第五章黄酮类化合物粉课件.ppt

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1、第五章黄酮类化合物第五章黄酮类化合物粉粉第1页，此课件共51页哦v掌握黄酮类化合物的基本结构、结构类型、理化性质、提取分离的方法；v熟悉黄酮类化合物的性状和鉴定的基本知识。教学目标教学目标第2页，此课件共51页哦主 要 内 容 结结 构构 类类 型型2 理理 化化 性性 质质3概概 述述14 提提 取取 分分 离离 及及 鉴鉴 定定第3页，此课件共51页哦 黄酮类化合物广泛分布于植物界中，而且生理活性多种多样，引黄酮类化合物广泛分布于植物界中，而且生理活性多种多样，引起了国内外的广泛重视，研究进展很快。起了国内外的广泛重视，研究进展很快。主要分布于芸香科主要分布于芸香科 橘、黄柏、芸香、（两面

2、针）橘、黄柏、芸香、（两面针）、豆科（合、豆科（合欢、含羞草、皂荚）、菊科、银杏科（银杏）欢、含羞草、皂荚）、菊科、银杏科（银杏）概述概述第4页，此课件共51页哦v芸香科芸香科柑橘枳实芸香第5页，此课件共51页哦v豆科昼开夜合昼开夜合第6页，此课件共51页哦第7页，此课件共51页哦黄酮类化合物的定义黄酮类化合物的定义经典定义：母核为经典定义：母核为2-2-苯基色原酮苯基色原酮的一系列的一系列化合物。化合物。现代定义：现代定义：两个苯环通两个苯环通过三个碳原子相互连接过三个碳原子相互连接而成的一系列化合物，而成的一系列化合物，即具有即具有C6-C3-C6C6-C3-C6结构母结构母核的一系列化合

3、物。核的一系列化合物。OOOO12345678123456OACB第8页，此课件共51页哦黄酮类化合物的基本结构黄酮类化合物的基本结构v C6-C3-C6v A、B环上常见的取代基有环上常见的取代基有羟基羟基、甲基、甲氧基及异戊烯基。甲基、甲氧基及异戊烯基。OACBv苷元部分苷元部分分类依据：分类依据：三碳链的氧化程度；三碳链的氧化程度；三碳链是否成环；三碳链是否成环；B环连接的位置不同。环连接的位置不同。第9页，此课件共51页哦 黄酮类化合物的苷元的结构类型根据三碳链氧化程度、黄酮类化合物的苷元的结构类型根据三碳链氧化程度、B环环（苯基）连接位置（苯基）连接位置（2-位或位或3-位）以及三碳

4、链是否构成环状分为位）以及三碳链是否构成环状分为下列类型：下列类型：黄酮和黄酮醇类黄酮和黄酮醇类二氢黄酮和二氢黄酮醇类二氢黄酮和二氢黄酮醇类异黄酮和二氢异黄酮类异黄酮和二氢异黄酮类查耳酮和二氢查耳酮类查耳酮和二氢查耳酮类 花色素花色素黄烷醇类黄烷醇类橙酮类橙酮类 其他黄酮类其他黄酮类黄酮类化合物的结构类型黄酮类化合物的结构类型第10页，此课件共51页哦OOOOOHOOOHOOOOOOOOO+OOOOHOOHOH简单黄酮类简单黄酮类黄酮醇类黄酮醇类二氢黄酮类二氢黄酮类二氢黄酮醇类二氢黄酮醇类异黄酮类异黄酮类二氢异黄酮类二氢异黄酮类花色素类花色素类二氢查尔酮类二氢查尔酮类查尔酮类查尔酮类黄烷黄烷-

5、3-醇醇 黄烷黄烷-3，4-二醇二醇 橙酮类橙酮类第11页，此课件共51页哦黄酮类化合物的分类黄酮类化合物的分类v糖部分糖部分黄酮苷中糖的连接位置规律：黄酮苷中糖的连接位置规律：1 1黄酮、二氢黄酮和异黄酮苷类：多在黄酮、二氢黄酮和异黄酮苷类：多在7-OH7-OH上形上形成单糖链苷。成单糖链苷。2 2黄酮醇和二氢黄酮醇苷类：多在黄酮醇和二氢黄酮醇苷类：多在3 3，7 7，33，4-OH4-OH上形成单糖链苷或在上形成单糖链苷或在3 3，7-7-；3 3，4-4-及及7 7，4-4-二二OHOH上形成双糖链苷。上形成双糖链苷。3 3花色苷类：多在花色苷类：多在3-OH3-OH上连接一个糖或形成上

6、连接一个糖或形成3 3，5-5-二葡萄糖苷。二葡萄糖苷。4 4C-C-苷：多连接在苷：多连接在6 6位或位或8 8位或位或6 6，8 8位都连接糖。位都连接糖。OACB第12页，此课件共51页哦掌握以下物结构式掌握以下物结构式OOOHOHOHOHOHOOHOHOHOOOHOHOOOOHOHOHCOOHOOOHOHOHOHO芸 香糖OOHOOHOHOMeOOOHOHOOOHOHglc黄芩素黄芩素OOHOOHOHOMe黄芩苷黄芩苷槲皮素槲皮素芦丁芦丁橙皮素橙皮素大豆素大豆素葛根素葛根素第13页，此课件共51页哦黄酮类化合物的理化性质黄酮类化合物的理化性质v性状 黄酮类化合黄酮类化合物颜色与结物颜色

7、与结构有什么关构有什么关系？系？类类 型型颜颜 色色黄酮、黄酮醇及其苷类黄酮、黄酮醇及其苷类灰黄灰黄-黄色黄色查尔酮查尔酮黄黄-橙黄色橙黄色二氢黄酮、二氢黄酮醇及二氢黄酮、二氢黄酮醇及黄烷醇黄烷醇几乎无色几乎无色花色素花色素一般一般pH7时显红色，时显红色，pH为为8.5时显紫色时显紫色pH8.5时显蓝色时显蓝色第14页，此课件共51页哦颜色与结构的关系颜色与结构的关系v黄酮类化合物的颜色与结构中的交叉共轭系黄酮类化合物的颜色与结构中的交叉共轭系统的有无和助色团的种类、数目及位置有关。统的有无和助色团的种类、数目及位置有关。v交叉共轭系统：交叉共轭系统：两个两个双键互不共轭，但分双键互不共轭，

8、但分别与第三个双键共轭别与第三个双键共轭形成的体系。共轭系形成的体系。共轭系统长容易呈色。统长容易呈色。v助色团：助色团：在在7位或位或4位引入位引入-OH及及-OCH3等等助色团后，产生助色团后，产生p-共共轭，使化合物颜色加轭，使化合物颜色加深深。第15页，此课件共51页哦类类 型型颜颜 色色黄酮、黄酮醇及其苷类黄酮、黄酮醇及其苷类灰黄灰黄-黄色黄色查尔酮查尔酮黄黄-橙黄色橙黄色二氢黄酮、二氢黄酮醇二氢黄酮、二氢黄酮醇及黄烷醇及黄烷醇几乎无色几乎无色花色素花色素一般一般pH7时显红色，时显红色，pH为为8.5时显紫色时显紫色pH8.5时显蓝色时显蓝色颜色与结构的关系颜色与结构的关系第16页

9、，此课件共51页哦溶解度与结构的关系溶解度与结构的关系类类 型型水中的溶解性水中的溶解性产生原因产生原因黄酮、黄酮黄酮、黄酮醇、查尔酮醇、查尔酮难溶难溶平面性分子，分子与分平面性分子，分子与分子间排列紧密，分子间子间排列紧密，分子间引力较大引力较大二氢黄酮、二氢黄酮、二氢黄酮醇二氢黄酮醇稍大稍大非平面型分子，非平面型分子，分子与分子与分子间排列不紧密，有分子间排列不紧密，有利于水分子进入利于水分子进入花色素花色素较大较大有盐的通性有盐的通性第17页，此课件共51页哦酸性与结构的关系酸性与结构的关系化合物化合物酸酸 性性溶解性溶解性7 7，4 4-二二OHOH黄酮黄酮强强5%5%碳酸氢钠水溶液碳

10、酸氢钠水溶液7-OH或或4-OH黄酮黄酮5%碳酸钠水溶液碳酸钠水溶液一般酚羟基黄酮一般酚羟基黄酮0.2%氢氧化钠水溶液氢氧化钠水溶液5-OH黄酮黄酮弱弱4%氢氧化钠水溶液氢氧化钠水溶液第18页，此课件共51页哦碱性与结构的关系碱性与结构的关系v黄酮类化合物分子中黄酮类化合物分子中-吡喃酮环上的吡喃酮环上的1-位氧原位氧原子子，因有未共用电子对，表现出微弱的碱性，可，因有未共用电子对，表现出微弱的碱性，可与强无机酸，如浓硫酸、浓盐酸等生成鍚盐，表与强无机酸，如浓硫酸、浓盐酸等生成鍚盐，表现出不同的颜色。现出不同的颜色。第19页，此课件共51页哦显色反应与结构的关系反应名称反应名称盐酸盐酸-镁粉反

11、应镁粉反应四氢硼钠反应四氢硼钠反应三氯化铝反应三氯化铝反应反应试剂反应试剂浓盐酸、镁粉2%四氢硼钠、浓硫酸1%三氯化铝乙醇溶液反应对象反应对象黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇二氢黄酮、二氢黄酮醇黄酮类化合物反应用途反应用途鉴定黄酮、黄酮醇、二氢鉴定黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇黄酮、二氢黄酮醇鉴定二氢黄酮、二氢黄酮鉴定二氢黄酮、二氢黄酮醇醇鉴定黄酮类化合物或作鉴定黄酮类化合物或作为显色剂为显色剂反应结果反应结果橙红-紫红色红红-紫红色紫红色黄色荧光或沉淀黄色荧光或沉淀第20页，此课件共51页哦显色反应与结构的关系显色反应与结构的关系反应名称反应名称锆盐锆盐-枸橼酸反应枸橼酸反应氨性氯化锶

12、反应氨性氯化锶反应三氯化铁反应三氯化铁反应反应试剂反应试剂2%二氯氧锆、2%枸橼酸0.01mol/L氯化锶、被氨气饱和的甲醇2%-5%三氯化铁反应对象反应对象3-或5-羟基黄酮或3，5-二羟基黄酮邻二酚羟基黄酮含酚羟基化合物反应用途反应用途鉴定黄酮分子中是否存在鉴定黄酮分子中是否存在3-或或5-羟基黄酮或羟基黄酮或3，5-二羟基黄酮二羟基黄酮鉴定黄酮分子中是否存在鉴定黄酮分子中是否存在邻二酚羟基邻二酚羟基鉴定黄酮分子中鉴定黄酮分子中是否存在酚羟基是否存在酚羟基反应结果反应结果黄色或先显黄后褪色黄色或先显黄后褪色 绿色绿色、棕色或黑色沉淀、棕色或黑色沉淀紫、紫、绿绿或或蓝色蓝色第21页，此课件共

13、51页哦黄酮类化合物的提取黄酮类化合物的提取 仔细阅读课本有关提取的内容，完成以下问仔细阅读课本有关提取的内容，完成以下问题：题：1.1.结合理化性质，说说黄酮类化合物常用结合理化性质，说说黄酮类化合物常用的提取方法及其原理。的提取方法及其原理。2.2.利用碱溶酸沉法提取黄酮类化合物时要利用碱溶酸沉法提取黄酮类化合物时要注意些什么？注意些什么？第22页，此课件共51页哦黄酮类化合物的分离黄酮类化合物的分离（一）（一）pH梯度萃取法梯度萃取法课堂讨论：课堂讨论：某提取浸膏中含有某提取浸膏中含有7-羟基黄酮、羟基黄酮、7,4-二羟基黄酮、二羟基黄酮、5-羟基黄酮、羟基黄酮、8-羟基黄酮四羟基黄酮四

14、种成分，请同学们以前后桌四名同学为单种成分，请同学们以前后桌四名同学为单位，分组讨论其分离方法，并设计相应的位，分组讨论其分离方法，并设计相应的工艺流程。工艺流程。第23页，此课件共51页哦（二）柱色谱法（二）柱色谱法 聚酰胺柱色谱：聚酰胺柱色谱：v酚羟基数目少酚羟基数目少 酚羟基数目多酚羟基数目多v易形成分子内氢键易形成分子内氢键 难形成分子内氢键难形成分子内氢键v芳香化程度低芳香化程度低 芳香化程度高芳香化程度高v异黄酮异黄酮 二氢黄酮二氢黄酮 黄酮黄酮 黄酮醇黄酮醇v游离黄酮游离黄酮 单糖苷单糖苷 双糖苷双糖苷 三糖苷三糖苷黄酮类化合物的分离黄酮类化合物的分离第24页，此课件共51页哦

15、1 1、性状性状 黄酮类化合物多为晶状固体，少数（如黄黄酮类化合物多为晶状固体，少数（如黄酮甙类）为无定形粉末。酮甙类）为无定形粉末。2 2、旋光性旋光性 甙元中，二氢黄酮、二氢黄酮醇、黄烷及甙元中，二氢黄酮、二氢黄酮醇、黄烷及黄烷醇具有手性碳，具旋光性，黄烷醇具有手性碳，具旋光性，其余黄酮类无其余黄酮类无旋光性。旋光性。甙类结构中含糖的部分结构，故均有甙类结构中含糖的部分结构，故均有旋光性，且多为左旋旋光性，且多为左旋。第二节第二节 黄酮类化合物的理化性质黄酮类化合物的理化性质第25页，此课件共51页哦 3 3、颜色颜色 黄酮的色原酮部分无色，在黄酮的色原酮部分无色，在2-2-位上引入苯环后

16、，位上引入苯环后，即形成交叉共轭体系，使共轭链延长，因而呈现出颜即形成交叉共轭体系，使共轭链延长，因而呈现出颜色。色。黄酮、黄酮醇及其甙类多显灰黄黄酮、黄酮醇及其甙类多显灰黄 黄色，查耳酮黄色，查耳酮为黄为黄 橙黄色，异黄酮类显微黄色，橙黄色，异黄酮类显微黄色，二氢黄酮、二氢二氢黄酮、二氢黄酮醇不显色。黄酮醇不显色。在上述黄酮、黄酮醇分子中，尤其在在上述黄酮、黄酮醇分子中，尤其在7-7-倍及倍及4-4-位引入位引入OHOH及及OCH3OCH3等供电基后，化合物的颜色加深，等供电基后，化合物的颜色加深，但在其它位置引入但在其它位置引入OHOH、OCH3OCH3等供电基影响较小。等供电基影响较小。

17、花色甙及其甙元的颜色随花色甙及其甙元的颜色随pHpH不同而改变，一般显不同而改变，一般显红色红色(pHpH 7 7)、紫色、紫色(pH8.5pH8.5)、蓝色、蓝色(pHpH 8.58.5)等颜色。等颜色。第26页，此课件共51页哦 OOOOOO+_ _ _+二、二、黄酮类化合物的性质与颜色反应黄酮类化合物的性质与颜色反应第27页，此课件共51页哦 4 4、溶解度溶解度 一般来说，一般来说，游离甙元游离甙元难溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、难溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、醋酸乙酯、乙醚等有机溶剂及稀碱液中。醋酸乙酯、乙醚等有机溶剂及稀碱液中。花色甙元（花青素）花色甙元（花青素）类以类以离子形

18、式存在，水溶度较大。黄酮类甙元分子中羟基数越多，水离子形式存在，水溶度较大。黄酮类甙元分子中羟基数越多，水中的溶解度越大。中的溶解度越大。黄酮甙类黄酮甙类，水溶性比相应甙元为大；糖链越长，则水溶水溶性比相应甙元为大；糖链越长，则水溶度越大度越大，一般易溶于水、甲醇、乙醇等强极性溶剂中，但难，一般易溶于水、甲醇、乙醇等强极性溶剂中，但难溶或不溶于苯、氯仿等有机溶剂中。溶或不溶于苯、氯仿等有机溶剂中。二、二、黄酮类化合物的性质与颜色反应黄酮类化合物的性质与颜色反应第28页，此课件共51页哦 5 5、酸碱性酸碱性 酸性酸性黄酮类化合物因分子中多含有黄酮类化合物因分子中多含有游离酚羟基游离酚羟基，故显

19、酸性，故显酸性，可溶于碱性溶液中。酸性强弱顺序依次为：可溶于碱性溶液中。酸性强弱顺序依次为：7 7，4-4-二二OH OH 7-7-或或4-OH4-OH 一般酚一般酚OH OH 5-OH 5-OH。此性质可用于提取、分离及。此性质可用于提取、分离及鉴定工作鉴定工作。碱性碱性 黄酮类化合物分子中黄酮类化合物分子中-吡喃酮环上的吡喃酮环上的1-1-位氧原子，位氧原子，因有未共用的电子对，故表现微弱的碱性，可与强无机酸，因有未共用的电子对，故表现微弱的碱性，可与强无机酸，如浓硫酸、盐酸等生成（如浓硫酸、盐酸等生成（金羊）盐金羊）盐，但生成的（金羊），但生成的（金羊）盐不盐不稳定，加水可分解。稳定，加

20、水可分解。第29页，此课件共51页哦 6 6、显色反应显色反应1 1）盐酸盐酸-镁粉（或锌粉）反应：镁粉（或锌粉）反应：多数黄酮、黄酮醇、二氢黄酮及二氢黄酮醇类化合物显橙红多数黄酮、黄酮醇、二氢黄酮及二氢黄酮醇类化合物显橙红 紫红色，少数显紫紫红色，少数显紫 蓝色。蓝色。查耳酮、橙酮、儿茶素类不显色。异查耳酮、橙酮、儿茶素类不显色。异黄酮类一般不显色。黄酮类一般不显色。2 2）四氢硼钠（钾）反应：四氢硼钠（钾）反应：NaBHNaBH4 4是对二氢黄酮类化合物专属性较高的一种还原剂。与二是对二氢黄酮类化合物专属性较高的一种还原剂。与二氢黄酮类化合物产生红氢黄酮类化合物产生红 紫色。紫色。其它黄酮

21、类化合物均不显色。其它黄酮类化合物均不显色。3 3）铝盐：铝盐：生成的络合物多为黄色（生成的络合物多为黄色（maxmax=415nm=415nm），并有荧光），并有荧光，可用于定性及定量分析。常用试剂为可用于定性及定量分析。常用试剂为1%1%三氯化铝或硝酸铝溶液。三氯化铝或硝酸铝溶液。第30页，此课件共51页哦 4）铅盐：铅盐：常用常用1%1%醋酸铅及碱式醋酸铅水溶液，碱式醋酸铅反应能力更醋酸铅及碱式醋酸铅水溶液，碱式醋酸铅反应能力更强，可生成黄强，可生成黄 红色沉淀。红色沉淀。5）锆盐：锆盐：多用多用2%2%二氯氧化锆（二氯氧化锆（ZrOCl2ZrOCl2）甲醇溶液。黄酮类化合物）甲醇溶液。

22、黄酮类化合物分子中有游离的分子中有游离的3-3-或或5-OH5-OH存在时，均可反应生成黄色的锆络合存在时，均可反应生成黄色的锆络合物。物。3-OH，4-酮基络合物的稳定性酮基络合物的稳定性 5-OH，4-酮基络合物酮基络合物（仅二氢黄酮醇除外（仅二氢黄酮醇除外）。）。当反应液中接着加入枸橼酸后，当反应液中接着加入枸橼酸后，5-5-羟基黄酮的黄色溶液显著褪色，而羟基黄酮的黄色溶液显著褪色，而3-3-羟基黄酮溶液仍呈鲜黄色羟基黄酮溶液仍呈鲜黄色（锆（锆枸橼酸反应）枸橼酸反应）第31页，此课件共51页哦 6）镁盐：镁盐：二氢黄酮、二氢黄酮醇类与醋酸镁的甲醇溶液，加热可显天二氢黄酮、二氢黄酮醇类与醋

23、酸镁的甲醇溶液，加热可显天蓝色荧光，若具有蓝色荧光，若具有C5-OHC5-OH，色泽更为明显。，色泽更为明显。而黄酮、黄酮醇及异黄而黄酮、黄酮醇及异黄酮类等则显黄酮类等则显黄橙黄橙黄褐色。褐色。7）氯化锶（氯化锶（SrCl2）：）：在氨性甲醇溶液中，可与分子中具有邻二酚羟基结构的黄酮在氨性甲醇溶液中，可与分子中具有邻二酚羟基结构的黄酮类化合物生成绿色类化合物生成绿色 棕色乃至黑色沉淀。棕色乃至黑色沉淀。8）三氯化铁反应：三氯化铁反应：多数黄酮类化合物因分子中含有游离酚羟基，与三氯化铁多数黄酮类化合物因分子中含有游离酚羟基，与三氯化铁水溶液或醇溶液可产生正反应，呈现颜色；当含有氢键缔合的酚水溶液

24、或醇溶液可产生正反应，呈现颜色；当含有氢键缔合的酚羟基时，颜色更明显。羟基时，颜色更明显。第32页，此课件共51页哦 9 9）硼酸显色反应硼酸显色反应 ：在无机酸或有机酸存在条件下，在无机酸或有机酸存在条件下，5-5-羟基黄酮及羟基黄酮及2-2-羟羟基查耳酮可与硼酸反应，呈亮黄色。基查耳酮可与硼酸反应，呈亮黄色。1010）碱性试剂显色反应：碱性试剂显色反应：在日光及紫外光下，通过纸斑反应，观察样品用氨蒸在日光及紫外光下，通过纸斑反应，观察样品用氨蒸气和其他碱性试剂处理后的色变深的情况。气和其他碱性试剂处理后的色变深的情况。当分子中有邻二当分子中有邻二酚羟基取代或酚羟基取代或3,4-3,4-二羟

25、基取代时，在碱液中很快氧化，最二羟基取代时，在碱液中很快氧化，最后生成绿棕色沉淀。后生成绿棕色沉淀。第33页，此课件共51页哦 （一）提取（一）提取黄酮甙类以及极性稍大的甙元（如羟基黄酮等），黄酮甙类以及极性稍大的甙元（如羟基黄酮等），一般可用丙酮、醋酸乙酯、乙醇提取。一般可用丙酮、醋酸乙酯、乙醇提取。一些多糖甙类可用一些多糖甙类可用沸水提取沸水提取。在提取花青素类化合物时，可加入少量酸在提取花青素类化合物时，可加入少量酸（0.1%盐酸，应当慎用，避免发生水解）。盐酸，应当慎用，避免发生水解）。大多数黄酮甙元宜用用氯仿、乙醚、醋酸乙酯等中极性大多数黄酮甙元宜用用氯仿、乙醚、醋酸乙酯等中极性溶剂

26、提取，溶剂提取，而对多甲氧基黄酮类游离甙元，甚至可用苯等而对多甲氧基黄酮类游离甙元，甚至可用苯等低极性溶剂进行提取。低极性溶剂进行提取。第三节第三节 黄酮类化合物的提取与分离黄酮类化合物的提取与分离第34页，此课件共51页哦 对得到的粗提物可进行下列精制处理，常用方法有：对得到的粗提物可进行下列精制处理，常用方法有：（一）溶剂萃取法（一）溶剂萃取法 利用黄酮类化合物与混入的杂质极性不同，选用不同溶剂进利用黄酮类化合物与混入的杂质极性不同，选用不同溶剂进行地萃取可达到精制纯化目的。行地萃取可达到精制纯化目的。例如植物叶子的醇浸液，可例如植物叶子的醇浸液，可用石油醚处理，以便除去叶绿素、胡萝卜素等

27、脂溶性色素。用石油醚处理，以便除去叶绿素、胡萝卜素等脂溶性色素。而某些药料水溶液则可加入多倍量浓醇，以沉淀除去蛋白而某些药料水溶液则可加入多倍量浓醇，以沉淀除去蛋白质、多糖类等水溶性杂质。质、多糖类等水溶性杂质。第35页，此课件共51页哦 有时溶剂萃取过程也可以用逆流分配法连续进行。常用的溶剂系有时溶剂萃取过程也可以用逆流分配法连续进行。常用的溶剂系统有：水统有：水-醋酸乙酯，正丁醇醋酸乙酯，正丁醇-石油醚等。石油醚等。溶剂萃取过程在除去杂质的同时，往往还可以收到分离甙和甙元或极溶剂萃取过程在除去杂质的同时，往往还可以收到分离甙和甙元或极性甙元与非极性甙元的效果性甙元与非极性甙元的效果。（二）

28、碱提取酸沉淀法（二）碱提取酸沉淀法 黄酮甙类虽有一定极性，可溶于水，但却难溶于酸性水，易溶黄酮甙类虽有一定极性，可溶于水，但却难溶于酸性水，易溶于碱性水，故可用碱性水提取，再于碱水提取液中加入酸，黄酮于碱性水，故可用碱性水提取，再于碱水提取液中加入酸，黄酮甙类即可沉淀析出。此法简便易行，如芦丁、橙皮甙、黄芩甙的甙类即可沉淀析出。此法简便易行，如芦丁、橙皮甙、黄芩甙的提取都应用了这个方法。提取都应用了这个方法。第36页，此课件共51页哦 兹以兹以从槐米中提取芦丁从槐米中提取芦丁为例说明该法的操作过程。为例说明该法的操作过程。槐米槐米（槐树（槐树Sophora japonica L.Sophora

29、 japonica L.花蕾）加约花蕾）加约6 6倍量水，煮倍量水，煮沸，在搅拌下缓缓加入石灰乳至沸，在搅拌下缓缓加入石灰乳至pH89pH89，在此，在此pHpH条件下微沸条件下微沸20302030分钟，趁热油滤，残渣同上再加分钟，趁热油滤，残渣同上再加4 4倍水煎倍水煎1 1次，乘热抽滤。次，乘热抽滤。合并滤液在合并滤液在60706070下，用浓盐酸调至下，用浓盐酸调至pHpH为为5 5，搅匀，静置，搅匀，静置2424小时，小时，抽滤。沉淀物水洗至中性，抽滤。沉淀物水洗至中性，6060干燥得干燥得芦丁粗品芦丁粗品，于水中重结晶，于水中重结晶，70807080干燥得干燥得芦丁纯品芦丁纯品。第3

30、7页，此课件共51页哦 在用碱酸法进行提取纯化时，应当注意所用碱液浓度不宜过高，以免在用碱酸法进行提取纯化时，应当注意所用碱液浓度不宜过高，以免在强碱性下，尤其加热进破坏黄酮母核。在加酸酸化时，酸性也不宜过在强碱性下，尤其加热进破坏黄酮母核。在加酸酸化时，酸性也不宜过强，以免生成（金羊）盐，致使析出的黄酮类化合物又重新溶解，降低强，以免生成（金羊）盐，致使析出的黄酮类化合物又重新溶解，降低产品收率。产品收率。当药料中含有大量果胶、粘液等不溶性杂质时，如花、果类药当药料中含有大量果胶、粘液等不溶性杂质时，如花、果类药材，宜用材，宜用石灰乳或石灰水石灰乳或石灰水代替其它碱性水溶液进行提取，以使上述

31、含羟代替其它碱性水溶液进行提取，以使上述含羟基的杂质生成钙盐沉淀，不致溶出。这也有利于黄酮类化合物的纯化处基的杂质生成钙盐沉淀，不致溶出。这也有利于黄酮类化合物的纯化处理。理。第38页，此课件共51页哦 （三）碳粉吸附法三）碳粉吸附法 主要适于甙类的精制工作主要适于甙类的精制工作。通常，在植物的甲醇粗提取物中，通常，在植物的甲醇粗提取物中，分次加入活性炭，搅拌，静置，直至定性检查上清液无黄酮反应分次加入活性炭，搅拌，静置，直至定性检查上清液无黄酮反应时为止。过滤，收集吸甙炭末，依次用沸甲醇、沸水、时为止。过滤，收集吸甙炭末，依次用沸甲醇、沸水、7%7%酚酚/水、水、15%15%酚酚/醇溶液进行

32、洗脱，各部分洗脱液进行定性检查醇溶液进行洗脱，各部分洗脱液进行定性检查（或用（或用PPCPPC鉴定）。通过对鉴定）。通过对Baptisia lecontei Baptisia lecontei 中黄酮类化中黄酮类化合物的研究证明，大部分黄酮甙类可用合物的研究证明，大部分黄酮甙类可用7%7%酚酚/水洗下。洗脱液水洗下。洗脱液经减压蒸发浓缩至小体积，再用乙醚振摇除去残留的酚，经减压蒸发浓缩至小体积，再用乙醚振摇除去残留的酚，余下水层减压浓缩即得较纯的黄酮甙类成分。余下水层减压浓缩即得较纯的黄酮甙类成分。第39页，此课件共51页哦 二、分离二、分离 现将较常用的方法介绍如下：现将较常用的方法介绍如下

33、：（一）柱层析法（一）柱层析法 分离黄酮类化合物常用的吸附剂或载体有分离黄酮类化合物常用的吸附剂或载体有硅胶硅胶、聚酰胺聚酰胺及及纤维素粉纤维素粉等。等。此外，也有用此外，也有用氧化铝氧化铝、氧化镁氧化镁及硅藻土等。及硅藻土等。1.硅胶柱层析硅胶柱层析：此法应用范围最广，此法应用范围最广，主要适于分离异黄主要适于分离异黄酮、二氢黄酮、二氢黄酮醇及高度甲基化（或乙酰化）的酮、二氢黄酮、二氢黄酮醇及高度甲基化（或乙酰化）的黄酮及黄酮醇类黄酮及黄酮醇类。少数情况下，在加水去活化后也可用于分离少数情况下，在加水去活化后也可用于分离极性较大的化合物，如多羟基黄酮醇及其甙类等。极性较大的化合物，如多羟基黄

34、酮醇及其甙类等。第40页，此课件共51页哦 2.聚酰胺柱层析：聚酰胺柱层析：对分离黄酮类化合物来说，聚酰胺是较为对分离黄酮类化合物来说，聚酰胺是较为理想的吸附剂。其吸附强度主要取决于黄酮类化合物分子中羟理想的吸附剂。其吸附强度主要取决于黄酮类化合物分子中羟基的数目与位置及溶剂与黄酮类化合物或与聚酰胺之间形成氢基的数目与位置及溶剂与黄酮类化合物或与聚酰胺之间形成氢键缔合能力的大小。键缔合能力的大小。聚酰胺柱层析可用于分离各种类型的黄酮类化合物，包聚酰胺柱层析可用于分离各种类型的黄酮类化合物，包括甙及甙元、查耳酮与二氢黄酮等括甙及甙元、查耳酮与二氢黄酮等 黄酮类化合物从聚黄酮类化合物从聚酰胺柱上洗

35、脱时大体有下列规律：酰胺柱上洗脱时大体有下列规律：（1）甙元相同，洗脱先后顺序一般是：）甙元相同，洗脱先后顺序一般是：参糖甙参糖甙 双糖甙双糖甙 单糖甙单糖甙 甙元甙元（2）母核上增加羟基，洗脱速度即相应减缓母核上增加羟基，洗脱速度即相应减缓第41页，此课件共51页哦 （3）不同类型黄酮化合物，先后流出顺序一般是：）不同类型黄酮化合物，先后流出顺序一般是：异黄酮异黄酮 二氢黄二氢黄酮醇酮醇 黄酮黄酮 黄酮醇黄酮醇（4）分子中芳香核、共轭双键多者则吸附力强，故查耳酮往往）分子中芳香核、共轭双键多者则吸附力强，故查耳酮往往比相应的二氢黄酮难于洗脱。上述规律也适用于黄酮类化合物比相应的二氢黄酮难于洗

36、脱。上述规律也适用于黄酮类化合物在聚酰胺薄层上的行为。在聚酰胺薄层上的行为。3.葡聚糖疑胶葡聚糖疑胶(Sephadex gel)柱层析柱层析：对于黄酮类化合物的分离，主要用两种型号的凝胶：对于黄酮类化合物的分离，主要用两种型号的凝胶：Sephadex-G型及型及Sephadex-LH-20型。型。第42页，此课件共51页哦 葡聚糖凝胶分离黄酮类化合物的机理是：葡聚糖凝胶分离黄酮类化合物的机理是：分离游离黄酮时，主要靠吸附作用。凝胶对黄酮类化合物分离游离黄酮时，主要靠吸附作用。凝胶对黄酮类化合物的吸附程度取决于游离酚羟基的数目。的吸附程度取决于游离酚羟基的数目。但分离黄酮甙时，则但分离黄酮甙时，

37、则分子筛的属性起主导作用。分子筛的属性起主导作用。在洗脱时，在洗脱时，黄酮甙类大体上是按黄酮甙类大体上是按分子量由大到小的顺序流出柱体，分子量由大到小的顺序流出柱体，葡聚糖凝胶柱层析中常用的洗脱剂有：葡聚糖凝胶柱层析中常用的洗脱剂有：(1)碱性水溶液（如碱性水溶液（如0.1mol/L NH4OH），含盐水溶液），含盐水溶液(0.5mol/L NaCl等等)。(2)醇及含水醇，如甲醇，甲醇醇及含水醇，如甲醇，甲醇-水（不同比例）、水（不同比例）、t-丁醇丁醇-甲甲醇醇(3:1)、乙醇等。、乙醇等。(3)其它溶剂：如含水丙酮、甲醇其它溶剂：如含水丙酮、甲醇-氯仿等。氯仿等。第43页，此课件共51页

38、哦 （二）梯度（二）梯度pH萃取法萃取法 梯度梯度pH萃取法适合于酸性强弱不同的黄酮甙元的分离。萃取法适合于酸性强弱不同的黄酮甙元的分离。根据黄酮根据黄酮类甙元酚羟基数目及位置不同其酸性强弱也不同的性质，可以将类甙元酚羟基数目及位置不同其酸性强弱也不同的性质，可以将混合物溶于有机溶剂（如乙醚）后，依次用混合物溶于有机溶剂（如乙醚）后，依次用5%NaHCO3、5%Na2CO3、0.2%NaOH及及4%NaOH水溶液萃取，来达到分离的目水溶液萃取，来达到分离的目的。的。酸性酸性：7，4-二二OH 7-或或4-OH （溶于溶于）：5%NaHCO3液液 5%Na2CO3液液 一般一般OH 5-OH 0

39、.2%NaOH液液 4%NaOH液）液）第44页，此课件共51页哦 （三）（三）根据分子中某些特定官能团进行分离根据分子中某些特定官能团进行分离 在黄酮类成分的混合物中，具有邻二酚羟基成分与无此结构的成在黄酮类成分的混合物中，具有邻二酚羟基成分与无此结构的成分，可用铅盐法分离。分，可用铅盐法分离。有邻二酚羟基的成分可被醋酸铅沉淀，有邻二酚羟基的成分可被醋酸铅沉淀，不不具有邻二酚羟基的成分可被碱式醋酸铅沉淀具有邻二酚羟基的成分可被碱式醋酸铅沉淀，达到分离的目的。，达到分离的目的。与黄酮类成分混存的其它杂质，如分子中有羧基（如树胶、与黄酮类成分混存的其它杂质，如分子中有羧基（如树胶、粘液、果胶、有

40、机酸、蛋白质、氨基酸等）或邻二酚羟基粘液、果胶、有机酸、蛋白质、氨基酸等）或邻二酚羟基（如鞣质等）时，也可为醋酸铅沉淀达到去杂目的。（如鞣质等）时，也可为醋酸铅沉淀达到去杂目的。第45页，此课件共51页哦具黄酮类化合物与铅盐生成的沉淀，滤集后按常法悬在浮在具黄酮类化合物与铅盐生成的沉淀，滤集后按常法悬在浮在乙醇中，通入乙醇中，通入H2S进行复分解，滤除硫化铅沉淀，滤液中可得进行复分解，滤除硫化铅沉淀，滤液中可得到黄酮类化合物。但初生态的到黄酮类化合物。但初生态的PbS沉淀具有较高的吸附性，因此沉淀具有较高的吸附性，因此现多不主张用现多不主张用H2S脱铅，而用硫酸盐或磷酸盐，或用阳离子交换树脂脱

41、铅，而用硫酸盐或磷酸盐，或用阳离子交换树脂脱铅。脱铅。有邻二酚羟基的黄酮可与硼酸络合，生成物易溶于水，借此也有邻二酚羟基的黄酮可与硼酸络合，生成物易溶于水，借此也可与不具上述结构的黄酮类化合物相互分离。可与不具上述结构的黄酮类化合物相互分离。在实际工作中，常将上述柱层析法与各种经典方法相互配合应用，在实际工作中，常将上述柱层析法与各种经典方法相互配合应用，以达到较好的分离效果。以达到较好的分离效果。第46页，此课件共51页哦 1、黄酮类化合物在甲醇中的、黄酮类化合物在甲醇中的UV谱特征谱特征溶剂：溶剂：MeOH+_ _OO_ _+OO带:200-280nm带:200-280nm带I:300-4

42、00nm带I:300-400nm第四节黄酮类化合物的波谱第四节黄酮类化合物的波谱第47页，此课件共51页哦H-2（异黄酮）（异黄酮）:7.67.8(1H,s);8.58.7(1H,s,DMSO-d6)2、黄酮类化合物、黄酮类化合物1H-NMR谱谱 C环环上的氢：上的氢：OOHOOH HH-3（黄酮）（黄酮）:6.3(1H,s)第48页，此课件共51页哦3、黄酮类化合物、黄酮类化合物13C-NMR谱谱 OO7234苷化位置苷化位置 C-1(糖糖)7或或2,3,4 100.0-102.55-O-葡萄糖苷葡萄糖苷104.37-O-鼠李糖苷鼠李糖苷 99.01）糖上苷化位移和）糖上苷化位移和C-1信号

43、信号苷化位移（酚性苷中）苷化位移（酚性苷中）4.0+6.0（C-1）第49页，此课件共51页哦3、黄酮类化合物、黄酮类化合物13C-NMR谱谱 OO7234 苷元糖苷化后，直接与糖相连的苷元糖苷化后，直接与糖相连的C-1向高场位移向高场位移，而，而邻、对位的邻、对位的C则向低场位移则向低场位移2）苷元的苷化位移）苷元的苷化位移第50页，此课件共51页哦 复习：复习：一一.请将下列化合物的结构式和名称配对请将下列化合物的结构式和名称配对,并说明各化合物的结构类型并说明各化合物的结构类型芦丁芦丁、槲皮素、葛根素、水飞蓟素、槲皮素、葛根素、水飞蓟素:C COOHOHOOHHOOHD DOOOOHOCH3OOHHOOHOHB BOOHOHOOHHOOglcrhaA AOHOOOHHOHOOHOH第51页，此课件共51页哦