铁皮石斛组织培养.ppt

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1、LOGOLOGO关于铁皮石斛组织培养关于铁皮石斛组织培养现在学习的是第1页，共14页Company Logo铁皮石斛的组织培养铁皮石斛的组织培养铁皮石斛，为兰科多年生附生草本植物。生铁皮石斛，为兰科多年生附生草本植物。生于海拔达于海拔达1600米的山地半阴湿的岩石上，米的山地半阴湿的岩石上，喜温暖湿润气候和半阴半阳的环境，不耐寒。喜温暖湿润气候和半阴半阳的环境，不耐寒。一般均能耐一般均能耐5的低温。石斛可分为黄草、的低温。石斛可分为黄草、金钗、马鞭等数十种，铁皮石斛为石斛之极金钗、马鞭等数十种，铁皮石斛为石斛之极品，它因表皮呈铁绿色而得名。品，它因表皮呈铁绿色而得名。现在学习的是第2页，共14

2、页Company Logo铁皮石斛的组织培养技术路线铁皮石斛的组织培养技术路线外植体外植体丛生芽丛生芽培养基培养基生根发育生根发育完整植株现在学习的是第3页，共14页Company Logo蔗糖：30g琼脂：6.8g初代培养基的设计初代培养基的设计诱导培养基诱导培养基 MS+BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖3%+琼脂6.8%【pH值5.25.6】MS母液：I-V50ml,5ml,5ml,5ml 5ml。激素母液：BA10ml,NAA5ml现在学习的是第4页，共14页Company Logo蔗糖：30g琼脂：6.8g土豆汁150ml继代培养基的设计继代培养基的设计增殖培养基增殖培养

3、基 MS+BA0.5ml+NAA0.2+土豆汁10%20%【pH值5.25.6】取MS母液：IV50ml,5ml,5ml,5ml,5ml;激素母液：BA5ml,NAA2ml现在学习的是第5页，共14页Company LogoNAABAIAA增殖培养将建立的无菌系中的小苗转入增殖培养基中进行增殖培养增殖培养将建立的无菌系中的小苗转入增殖培养基中进行增殖培养。增殖培养基以。增殖培养基以MS为基本培养基，添加不同浓度的生长调节剂为基本培养基，添加不同浓度的生长调节剂BA、NAA、IAA、IBA及土豆汁和香蕉汁等附加物及土豆汁和香蕉汁等附加物。土豆汁土豆汁香蕉汁香蕉汁IBA现在学习的是第6页，共14页

4、Company Logo蔗糖：30g琼脂：6.8g香蕉汁：200ml活性炭：20g生根培养基的设计生根培养基的设计生根培养基生根培养基1/2MS+NAA0.20.5mg/L+香蕉汁20%+活性炭2.0%【pH值5.25.6】取MS母液：IV25ml,5ml,5ml,5ml,5ml;激素母液：NAA25ml现在学习的是第7页，共14页Company LogoYour Text here生根培养将丛生芽无菌操作切下单株放在生根培养基中于适宜条件下培养，约12周后即生根，以长成完整植株。现在学习的是第8页，共14页Company Logo优选优选1年生铁皮石斛植株年生铁皮石斛植株上上生长健壮的茎段生

5、长健壮的茎段外植体的选择外植体的选择接种小芽苗多易于在苗基部形成丛生芽接种小芽苗多易于在苗基部形成丛生芽。苗的高度为苗的高度为12cm时时,丛生芽增殖倍数最高数丛生芽增殖倍数最高数。生长发育健壮苗优先生长发育健壮苗优先123现在学习的是第9页，共14页Company Logo外外植植体的体的处处理理Text 1Text 2Text 3摘去叶片和膜摘去叶片和膜质叶鞘，剪成质叶鞘，剪成约约2cm长带节长带节的小段的小段。用洗洁剂清用洗洁剂清洗后置流水洗后置流水下冲下冲2030 min。在超净工作台上用在超净工作台上用75%的酒精消的酒精消30s0.1%HgCl2灭灭菌菌5min后，用无菌后，用无菌

6、水冲洗水冲洗56次，放入次，放入垫有干无菌滤纸的垫有干无菌滤纸的培养皿中，以吸去培养皿中，以吸去多余水分，茎段两多余水分，茎段两端各切端各切0.20.3cm。现在学习的是第10页，共14页Company Logo接种实验接种实验一、接种准备工作一、接种准备工作1、超净工作台开紫外灯照射、超净工作台开紫外灯照射10-20min送风送风2、外植体消毒（继代培养采用已建立的无菌培养物作为材料）、外植体消毒（继代培养采用已建立的无菌培养物作为材料）3、工具消毒、工具消毒二、接种操作二、接种操作1、用消毒工具、器皿，切取铁皮石斛幼茎段、用消毒工具、器皿，切取铁皮石斛幼茎段2cm2、接种环烧红，沾一下培养

7、基、接种环烧红，沾一下培养基3、镊取茎段插于培养基中、镊取茎段插于培养基中4、封口、标记、封口、标记现在学习的是第11页，共14页Company Logo各时期的培养条件各时期的培养条件 茎段的诱导时间在511天之间 培养温度2325，光照强度2000lx，光照时间10h/d现在学习的是第12页，共14页Company Logo参考文献参考文献 1郑宽瑜郑宽瑜,邓君浪邓君浪,赵培快繁技术体系研究赵培快繁技术体系研究J.云南农业云南农业科技科技,2009,(S2):57-59。2周根余周根余,谢薇谢薇,程磊程磊.影响铁皮石斛原球茎生长的若干因素影响铁皮石斛原球茎生长的若干因素J.江西科学江西科学,1999,17(4):231-235.3叶纪沟叶纪沟.铁皮石斛试管苗的人工栽培研究铁皮石斛试管苗的人工栽培研究J.中国药中国药业业,2001,10(1):53。4李铭宗李铭宗.铁皮石斛的生物学特性和人工栽培铁皮石斛的生物学特性和人工栽培J.福建热福建热作科技作科技,1999,24(1):29-31。5张明张明,夏鸿西夏鸿西,朱利泉朱利泉,等等.石斛组织培养研究进展石斛组织培养研究进展J.中国中药杂志中国中药杂志,2000,25(6):323-326。现在学习的是第13页，共14页感谢大家观看感谢大家观看现在学习的是第14页，共14页