蛋白质的测定.ppt

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1、蛋白质的测定现在学习的是第1页，共43页食品和其原料中蛋白质含量的测定，主要（也是最食品和其原料中蛋白质含量的测定，主要（也是最常用的）用凯氏定氮法测定总氮量，然后乘一个蛋白质常用的）用凯氏定氮法测定总氮量，然后乘一个蛋白质换算系数。这里也包括非蛋白的氮，如核酸、含氮碳水换算系数。这里也包括非蛋白的氮，如核酸、含氮碳水化合物、生物碱等；含氮类脂、卟啉和含氮的色素所以化合物、生物碱等；含氮类脂、卟啉和含氮的色素所以只能称为粗蛋白的含量只能称为粗蛋白的含量（但马铃薯等非蛋白氮多的要单（但马铃薯等非蛋白氮多的要单测）。测）。蛋白质是生命的物质基础，人体蛋白质是生命的物质基础，人体11%13%总热量总

2、热量来自蛋白质。无论动物、植物都含有蛋白质，只是来自蛋白质。无论动物、植物都含有蛋白质，只是含量及类型不同。含量及类型不同。现在学习的是第2页，共43页 关于氮关于氮-pro换算等数换算等数 对于氮含量换算成对于氮含量换算成pro含量的等数，历来采用含量的等数，历来采用6.25，这个数值是以，这个数值是以pro平均含氮而导出的数值，但是平均含氮而导出的数值，但是食品中含氮的比例，因食品种类不同，差别是很食品中含氮的比例，因食品种类不同，差别是很大的，我们在测定大的，我们在测定pro时，应该是不同的食品采时，应该是不同的食品采用不同的换算等数，一般手册上列出了一部分换用不同的换算等数，一般手册上

3、列出了一部分换称等数，用时可查，称等数，用时可查，蛋蛋=6.25，肉，肉=6.25，牛乳，牛乳=6.38，稻米，稻米=5.95，大麦，大麦=5.83，玉米，玉米=6.25，小麦，小麦=5.83，麸皮麸皮=6.31，面粉，面粉=5.70，如果手册上查不到的样品则，如果手册上查不到的样品则可用可用6.25，一般在写报告时要注明采用的换算等数一般在写报告时要注明采用的换算等数以何物代替。以何物代替。现在学习的是第3页，共43页蛋白质的测定方法分两大类：蛋白质的测定方法分两大类：一类是利用蛋白质的共性即含氮量、肽键和折射一类是利用蛋白质的共性即含氮量、肽键和折射率等测定蛋白质含量；率等测定蛋白质含量；

4、另一类是利用蛋白质中的氨基酸残基、酸性和碱另一类是利用蛋白质中的氨基酸残基、酸性和碱性基因以及芳香基团等测定蛋白质含量。性基因以及芳香基团等测定蛋白质含量。具体测定方法：具体测定方法：凯氏定氮法凯氏定氮法最常用的，国内外应用普遍。最常用的，国内外应用普遍。双缩脲反应、染料结合反应、酚试剂法双缩脲反应、染料结合反应、酚试剂法国外：国外：红外分析仪红外分析仪现在学习的是第4页，共43页现在学习的是第5页，共43页氨基酸总量氨基酸总量酸碱滴定法测定。酸碱滴定法测定。各种氨基酸的分离与定量各种氨基酸的分离与定量色谱技术。色谱技术。有多种氨基酸分析仪。有多种氨基酸分析仪。现在学习的是第6页，共43页第二

5、节第二节 蛋白质的定性测定蛋白质的定性测定一、蛋白质的一般显色反应一、蛋白质的一般显色反应电泳或纸层析之后用一些染料与蛋白质结合并变电泳或纸层析之后用一些染料与蛋白质结合并变色。书中列举了色。书中列举了 5 种染料。种染料。二、复合蛋白质的显色反应二、复合蛋白质的显色反应（一）糖蛋白的显色（一）糖蛋白的显色（3种方法）种方法）（二）脂蛋白的显色（二）脂蛋白的显色（2种方法）种方法）现在学习的是第7页，共43页第三节第三节 蛋白质的定量测定蛋白质的定量测定 一般说来，动物性食品的蛋白质含量高于植物性食品。一般说来，动物性食品的蛋白质含量高于植物性食品。例如牛肉中蛋白质含量为例如牛肉中蛋白质含量为

6、 20.0%左右，猪肉左右，猪肉 9.5%，兔兔肉肉 21%，鸡肉鸡肉 20%，牛乳牛乳 3.5%，带鱼带鱼 18.0%，大豆大豆 40%，面粉面粉 9.9%，菠菜菠菜 2.4%，黄瓜黄瓜 1.0%，苹果苹果 1.4%测定食品中的蛋白质的含量，对于评价食品的营养测定食品中的蛋白质的含量，对于评价食品的营养价值，合理开发利用食品资源、提高产品质量、优化食价值，合理开发利用食品资源、提高产品质量、优化食品配方、指导经济核算及生产过程控制均具有极其重要品配方、指导经济核算及生产过程控制均具有极其重要的意义。的意义。现在学习的是第8页，共43页一些蛋白质的含氮量一些蛋白质的含氮量 一般为一般为 15%

7、17.6%，有的上下浮动，有的上下浮动可以测出总氮可以测出总氮 N一、一、凯氏定氮法凯氏定氮法 由由Kieldhl于于1833年提出，现发展为常量、微量、年提出，现发展为常量、微量、自动定氮仪法，半微量法及改良凯氏法。书中只介自动定氮仪法，半微量法及改良凯氏法。书中只介绍前三种。绍前三种。16%N=N6.25=蛋白质含量蛋白质含量现在学习的是第9页，共43页（一）常量凯氏定氮法（一）常量凯氏定氮法1.原理原理 样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，其中碳和氢被氧化为二，使蛋白质分解，其中碳和氢被氧化为二氧化碳和水逸出，而样品中的有机氮转化氧化碳和水逸出

8、，而样品中的有机氮转化为氨与硫酸结合成硫酸铵。然后加碱蒸馏为氨与硫酸结合成硫酸铵。然后加碱蒸馏，使氨蒸出。用，使氨蒸出。用H3BO3吸收后再以标准吸收后再以标准HCl或硫酸溶液滴定。根据标准酸消耗量可以或硫酸溶液滴定。根据标准酸消耗量可以计算出蛋白质的含量。计算出蛋白质的含量。现在学习的是第10页，共43页2、整个过程分三步：、整个过程分三步：消化、蒸馏、吸收与滴定消化、蒸馏、吸收与滴定（1）消化）消化 总反应式：总反应式：加硫酸钾加硫酸钾 作为增温剂，提高溶液沸点，作为增温剂，提高溶液沸点，纯硫酸沸点纯硫酸沸点 340，加入硫酸钾之后可以提高，加入硫酸钾之后可以提高至至400以上。也可加入硫

9、酸钠，氯化钾等提以上。也可加入硫酸钠，氯化钾等提高沸点，但效果不如硫酸钾。高沸点，但效果不如硫酸钾。2NH2（CH2）2COOH+13H2SO4 （NH4）2SO4+6CO2+12SO2+16H2O一定要用浓硫酸（一定要用浓硫酸（98%）现在学习的是第11页，共43页 加硫酸铜加硫酸铜 作为催化剂。还可以作消化终点指示剂（作为催化剂。还可以作消化终点指示剂（做蒸馏时碱性指示剂）。还可以加氧化汞、汞（均有做蒸馏时碱性指示剂）。还可以加氧化汞、汞（均有毒，价格贵）、硒粉、二氧化钛。毒，价格贵）、硒粉、二氧化钛。加氧化剂加氧化剂 如双氧水、次氯酸钾等加速有机如双氧水、次氯酸钾等加速有机 物物氧化速度

10、。氧化速度。现在学习的是第12页，共43页仪器：要防止爆仪器：要防止爆沸。沸。另外：介绍另外：介绍“自动回流消化自动回流消化仪仪”现在学习的是第13页，共43页（2）蒸馏蒸馏 消化液消化液+40%氢氧化钠加热氢氧化钠加热蒸馏，放出氨蒸馏，放出氨气。气。现在学习的是第14页，共43页（3）吸收与滴定吸收与滴定用用4%硼酸吸收，用盐酸标准溶液滴定，指示剂硼酸吸收，用盐酸标准溶液滴定，指示剂用混合指示剂（甲基红用混合指示剂（甲基红溴甲基酚绿混合指示剂）溴甲基酚绿混合指示剂）国标用亚甲基兰国标用亚甲基兰+甲基红。甲基红。指示剂指示剂 红色红色 绿色绿色 红色红色 （酸）（酸）（碱）（碱）（酸）（酸）用

11、过量的用过量的 H2SO4 或或 HCl 标准溶液吸收，再用标准溶液吸收，再用 NaOH 标准溶液滴定过剩的酸液，用甲基红指示剂标准溶液滴定过剩的酸液，用甲基红指示剂。吸收吸收滴定滴定现在学习的是第15页，共43页 3、说明：、说明：所用试剂溶液应用无氨蒸馏水配制。所用试剂溶液应用无氨蒸馏水配制。消化时不要用强火，应保持和缓沸腾，消化时不要用强火，应保持和缓沸腾，以免粘贴在凯氏瓶内壁上的含氮化合物以免粘贴在凯氏瓶内壁上的含氮化合物在无硫酸存在的情况下消化不完全而造在无硫酸存在的情况下消化不完全而造成氮损失。成氮损失。现在学习的是第16页，共43页 消化时应注意不时转动凯氏烧瓶，以便利用冷凝酸液

12、消化时应注意不时转动凯氏烧瓶，以便利用冷凝酸液将附在瓶壁上的固体残渣洗下，并促进其消化完全。将附在瓶壁上的固体残渣洗下，并促进其消化完全。样品中若含脂肪或糖较多时，消化过程中易产生样品中若含脂肪或糖较多时，消化过程中易产生大量泡沫，为防止泡沫溢出瓶外，在开始消化时应大量泡沫，为防止泡沫溢出瓶外，在开始消化时应用小火加热，并时时摇动；或者加入少量辛醇或液用小火加热，并时时摇动；或者加入少量辛醇或液体石蜡或硅油消泡剂，并同时注意控制热源强度。体石蜡或硅油消泡剂，并同时注意控制热源强度。当样品消化液不易澄清透明时，可将凯氏烧瓶冷却，当样品消化液不易澄清透明时，可将凯氏烧瓶冷却，加入加入30过氧化氢过

13、氧化氢 23 m1 后再继续加热消化后再继续加热消化。现在学习的是第17页，共43页 若取样量较大，如干试样超过若取样量较大，如干试样超过5 g 可按每克试样可按每克试样5 m1的比例增加硫酸用量。的比例增加硫酸用量。般消化至呈透明后，继续消化般消化至呈透明后，继续消化30分钟即可，但分钟即可，但对于含有特别难以氨化的氮化合物的样品如含赖对于含有特别难以氨化的氮化合物的样品如含赖氨酸、组氨酸、色氨酸、酪氨酸或脯氨酸等时，需氨酸、组氨酸、色氨酸、酪氨酸或脯氨酸等时，需适当延长消化时间。有机物如分解完全，消化液呈适当延长消化时间。有机物如分解完全，消化液呈蓝色或浅绿色，但含铁量多时，呈较深绿色。蓝

14、色或浅绿色，但含铁量多时，呈较深绿色。蒸馏装置不能漏气。蒸馏装置不能漏气。现在学习的是第18页，共43页 蒸馏前若加碱量不足，消化液呈蓝色不生成氢氧蒸馏前若加碱量不足，消化液呈蓝色不生成氢氧化铜沉淀，此时需再增加氢氧化钠用量。化铜沉淀，此时需再增加氢氧化钠用量。氢氧化铜在氢氧化铜在7090时发黑。时发黑。蒸馏完毕后，应先将冷凝管下端提离液面清洗管蒸馏完毕后，应先将冷凝管下端提离液面清洗管口，再蒸口，再蒸1分钟后关掉热源否则可能造成吸收液分钟后关掉热源否则可能造成吸收液倒吸。倒吸。现在学习的是第19页，共43页二、二、微量凯氏定氮法微量凯氏定氮法1、原理及适用范围同前、原理及适用范围同前2、与常

15、量法不同点：、与常量法不同点：加入硼酸量加入硼酸量有有50 ml 10 ml,滴定用盐酸浓度由滴定用盐酸浓度由0.1 mol/L 0.01 mol/L,可用微量滴定管。可用微量滴定管。3、蒸馏装置见下图、蒸馏装置见下图 。现在学习的是第20页，共43页10-210-2现在学习的是第21页，共43页三、三、自动凯氏定氮法自动凯氏定氮法1 1、原理及适用范围同前原理及适用范围同前 2 2、特点：特点：（1）消化装置用优质玻璃制成的凯氏消化瓶，红外线）消化装置用优质玻璃制成的凯氏消化瓶，红外线加热的消化炉。加热的消化炉。（2）快速：一次可同时消化）快速：一次可同时消化8个样品，个样品，30分钟可消化

16、完分钟可消化完毕。毕。（3）自动：自动加碱蒸馏，自动吸收和滴定，自动数字显）自动：自动加碱蒸馏，自动吸收和滴定，自动数字显示装置。可计算总氮百分含量并记录，示装置。可计算总氮百分含量并记录，12分钟完成分钟完成1个样。个样。现在学习的是第22页，共43页北京福德泰和科技有限公司北京福德泰和科技有限公司产品名称：产品名称：凯氏定氮仪凯氏定氮仪 现在学习的是第23页，共43页二、双缩脲法二、双缩脲法 传统的凯氏定氮法应用范围广，灵敏度高、准确，不要传统的凯氏定氮法应用范围广，灵敏度高、准确，不要大仪器，但费时间，有环境污染。大仪器，但费时间，有环境污染。新开发的：双缩脲法、新开发的：双缩脲法、紫外

17、分光光度法、紫外分光光度法、染料结合法、染料结合法、水杨酸比色法等。水杨酸比色法等。现在学习的是第24页，共43页1.原理原理脲（尿素）脲（尿素）NH2CONH2 加热至加热至150160时，两分时，两分子缩和成双缩脲。子缩和成双缩脲。双缩脲能和硫酸铜的碱性溶液生成紫色络和物，这种反应叫双缩脲能和硫酸铜的碱性溶液生成紫色络和物，这种反应叫双缩脲反应。（缩二脲反应）双缩脲反应。（缩二脲反应）蛋白质分子中含有肽键蛋白质分子中含有肽键 CONH 与双缩脲结构相似与双缩脲结构相似。在同样条件下也有呈色反应，在一定条件下，其颜色。在同样条件下也有呈色反应，在一定条件下，其颜色深浅与蛋白质含量成正比，可用

18、分光光度计来测其吸光深浅与蛋白质含量成正比，可用分光光度计来测其吸光度，确定含量。（度，确定含量。（560nm）NH2CONHCONH2 +NH3NH2CONH2+NH2CONH2现在学习的是第25页，共43页注：测蛋白质时叫双缩脲法，并不另加双缩脲。注：测蛋白质时叫双缩脲法，并不另加双缩脲。样品不用消化样品不用消化2.方法特点及应用范围方法特点及应用范围本法灵敏度较低，但操作简单快速，故在生物化学领域本法灵敏度较低，但操作简单快速，故在生物化学领域中测定蛋白质含量时常用此法。本法亦适用于豆类、油中测定蛋白质含量时常用此法。本法亦适用于豆类、油料、米谷等作物种子及肉类等样品测定。料、米谷等作物

19、种子及肉类等样品测定。3.主要仪器：主要仪器：分光光度计，离心机（分光光度计，离心机（4000 r/min）4.试剂：试剂：(1)碱性硫酸铜溶液碱性硫酸铜溶液 (2)四氯化碳四氯化碳现在学习的是第26页，共43页5操作方法：采用凯氏法测出的蛋白质样品为标操作方法：采用凯氏法测出的蛋白质样品为标准样绘标准曲线准样绘标准曲线。三紫外吸收法三紫外吸收法 1 1原理：利用蛋白质的特有基团，原理：利用蛋白质的特有基团，R R（NH NHCHCHCOCO）对紫外光有吸收作用在对紫外光有吸收作用在280 nm280 nm下，吸光度与蛋白质浓度下，吸光度与蛋白质浓度成直线关系，求含量。成直线关系，求含量。现在

20、学习的是第27页，共43页2 2适用范围：常用于生物化学工作，因为干扰因素多适用范围：常用于生物化学工作，因为干扰因素多，故在食品分析领域应用不广泛。，故在食品分析领域应用不广泛。3 3主要仪器：主要仪器：紫外分光光度计紫外分光光度计 离心机（离心机（3000 3000 5000 r/min 5000 r/min）4 4操作：用凯氏法测定作标样做标准曲线操作：用凯氏法测定作标样做标准曲线现在学习的是第28页，共43页第五节第五节 氨基酸的定性测定氨基酸的定性测定 利用各种显色反应利用各种显色反应现在学习的是第29页，共43页第六节第六节 氨基酸定量测定氨基酸定量测定一氨基酸的一般定量测定一氨基

21、酸的一般定量测定（一）甲醛滴定法（一）甲醛滴定法 1.1.原理：氨基酸本身有碱性原理：氨基酸本身有碱性 NHNH2 2 基，又有基，又有 酸性酸性 COOH COOH 基，成中性内盐，加入甲醛基，成中性内盐，加入甲醛 溶液后，与溶液后，与 NHNH2 2 结合，碱性消失，再用强碱结合，碱性消失，再用强碱来滴定来滴定 COOH COOH 基。基。2 2特点：适用于发酵工业，如发酵液中含氮量，其发酵过程特点：适用于发酵工业，如发酵液中含氮量，其发酵过程中氮量减少情况等。（适于食品中游离氨基酸的测中氮量减少情况等。（适于食品中游离氨基酸的测定）定）现在学习的是第30页，共43页 3 3双指示剂：双指

22、示剂：40%40%中性甲醛溶液：以百里酚酞作指示剂，用中性甲醛溶液：以百里酚酞作指示剂，用 氢氧化钠将氢氧化钠将40%40%甲醛中和至蓝色。甲醛中和至蓝色。0.1%0.1%百里酚酞乙醇溶液，百里酚酞乙醇溶液，0.1%0.1%中性红中性红50%50%乙醇溶液，乙醇溶液，0.1 mol/L 0.1 mol/L 氢氧化钠标准溶液。氢氧化钠标准溶液。4 4操作：同时取两份样：操作：同时取两份样：+中性红指示剂，用氢氧化钠直接滴，中和中性红指示剂，用氢氧化钠直接滴，中和 样液中其它酸性物质。样液中其它酸性物质。+百里酚酞百里酚酞+中性甲醛中性甲醛+NaOH+NaOH 滴，中和了滴，中和了 样液中氨基酸的

23、羧基与其它酸性物质的总样液中氨基酸的羧基与其它酸性物质的总 和。和。二者之差可计算氨基酸含量二者之差可计算氨基酸含量现在学习的是第31页，共43页（二）茚三酮的比色法（二）茚三酮的比色法 原理：氨基酸在一定条件下与茚三酮起反应，生成原理：氨基酸在一定条件下与茚三酮起反应，生成蓝紫色化合物，可比色定量。颜色深浅与氨基酸含量成蓝紫色化合物，可比色定量。颜色深浅与氨基酸含量成正比，最大吸收波长为正比，最大吸收波长为570nm.570nm.（三）电位滴定法（三）电位滴定法现在学习的是第32页，共43页第七节第七节 氨基酸的分离与测定氨基酸的分离与测定 一薄层色谱法（薄层层析法（一薄层色谱法（薄层层析法

24、（TLC TLC 法）法）Thin Layer ChromatographyThin Layer Chromatography简介：简介：近年来发展起来的一种微量而快速的层析方法，近年来发展起来的一种微量而快速的层析方法，它把吸附剂或支持剂均匀的铺在玻璃板上成一薄层，它把吸附剂或支持剂均匀的铺在玻璃板上成一薄层，把样品点在薄层上，然后用合适的溶剂展开，从而达把样品点在薄层上，然后用合适的溶剂展开，从而达到分离、鉴定和定量的目的。因为层析在薄层上进行到分离、鉴定和定量的目的。因为层析在薄层上进行，所以称为薄层层析。它的应用范围比纸上层析更广，所以称为薄层层析。它的应用范围比纸上层析更广泛，常用来

25、分析氨基酸、农药残留量、黄曲霉毒素等泛，常用来分析氨基酸、农药残留量、黄曲霉毒素等。现在学习的是第33页，共43页（一）原理：（一）原理：取一定量经水解的样品溶液，滴在制好的薄层板取一定量经水解的样品溶液，滴在制好的薄层板上，在溶剂系统中进行双向上行法展开，上，在溶剂系统中进行双向上行法展开，样品各组分样品各组分在薄层板上经过多次的被吸附、解吸、交换等作用，在薄层板上经过多次的被吸附、解吸、交换等作用，同一物质具有相同的同一物质具有相同的Rf值，不同成分则有不同的值，不同成分则有不同的Rf值，因值，因而各种混合物可达到彼此被分离的目的。然后用茚三酮显而各种混合物可达到彼此被分离的目的。然后用茚

26、三酮显色，与标准氨基酸进行对比，鉴别各种氨基酸种类，从显色，与标准氨基酸进行对比，鉴别各种氨基酸种类，从显色斑点颜色的深浅可以大致确定其含量。色斑点颜色的深浅可以大致确定其含量。现在学习的是第34页，共43页 R Rf f=a/b=a/bab样点样点溶剂前沿溶剂前沿点样原点点样原点现在学习的是第35页，共43页优点：优点：展开时间短，一般在展开时间短，一般在20203030分钟，展开距离通常只分钟，展开距离通常只需需10 cm10 cm，且分离效果好。，且分离效果好。层析后得到的斑点小而清晰。层析后得到的斑点小而清晰。能够使用多种显色剂。能够使用多种显色剂。点样量少，灵敏度高。（比纸层析高点样

27、量少，灵敏度高。（比纸层析高1010100100倍倍）精确到精确到0.01ug0.01ug。也可用于大量分离也可用于大量分离500 mg500 mg，作为样品制备层析，作为样品制备层析。缺点：缺点：R Rf f值重现性比纸上层析差。值重现性比纸上层析差。分类：按层析的原理可分为：吸附、分配、离子分类：按层析的原理可分为：吸附、分配、离子交换、凝胶等。交换、凝胶等。现在学习的是第36页，共43页（三）操作方法：（三）操作方法：薄层板制备薄层板制备 样品液制备样品液制备 点样：距薄板底端点样：距薄板底端2cm2cm处，用针画一标记作为处，用针画一标记作为 原点。再以点样距扳子宽窄可点几个点同时原点

28、。再以点样距扳子宽窄可点几个点同时 展开，点与点之间间隔展开，点与点之间间隔1 12cm2cm。a.a.可用毛细玻璃管、微量吸管或微量注射器。注可用毛细玻璃管、微量吸管或微量注射器。注 意要等一个点干了再点另一个点。意要等一个点干了再点另一个点。b.b.用一小直径用一小直径3 mm 3 mm 滤纸片，浸入样液，埋到滤纸片，浸入样液，埋到 板子上先挖好一个小洞穴。板子上先挖好一个小洞穴。现在学习的是第37页，共43页 展开：点样完了，放入密闭容器中（展开槽），倾斜展开：点样完了，放入密闭容器中（展开槽），倾斜一定角度一定角度10103030，下端浸入展开剂，下端浸入展开剂1cm1cm，千万，千万

29、别让溶剂浸过了样点。到离顶端一部分，取出别让溶剂浸过了样点。到离顶端一部分，取出样板、晾干、显色。样板、晾干、显色。a.a.展开剂的有关情况：主要是低沸点的展开剂的有关情况：主要是低沸点的2 23 3种有机溶剂种有机溶剂组成的溶剂系统，分离效果主要决定于展开剂的选择，因组成的溶剂系统，分离效果主要决定于展开剂的选择，因为吸附剂在一定情况下是恒定的，吸附剂的选择余地远远为吸附剂在一定情况下是恒定的，吸附剂的选择余地远远小于展开剂的选择小于展开剂的选择。现在学习的是第38页，共43页b.b.展开剂的选择方法：展开剂的选择方法：.微量圆环法。微量圆环法。.用小载波片试验，微量展开剂展开用小载波片试验

30、，微量展开剂展开5cm5cm。.图解法：图解法：样品极性小，选吸附剂活性高，展开剂极性低的。样品极性小，选吸附剂活性高，展开剂极性低的。样品极性大，选吸附剂活性低，展开剂极性高。样品极性大，选吸附剂活性低，展开剂极性高。有机溶剂极性由小到大为：有机溶剂极性由小到大为：石油醚、环己烷、四氯化碳、三氯乙烷、甲苯、苯、二氯石油醚、环己烷、四氯化碳、三氯乙烷、甲苯、苯、二氯甲烷、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、丙酮、正丙醇、乙醇、甲甲烷、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、丙酮、正丙醇、乙醇、甲醇、水、吡啶、有机酸类等。醇、水、吡啶、有机酸类等。现在学习的是第39页，共43页c.c.展开的方式：展开的方式：上行法、下行法、双

31、向展开、单向多次展开、双向上行法、下行法、双向展开、单向多次展开、双向多次展开。多次展开。双向展开：双向展开：现在学习的是第40页，共43页 显色：显色：a.a.喷适当的溶液，使斑点显色，即喷雾显色。喷适当的溶液，使斑点显色，即喷雾显色。b.b.喷有荧光反应的物质，在紫外光下观察斑点。喷有荧光反应的物质，在紫外光下观察斑点。c.c.将涂有荧光指示剂的薄层板放在紫外灯下观察。将涂有荧光指示剂的薄层板放在紫外灯下观察。（涂板时把（涂板时把荧光指示剂加入到固体吸附剂中）荧光指示剂加入到固体吸附剂中）现在学习的是第41页，共43页定性：在同一块板上，同等条件下操作，被测样与标准样定性：在同一块板上，同

32、等条件下操作，被测样与标准样同时展开、显色，同同时展开、显色，同 R Rf f 值即是；值即是；查手册找相同的查手册找相同的 R Rf f 值。值。定量：定量：a.a.目视定量法：以标准斑点对照，相当于样品目视定量法：以标准斑点对照，相当于样品斑点中含量斑点中含量ugug数。数。b.b.斑点面积定量法。斑点面积定量法。c.c.将样点取下来，定容，离心，比色。将样点取下来，定容，离心，比色。d.d.利用薄层色谱扫描仪：利用薄层色谱扫描仪：例：日本岛津例：日本岛津 CSCS910 910 型双波长薄型双波长薄 层色谱扫描仪层色谱扫描仪 现在学习的是第42页，共43页 介绍离心薄层色谱仪：介绍离心薄层色谱仪：1.LBG 1型离心薄层色谱仪型离心薄层色谱仪 北京产北京产2.7924型离心薄层色谱仪型离心薄层色谱仪 美国美国Harrison 公司研制公司研制3.CLC 5型离心制备液体色谱仪（日本日立公司，型离心制备液体色谱仪（日本日立公司，带紫外检测器、记录器和自动收集器，制备量可带紫外检测器、记录器和自动收集器，制备量可达达 10g。二氨基酸自动分析仪法二氨基酸自动分析仪法三气相色谱法三气相色谱法四高效液相色谱法四高效液相色谱法现在学习的是第43页，共43页