实验大肠杆菌的培养和分离讲稿.ppt

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1、关于实验大肠杆菌的培养和分离第一页，讲稿共七十八页哦微生物包括哪五类：真菌原生生物特点：结构简单,形体微小.通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构.且体内一般不含有叶绿素.不能进行光合作用.原核生物界 原生生物界真菌界病毒界一、基础知识：(一)微生物第二页，讲稿共七十八页哦大肠杆菌（E.coli）分布：人和哺乳动物肠道，此外还广泛分布于水、污水、土壤、谷类、乳制品等当中。大肠杆菌在人体的_中一般对人体无害，但任何大肠杆菌如果进入_都会对人体产生危害。大肠杆菌是_工程中被广泛采用的工具。肠道泌尿系统基因革兰氏_（填阴或阳）性菌阴代谢类型：异养，兼性厌氧型生长适宜温度：质粒、

2、EcoR限制酶、E.coli-DNA连接酶、受体细胞37左右第三页，讲稿共七十八页哦细菌的代谢类型 n自养型细菌n异养型细菌:光合自养型:化能自养型:大部分腐生菌和寄生菌如蓝细菌如硝化细菌1、同化作用类型2、异化作用类型需氧型细菌厌氧型细菌兼性厌氧型细菌大多数细菌如破伤风杆菌如酵母菌、大肠杆菌。大肠杆菌属于异养、兼性厌氧型细菌第四页，讲稿共七十八页哦大肠杆菌酵母菌放线菌 霉菌菌落：单个或少数细菌在固体培养基上大量生长繁殖时，所形成的肉眼可见的具有一定形态结构的子细胞群体。不同微生物形成的菌落具有不同的特征，是鉴定菌种的重要依据。如菌落的大小、形状、边缘、光泽度、颜色、透明度等。菌落的概念菌落的

3、概念白色或乳白色，光滑大肠杆菌菌落：第五页，讲稿共七十八页哦 有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌.第六页，讲稿共七十八页哦一、基础知识：（二）培养基 培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。（1）按物理状态分：固体培养基和液体培养基、半固体培养基。（2）按功能分：选择培养基和鉴别培养基。（3）按成分分：天然培养基和合成培养基。1.培

4、养基的类型和用途第七页，讲稿共七十八页哦液体培养基：表面生长均匀混浊生长沉淀生长第八页，讲稿共七十八页哦固体培养基：菌落，菌苔第九页，讲稿共七十八页哦半固体培养基：无动力 有动力(弥散)(是否运动)第十页，讲稿共七十八页哦选择培养基加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基:分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基:分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基:分离自养型微生物 加入青霉素等抗生素的培养基:分离导入了目的基因的受体细胞 加入氨基喋呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培养基:分离杂交瘤细胞第十一页，讲稿共七十八页哦天然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。优

5、点：营养成分丰富，培养效果好缺点：来源受限;成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析;易发生支原体污染;根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。优点：标准化生产，组分和含量相对固定;成本低 缺点：缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。合成培养基:天然培养基：第十二页，讲稿共七十八页哦血清中含有：多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等）多种金属离子；激素；促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原等。各种生长因子转移蛋白不明成分 人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和繁殖，还需补充一定

6、量的天然培养基（如血清）。第十三页，讲稿共七十八页哦培养基的用途液体培养基：增菌，常用于发酵工业固体培养基：增菌，菌种保存及分离纯化、鉴定菌落、活菌计数等半固体培养基：动力检测，保种第十四页，讲稿共七十八页哦不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方调节pH2、成分水、碳源、氮源、无机盐、生长因子(生长因子即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)真菌：56 细菌：6.5 7.5 有时会加一定量的氯化钠以维持一定的渗透压第十五页，讲稿共七十八页哦1.无菌操作的概念 无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止_污染的方法。四、无菌操作四、无菌操作_必须无菌、_也必须

7、要无菌、_时不能带入其他杂菌主要包括：杂菌2.消毒与灭菌的概念及两者的区别 消毒：使用较温和理化因素，仅杀死物体表面或内部的一部分对人体有害的微生物的过程。不能杀死芽孢和孢子。灭菌：使用强烈的理化因素消灭物体内外所有微生物，包括芽孢和孢子。各种器具培养基转移菌种第十六页，讲稿共七十八页哦比较消毒与灭菌较为温和部分生活状态的微生物不能能全部微生物强烈第十七页，讲稿共七十八页哦高压蒸汽灭菌（湿热灭菌）洒精灯灼烧灭菌干热灭菌（1）灭菌方法：3、常用的灭菌和消毒的方法培养基、无菌水、各种耐高温的玻璃金属器具100kPa、121 下维持15-30min需要保持干燥耐高温的玻璃金属器皿160-170 下加

8、热1-2h接种环等金属器具第十八页，讲稿共七十八页哦第十九页，讲稿共七十八页哦1、煮沸消毒法:100煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75 下煮30min或 80 下煮15min3、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源4、紫外线消毒(2)消毒的方法：3.常用的消毒与灭菌的方法第二十页，讲稿共七十八页哦请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1）培养细菌用的培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（3）实验操作者的双手答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。第二十一页，讲稿共七十八页哦（一）制备LB培养基（通用的细菌培养基）

9、1、配方：蛋白胨0.5克，酵母提取物0.25克，氯化钠0.5克，水50ml（配固体培养基再加琼脂1克）溶解计算称量调pH分装加塞，包扎2、流程二二 操作步骤操作步骤灭菌倒平板第二十二页，讲稿共七十八页哦分装：注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，因此在将培养基转移到三角瓶或试管中时必须用_。加塞：试管用塑料盖或_；三角瓶口用_或_封口,再用_或报纸封口。包扎：用_或报纸三角漏斗棉花塞封口膜6层纱布牛皮纸牛皮纸高压蒸气灭菌法灭菌1）加水：2）装锅：向外层锅内加入适量的水，加水的要求是_.物品放置的要求_：加盖：将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的_内。再以_方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿

10、使漏气。不触及内胆整齐、稳定、留出空隙排气槽两两对称第二十三页，讲稿共七十八页哦3）加热排气：4）保温保压：5）出锅：打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的_。_后，关上排气阀。当锅内压力升到_kg/cm2时，控制热源，维持压力至_min。切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力降至_时，打开_，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。冷空气待冷空气完全排尽0115排气阀否则会因锅内压力较高，打开气阀后造成的压力差可能使容器内的培养基喷溅造成棉塞沾染培养基而发生污染，甚至使容器爆炸。灭菌后，通常将实验用具放入6080 _中烘干，以除去灭菌时的水分，避免引起_。烘箱污染第二十四页，讲稿共七十八页哦倒平板：待

11、培养基冷却至_ 时，将每只培养皿倒入_ml未凝固的固体培养基，置于_位置上，轻轻晃动使其均匀铺满平皿底部，待凝，使之形成平面。_备用。制斜面：将未凝固的固体培养基的试管_放，冷却待凝使即成为斜面。1012水平倒置斜倒平板、制斜面操作平台：灭菌好的培养基和实验器具置于超净台上打开_和_，灭菌30min.过滤风紫外线超净台第二十五页，讲稿共七十八页哦思考题：A、操作过程中避免带入杂菌的方法有哪些？1、灭菌后的培养基、器具置于超净台上，并打开超净台的紫外灯和过滤风，灭菌30分钟。2、用镊子夹出洒精棉球擦拭桌面和实验者双手。3、整个操作在酒精灯火焰旁进行4、打开后或加塞前试管口、三角瓶口灼烧灭菌。B、

12、培养基灭菌后，需要冷却到60后才倒平板，你用什么办法来估计培养基的温度呢？可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。第二十六页，讲稿共七十八页哦思考题思考题C、为何要将平板倒置？平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落培养基，造成污染。D、在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。E、如何检查培养基是否受杂菌的污染？

13、将未接种的培养基放在恒温箱中培养，若无菌落产生则未受杂菌污染。第二十七页，讲稿共七十八页哦（二）液体培养基接种培养（二）液体培养基接种培养主要器具：操作方法：先将接种环进行_灭菌,_后的接种环挑取少量菌种，放入三角瓶的液体培养基中，加塞。置于_摇床振荡培养小时。无菌操作：略摇床思考：如何冷却接种环？可通过接触试管内壁或未长菌的培养基达到冷却的目的。接种环、摇床等灼烧冷却第二十八页，讲稿共七十八页哦（三）平板划线分离法（三）平板划线分离法主要器具：操作过程：注意：无菌操作方法：同前。将培养皿_（盖在下），放于_恒温培养箱中培养_小时。在作第二次以及其后的划线操作时，要从上一次划线的开始_划线。接

14、种环、思考：若如上图所示进行划线分离，则接种环总共进行几次灼烧灭菌？恒温培养箱。每次划线前接种环都要灼烧灭菌，再冷却。末端倒置第二十九页，讲稿共七十八页哦第三十页，讲稿共七十八页哦 平板划线的操作方法平板划线的操作方法交叉划线法交叉划线法连续划线法连续划线法 第三十一页，讲稿共七十八页哦 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到

15、单个菌落。2、在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？划线结束后灼烧接种环，及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。第三十二页，讲稿共七十八页哦3.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？以免接种环温度太高，杀死菌种。4.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。5、如何判断接种操作是否符合无菌要求？如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接

16、种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求。第三十三页，讲稿共七十八页哦（四）（四）稀释涂布平板法稀释涂布平板法主要器具：玻璃三角刮刀、移液管或吸管操作过程：先将培养菌液稀释（10-510-7倍）用移液管或吸管取0.1ml稀释度不同的菌液，加在平板上，用无菌玻璃三角刮刀均匀涂布在培养基平面上。在适当稀释度下，可培养得到相互分开的的菌落。将培养皿倒置（盖在下），放于 恒温培养箱中培养小时。划线分离方法简单；涂布分离，易形成单菌落，但操作复杂些。第三十四页，讲稿共七十八页哦10g土样从土壤中分离微生物稀释涂布法稀释涂布法第三十五页，讲稿共七十八页哦（五）

17、斜面接种及菌种保存（五）斜面接种及菌种保存主要器具：操作过程：在无菌操作下，用接种环挑取_菌落，再用划线法（自斜面底部向上轻轻划直线）接种在_上，_恒温培养箱中培养_小时后，_ 冰箱保存。无菌操作：同前试管斜面培养基密闭效果比平面的好很多,不容易进入杂菌，同时能用来做纯细菌的长期保存。思考：菌种保存为何采用斜面而不是平板？接种环、恒温箱、冰箱单斜面第三十六页，讲稿共七十八页哦 1、临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4冰箱保存。2、长期保存：甘油冷冻管藏法第三十七页，讲稿共七十八页哦实验一实验一 大肠杆菌的培养和分离大肠杆菌的培养和分离实验步骤：一 配制LB培养基溶解计算称量调pH分

18、装加塞，包扎灭菌二倒平板、制斜面三 大肠杆菌的培养三 大肠杆菌的分离平板划线分离法（或稀释涂布平板法）使所需细菌大量繁殖获得单菌落，纯化菌株四 斜面接种培养目的菌株的纯培养和菌种保存第三十八页，讲稿共七十八页哦类型一 培养基及无菌技术【典例1】(2015绍兴模拟)请回答下列与大肠杆菌有关的问题。(1)从生态系统的成分上看，大肠杆菌属于。第三十九页，讲稿共七十八页哦(2)下表是某公司研发的一种培养大肠杆菌菌群的培养基配方。第四十页，讲稿共七十八页哦根据物理状态划分，该培养基属于(固体、液体)培养基。该培养基中的碳源是。(3)在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行(填“消毒

19、”或“灭菌”)；操作者的双手需要进行清洗和。空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能 。第四十一页，讲稿共七十八页哦(4)将配制好的培养基分装到试管中，加棉塞后若干支试管一捆，包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入中灭菌，温度为，时间为。灭菌完毕拔掉电源，待锅内压力自然降到大气压时，将试管取出。如果棉塞上沾有培养基，此试管应。(5)使用高压蒸汽灭菌锅时注意，先向锅内倒入。把锅内水加热煮沸并将其中原有冷空气彻底排出后，将锅密闭。若在灭菌前，没有排尽锅内的冷空气会导致 。第四十二页，讲稿共七十八页哦(6)从一支试管向另一支试管接种时注意，接种环要在酒精灯(选填“内焰”或“外焰”)灭菌，并

20、且待接种环后蘸取菌种，试管口不能离开酒精灯火焰附近，将接种的试管在适宜温度下培养，长成菌落后放入冰箱中保存。第四十三页，讲稿共七十八页哦【解题指南】解答本题需明确以下两点：(1)根据表中提供的信息分析培养基的类型。(2)根据题干信息总结无菌操作应注意的问题。第四十四页，讲稿共七十八页哦【解析】(1)大肠杆菌营腐生生活，从生态系统的成分来看，大肠杆菌属于分解者。(2)表中的培养基配方中含有琼脂，是固体培养基，其中能为大肠杆菌提供碳元素的物质有蛋白胨、乳糖和蔗糖。(3)微生物培养过程中，培养基和培养皿要进行灭菌，操作者的双手要进行消毒；紫外线杀菌的原理是紫外线不仅能使蛋白质变性，还能损伤DNA的结

21、构。第四十五页，讲稿共七十八页哦(4)培养基的灭菌应用高压蒸汽灭菌锅，在压力为1 kg/cm2、温度为121条件下，灭菌15 min。若棉塞上沾有培养基，易被杂菌污染，应废弃。(5)使用高压蒸汽灭菌锅时要先加入适量水，否则没有高压蒸汽，还有可能损坏设备。(6)酒精灯外焰温度高，灭菌效果好。灼烧后待冷却后再蘸取菌种，否则会杀死菌种造成实验失败。第四十六页，讲稿共七十八页哦答案：(1)分解者(2)固体乳糖、蔗糖、蛋白胨(3)灭菌消毒损伤DNA的结构(4)高压蒸汽灭菌锅12115 min废弃(5)适量水锅内温度上升不到应有度数，使灭菌不彻底(6)外焰冷却4第四十七页，讲稿共七十八页哦【互动探究】(1

22、)培养大肠杆菌除用题中所给培养基外，还可用何种培养基？提示：LB液体培养基。(2)表中的培养基在配制时应如何操作？提示：表中的培养基中含有琼脂成分，配制时要不断搅拌，否则易引起琼脂糊底而使烧杯炸裂。第四十八页，讲稿共七十八页哦【加固训练】(2015嘉兴模拟)下面是肺炎双球菌离体转化实验的主要步骤：第四十九页，讲稿共七十八页哦(1)实验用的器皿必须是无菌的，常用法灭菌。用此法对培养基灭菌时，常将培养基装在(器皿)中进行。(2)实验操作需在超净工作台上进行。工作台上，实验前一段时间需打开，而实验中需关闭的是。A.酒精灯 B.照明灯C.过滤风 D.紫外灯(3)平面培养基与悬浮培养所用的培养基相比，应

23、增加的成分是。第五十页，讲稿共七十八页哦(4)常用涂布法给平面培养基接种。下列叙述错误的是()A.接种的目的是使细菌相互分离B.接种需过滤除去杂菌后进行C.接种工具需灼烧后使用D.接种需在酒精灯火焰旁进行(5)在37恒温箱中培养时，培养皿需，主要目的是避免水滴影响的形成。(6)培养后，如果观察到菌落重叠，则在涂布法接种之前需进行操作。第五十一页，讲稿共七十八页哦【解析】(1)微生物培养实验中的各种器皿常采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌，培养基则装在三角瓶中再进行灭菌。(2)在超净工作台上操作时应关闭紫外灯，避免对实验者造成伤害。(3)平面培养基因含有琼脂而呈固体或半固体状态。(4)接种的目的是为了得

24、到所需要的细菌，在无菌条件下进行，杂菌和肺炎双球菌大小差不多，所以用过滤的方法是不能除去杂菌的。(5)培养皿在培养箱中应倒置，防止水滴滴落污染培养基，影响单菌落的形成。(6)如果菌落重叠，说明菌液浓度过高，需要稀释。第五十二页，讲稿共七十八页哦答案：(1)高压蒸汽灭菌三角瓶(2)D(3)琼脂(4)B(5)倒置单菌落(6)稀释菌液第五十三页，讲稿共七十八页哦类型二 大肠杆菌的培养和分离【典例2】大肠杆菌是生存在人体肠道中的正常菌群，每克粪便中含有109个，且能够与致病菌混杂生长。如果食品和饮用水中出现大肠杆菌，就意味着食物可能被粪便污染而带上致病菌，因而常将大肠杆菌的数量作为食品卫生的检测指标之

25、一。请据此回答下列问题：第五十四页，讲稿共七十八页哦(1)测定街边出售的奶茶中大肠杆菌的数目，常用涂布分离法进行测定。该方法首先配制LB培养基，进行高压蒸汽灭菌后冷却至60，在旁倒在培养皿中形成平板；对奶茶样品进行一定倍数的稀释，取0.1 mL奶茶稀释液，加在培养皿的固体培养基上，用涂布在培养基平面上，然后进行培养；观察统计培养皿中数目；该数据比实际数值要 (填“高”或“低”)，原因是 。实验完成后需要对培养基进行处理，然后才能倒掉。第五十五页，讲稿共七十八页哦(2)若要对上述培养基中的菌种进行扩大培养，则需配制LB 培养基，灭菌后，将在酒精灯火焰上烧红后冷却，然后蘸取单菌落中的菌体接种到新的

26、培养基中，在适宜环境中培养h即可。第五十六页，讲稿共七十八页哦【解析】(1)微生物的分离通常用固体培养基。为防止杂菌污染，要在酒精灯火焰旁倒平板。在用涂布分离法分离细菌时，为了使细菌均匀涂布在固体培养基上，常用玻璃刮刀把菌液涂布在培养基上。通过观察菌落数推算细菌数目。培养基中可能有两个或多个细菌紧挨在一起，共同形成一个菌落，因此观察到的菌落数可能比实际菌落数低。为了防止实验菌污染环境，实验完成后需要对培养基进行灭菌处理，然后才能倒掉。第五十七页，讲稿共七十八页哦(2)对微生物进行扩大培养，通常使用液体培养基。一般用接种环转移带菌的培养物。接种时，先将接种环在明火上烧红后冷却，然后蘸取带菌的培养

27、物，接种到新的培养基中。在液体培养基中，只要接种培养12 h，每毫升培养基中就有几亿个细菌。答案：(1)固体酒精灯火焰玻璃刮刀(涂布棒)菌落低培养基中可能有两个或多个细菌紧挨在一起，共同形成一个菌落灭菌(2)液体接种环12 第五十八页，讲稿共七十八页哦【加固训练】(2015杭州模拟)大肠杆菌是生活在人和高等动物体内的一种常见细菌，在饮用水的检测中常用它作为水源是否受到污染的指示菌，在遗传学上常作为实验材料，在基因工程中常用它作为受体细胞，为人类的健康和科学技术的发展作出了许多贡献。请回答下列有关大肠杆菌的问题：(1)在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑、和渗透压等条件。由于该细菌具

28、有体积小、结构简单、易培养、等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。第五十九页，讲稿共七十八页哦(2)分离大肠杆菌时常用的接种方法是法和法。前者操作简单，后者更易分开，但操作复杂些。(3)培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是将未接种的培养基在适宜的温度下放置适当的时间，观察。第六十页，讲稿共七十八页哦(4)若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，下列对操作过程说法不妥的是()A.严格操作、多次重复B.保证待测样品稀释的浓度比较合适C.倒平板培养D.计数所有菌落，取其平均值(5)通常对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、

29、大小、硬度和颜色等对细菌进行初步的鉴定(或分类)。第六十一页，讲稿共七十八页哦【解题指南】解答本题的关键有两个方面：(1)在微生物培养操作过程中需要灭菌，不同的对象采用的灭菌方法不同。比较各种灭菌方法，并说明各种方法能消灭细菌的原因。(2)菌种的鉴定通常使用固体培养基，根据菌落的特征鉴定菌种，不能用单个的细菌进行菌种鉴定。第六十二页，讲稿共七十八页哦【解析】(1)大肠杆菌的培养除需要合适的营养条件外，还需要适宜的温度、酸碱度(pH)和渗透压。由于大肠杆菌变异类型容易选择、繁殖速度快，常作为遗传学研究的实验材料。(2)分离微生物常用的接种方法有划线分离法和涂布分离法。前者方法简单；后者单菌落更易

30、分开，但操作复杂些。第六十三页，讲稿共七十八页哦(3)培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是将未接种的培养基在适宜的温度下放置适当的时间，观察培养基上是否有菌落产生。若固体培养基被细菌污染，在适宜条件下培养一段时间，细菌会大量繁殖，形成菌落，可根据菌落数量的多少判断污染程度。第六十四页，讲稿共七十八页哦(4)若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，应该采用倒平板培养，并且严格操作、多次重复；保证待测样品稀释的浓度比较合适。(5)对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的鉴定。第六十五页，讲稿共七

31、十八页哦答案：(1)温度酸碱度(pH)生活周期短(或繁殖快)(2)划线分离涂布分离单菌落(3)培养基上是否有菌落产生(4)D(5)菌落特征第六十六页，讲稿共七十八页哦类型三 分离以尿素为氮源的微生物【典例3】(2012浙江高考)幽门螺杆菌(Hp)感染是急慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素。在患者体内采集样本并制成菌液后，进行分离培养。实验基本步骤如下：第六十七页，讲稿共七十八页哦请回答：(1)在配制培养基时，要加入尿素和酚红指示剂，这是因为Hp含有，它能以尿素作为氮源；若有Hp，则菌落周围会出现 色环带。(2)下列对尿素溶液进行灭菌的最适方法是灭菌。A.高压蒸汽 B.紫外灯照射C.70%酒精浸

32、泡 D.过滤第六十八页，讲稿共七十八页哦(3)步骤X表示。在无菌条件下操作时，先将菌液稀释，然后将菌液到培养基平面上。菌液稀释的目的是为了获得菌落。(4)在培养时，需将培养皿倒置并放在中。若不倒置培养，将导致 。(5)临床上用14C呼气实验检测人体是否感染Hp，其基本原理是Hp能将14C标记的分解为NH3和14CO2。第六十九页，讲稿共七十八页哦【解题指南】解答本题需注意两个方面：(1)细菌和真菌的培养步骤一般为配制培养基、高温灭菌、冷却倒平板、接种、适宜条件下进行培养，依据这一步骤推测X的名称。(2)检测尿素是否分解依据其分解产物呈碱性，用酸碱指示剂酚红检测。第七十页，讲稿共七十八页哦【解析

33、】(1)幽门螺杆菌中含有脲酶，能将尿素分解成为NH3和CO2，故尿素为氮源。NH3为碱性，能使酚红呈红色，故菌落周围会出现红色环带。(2)尿素在高温下分解，故不能用高温灭菌法，只能采取过滤的方法。(3)由细菌和真菌培养操作步骤可知，X为接种。接种时，应将菌种均匀涂布在培养基上。为了获得单菌落，接种前应该稀释菌液。(4)为了形成单菌落还应该将培养皿倒置在恒温箱中培养。(5)用14C标记尿素，分解后标记物全部在CO2中。第七十一页，讲稿共七十八页哦答案：(1)脲酶红(2)D(3)接种涂布单(4)恒温培养箱无法形成单菌落(5)尿素第七十二页，讲稿共七十八页哦【加固训练】尿素是一种重要的农业肥料，但若

34、不经细菌的分解，就不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，下列是从土壤中分离分解尿素细菌的有关问题，请分析回答：第七十三页，讲稿共七十八页哦(1)上图是利用 法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步 分散到培养基的表面。(2)如果要对培养的菌落进行纯化，在培养基上划线操作中，操作的第一步及每次划线之前都要灼烧接种环，目的是对接种环进行 。第七十四页，讲稿共七十八页哦(3)下表是一种培养基配方：制备培养基的操作步骤是()a.倒平板b.计算c.溶化d.称量e.灭菌A.abcdeB.ebdcaC.bdcaeD.bdcea第七十五页，讲稿共七十八页哦该培养基属于培养基(多选)()A.液体B

35、.固体C.鉴定D.选择E.天然使用该培养基的目的是 。在培养基中加入指示剂，可初步鉴定出该种细菌能分解尿素。(4)在进行分离分解尿素的细菌实验时，A同学从培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。A同学的实验结果产生的原因可能有(多选)()A.由于土样不同B.由于培养基污染C.由于操作失误D.没有设置对照第七十六页，讲稿共七十八页哦【解析】(1)图中的接种方法是划线法，该方法随着划线次数的增多，线上的细菌密度逐渐减小，最后成为单个分布的细菌。(2)接种前要对接种环进行灼烧灭菌，杀死接种环上存留的杂菌。(3)制备培养基的基本步骤是计算称量溶化灭菌倒平板。从成分上看，该培养基中尿素是唯一的氮源，所以属于选择培养基，目的是筛选能分解尿素的细菌。因为含有琼脂糖，所以该培养基又属于固体培养基。第七十七页，讲稿共七十八页哦感谢大家观看第七十八页，讲稿共七十八页哦