抗体免疫学课件.ppt

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1、抗体免疫学抗体免疫学第1页，此课件共23页哦机体经机体经特定抗原特定抗原免疫后含免疫后含特定抗体特定抗体的血清。的血清。第2页，此课件共23页哦治疗治疗：用抗血清治疗被剧毒：用抗血清治疗被剧毒蛇咬伤的人员；抗白喉抗血蛇咬伤的人员；抗白喉抗血清治疗白喉病。清治疗白喉病。预防预防：研究人员、消防人员：研究人员、消防人员及战斗人员预先注射抗破伤及战斗人员预先注射抗破伤风抗体。风抗体。抗血清制备的目的抗血清制备的目的1 1、被动免疫预防和治疗、被动免疫预防和治疗第3页，此课件共23页哦2 2、免疫学诊断及鉴定试剂、免疫学诊断及鉴定试剂 如抗甲型肝炎病毒表面抗原如抗甲型肝炎病毒表面抗原AbAb、抗艾滋病

2、毒抗血清等。、抗艾滋病毒抗血清等。E.coli E.coli、BtBt、根瘤菌等的标准抗血清，血型鉴定用的抗血清。、根瘤菌等的标准抗血清，血型鉴定用的抗血清。abcABC第4页，此课件共23页哦Ag2341-含含多个抗原表位的抗原多个抗原表位的抗原免疫动物，可刺免疫动物，可刺激体内激体内多个多个B B细胞克隆细胞克隆产生针对产生针对多种多种抗原抗原表位表位的的抗体的混合物抗体的混合物B1B4B3B2B1B1B1B1B2B2B2B2B3B3B3B3B4B4B4B4第5页，此课件共23页哦l羊羊常用于常用于较大批量较大批量地生产抗体（商品）地生产抗体（商品）l马马：常用于：常用于大批量大批量生产治

3、疗用抗体（商品）生产治疗用抗体（商品）1 1、常用的免疫动物、常用的免疫动物l兔子（兔子（rabbitrabbit）：最常用于：最常用于自制抗体，抗体量自制抗体，抗体量较多较多。（。（新西兰，大耳白）新西兰，大耳白）第6页，此课件共23页哦l小鼠（小鼠（mousemouse）：可用于自制抗体，：可用于自制抗体，但抗体量很少。（但抗体量很少。（Balb/cBalb/c，昆明鼠，昆明鼠）l大鼠（大鼠（ratrat）：可用于自制抗体，免：可用于自制抗体，免疫过程要麻醉动物。（疫过程要麻醉动物。（WistarWistar大鼠大鼠）l豚鼠（豚鼠（guinea pigguinea pig）：国外实：国外实

4、验室常用验室常用第7页，此课件共23页哦2 2、抗原剂量选择、抗原剂量选择l兔子（兔子（rabbitrabbit）：l200g200g1 000g/1 000g/次次l小鼠（小鼠（mousemouse）：l50g50g400g/400g/次次l大鼠（大鼠（ratrat）：l100g100g1 000g/1 000g/次次第8页，此课件共23页哦3 3、佐剂的应用、佐剂的应用非特异性免疫非特异性免疫，当与，当与抗原抗原一起注射或预先注一起注射或预先注入机体时，可入机体时，可增强增强机体对抗原的免疫原性或机体对抗原的免疫原性或改变改变免免疫应答类型疫应答类型佐剂佐剂（adjuvantadjuvan

5、t）无机佐剂无机佐剂：氢氧化铝、明矾等：氢氧化铝、明矾等有机佐剂有机佐剂：卡介苗等：卡介苗等FreundFreund佐剂佐剂：弗氏不完全佐剂和弗氏完全佐剂：弗氏不完全佐剂和弗氏完全佐剂l可溶性抗原？可溶性抗原？第9页，此课件共23页哦4 4、免疫的基本步骤、免疫的基本步骤(1)(1)、注射途径和位点、注射途径和位点口服口服肌肉肌肉皮内皮内皮下皮下静脉静脉腹腔腹腔耳后耳后足掌足掌背部背部淋巴结周围淋巴结周围第10页，此课件共23页哦(2)(2)、基础免疫、基础免疫(3)(3)、加强免疫、加强免疫首次首次第第2 2次以后次以后大量抗原大量抗原完全弗式佐剂完全弗式佐剂+抗原量抗原量1/51/52/5

6、2/5多次多次，间隔，间隔2-42-4周周不完全弗式佐剂不完全弗式佐剂+第11页，此课件共23页哦加强免疫两次或三次以后的第加强免疫两次或三次以后的第7 7天取血天取血(4)(4)、抗血清效价测定、抗血清效价测定第12页，此课件共23页哦(5)(5)、制备抗血清、制备抗血清最后一次免疫后最后一次免疫后7-107-10天放血天放血放血放置，凝固，吸取血清放血放置，凝固，吸取血清离心离心纯化纯化分装分装冻存冻存第13页，此课件共23页哦第14页，此课件共23页哦l 特异性不强特异性不强5 5、制备多克隆抗体的、制备多克隆抗体的主要局限主要局限 交叉反应交叉反应l 纯化相对困难纯化相对困难l 无法连

7、续生产无法连续生产抗原抗原A抗原抗原B第15页，此课件共23页哦“多克隆抗体制备多克隆抗体制备”小结小结l多克隆抗体多克隆抗体（Polyclonal antibody,pAb）：含多个抗原表位的抗原免疫动物，可：含多个抗原表位的抗原免疫动物，可刺激体内多个刺激体内多个B细胞克隆产生针对多种抗原表位的抗体的混合物细胞克隆产生针对多种抗原表位的抗体的混合物l基本步骤基本步骤：l1、常用的免疫动物：马、羊；兔，豚鼠；大鼠，小鼠。、常用的免疫动物：马、羊；兔，豚鼠；大鼠，小鼠。l2、抗原剂量选择：、抗原剂量选择：50g1 000g/次。次。l3、佐剂的应用（可溶性抗原）：、佐剂的应用（可溶性抗原）：F

8、reund佐剂。佐剂。l4、免疫的基本步骤：、免疫的基本步骤：l（1）、注射途径和位点；）、注射途径和位点；l（2）、基础免疫：首次，大量抗原）、基础免疫：首次，大量抗原+完全弗氏佐剂；完全弗氏佐剂；l（3）、加强免疫：第二次以后，间隔多次，少量抗原）、加强免疫：第二次以后，间隔多次，少量抗原+不完全弗氏佐剂；不完全弗氏佐剂；l（4）、抗血清效价测定：加强免疫两次或三次以后的第）、抗血清效价测定：加强免疫两次或三次以后的第7天取血，测定效价；天取血，测定效价；l（5）、制备抗血清：最后一次免疫后）、制备抗血清：最后一次免疫后7-10天放血，静置，吸取血清，离心，纯化，分天放血，静置，吸取血清，

9、离心，纯化，分装，备用。装，备用。l制备多克隆抗体的主要局限制备多克隆抗体的主要局限：特异性不强；纯化相对困难；无法连续生产：特异性不强；纯化相对困难；无法连续生产第16页，此课件共23页哦Ag2341B1B4B3B2B1B1B1B1B2B2B2B2B3B3B3B3B4B4B4B4单克隆抗体单克隆抗体：单个：单个B B细胞克隆针对一个抗原决定簇所细胞克隆针对一个抗原决定簇所产生的一种均一的抗体。产生的一种均一的抗体。第17页，此课件共23页哦骨髓瘤细胞：不能合成或分泌骨髓瘤细胞：不能合成或分泌IgIg，具有在体外长期连续继代的，具有在体外长期连续继代的特性。特性。细胞融合细胞融合(cell f

10、usion)(cell fusion)，是在自发或人工诱导下，两个不同基因，是在自发或人工诱导下，两个不同基因型的细胞或原生质体融合形成一个杂种细胞。型的细胞或原生质体融合形成一个杂种细胞。第18页，此课件共23页哦二、二、单克隆抗体（单克隆抗体（monoclonal Ab,mAbmonoclonal Ab,mAb）19751975年，由年，由KohlerKohler和和MilsteinMilstein建立建立19841984年，获诺贝尔奖年，获诺贝尔奖Georges J.F.Khler Csar Milstein 淋巴细胞杂交瘤技术淋巴细胞杂交瘤技术第19页，此课件共23页哦免疫的淋巴细胞免

11、疫的淋巴细胞：具有合成分泌抗体的功能具有合成分泌抗体的功能 但不能在体外连续继代生长。但不能在体外连续继代生长。骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞：不能合成或分泌：不能合成或分泌Ig Ig。具有在体外长期连续继代的特性。具有在体外长期连续继代的特性。单克隆抗体技术的原理单克隆抗体技术的原理杂交瘤细胞杂交瘤细胞：合成抗体、能在体外长期连续传代：合成抗体、能在体外长期连续传代第20页，此课件共23页哦单抗与多抗的区别单抗单抗多抗多抗抗体组成抗体组成单一单一复杂复杂抗体性质抗体性质 高纯度、高特异性高纯度、高特异性 纯度低、特异性较差纯度低、特异性较差纯化标记纯化标记 容易，效果好容易，效果好 难度高一些难度高一

12、些种属来源种属来源 绝大多数是小鼠绝大多数是小鼠 兔子、羊、豚鼠等兔子、羊、豚鼠等制备周期制备周期 长长(最短最短4个月）个月）短（短（2个月）个月）制备技术制备技术 复杂复杂 简单简单经费经费 多多 少少第21页，此课件共23页哦免疫治疗与药物结合的免疫免疫治疗与药物结合的免疫-化学疗法化学疗法,利用单克隆抗体与靶利用单克隆抗体与靶细胞特异性结合，将药物带至病灶部位。细胞特异性结合，将药物带至病灶部位。单抗的应用：单抗的应用：“导弹导弹”疗法疗法因此，单克隆抗体可直接用于人类疾病的诊断、预防、治疗以及免疫机制的因此，单克隆抗体可直接用于人类疾病的诊断、预防、治疗以及免疫机制的研究，为人类恶性肿瘤的免疫诊断与免疫治疗开辟了广阔前景。研究，为人类恶性肿瘤的免疫诊断与免疫治疗开辟了广阔前景。单抗单抗导航系统导航系统药物药物弹头弹头第22页，此课件共23页哦鼠源抗体对人而言，具有免疫原性。可能产生抗鼠抗体的抗体。第23页，此课件共23页哦