抗血清的制备实验.ppt

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1、抗血清的制备实验现在学习的是第1页，共30页选择合适的抗原选择合适的抗原分离纯化抗原分离纯化抗原选择免疫动物选择免疫动物确定免疫方案和程序确定免疫方案和程序免疫动物免疫动物采血分离血清采血分离血清抗血清的纯化与鉴定抗血清的纯化与鉴定抗血清制备的基本流程抗血清制备的基本流程现在学习的是第2页，共30页设计实验方案的设计设计实验方案的设计 1.1.设计本实验的理由（实验目的）。设计本实验的理由（实验目的）。2.2.实验方案设计。实验方案设计。3.3.可行性（理论、人员、实验条件等）。可行性（理论、人员、实验条件等）。4.4.创新性。创新性。5.5.本实验要解决的主要问题。本实验要解决的主要问题。6

2、.6.预期目标。预期目标。每个组交一份实验方案（每个组交一份实验方案（3-43-4个同学一组）个同学一组）现在学习的是第3页，共30页论文式实验报告论文式实验报告 一、题目的选择一、题目的选择 1 1、准确、具体、简洁、醒目，使人一目、准确、具体、简洁、醒目，使人一目了然，引起重视了然，引起重视 2 2、作者与单位、作者与单位(班级班级)，并注明所在班级，并注明所在班级和指导教师姓名。和指导教师姓名。3 3、摘要和关键词、摘要和关键词 摘要是对论文主要内摘要是对论文主要内容和观点的概括容和观点的概括 现在学习的是第4页，共30页论文式实验报告论文式实验报告 二、关键词二、关键词 又称主题词或索

3、引词，一篇论著又称主题词或索引词，一篇论著(论文论文)一般选用一般选用2 25 5个关键词个关键词 现在学习的是第5页，共30页论文式实验报告论文式实验报告 三、引言三、引言(前言前言)引言是论文正文的开场引言是论文正文的开场白白 1 1、引起读者对本论文的兴趣。、引起读者对本论文的兴趣。2 2、为读者提供理解本论文所需的背景资、为读者提供理解本论文所需的背景资料料 。现在学习的是第6页，共30页论文式实验报告论文式实验报告 四、材料与方法材料四、材料与方法材料 1 1、实验对象、实验对象 2 2、实验材料、实验材料 3 3、实验分组、实验分组 4 4、实验过程和方法、实验过程和方法 6 6、

4、数据处理等内容。、数据处理等内容。现在学习的是第7页，共30页论文式实验报告论文式实验报告 五、结果：五、结果：结果是实验研究成果的结晶结果是实验研究成果的结晶 现在学习的是第8页，共30页论文式实验报告论文式实验报告 六、讨论六、讨论 1.11.1 1.21.2 1.31.3对实验结果解释和评价 现在学习的是第9页，共30页论文式实验报告论文式实验报告 七、参考文献七、参考文献 期刊：著者文章名刊物名称，卷或年期刊：著者文章名刊物名称，卷或年(期期)：文章的起讫页码：文章的起讫页码书籍：编著者书名版本出版地：出书籍：编著者书名版本出版地：出版者，年份版者，年份 现在学习的是第10页，共30页

5、一、颗粒性抗原的制备（2%5%RBC2%5%RBC的制备）的制备）（1）静脉采血2-3ml，注入抗凝管中，轻轻混匀。（2）洗涤RBC 将上述抗凝血移至10ml试管中，加入NS 6-7ml，混匀，2500r/min2500r/min离心离心5min,5min,去上清。重复上去上清。重复上述操作三次，最后一次去上清后，将红述操作三次，最后一次去上清后，将红细胞配制成细胞配制成2%5%2%5%的的RBCRBC悬液。悬液。现在学习的是第11页，共30页 2 2、取上述、取上述RBCRBC悬液悬液1ml1ml免疫家兔免疫家兔。免疫部位：静脉、皮内、皮下等。免疫部位：静脉、皮内、皮下等。每只兔子免疫。每只

6、兔子免疫810810点，每点点，每点0.1ml0.1ml左右。每隔左右。每隔2424天免疫一次天免疫一次。现在学习的是第12页，共30页1 1班免疫时间表班免疫时间表每隔每隔2天免疫一次天免疫一次现在学习的是第13页，共30页2班免疫时间表班免疫时间表每隔每隔3天免疫一次天免疫一次现在学习的是第14页，共30页3班免疫时间表班免疫时间表每隔每隔4天免疫一次天免疫一次现在学习的是第15页，共30页 3 3、心脏采血、心脏采血10ml10ml，凝固后，分离血清（，凝固后，分离血清（20002000转转/min,5/min,5分钟分钟)。4 4、取两支小试管并以、取两支小试管并以A A、B B标记之

7、，将上述标记之，将上述血清一半加入血清一半加入A A管，另一半加入管，另一半加入B B管。将管。将A A管置于管置于5656水浴箱水浴箱3030分钟（灭活补体）。分钟（灭活补体）。现在学习的是第16页，共30页 5 5、抗血清效价的鉴定。、抗血清效价的鉴定。凝集试验和溶血反应凝集试验和溶血反应现在学习的是第17页，共30页 凝 集 反 应现在学习的是第18页，共30页实验原理实验原理指指颗粒性抗原颗粒性抗原(RBC)(RBC)与相应抗体特异结与相应抗体特异结合，在适当电解质存在下，形成肉眼可合，在适当电解质存在下，形成肉眼可见的凝集现象。见的凝集现象。现在学习的是第19页，共30页试管凝集试验

8、过程试管凝集试验过程1.1.取洁净小试管取洁净小试管8 8支，排列于试管架上，支，排列于试管架上，依次编号。依次编号。2.2.向各管中加入生理盐水向各管中加入生理盐水200ul200ul。现在学习的是第20页，共30页3.3.向第一支试管中加入向第一支试管中加入A A管血清管血清200ul200ul，充分混匀，充分混匀，吸出，吸出200ul200ul放入第二管，混匀后取出放入第二管，混匀后取出200ul200ul加入第三管中，如此类推直至第七管，混匀后加入第三管中，如此类推直至第七管，混匀后取出取出200ul200ul弃去。第八管不加血清，为生理盐弃去。第八管不加血清，为生理盐水对照管。至此，

9、第水对照管。至此，第1717管的血清稀释度分别为管的血清稀释度分别为：1 1：2 2，1 1：4 4，1 1：8 81 1：128128。这种稀释。这种稀释方法称为连续倍比稀释法，为免疫试验中常用方法称为连续倍比稀释法，为免疫试验中常用的稀释方法。的稀释方法。现在学习的是第21页，共30页4.4.向每管加入向每管加入200ul 2%RBC200ul 2%RBC悬液，此时每悬液，此时每管的液体总量为管的液体总量为400ul400ul ，血清稀释度又增加，血清稀释度又增加1 1倍。倍。5.5.摇匀，置摇匀，置37 37 30min 30min。(取出试管取出试管15001500r/s 30r/s

10、30秒秒)观察结果。观察结果。现在学习的是第22页，共30页试管凝集操作程序试管凝集操作程序(倍比稀释法倍比稀释法)管号管号 12345678对照对照生理盐生理盐水水 200200200200200200200200血清血清 200200200200200200200RBC 200200200200200200200200终稀释终稀释度度 1/41/81/161/321/641/1281/256-弃去单位：单位：uL现在学习的是第23页，共30页结果判断 选择适当的光暗对比背景，先不要振摇，观选择适当的光暗对比背景，先不要振摇，观察管底凝集物的范围和上清液的浊度。然后察管底凝集物的范围和上清液

11、的浊度。然后轻轻摇动试管，注意观察凝集颗粒的大小、轻轻摇动试管，注意观察凝集颗粒的大小、均匀度等。每一试管的观察，都应与对照管均匀度等。每一试管的观察，都应与对照管进行比较。盐水对照管诮无凝集现象，轻轻进行比较。盐水对照管诮无凝集现象，轻轻摇动试管则摇动试管则RBCRBC分散成均匀混浊；而凝集块分散成均匀混浊；而凝集块则沉于管底，轻摇时不易散开，凝集程度通则沉于管底，轻摇时不易散开，凝集程度通常以常以“+”表示：表示：现在学习的是第24页，共30页“4+4+”很强，全部很强，全部RBCRBC凝集，凝集块全部沉凝集，凝集块全部沉于管底，液体澄清。于管底，液体澄清。“3+3+”强，强，RBCRBC

12、大部分凝集并沉于管底，液大部分凝集并沉于管底，液体稍混浊。体稍混浊。“2+2+”中等强度，中等强度，RBCRBC大约一半凝集，液体大约一半凝集，液体较混浊。较混浊。“+”弱，仅少量弱，仅少量RBCRBC凝集，液体明显混浊。凝集，液体明显混浊。“-”不凝集，液体混浊与对照管相同。不凝集，液体混浊与对照管相同。只要待测血清管出现只要待测血清管出现“2+2+”以上的凝集现象以上的凝集现象，即可判断为反应阳性；以出现，即可判断为反应阳性；以出现“2+2+”凝集凝集的最大稀释度为待测血清的抗体效价。的最大稀释度为待测血清的抗体效价。现在学习的是第25页，共30页 溶溶 血血 试试 验验现在学习的是第26

13、页，共30页实验原理实验原理 溶血反应是指补体参与的抗体溶血反应是指补体参与的抗体致红细胞的溶解反应致红细胞的溶解反应.参与反应的成分有参与反应的成分有红细胞红细胞、抗红细抗红细胞抗体胞抗体，也称溶血素、，也称溶血素、补体。补体。现在学习的是第27页，共30页溶血反应溶血反应实验过程实验过程1.1.取洁净小试管取洁净小试管8 8支，排列于试管架上，支，排列于试管架上，依次编号。依次编号。2.2.向各管中加入生理盐水向各管中加入生理盐水200ul200ul。现在学习的是第28页，共30页3.3.向第一支试管中加入血清向第一支试管中加入血清200ul200ul，充分混匀，充分混匀，吸出，吸出200

14、ul200ul放入第二管，混匀后取出放入第二管，混匀后取出200ul200ul加入第三管中，如此类推直至第七管加入第三管中，如此类推直至第七管，混匀后取出，混匀后取出200ul200ul弃去。第八管不加血清弃去。第八管不加血清，为生理盐水对照管。至此，第，为生理盐水对照管。至此，第1717管的血管的血清稀释度分别为：清稀释度分别为：1 1：2 2，1 1：4 4，1 1：8 81 1：128128。这种稀释方法称为连续倍比稀释法。这种稀释方法称为连续倍比稀释法，为免疫试验中常用的稀释方法。，为免疫试验中常用的稀释方法。现在学习的是第29页，共30页4.4.向每管加入向每管加入200ul 2%RBC200ul 2%RBC悬液，此时每悬液，此时每管的液体总量为管的液体总量为400ul400ul ，血清稀释度又增，血清稀释度又增加加1 1倍。倍。5.5.摇匀，置摇匀，置37 37 30min 30min。观察结果。观察结果。现在学习的是第30页，共30页