液相色谱工作原理及简单操作.ppt

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1、关于液相色谱工作原理及简单操作现在学习的是第1页，共14页Agilent 1260 HPLC 工作原理及简单操作工作原理及简单操作 内容：一、HPLC各模块的原理；二、开机/关机操作；三、软件；现在学习的是第2页，共14页一一 、HPLC各模块工作原理及维护各模块工作原理及维护 HPLC：高效液相色谱仪（High Performances Liquid Chromatography）。由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几个部分组成。现在学习的是第3页，共14页关于溶剂关于溶剂HPLC各模块的工作原理及维护所有溶剂应为HPLC级，水应为二次超纯水；所有溶剂应经过过滤。过滤水应使用一次

2、性水相/有机相滤膜。所有溶剂应经过超声脱气；水易滋生藻类，避免直接照射，过滤水最好使用不要超过两天；注意溶剂的相容性，避免使用不相容的溶剂；避免使用强酸、强碱或有机氯等腐蚀性溶剂；在溶剂瓶中的溶剂过滤头可能会堵塞，必要时小心拿下用强酸（35%硝酸）浸泡时，用水冲洗，但不要使用超声处理。现在学习的是第4页，共14页泵的注意事项泵的注意事项1，溶剂的过滤、脱气；2，避免使用腐蚀性溶剂；3，在满足分析的前提下，尽可能使用较低的流速较低的系统压力。四元泵：缓冲溶液要放在A、D通道，以避免盐颗粒析出。建议A通道：水；B、C通道：有机溶剂；D通道：缓冲溶液。HPLC各模块的工作原理及维护现在学习的是第5页

3、，共14页自动进样器自动进样器样品要干净、经过过滤。样品要干净、经过过滤。洗针：把样品残留降低到最小限洗针：把样品残留降低到最小限度度HPLC各模块的工作原理及维护现在学习的是第6页，共14页关于恒温柱箱关于恒温柱箱控制范围：最高80C，低温低于室温10C。左右温度应保持一致。一定要关闭前面板。HPLC各模块的工作原理及维护现在学习的是第7页，共14页检测器检测器DAD在没有样品分析任务时要关闭氘灯，以延长氘灯的使用寿命,但是也不要频繁的开关,这样也会影响寿命。同时，打开灯需要预热10min 左右HPLC各模块的工作原理及维护现在学习的是第8页，共14页检测器检测器FLDHPLC各模块的工作原

4、理及维护FLD是一款具有高度灵敏度和高度选择性的检测器。其激发光源是氙灯，此灯不需要预热。现在学习的是第9页，共14页开机操作：1，打开计算机。2，打开LC各模块的电源，等待仪器自检完毕，1-2min。3，双击桌面上“Instrument 1 Online”图标，进入化学工作站,在工作站打开各工作模块。4，打开Seal Wash清洗液开关，清洗10min。5，打开清洗阀，排除系统中的气泡，平衡差不多30min.6,拧上清洗阀，将流量设为所需流速，平衡30min即可以打样。关机操作：1，如果使用了缓冲溶液流动相应先用水冲洗系统30min。2，用纯有机相冲洗系统30min。3，在工作站上关闭各个模

5、块。4，退出工作站，关闭计算机。5，关闭LC各个模块的电源。二、二、开机开机/关机操作关机操作现在学习的是第10页，共14页指示灯状态指示灯状态每个部件接通电源后LED灯显示绿色关机 power off准备进样 power on没准备好Not Ready运行Run故障Error驻留ResidentBlink仪器LED状态显示电源开关显示黑Black黑Black黄Yellow绿Green红Red黄闪烁Yellow blinking6种LED仪器状态：开机/关机操作现在学习的是第11页，共14页每次用过仪器后必须做每次用过仪器后必须做!整台液相色谱仪的维护整台液相色谱仪的维护1.在使用过含盐缓冲液

6、后必须清水冲洗泵15分钟，此时 必须打开排放阀，不能使废液进入色谱柱。2.关上排放阀，用90%+10%的水、甲醇溶液冲洗整个系 统，时间为1520分钟，流量1ml/min。本步骤主要是冲 洗干净系统内其他含盐的部位。3.用纯的强溶剂冲洗整个系统，时间为1小时，流量为 1ml/min。本步骤主要是保护色谱柱。4.如果未使用缓冲液，上面1、2两步骤可免去，直接用 纯的强溶剂冲洗整个系统，时间为1小时，流量为1ml/min。开/关机操作现在学习的是第12页，共14页 三、实验操作及软件三、实验操作及软件 1、开机、开软件、开机、开软件 2、冲柱子：、冲柱子：95%甲醇（排气泡）甲醇（排气泡）-5%甲醇（排气泡）甲醇（排气泡）-流动相（排气泡）。流动相（排气泡）。3、编辑数据采集方法、编辑数据采集方法 4、单针及序列、单针及序列 5、样品采集、样品采集 6、图谱优化、图谱优化 7、报告、报告 现在学习的是第13页，共14页感谢大家观看感谢大家观看现在学习的是第14页，共14页