2022年培养基适用性检查方法的验证 .pdf

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1、.培养基适用性检查方法的验证验证目的：确认所采用的方法适合于供试品的无菌检查。即确认供试品在该检验量、该检验条件下无抑菌活性或其抑菌活性已被充分消除到可以忽略不计，以保证检验结果的准确、可靠及检验方法的完整性。KHCa23ypw 2.验证时机4SP|AFz 2.1.建立药品的无菌检查法时D 3jPp4h 2.2.修订检验方法时yB:+-S4 2.3.供试品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时9CR名师资料总结-精品资料欢迎下载-名师精心整理-第 1 页，共 6 页 -=l 3.验证要求3.1.验证时，按“供试品的无菌检查”的规定要求进行操作试验。agi;PI 3.2.对每一试验菌应逐一

2、进行验证。*kczYifAK 3.3.硫乙醇酸盐流体培养基金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌。V20m+OD 3.4.改良马丁琼脂培养基白色念珠菌、黑曲霉。WuQ BQ*3.5.验证试验所用的菌株传代次数不得超过5 代，并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。3.6.验证试验可在供试品的无菌检查之前或与供试品的无菌检查同时进行。当同时进行时，若验证试验失败，则供试品的无菌检查结果是不成立的。4.验证程序=y 5Q|v;4.1.验证准备：准备验证所需的供试品、培养基、试药试剂、仪器设备和菌种。;2/Gh*N 4.1.1.培养基gj$/B-_E 硫乙醇酸盐流体培养基

3、；改良马丁琼脂培养基；营养琼脂培养基；血琼脂培养基1H/4 备注：a)培养基应注明来源；如采用市售干粉培养基，应按说明配制。q4XU!9 b)配制后的培养基应按照中国药典附录“无菌检查法”中“培养基的适用性检查”项下检验无菌性和灵敏度。4.1.2.仪器设备名师资料总结-精品资料欢迎下载-名师精心整理-第 2 页，共 6 页 -pi_ 4.1.2.1.净化工作台U:ZAt9Z2_ 4.1.2.2.生物洁净安全柜2Z:7y0+m 4.1.2.3.集菌仪4.1.2.4.生化培养箱W&-B51w 4.1.2.5.霉菌培养箱4.1.2.6.高温试验箱4.1.2.7.台式灭菌器O Plk%5=8 4.1.

4、2.8.医药品冷藏柜A Qj:v 4.1.2.9.微波炉备注：以上仪器设备需要验证的均应已按要求验证过。,hA2d9wV 4.1.3.菌种g4ELl 4.1.3.1.金黄色葡萄球菌CMCC（B）26003 4.1.3.2.枯草芽孢杆菌CMCC（B）63501 oz h:tA&4.1.3.3.白色念珠菌CMCC（F）98001 4.1.3.4.黑曲霉 CMCC（F）98003 4.1.3.5.铜绿假单胞菌CMCC（B）10104 p-Wz8,!4.1.3.6.生孢梭菌 CMCC（B）64941?Bi-.17 4.2.供试液制备：按照中国药典附录“无菌检查法”中“批出厂产品最少检验数量”一表确定取

5、样量。供试品的稀释按品种项下的规定确定稀释液（可根据供试品特性调整稀释液用量），如品种项下无规定，则按中国药典附录“无菌检查法”中“稀释液、冲洗液及其制备方法”项下的规定确定稀释液。4.3.菌液制备.I8=C 按中国药典附录“无菌检查法”中“灵敏度检查”项下的菌液制备。U VudX:G m 备注：a)对于同一份培养物，采用相同的测定方法，不同的试验人员的测定结果可能有很大的误差。所以在操作过程中，应特别注意能造成误差的各个环节。名师资料总结-精品资料欢迎下载-名师精心整理-第 3 页，共 6 页 -b)当采用固体培养基上的培养物制备菌悬液时，应尽量使菌苔成单个菌体分散于稀释液中。T FTFu名

6、师资料总结-精品资料欢迎下载-名师精心整理-第 4 页，共 6 页 -N c)为保证每次菌数测定能在预计的范围内，在对菌液做10 倍系列稀释时，要求稀释每个浓度的菌液均应换灭菌吸管。DdO&mdlt d)液体培养物直接稀释法较比浊法造成误差小，基本保证每次菌数能控制在要求的范围内。e)最终制得的菌悬液应为小于100CFU/ml。F5N?gN f)金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌采用营养琼脂培养基；生孢梭菌采用血琼脂培养基；白色念珠菌、黑曲霉采用改良马丁琼脂培养基。名师资料总结-精品资料欢迎下载-名师精心整理-第 5 页，共 6 页 -4.4.验证方法V(p8-k 4.4.1.将规定量

7、的供试品按薄膜过滤法过滤，用定量的冲洗液冲洗，在最后一次的冲洗液中加入小于100CFU的试验菌，过滤。c0ZH&g 4.4.2.取出滤膜接种至硫乙醇酸盐流体培养基或改良马丁琼脂培养基中，或将培养基加至滤筒内。:.lrOX9sN 4.4.3.另取一装有同体积培养基的容器，加入等量试验菌，作为对照。按规定温度培养35 天。4.5.结果判断4.5.1.如含供试品各容器中的试验菌均生长良好，供试品可照此检查法和检查条件进行供试品的无菌检查法检查。t?,zgp(h 4.5.2.如含供试品的任一容器中微生物生长微弱、缓慢或不生长，可采用增加冲洗量，增加培养基用量，使用中和剂或灭菌剂；更换滤膜品种等方法，并重新进行方法验证。名师资料总结-精品资料欢迎下载-名师精心整理-第 6 页，共 6 页 -