药物的含量测定的方法与验证.ppt

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1、关于药物的含量测定的方法与验证现在学习的是第1页，共30页基本要求基本要求 一、掌握一、掌握 测定药物含量的容量、光谱和色谱分测定药物含量的容量、光谱和色谱分 析法，滴定度与含量计算，色谱系统适析法，滴定度与含量计算，色谱系统适用性试验的内容、要求及相关计算。药用性试验的内容、要求及相关计算。药物分析方法验证与内容。物分析方法验证与内容。二、熟悉二、熟悉 定量分析样品的前处理方法。定量分析样品的前处理方法。现在学习的是第2页，共30页第一节第一节 定量分析方法的分类和特点定量分析方法的分类和特点测定药物的含量是评价药品质量优劣的重要测定药物的含量是评价药品质量优劣的重要手段，其测定方法多种多样

2、，而手段，其测定方法多种多样，而容量分析法容量分析法、光谱法光谱法和和色谱法色谱法是中国药典收载最多的方法。是中国药典收载最多的方法。一般而言：一般而言：化学原料药化学原料药的含量测定，首选的含量测定，首选容量分析法容量分析法 药物制剂药物制剂的含量测定，多采用的含量测定，多采用色谱分析法色谱分析法药物制剂的药物制剂的定量检查定量检查，选用，选用光谱分析法光谱分析法现在学习的是第3页，共30页1.1 特点：特点：根据滴定液的浓度和等当点（滴定误差）时根据滴定液的浓度和等当点（滴定误差）时消耗的滴定液体积，计算被测药物的含量。消耗的滴定液体积，计算被测药物的含量。容量分析通常用于测定高含量或中含

3、量组分，容量分析通常用于测定高含量或中含量组分，即被测组分的含量在即被测组分的含量在1以上，容量分析法比以上，容量分析法比较准确，一般情况下较准确，一般情况下相对误差相对误差可达可达0.2以下。以下。容量分析法操作简便、快速、比较准确，所容量分析法操作简便、快速、比较准确，所用仪器普通易得，在药品检验工作中具有很用仪器普通易得，在药品检验工作中具有很大的实用价值。大的实用价值。第一节 定量分析方法的分类和特点一、一、容量分析法容量分析法现在学习的是第4页，共30页 1.2 计算计算1.滴定度：指每滴定度：指每1ml药典规定摩尔浓度的药典规定摩尔浓度的滴定滴定液液所相当的所相当的被测药物被测药物

4、的质量。的质量。2.滴定度（滴定度（T）的计算：在容量分析中，被测）的计算：在容量分析中，被测药物（药物（B）与滴定液（）与滴定液（T1）之间都按一定的）之间都按一定的摩尔比进行反应的，反应可表示为：摩尔比进行反应的，反应可表示为：aT1 +bB 产物产物 a b T T(mg/mL)=(mg/mL)=m mb/ab/aM M 实际滴定度实际滴定度TTF F=实际摩尔浓度实际摩尔浓度/药典规定的摩尔浓度药典规定的摩尔浓度现在学习的是第5页，共30页3.含量的计算：含量的计算：在测定药物含量时，常用直接滴定法和回滴定在测定药物含量时，常用直接滴定法和回滴定 法（剩余滴定法）。法（剩余滴定法）。（

5、1）直接滴定法：）直接滴定法：W W 供试品的称取量；供试品的称取量；mg；V消耗的滴定液体积，消耗的滴定液体积，ml；T药典规定的滴定度，药典规定的滴定度，mg/ml；F校正因数校正因数 含量含量()VT/W W 100%V VT TF/WF/W 100%100%现在学习的是第6页，共30页（2）间接滴定法：）间接滴定法：包括包括生成物滴定法生成物滴定法和和剩余量滴定法剩余量滴定法。1）生成物滴定法：生成物滴定法：指被测药物指被测药物D与化合物与化合物A作用，定量生成化作用，定量生成化合物合物B，再用滴定液，再用滴定液T滴定化合物滴定化合物B。计算公式同直接法。计算公式同直接法。滴定度计算时

6、考虑滴定度计算时考虑D/B,B/T之间的关系之间的关系 P146示例示例4-3现在学习的是第7页，共30页 2）剩余量滴定法（剩余量滴定法（回滴定法）回滴定法）加入定量过量的滴定液加入定量过量的滴定液T1，使其与被测药物定，使其与被测药物定量反应，待反应完全后，再用滴定液量反应，待反应完全后，再用滴定液T2回滴反应回滴反应中剩余的滴定液中剩余的滴定液T1。t11T1+bD 产物产物1+剩余剩余T1（D与与T1反应）反应）t2T2+t12T1 产物产物2 （T2回滴回滴T1）不做空白试验时百分含量计算方法不做空白试验时百分含量计算方法 计算公式计算公式1：含量含量()（V VT1F FT1V V

7、T2F FT2)T1/W W 100%注意：T1与T2的浓度是相当的 现在学习的是第8页，共30页做空白试验时百分含量计算方法做空白试验时百分含量计算方法含量含量()（V VT20V VT2S)F FT2T1/W W 100%W W 供试品的称取量供试品的称取量mgV VT20 空白空白实验时消耗滴定液实验时消耗滴定液T2的体积的体积mL V VT2S 样品测定时消耗滴定液样品测定时消耗滴定液T2的体积的体积mL F FT2 滴定液滴定液T2的浓度的浓度校正因数校正因数 T1 药典规定的滴定液药典规定的滴定液T1滴定度，滴定度，mg/mL现在学习的是第9页，共30页 二、光谱分析法二、光谱分析

8、法 （一）紫外（一）紫外-可见分光光度法（可见分光光度法（200200nmnm760nm)760nm)灵敏度高，可达灵敏度高，可达10-4g/ml 10-7g/ml 1.特点特点 准确度高，准确度高，RSD（%）为为2%5%仪器价格低廉，操作简单，易普及仪器价格低廉，操作简单，易普及 应用广泛。许多化合物都可采用应用广泛。许多化合物都可采用 2.2.朗伯朗伯-比耳定律比耳定律 A=ECL A=ECL 吸收系数吸收系数(E)(E)用摩尔吸收系数用摩尔吸收系数()()或百分吸收系数或百分吸收系数(E(E1%1%1cm1cm)两种方式两种方式表示。表示。两者关系为：两者关系为：E E1%1%1cm1

9、cm100/M100/ME E1%1%1cm1cm：指在一定波长下，溶液浓度：指在一定波长下，溶液浓度(C)(C)为为1 1(W/V)(W/V)，L L1cm1cm时的吸收度。时的吸收度。现在学习的是第10页，共30页3.3.仪器校正和检定仪器校正和检定（1 1）波长：）波长：波长校正用汞灯中较强谱线波长校正用汞灯中较强谱线237.38,253.65,275.28,237.38,253.65,275.28,296.73,313.16,334.15,365.02,404.66,425.83,296.73,313.16,334.15,365.02,404.66,425.83,546.07546.0

10、7nmnm与与576.96576.96nm nm 或用仪器中氘灯的或用仪器中氘灯的486.02486.02nmnm与与656.10656.10nmnm进行校正。进行校正。（2 2）吸收度的检定：）吸收度的检定：用用K K2 2CrOCrO7 7(60mg)+0.005mol/LH(60mg)+0.005mol/LH2 2SOSO4 4液定容至液定容至10001000mlml 波长波长(nm)235(nm)235(最小最小)257()257(最大最大)313()313(最小最小)350()350(最大最大)E E1%1%1 1cmcm 124.5 144.0 48.62 106.6 124.5

11、144.0 48.62 106.6 现在学习的是第11页，共30页（3 3）杂散光检查：）杂散光检查：试剂试剂 浓度浓度(g/ml)g/ml)测定波长测定波长 透光率透光率(%)(%)NaI 1.00 220nm NaI 1.00 220nm 0.8 0.8 NaNO NaNO2 2 5.00 340nm 5.00 340nm 0.8 0.8（4)4)对溶剂的要求对溶剂的要求:220 220240nm 241240nm 241250nm 251250nm 251300nm 300nm300nm 300nm以上以上 溶剂溶剂+吸收池吸收池 A0.41 0.41 0.20 0.20 0.10 0.

12、10 0.05 0.05 现在学习的是第12页，共30页(5)测定法测定法 要求供试品溶液的要求供试品溶液的A A应在应在0.3 0.3 0.70.7【对照品比较法对照品比较法】用用相同溶剂相同溶剂分别配制分别配制供试品供试品溶液和溶液和对照品对照品溶液，对照品溶液溶液，对照品溶液中所含被测物的量应为供试品液中被测物规定量的中所含被测物的量应为供试品液中被测物规定量的10010，在规定波长下测定两溶液吸收度后，按下式计算供，在规定波长下测定两溶液吸收度后，按下式计算供试品溶液中被测物的浓度：试品溶液中被测物的浓度：C Cx x=(=(A Ax x/A Ar r)C Cr r 原料药百分含量原料

13、药百分含量%=%=C Cx xD/WD/W100%100%W 供试品的称取量；供试品的称取量；mg；C Cx x供试品溶液的浓度，供试品溶液的浓度，mg/ml；D D稀释体积稀释体积 现在学习的是第13页，共30页【对照品比较法对照品比较法】固体制剂含量相当于标示量的百分数：固体制剂含量相当于标示量的百分数：标示量（标示量（%）=C Cx xD/WD/WW W平均平均/B/B100%100%W 供试品的称取量；供试品的称取量；mg；C Cx x供试品溶液的浓度，供试品溶液的浓度，mg/ml；D D稀释体积稀释体积 W W平均平均单位制剂的平均重量（或装量）单位制剂的平均重量（或装量）B B制剂

14、的标示量制剂的标示量现在学习的是第14页，共30页(5)测定法测定法 要求供试品溶液的要求供试品溶液的A A应在应在0.3 0.3 0.70.7【吸收系数法吸收系数法】配制供试品溶液，在规定波长处测定其吸收度（配制供试品溶液，在规定波长处测定其吸收度（A），再将供），再将供试品在规定条件下的吸收系数计算含量试品在规定条件下的吸收系数计算含量 C Cx x=A Ax x/100100E1%1cm 原料药百分含量原料药百分含量%=%=C Cx xD/WD/W100%100%W 供试品的称取量；供试品的称取量；mg；C Cx x供试品溶液的浓度，供试品溶液的浓度，mg/ml；D D稀释体积稀释体积

15、现在学习的是第15页，共30页【对照品比较法对照品比较法】固体制剂含量相当于标示量的百分数：固体制剂含量相当于标示量的百分数：注射液标示量注射液标示量（%）=CxD/VV平均平均/B1000100%C Cx x供试品溶液的浓度，供试品溶液的浓度，mg/mL；D D稀释体积稀释体积 V 供试品取样量；供试品取样量；mLV V平均平均注射液规格（注射液规格（mL/支）支）B B标示量（标示量（mg/支）支）现在学习的是第16页，共30页 （二）荧光分光光度法（二）荧光分光光度法特点特点灵敏度高灵敏度高，可达，可达10-10g/ml 10-12g/ml 在在低浓度低浓度进行测定，防止进行测定，防止F

16、与与C不成正比及自熄灭作用不成正比及自熄灭作用 用基准物溶液校正仪器灵敏度，防止样品液荧光衰减用基准物溶液校正仪器灵敏度，防止样品液荧光衰减 灵敏度高，但灵敏度高，但干扰因素多干扰因素多。制备荧光制备荧光衍生物衍生物，可提高其灵敏度和选择性。，可提高其灵敏度和选择性。用样品用样品量少量少，操作，操作简单简单，方法，方法快速快速，应用，应用范围范围较较广广。现在学习的是第17页，共30页2.荧光分析仪荧光分析仪 有二个单色光器有二个单色光器激发单色光器与发射单色激发单色光器与发射单色光光 器；且激发光源、样品池和检测器成直角。器；且激发光源、样品池和检测器成直角。含量测定含量测定 常用的方法对照

17、品比较法常用的方法对照品比较法:Ci=(Ri-Rib)/(Rr-Rrb)C Cr r Ch.P收载收载地高辛片、利血平片、洋地黄毒苷片。地高辛片、利血平片、洋地黄毒苷片。标示量（标示量（%）=C Cx xD/WD/WW W平均平均/B/B100%100%现在学习的是第18页，共30页 三、色谱分析法三、色谱分析法 按分离原理分为：吸附；分配；离子交换；排阻色谱按分离原理分为：吸附；分配；离子交换；排阻色谱 方法分类方法分类 按分离方法分为：按分离方法分为：PC；TLC；柱色谱；柱色谱；GC；HPLC。（一）（一）HPLC法法 1.对对HPLC仪器一般要求仪器一般要求 色谱柱、流动相按品种项下要

18、求。色谱柱、流动相按品种项下要求。色谱柱的色谱柱的理论板数理论板数：n=5.54(tR/Wh/2)2 2.系统性试验系统性试验 分离度分离度：R=2（tR1 tR2)/(W1+W2);要大于要大于1.5 拖尾因子拖尾因子：T=W0.05h/2d1 应在应在0.9 1.05 现在学习的是第19页，共30页 内标法加校正因子测定供试品中主成分含量内标法加校正因子测定供试品中主成分含量3.测定方法测定方法 标准曲线法标准曲线法 外标法测定供试品中主成分含量外标法测定供试品中主成分含量 外标一点法外标一点法 应用示例：应用示例：RP-HPLC法测定盐酸黄酮哌酯片含量，用标准曲线法如法测定盐酸黄酮哌酯片

19、含量，用标准曲线法如头孢拉丁；头孢羟氨苄；头孢拉丁；头孢羟氨苄；头孢唑啉钠用外标一点法头孢唑啉钠用外标一点法现在学习的是第20页，共30页（1）内标法加校正因子测定供试品中主成分）内标法加校正因子测定供试品中主成分含量含量 内标法：将一个已知重量，样品中不含有的内标法：将一个已知重量，样品中不含有的纯物质，加至待测样品溶液中，以此纯物质纯物质，加至待测样品溶液中，以此纯物质的量为标竿，对比测定待测的量为标竿，对比测定待测i组分的含量的方组分的含量的方法谓内标法。优点：定量结果与进样量无关法谓内标法。优点：定量结果与进样量无关（不超载条件下）。（不超载条件下）。对内标物的要求：对内标物的要求：1

20、、内标物是原样品中不含、内标物是原样品中不含有的组分。有的组分。2、内标物的保留时间应与待测成、内标物的保留时间应与待测成分相近，分离度分相近，分离度R1.5。3、内标物必须是纯、内标物必须是纯度合乎要求的纯物质。度合乎要求的纯物质。现在学习的是第21页，共30页 精密称（量）取药物对照品和内标物质，精密称（量）取药物对照品和内标物质，分别配成溶液，精密量取各溶液，配成校正分别配成溶液，精密量取各溶液，配成校正因子（因子（f）测定用的含内标的对照品溶液。取）测定用的含内标的对照品溶液。取一定量注入仪器，记录色谱图。测量对照品一定量注入仪器，记录色谱图。测量对照品和内标物质的峰面积（或峰高），按

21、下式计和内标物质的峰面积（或峰高），按下式计算校正因子：算校正因子：校正因子（校正因子（f）（）（As/Cs）内标内标/（Ai/Ci）对照对照现在学习的是第22页，共30页 再精密称取供试品，配成溶液，精密量再精密称取供试品，配成溶液，精密量取供试品溶液和上述内标溶液，同法配成供取供试品溶液和上述内标溶液，同法配成供含测的含内标的供试品溶液，取一定量注入含测的含内标的供试品溶液，取一定量注入仪器，记录色谱图，测量供试品中待测成分仪器，记录色谱图，测量供试品中待测成分和内标物质的峰面积或峰高（和内标物质的峰面积或峰高（A或或h），按下），按下式计算含量：式计算含量：f（As/Cs）内标内标/（A

22、i/Ci）供供 含量（含量（Ci）供供f（Ai）供供/（As/Cs）内标内标 现在学习的是第23页，共30页（2）外标法测定供试品中主成分含量：外标）外标法测定供试品中主成分含量：外标法是以供试品的对照品或标准品作对照物质，法是以供试品的对照品或标准品作对照物质，相比较以求得供试品的含量。外标法可分为相比较以求得供试品的含量。外标法可分为标准曲线法和外标一点法。标准曲线法和外标一点法。1）标准曲线法：配制一系列已知浓度的对照）标准曲线法：配制一系列已知浓度的对照品或标准品溶液，在同一操作条件下，按同品或标准品溶液，在同一操作条件下，按同量注入色谱仪，测其峰面积（峰高），作出量注入色谱仪，测其峰

23、面积（峰高），作出峰面积（或峰高）与浓度的标准曲线。然后峰面积（或峰高）与浓度的标准曲线。然后在相同条件下，注入同量供试品溶液，获得在相同条件下，注入同量供试品溶液，获得待测组分的峰面积（或峰高），根据标准曲待测组分的峰面积（或峰高），根据标准曲线或其回归方程，计算供试品中待测组分的线或其回归方程，计算供试品中待测组分的浓度。浓度。现在学习的是第24页，共30页 AaC+b r0.9999 线性范围线性范围 gml-1gml-1 若待测组分的峰面积为若待测组分的峰面积为Ax，则由上述线性方，则由上述线性方程可计算出对应的待测组分浓度程可计算出对应的待测组分浓度Cx。应用示例自阅应用示例自阅 现

24、在学习的是第25页，共30页 2）外标一点法）外标一点法 精密称（量）取对照品和供精密称（量）取对照品和供试品，分别配制成对照品溶液（试品，分别配制成对照品溶液（C对对）和供试）和供试品溶液（品溶液（C供供），分别精密量取一定量，注入），分别精密量取一定量，注入仪器，记录色谱图，测量对照品的峰面积仪器，记录色谱图，测量对照品的峰面积（A对对）和供试品待测成分的峰面积（）和供试品待测成分的峰面积（A供供）（或峰高），按下式计算含量：（或峰高），按下式计算含量：C供供（C对对/A对对）A供供 外标法简便，但要求进样量准确及操作条件外标法简便，但要求进样量准确及操作条件稳定。稳定。内标法优点：在进样

25、量不超限范围内，内标法优点：在进样量不超限范围内，定量结果与进样量无关，但样品配制麻烦，定量结果与进样量无关，但样品配制麻烦，内标物有时不易寻找是其缺点。内标物有时不易寻找是其缺点。现在学习的是第26页，共30页 （二）（二）GC法法 1.对对GC仪器一般要求仪器一般要求 载气为载气为氮气氮气；色谱柱为填充或毛细管柱；色谱柱为填充或毛细管柱 色谱柱的色谱柱的理论板数理论板数：n=5.54(tR/Wh/2)2 2.系统性试验系统性试验 分离度分离度：R=2（tR1 tR2)/(W1+W2);要大于要大于1.5 拖尾因子拖尾因子：T=W0.05h/2d1 应在应在0.9 1.05 现在学习的是第2

26、7页，共30页 内标法加校正因子测定供试品中主成分含量内标法加校正因子测定供试品中主成分含量 3.测定方法测定方法 标准曲线法标准曲线法 外标法测定供试品中主成分含量外标法测定供试品中主成分含量 外标一点法外标一点法 应用示例：应用示例：Ch.P(2000)收载的月桂卓酮、维生素收载的月桂卓酮、维生素E及其片剂、注及其片剂、注 射剂、甲酚皂溶液等均采用射剂、甲酚皂溶液等均采用GC法中的内标法加校正法中的内标法加校正 因子测定含量。因子测定含量。现在学习的是第28页，共30页小小 结结药物含量测定的容量、光谱和色谱分析方药物含量测定的容量、光谱和色谱分析方法。法。计算公式：计算公式：容量法：容量法：光谱法：光谱法：含量含量()VT/W W 100%V VT TF/WF/W 100%100%含量含量()（VT20VT2S)FT2T1/W 100%原料药百分含量原料药百分含量%=%=C Cx xD/WD/W100%100%标示量（标示量（%）=C Cx xD/WD/WW W平均平均/B/B100%100%注射液标示量注射液标示量（%）=CxD/VV平均平均/B1000100%现在学习的是第29页，共30页感谢大家观看感谢大家观看现在学习的是第30页，共30页