糖和苷 (2).ppt

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1、关于糖和苷(2)现在学习的是第1页，共89页目的要求：1熟悉糖的结构类型，掌握糖熟悉糖的结构类型，掌握糖Haworth式的式的端基碳端基碳构型、构型、构象及糖的理化性质。构象及糖的理化性质。2熟悉苷的结构类型，掌握苷的一般性质、苷键的裂解方熟悉苷的结构类型，掌握苷的一般性质、苷键的裂解方法及其裂解规律。法及其裂解规律。3掌握苷元和糖、糖和糖之间连接位置、连接顺序以及苷掌握苷元和糖、糖和糖之间连接位置、连接顺序以及苷键构型的确定方法。键构型的确定方法。4掌握糖和苷的提取分离方法。掌握糖和苷的提取分离方法。现在学习的是第2页，共89页第一节 单糖的立体结构 单糖(monosaccharides)是

2、多羟基醛或酮，是组成糖及其衍生物的基本单位。单糖的结构可用Fisher和Haworth投影式表示。CH2OHOHHOOHHOHHCH2OHCH2OHOHHOOHHHHOCH2OHD-果糖 DfructoseL-山梨糖 L-sorbose2-酮羰基现在学习的是第3页，共89页CHOOHHHHOOHHOHHCH2OH葡萄糖FisherOHH OO HC H2O HO HHHHO HOOHH OO HC H2O HO HHHO HHOHaworth现在学习的是第4页，共89页一、单糖的绝对构型一、单糖的绝对构型 习惯上把单糖Fisher投影式中距羰基最远的那个不对称碳原子的构型定为整个糖分子的绝对构

3、型。其羟基向右的为D型，向左的为L-型。CHOOHHHHOHHOCH2OHCHOHHOHHOOHHCH2OHL-阿拉伯糖D-来苏糖现在学习的是第5页，共89页在Haworth式中也是看那个不对称碳原子上的取代基，向上为型，向下为型。D-葡萄糖OOCH3L-鼠李糖现在学习的是第6页，共89页二、单糖的端基差向异构体 单糖成环后新形成的一个不对称碳原单糖成环后新形成的一个不对称碳原子称为端基碳子称为端基碳(anomeric carbon)，生成，生成的一对差向异构体有的一对差向异构体有、二种构型。二种构型。Fisher投影式：投影式：C1-OH与原与原C5(六碳糖六碳糖)或或C4(五碳糖五碳糖)-

4、OH，顺式的为顺式的为，反式的为，反式的为。Haworth投影式：投影式：C1-OH与原与原C5(六碳糖六碳糖)或或C4(五碳五碳糖糖)-取代基取代基，异侧的为异侧的为，同侧的为，同侧的为。现在学习的是第7页，共89页现在学习的是第8页，共89页OOHOOHCH3CH3L鼠李糖异侧同侧现在学习的是第9页，共89页三、单糖的氧环 自然界的糖都以六元或五元氧环的形式 存 在。五 元 氧 环 的 称 为 呋 喃 糖（furanose)，六元氧环的称为吡喃糖（pyranose).现在学习的是第10页，共89页四、单糖的构象Haworth式更接近糖结构的真实情况，但仍是一种简化的表示方法。呋喃环：基本为

5、一平面（如：信封式），无明显的结构变化。吡喃环：以椅式构象为优势构象，C1或1C。现在学习的是第11页，共89页绝大多数单糖的优势构象是C1式，只有极少数如L-鼠李糖等的优势构象是1C式。现在学习的是第12页，共89页第二节、糖和苷的分类 单糖 monosaccharides 低聚糖 oligosaccharides:由29个单糖基通过苷键键合而成的直糖链或支糖链的聚糖。多聚糖 polysaccharides：由十个以上的单糖基通过苷键键合而成的聚糖。现在学习的是第13页，共89页一、单糖 monosaccharides1.五碳醛糖aldopentosesCHOOHHHHOHHOCH2OHCH

6、OHHOHHOOHHCH2OHL-阿拉伯糖 L-arabinoseD-来苏糖D-lyxose现在学习的是第14页，共89页2.甲基五碳糖OCH3L-鼠李糖L-rhamnoseCHOOHHHHOHHOOHHCH3L-鼠李糖L-rhamnose现在学习的是第15页，共89页3.六碳醛糖aldohexosesCHOOHHHHOOHHOHHCH2OHCHOOHHHHOHHOOHHCH2OHD-半乳糖D-葡萄糖现在学习的是第16页，共89页OOD-mannoseD-甘露糖OD-阿洛糖D-alloseOD-galactoseD-半乳糖2-位异构3-位异构4-位异构D-葡萄糖D-glucose现在学习的是第

7、17页，共89页4.六碳酮糖六碳酮糖ketohexose,hexuloseCH2OHOHHOOHHOHHCH2OHCH2OHOHHOOHHHHOCH2OHD-果糖 DfructoseL-山梨糖 L-sorbose现在学习的是第18页，共89页5.分支链的单糖CHOHOHCH2OHHOCH2OHCHOHOCH2HHOHCH2OHHOHD芹糖D金缕梅糖现在学习的是第19页，共89页单糖的一个或几个醇羟基换成氨基。天然存在的氨基糖多为2-氨基-2-去氧醛糖。6.氨基糖(amino sugar):CHONH2HHHOOHHOHHCH2OH2-氨基-2-去氧-D-葡萄糖CHOHCH3NHOHHHHOHH

8、OCH2OH2-甲氨基-2-去氧-L-葡萄糖现在学习的是第20页，共89页7.7.去 氧 糖去 氧 糖(d e o x y s u g a r s)单糖分子的一个或两个羟基为氢原子代替的糖。常见的有6-去氧糖，甲基五碳糖，2，6-二去氧糖及其3-O-甲醚等。CHOCH2OHHOHHOHHCH2OHCHOCH2OCH3HHHOHHOCH2OHD毛地黄毒糖L夹竹桃糖现在学习的是第21页，共89页8.糖醇 单糖的醛或酮还原成羟基后所得的多元醇。CH2OHHHOOHHOHHHHOCH2OHCH2OHOHHHHOOHHOHHCH2OH卫矛醇D山梨醇现在学习的是第22页，共89页9.糖醛酸OCOOHOHO

9、HOHH.OHOCOOHOHOHH.OHHOD葡萄糖醛酸D半乳糖醛酸现在学习的是第23页，共89页10.环醇类HOOHOHOHOHOHOHHOOCH3OHOHHOHOOHOHOHOHL-(-)-matezodamboseL-(-)-bornositolD-槲皮醇环状的多羟基化合物。从生源上看属于单糖衍生物。环状的多羟基化合物。从生源上看属于单糖衍生物。现在学习的是第24页，共89页二、低聚糖 oligosaccharides 二糖：蔗糖据单糖的个数 三糖：棉子糖 四糖：水苏糖 五糖：毛蕊糖 还原糖：樱草糖据有无游离的醛或酮基 非还原糖：蔗糖，大 多数的三、四、五糖等现在学习的是第25页，共89

10、页三、多聚糖 polysaccharides据在生物体内的功能分为：形成动植物的支持组织：如植物中的纤维素、甲壳类动物的甲壳素；分子呈直链型，不溶于水；为动植物储存养料：如淀粉、肝糖元等；分子多为支链型分子，可溶于热水成胶体溶液，可经酶催化水解释放单糖以供应能量。现在学习的是第26页，共89页均多糖（homosaccharide):由一种单糖组成。如：由葡聚糖为glucan。杂多糖（heterosaccharide):由两种以上的单糖组成，如：葡萄甘露聚糖glucomannan。据单糖的种类分为：植物多糖动物多糖据来源分为：现在学习的是第27页，共89页四、苷类(glycosides)（配糖体

11、）糖或糖的衍生物 非糖物质（氨基糖，糖醛酸等）（黄酮，萜类等）苷(glycosides)糖的端基碳原子苷键、现在学习的是第28页，共89页据苷键原子的不同：据苷键原子的不同：氧苷(醇苷、酚苷、氰苷、酯苷、吲哚苷)硫苷：端基-OH与苷元上的巯基而成的苷。氮苷：端基碳与苷元上的氮原子相连的苷。碳苷：糖基直接连在苷元碳原子的苷类。现在学习的是第29页，共89页1.氧苷OHOOHOHCH2OHOHOOHOOHOHCH2OHOCH2OHOHOOHOHCH2OHONCCH2OHOHOOHOHCH2OHOOCH2CH2OH醇苷酚苷氰苷酯苷红景天苷天麻苷垂盆草苷山慈姑苷现在学习的是第30页，共89页吲哚苷NH

12、OOOOHOHOHHO菘苔苷现在学习的是第31页，共89页2.硫苷OHOOHOHCH2OHSNSOSO3OCH3萝卜苷现在学习的是第32页，共89页3.氮苷NNNNNH2OOHOHHHHHHO腺苷腺苷现在学习的是第33页，共89页4.碳苷：由苷元的酚羟基所活化的邻或对位的氢与糖的端基羟基脱水缩合而成。糖多接在间二或间三酚羟基环上。HOOHOHHOOHOHHHOOHOHglcHOOHOHglc 碳苷的苷元多为黄酮类、蒽醌类化合物，黄酮碳苷糖多接在6-或8-位上。现在学习的是第34页，共89页OHOOHOOHOHO芒果苷1468现在学习的是第35页，共89页第三节、糖的化学性质与糖和苷的分离和结构

13、鉴定密切相关的反应：氧化反应 糠醛的形成反应 羟基反应 羰基反应 硼酸络合反应现在学习的是第36页，共89页一、氧化反应过碘酸反应适用范围：邻二醇，-氨基醇，-羟基醛（酮），邻二酮和某些活泼次甲基等结构。特点：定量，一个邻二醇，消耗一分子过碘酸；水溶液或亲水有机溶剂中进行；邻二醇顺式反应比反式快（中性或弱酸性）；对固定在环的异侧并无扭曲余地的邻二醇羟基不反应。应用：推测糖的种类、糖的氧环大小、糖与糖的连接位置、分子中邻二醇羟基的数目及碳的构型等。现在学习的是第37页，共89页CCOHHHOHCCCOHHHOH OHHIO4CHOOHC+IO4CHOOHC+HCOOHCCOHHHOIO4CHOH

14、OOC+2CCNH2HHOHIO4CHOOHC+NH3现在学习的是第38页，共89页OOOOCH33IO4-OOHCOHCOCHOOHCOOCH3+HCOOH现在学习的是第39页，共89页反应机理：反应机理：酸性或中性介质酸性或中性介质五元环状酯中间体五元环状酯中间体C-OHC-OH+H2IO5C-OC-OI=O=OOHC=OC=O+HIO3+H2O现在学习的是第40页，共89页OOCH3OOCH3OOCH3甲基-D-甘露糖 甲基-D-半乳糖 甲基-D-葡萄糖在弱酸性或中性介质中，顺式在弱酸性或中性介质中，顺式1,2-二元醇比反式二元醇比反式的反应快的多。的反应快的多。现在学习的是第41页，共

15、89页应用：应用：常用于糖类和多元醇结构研究。从过碘酸常用于糖类和多元醇结构研究。从过碘酸的消耗量到甲醛或甲酸等的生成量测定，的消耗量到甲醛或甲酸等的生成量测定，对糖的结构推测等都有很大的作用。对糖的结构推测等都有很大的作用。游离的单糖按游离的单糖按Fisher式，成苷的糖按式，成苷的糖按Haworth 式估算消耗的过碘酸的摩尔数。式估算消耗的过碘酸的摩尔数。现在学习的是第42页，共89页二、糠醛的形成反应二、糠醛的形成反应 单糖在浓酸作用下，脱去三分子水，生成具有呋喃环结构的糠醛衍生物。多糖先水解成单糖，然后再脱水生成相同的产物。糖醛酸先脱羧，再形成糠醛。ORCHO糠醛 5-甲糠醛5-羟甲糠

16、醛 R=H,R=CH3,R=CH2OH,现在学习的是第43页，共89页应用：检测糖类应用：检测糖类 原理原理：糖在浓酸的作用下发生糠醛反应，所生成的糠醛衍生物和许多芳胺、酚类以及具有活性次甲基基团的化合物缩合生成有色物质。根据这一性质配置了糖的显色剂。根据这一性质配置了糖的显色剂。试剂试剂：有机酸（三氯乙酸、草酸等）或无机酸（硫酸、磷酸等）酚或胺类：如：苯酚，萘酚，苯胺。含有活泼次甲基的化合物：如蒽酮现在学习的是第44页，共89页 Molish反应：浓硫酸和-萘酚OROHO糠醛与糠醛与-萘酚缩萘酚缩合物合物 紫色紫色常用的层析显色剂：常用的层析显色剂：邻苯二甲酸和苯胺（邻苯二甲酸和苯胺（蓝色蓝

17、色）现在学习的是第45页，共89页三、羟基反应 糖的羟基反应包括：醚化反应、酰化反应和缩酮（醛）反应。羟基的活泼性：半缩醛羟基(C1-OH）伯醇基(C6-OH)C2-OH其它仲醇基 e-OH a-OH 现在学习的是第46页，共89页(一一)醚化（甲基化）反应醚化（甲基化）反应 常采用的有常采用的有:甲醚化、三甲硅醚化和三苯甲醚化、三甲硅醚化和三苯甲醚化反应。甲醚化反应。甲基化常用的方法：甲基化常用的方法：Kuhn改良法改良法：是在：是在Haworth法和法和Purdic法的基础法的基础上改良的。在二甲基甲酰胺（上改良的。在二甲基甲酰胺（DMF）溶液中用）溶液中用CH3I和和Ag2O,或或(CH

18、3)2SO4和和BaO/Ba(OH)2进行反应。进行反应。箱守法（箱守法（Hakomori)：在二甲基亚砜（：在二甲基亚砜（DMSO）中用）中用NaH和和CH3I进行反应。进行反应。现在学习的是第47页，共89页（二）酰化反应（二）酰化反应包括：乙酰化和对甲苯磺酰化。反应条件：在醋酐加醋酸钠，或醋酐中加氯化锌或在醋酐加吡啶溶液中反应，室温放置即可得到全乙酰化的糖。将糖作成缩醛（酮）可进行部分乙酰化。用途：NMR测定，鉴别羟基数目；GC-MS联用，决定多糖连接点。现在学习的是第48页，共89页3.缩酮和缩醛反应 酮或醛在脱水剂（如矿酸、无水氯化锌和无水硫酸铜）存在下和多元醇的两个有适当空间位置的

19、羟基易形成环状缩酮或缩醛。缩酮反应：一般酮类易与顺邻羟基形成五元环状物；缩醛反应：醛类易与1,3-双羟基生成六元环状物。现在学习的是第49页，共89页 糖与丙酮生成的五元环缩酮称为异丙叉衍生物，又称丙酮加成物。-D-半乳糖半乳糖 1,2;3,4-二二-O-异丙叉异丙叉-D-半乳吡喃糖半乳吡喃糖O+CH3COCH3H2SO4OOOOO现在学习的是第50页，共89页应用应用:保护游离糖的一对或两对羟基。保护游离糖的一对或两对羟基。OCHOCH2-OOO(CH3)2SO4NaOHOCHOCH2-OH3COOOHCl/H2OOH3CO现在学习的是第51页，共89页四、羰基反应还原糖和一分子苯肼缩合生成

20、糖苯腙，多数糖苯腙是还原糖和一分子苯肼缩合生成糖苯腙，多数糖苯腙是水溶性的，选择适当的肼可以制得糖腙以鉴别糖类，也水溶性的，选择适当的肼可以制得糖腙以鉴别糖类，也可用于分离和纯化糖。可用于分离和纯化糖。糖和过量的苯肼糖和过量的苯肼作用，在作用，在C1和和C2导入两分子苯肼，生成导入两分子苯肼，生成糖脎。多难溶于水，有好晶型。糖脎。多难溶于水，有好晶型。2-去氧糖不成脎。去氧糖不成脎。现在学习的是第52页，共89页五、硼酸络合反应 糖的邻二羟基与许多试剂可生成络合物，可用于糖的分离、鉴定和构型推定。现在学习的是第53页，共89页第四节、苷键的裂解（糖链的降解）酸催化水解反应(醇解)乙酰解反应 碱

21、催化水解和-消除反应 酶催化水解 过碘酸裂解反应现在学习的是第54页，共89页1.酸催化水解反应OORH-H+OORHH+ROH-ROHOHOH+H2O-H2OOOH2HOOHH+H+-H+H+现在学习的是第55页，共89页水解难易规律:苷原子的电子云密度 和空间环境苷原子不同:N-苷 O-苷 S-苷 C-苷呋喃糖 吡喃糖 (50-100倍)酮糖醛糖吡喃糖苷中C5位的取代基越大越难水解,即:五碳糖甲基五碳糖六碳糖七碳糖糖醛酸去氧糖羟基糖氨基糖OORNH2OOROOROH醇苷OHOOHOHCH2OHOHOOHOOHOHCH2OHOCH2OH醇甙酚甙 a-易质子化，苷元为大基团：a-e-（稳定性）

22、现在学习的是第57页，共89页氮原子位于酰胺或嘧啶位置时,N-苷难于用矿酸水解.（p78）NOOOOHOO朱朱砂砂莲莲苷苷必须先将酰胺羰基还原为羟基后才能酸水解现在学习的是第58页，共89页酸水解方法 510%HCl/H2SO4/甲醇 两相水解法：对酸不稳定苷元用酸水/有机溶剂（后加）TLC斑点检查现在学习的是第59页，共89页2.碱催化水解 苷元为酸、酚、有羰基共轭的烯醇类等，苷键具有酯的性质，遇碱能水解。（自己看书）现在学习的是第60页，共89页3.酶催化水解酶促反应具有专属性高，条件温和的特点。麦芽糖酶（maltase）专使-葡萄糖苷键水解。杏仁苷酶（emulsin）是一种-葡萄糖苷水解

23、酶。用酶水解苷键可以获知苷键的构型，可以保持苷元结构不变，还可以保留部分苷键得到次级苷或低聚糖，以便获知苷元和糖、糖和糖之间的连接方式。现在学习的是第61页，共89页4.过碘酸裂解反应(Smith裂解法）OHOOHOHCH2OHOROHCOHCOCH2OHORBH4H+HOCH2HOCH2OCH2OHORHCOOH+HOCH2HOCH2CHOOHCH2OHROH+IO4苷元结构容易改变的苷以及C-苷的水解研究特别适宜。但不适于苷元上也有1，2-二元醇结构的苷类。现在学习的是第62页，共89页OHOOHOHCH2OHROHCOHCOCH2OHRIO4BH4HHOCH2HOCH2OCH2OHRHC

24、OOH+HOCH2HOCH2CH2OHOHCH2OHR+RIO4CHOHCOOHC-苷的水解：比原苷元多一个醛。现在学习的是第63页，共89页5、糖醛酸苷的选择性水解反应 糖醛酸的苷键是很难用稀酸水解的，需要采用一些特殊的选择性水解反应，如紫外光照射法、四醋酸铅分解法、醋酐-吡啶法等。现在学习的是第64页，共89页第五节、糖的核磁共振性质 一般1H-NMR谱中，糖端基质子信号在4.3-6.0，其余部分在3.2-4.2左右，甲基五碳糖的甲基信号在1.0左右，因此可以从端基质子的个数和化学位移值可以推测糖的种类、个数及糖与糖、糖与苷元的连接位置。现在学习的是第65页，共89页C1-H和C2-H的偶

25、合常数，决定端基碳的构型。OHOH2CHOOHHHORHOOHOH2CHOOHHORHHO-D-葡萄糖-D-葡萄糖六碳吡喃糖苷，当是葡萄糖或半乳糖，-构型其J1，2为68Hz左右，而-构型J1，2为24Hz左右。现在学习的是第66页，共89页OHOH2CHOHOHHORHOOHOH2CHOHOHORHHO-D-甘露糖-D-甘露糖而甘露糖和鼠李糖难于区分端基碳的构型。呋喃型糖也不能通过端基质子的偶合常数来判断它们的苷键构型。现在学习的是第67页，共89页 JC，H也可对六碳吡喃糖苷的竖键（即-型）和横键（-型）的鉴定有很大帮助，160-165Hz为-D或-L型苷键，170-175Hz为-D或 -

26、L型苷键。13C-NMR：anomeric 碳：98-110，D型 100,-D 100C2 C4碳：70-85C5、C6碳：60-65CH3（甲基五碳糖）：18现在学习的是第68页，共89页 苷化位移（glycosidation shift）糖的端基羟基成苷后，端基碳（C1）和苷元的-C的化学位移均向低场移动，而相邻的碳（-C）稍向高场移动，偶尔也有稍向低场移动的，这种苷化前后的化学变化，称做。苷化位移规律：一、醇苷：端基及-C向低场1、苷元为链状，苷化位移随伯、仲、叔递减。现在学习的是第69页，共89页2、苷元为环醇，若-C有烷基取代，苷化位移与苷元位及糖的端基手性有关。苷元位及糖的端基手

27、性相同，与-C无取代相似。苷元位及糖的端基手性不同，苷化位移比-C无取代大。现在学习的是第70页，共89页二、酚苷：与醇苷相反，-C向高场，-C向低场。三、酯苷：与醇苷相反，-C向高场，-C向低场。现在学习的是第71页，共89页第六节、糖链结构的测定三个问题：单糖组成；糖的连接顺序和位置；苷键构型。（一）纯度鉴定 常用的纯度鉴定法有：官能团分析；比旋度；毛细管气相层析；HPLC等。电泳是常用的鉴定纯度方法。现在学习的是第72页，共89页多糖的分子量只是一种统计平均值。（二）分子量的测定 单糖、低聚糖及其苷的分子量测定目前大多用质谱法。在不同型号的Sephadex或Sepharose柱层析上测定

28、多糖分子量是用量小、操作简便的方法。工作中需要一系列结构相似的已知分子量得多糖作比标准曲线。现在学习的是第73页，共89页（三）单糖的鉴定1、糖的种类 一般是将苷键全水解，水解产物鉴定。色谱法：PC；TLC；GC（衍生物）；HPLCNMR：化学位移；J值化学法：如Molish反应现在学习的是第74页，共89页2、糖的数目的确定主要根据NMR：碳谱 90110；氢谱 46 2D-NMR；MS等。（四）单糖之间连接位置的决定 将糖链全甲基化，然后水解苷键，鉴定所获得的甲基化单糖，其中游离-OH的部位就是连结位置。目前常使用 13C-NMR 方法，主要是通过归属各碳信号，以确定产生苷化位移的碳。现在

29、学习的是第75页，共89页 （五）糖链连接顺序的决定早期是缓和水解法。将糖链水解成较小的片断（各种低聚糖）再分析。质谱分析也以用于低聚糖的结构研究。自旋晶格弛豫时间T1是结构研究中常用的另外一个参数。一般说外侧糖比内侧糖的T1 值大。现在学习的是第76页，共89页观察两糖之间质子的远程偶合确定。OOAcOOHOOOAcHOOAcHHAcOAcOAcOAcOOAcHAcOH3.893.66现在学习的是第77页，共89页 （六）苷键构型的确定核磁共振技术酶催化水解分子旋光差（Klyne法）Klyne将苷和苷元的分子旋光差与组成该苷元的糖的一对甲苷的分子旋光度进行比较，数值上相接近的一个便是与之有相

30、同苷键的一个（参见94）。现在学习的是第78页，共89页第七节、糖和苷的提取分离 为防止苷在提取中发生水解，可用乙醇或沸水作为溶剂进行提取。现在学习的是第79页，共89页第七节第七节 糖和苷的提取分离糖和苷的提取分离Extraction and Isolation of Saccharides and Glycosides 提取分离糖及苷时须考虑的问题提取分离糖及苷时须考虑的问题 酶对糖及其苷类提取的影响酶对糖及其苷类提取的影响 欲提取原始苷时，需杀酶。欲提取原始苷时，需杀酶。用用60%以上乙醇、甲醇或以上乙醇、甲醇或80以上水处理；以上水处理；欲提取次生苷或苷元，需利用酶，如发酵等。欲提取次

31、生苷或苷元，需利用酶，如发酵等。提取糖及苷类溶剂的选择提取糖及苷类溶剂的选择 杂质的除去杂质的除去现在学习的是第80页，共89页 一、提取一、提取 主要为溶剂法主要为溶剂法水、稀醇（单糖、低聚糖、多糖）。水、稀醇（单糖、低聚糖、多糖）。糖类的提取可根据它们对乙醇和水的溶解度不同，而采用冷热水、冷糖类的提取可根据它们对乙醇和水的溶解度不同，而采用冷热水、冷热稀醇等条件。热稀醇等条件。苷类分子的极性随着糖基的增多而增大苷类分子的极性随着糖基的增多而增大。可根据其极性大小，来。可根据其极性大小，来选择相适应的溶剂。选择相适应的溶剂。破坏或抑制植物体内酶的方法：破坏或抑制植物体内酶的方法：采集新鲜材料

32、采集新鲜材料迅速加热干燥迅速加热干燥冷冻保存等冷冻保存等 现在学习的是第81页，共89页 二、分离二、分离 主要有以下方法：主要有以下方法：1活性炭柱色谱活性炭柱色谱 2纤维素色谱纤维素色谱 3离子交换柱色谱离子交换柱色谱 4凝胶柱色谱凝胶柱色谱 5季铵氢氧化物沉淀法季铵氢氧化物沉淀法 6分级沉淀或分级溶解法分级沉淀或分级溶解法 7蛋白质除去法蛋白质除去法 现在学习的是第82页，共89页 1活性炭柱色谱活性炭柱色谱 （1）概述）概述 用途用途：分离水溶性物质较好：分离水溶性物质较好 如：氨基酸、糖类及某些苷类。如：氨基酸、糖类及某些苷类。特点特点：（对于活性炭柱色谱）：（对于活性炭柱色谱）上样

33、量大，分离效果较好，适合大量制备；上样量大，分离效果较好，适合大量制备；来源容易，价格廉；来源容易，价格廉；缺点：无测定其吸附力级别的理想方法。缺点：无测定其吸附力级别的理想方法。（2）活性炭对物质的吸附规律）活性炭对物质的吸附规律 对分子量大的化合物吸附力大于分子量小的化合物，即：对分子量大的化合物吸附力大于分子量小的化合物，即：多糖多糖 单糖单糖 现在学习的是第83页，共89页 活性炭在水溶液中的吸附力最强，在有机溶剂中吸附力较弱。活性炭在水溶液中的吸附力最强，在有机溶剂中吸附力较弱。洗脱洗脱顺序顺序：H2O、10%、20%、30%、50%、70%乙醇液乙醇液 无机盐无机盐 二糖二糖 三糖

34、三糖 多糖多糖 单糖等单糖等 2离子交换柱色谱离子交换柱色谱 除水提液中的酸、碱性成分和无机离子；除水提液中的酸、碱性成分和无机离子；制成硼酸络合物制成硼酸络合物强碱性阴离子交换树脂（不同浓度硼酸盐液强碱性阴离子交换树脂（不同浓度硼酸盐液洗脱）洗脱）现在学习的是第84页，共89页4凝胶柱色谱凝胶柱色谱 （1）常用商品名称及型号：常用商品名称及型号：葡聚糖凝胶（商品名：葡聚糖凝胶（商品名：Sephadex G）如：如：G-10、G-15、G-200等等 10表示吸水量乘以表示吸水量乘以10，即，即1.0ml/g 的吸水量的吸水量 琼脂糖凝胶（琼脂糖凝胶（Sepharose，Bio-Gel A）聚

35、丙烯酰胺凝胶（聚丙烯酰胺凝胶（Bio-Gel P）羟丙酰基交联葡聚糖凝胶（羟丙酰基交联葡聚糖凝胶（Sephadex LH-20）（亲脂性，可在有机溶剂中进行分离的分子筛）（亲脂性，可在有机溶剂中进行分离的分子筛）（2）操作过程：）操作过程：除除LH-20外，均在外，均在H2O中进行中进行。现在学习的是第85页，共89页 将凝胶在适当的溶液中浸泡（多为洗脱剂）；将凝胶在适当的溶液中浸泡（多为洗脱剂）；待充分膨胀后装入层析柱；待充分膨胀后装入层析柱；用洗脱液洗脱；用洗脱液洗脱；收集、回收溶液，干燥。收集、回收溶液，干燥。（3）洗脱溶剂的选择：洗脱溶剂的选择：分离中性物质分离中性物质水及电解质溶液水

36、及电解质溶液 （酸、碱、盐溶液及缓冲液）（酸、碱、盐溶液及缓冲液）阻滞较大的组分阻滞较大的组分水水+有机溶液有机溶液 （水（水-甲醇、水甲醇、水-乙醇、水乙醇、水-丙酮等）丙酮等）注意：注意：LH-20可用有机溶液进行溶胀可用有机溶液进行溶胀 （如：（如：CHCl3、丁醇、二氧六环等）、丁醇、二氧六环等）(适用：有机物质的分离，如：脂类、固醇类等适用：有机物质的分离，如：脂类、固醇类等)现在学习的是第86页，共89页 5季铵氢氧化物沉淀法季铵氢氧化物沉淀法 6分级沉淀或分级溶解法分级沉淀或分级溶解法 7蛋白质除去法蛋白质除去法 现在学习的是第87页，共89页三、糖的提取分离实例三、糖的提取分离

37、实例 要对类型繁多、结构复杂、性质差异明显的糖及其苷类提出要对类型繁多、结构复杂、性质差异明显的糖及其苷类提出共同的基本提取分离方案比较困难。共同的基本提取分离方案比较困难。下面以下面以地黄根地黄根中单糖和低聚糖的提取分离为例进行简要讨论。中单糖和低聚糖的提取分离为例进行简要讨论。取鲜根取鲜根热热EtOH、H2O提提阴阳离子交换树脂（除酸碱成分）得中性阴阳离子交换树脂（除酸碱成分）得中性成分成分 活性炭柱（活性炭柱（15%HOAc处理）处理）等，等，得：得：D-葡萄糖、葡萄糖、D-半乳糖、半乳糖、D-果糖、果糖、蔗糖、蔗糖、棉子糖、棉子糖、甘露三糖甘露三糖、水苏水苏糖糖(四糖四糖)、毛蕊糖毛蕊糖(五糖五糖)现在学习的是第88页，共89页感谢大家观看感谢大家观看现在学习的是第89页，共89页