实验一细胞形态细胞器的显微结构的观察精选PPT.ppt

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1、关于实验一细胞形态细胞器的显微结构的观察第1页，讲稿共36张，创作于星期日一、实验目的一、实验目的1.1.了解普通光学显微镜的工作原了解普通光学显微镜的工作原理，掌握光学显微镜的使用方理，掌握光学显微镜的使用方法。法。2.2.熟悉光学显微镜下细胞的基本熟悉光学显微镜下细胞的基本形态与结构。形态与结构。第2页，讲稿共36张，创作于星期日二、实验原理二、实验原理 细胞是生物体的基本结构单位。构成生细胞是生物体的基本结构单位。构成生物机体的细胞是多种多样的。要对细胞进行物机体的细胞是多种多样的。要对细胞进行研究，首先要从其形态结构人手。所以，要研究，首先要从其形态结构人手。所以，要借助显微镜的成像及

2、放大原理，在显微镜下，借助显微镜的成像及放大原理，在显微镜下，才能观察到细胞的基本形态结构。才能观察到细胞的基本形态结构。第3页，讲稿共36张，创作于星期日n经物镜形成倒立实像，经目镜进一步放大成像。第4页，讲稿共36张，创作于星期日n显微镜物象是否清楚不仅决定于放大倍数，还与显微镜的分辨力有关。显微镜物象是否清楚不仅决定于放大倍数，还与显微镜的分辨力有关。n制作光学镜头所用的玻璃折射率为制作光学镜头所用的玻璃折射率为1.651.65 1.781.78，所用介质的折射率越接近玻璃，所用介质的折射率越接近玻璃的越好。对于干燥物镜来说，介质为空气，镜口率一般为的越好。对于干燥物镜来说，介质为空气，

3、镜口率一般为0.050.05 0.950.95；油镜头；油镜头用香柏油为介质，镜口率可接近用香柏油为介质，镜口率可接近1.51.5。n普通光线的波长为普通光线的波长为400400 700nm700nm，因此显微镜分辨力数值不会小于，因此显微镜分辨力数值不会小于0.2m0.2m，人眼，人眼的分辨力是的分辨力是0.2mm0.2mm，所以一般显微镜设计的最大放大倍数通常为，所以一般显微镜设计的最大放大倍数通常为1000X1000X。第5页，讲稿共36张，创作于星期日显微镜的分辨率显微镜的分辨率:也称为分辨力，它是指能把两个物点辨清的最小距离，也称为分辨力，它是指能把两个物点辨清的最小距离，分辨距离越

4、大，则分辨率越低。所以，分辨率是以分辨分辨距离越大，则分辨率越低。所以，分辨率是以分辨 距离来表示的。距离来表示的。其计算公式为其计算公式为:D=0.61:D=0.61/NA NA=nsina/2/NA NA=nsina/2 式式中中D D为为分分辨辨率率，A A为为光光波波波波长长，n=介介质质折折射射率率；=镜镜口口角角（标标本本对对物物镜镜镜镜口口的的张张角角），NANA为为物物镜镜的的数数值值孔孔径径(镜镜口口率率)。镜镜口口角角总总是是要要小小于于180，所所以以sina/2的最大值必然小于的最大值必然小于1。第6页，讲稿共36张，创作于星期日 在在物物镜镜上上，有有镜镜口口率率(N

5、.A.)(N.A.)的的标标志志，它它反反应应该该镜镜头头分分辨辨力力的的大大小小，其其数数字字越越大大，表表示分辨率越高，各物镜的镜口率如下表：示分辨率越高，各物镜的镜口率如下表：物镜物镜 镜口率镜口率(N.A.)(N.A.)工作距离工作距离(mm)(mm)10 0.25 5.40 10 0.25 5.40 40 0.65 0.39 40 0.65 0.39 100 1.30 0.11 100 1.30 0.11显微镜的总放大倍数等于目镜和物镜放大倍数的乘积，显微镜的总放大倍数等于目镜和物镜放大倍数的乘积，公式为公式为:M=K1xK2:M=K1xK2焦点深度焦点深度:显微镜调焦到看清标本某一

6、点时，不仅是这一物点，而且它的显微镜调焦到看清标本某一点时，不仅是这一物点，而且它的 上下两侧也能看清楚两侧的厚度叫做焦点深度。看到标本的全上下两侧也能看清楚两侧的厚度叫做焦点深度。看到标本的全 厚度，必须调节螺旋仔细地从上到下进行观察。厚度，必须调节螺旋仔细地从上到下进行观察。第7页，讲稿共36张，创作于星期日厚标本和薄标本厚标本和薄标本4-5 um4-5 um2um2um基础知识基础知识第8页，讲稿共36张，创作于星期日基础知识基础知识三、显微镜概述三、显微镜概述 显微镜是观察细胞的主要工具。根据光源不同，可分为光学显显微镜是观察细胞的主要工具。根据光源不同，可分为光学显微镜和电子显微镜两

7、大类。前者以可见光（紫外线显微镜以紫外光）微镜和电子显微镜两大类。前者以可见光（紫外线显微镜以紫外光）为光源，后者则以电子束为光源。为光源，后者则以电子束为光源。1.1.光学显微镜光学显微镜 普通生物显微镜由普通生物显微镜由3 3部分构成：部分构成：照明系统：包括光源和聚光器。照明系统：包括光源和聚光器。光学放大系统：由物镜和目镜组成，光学放大系统：由物镜和目镜组成，是显微镜的主体。是显微镜的主体。机械装置：用于固定材料和观察方便，机械装置：用于固定材料和观察方便，包括镜台包括镜台(载物台载物台)、调节器和、调节器和、物镜转换器物镜转换器(旋转器旋转器)等。等。尼康E-600显微镜 第9页，讲

8、稿共36张，创作于星期日2.体视显微镜（可直接进行解剖及观察并具有正像立体感）体视显微镜（可直接进行解剖及观察并具有正像立体感）第10页，讲稿共36张，创作于星期日3.荧光显微镜荧光显微镜 尼康E800荧光DIC显微镜 荧光显微镜照片（微管呈绿荧光显微镜照片（微管呈绿色、微丝红色、核蓝色）色、微丝红色、核蓝色）第11页，讲稿共36张，创作于星期日荧光显微镜和普通显微镜有以下的区别：n1.照明方式通常为落射式，即光源通过物镜投射于样品上。n2.光源为紫外光，波长较短，分辨力高于普通显微镜。n3.有两个特殊的滤光片，光源前的用以滤除可见光，目镜和物镜之间的用于滤除紫外线，用以保护人目。第12页，讲

9、稿共36张，创作于星期日4.4.激光共聚焦激光共聚焦扫描显微镜（扫描显微镜（具具有高分辨率可进有高分辨率可进行显微断层扫描）行显微断层扫描）LCSM照片照片蓝色为细胞核，绿色蓝色为细胞核，绿色为微管为微管（能观察活细胞）（能观察活细胞）第13页，讲稿共36张，创作于星期日5.暗视野显微镜暗视野显微镜 暗视野显微镜（暗视野显微镜（dark field microscopedark field microscope）的聚光镜中央有当光片，使照）的聚光镜中央有当光片，使照明光线不直接进人物镜，只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜，因而明光线不直接进人物镜，只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜，因而视

10、野的背景是黑的，物体的边缘是亮的。利用这种显微镜能见到小至视野的背景是黑的，物体的边缘是亮的。利用这种显微镜能见到小至 4-4-200nm200nm的微粒子，分辨率可比普通显微镜高的微粒子，分辨率可比普通显微镜高5050倍。倍。6.6.相差显微镜相差显微镜 一种介壳虫的染色体 第14页，讲稿共36张，创作于星期日7.偏光显微镜偏光显微镜（对于双折射物质进行结构研究）对于双折射物质进行结构研究）偏光显微镜（偏光显微镜（polarizing microscopepolarizing microscope）用于检测具有双折射性的物质，如）用于检测具有双折射性的物质，如纤维丝、纺锤体、胶原、染色体等等

11、。纤维丝、纺锤体、胶原、染色体等等。8.8.微分干涉差显微镜微分干涉差显微镜（图像具有浮雕感）（图像具有浮雕感）DICDIC显微镜其优点是能显示结构的三维立体投影影像。与相差显微镜相显微镜其优点是能显示结构的三维立体投影影像。与相差显微镜相比，其标本可略厚一点，折射率差别更大，故影像的立体感更强。比，其标本可略厚一点，折射率差别更大，故影像的立体感更强。DIC显微镜下的硅藻（伪彩色）第15页，讲稿共36张，创作于星期日9.9.倒置显微镜（倒置显微镜（组织培养中长工作距离的）组织培养中长工作距离的）n组成和普通显微镜一样，只组成和普通显微镜一样，只不过物镜与照明系统颠倒，不过物镜与照明系统颠倒，

12、前者在载物台之下，后者在前者在载物台之下，后者在载物台之上（右图），用于载物台之上（右图），用于观察培养的活细胞，具有相观察培养的活细胞，具有相差物镜。差物镜。第16页，讲稿共36张，创作于星期日10.10.显微操作技术显微操作技术 尼康尼康NT-88NENT-88NE显微操作显微操作/注射仪注射仪 第17页，讲稿共36张，创作于星期日四、实验用品四、实验用品n各种组织切片各种组织切片第18页，讲稿共36张，创作于星期日五、五、实验步骤实验步骤(一一)显微镜的使用显微镜的使用1.1.观察前的准备工作观察前的准备工作 (1)(1)观察者要养成显微镜镜检的工作习惯，观察时要双观察者要养成显微镜镜检

13、的工作习惯，观察时要双 眼同时睁开，一边观察一边进行记录或描绘。眼同时睁开，一边观察一边进行记录或描绘。(2)(2)观察时所用的材料、药品和各种器具要预先准备好。观察时所用的材料、药品和各种器具要预先准备好。(3)(3)显微镜在使用之前应检查一下它的各个部件是否完整显微镜在使用之前应检查一下它的各个部件是否完整 和正常，并对载物台、目镜、物镜以及聚光器上端透和正常，并对载物台、目镜、物镜以及聚光器上端透 镜进行必要的清洁工作。然后进行合轴调节。镜进行必要的清洁工作。然后进行合轴调节。第19页，讲稿共36张，创作于星期日瞳瞳 距距 调调 节节2.2.显微镜的调节显微镜的调节第20页，讲稿共36张

14、，创作于星期日屈屈 光光 度度 调调 节节调节调节第21页，讲稿共36张，创作于星期日粗粗 调调 松松 紧紧 调调 节节 旋旋 钮钮第22页，讲稿共36张，创作于星期日聚聚 光光 镜镜 中中 心心 调调 节节 光轴中心调节光轴中心调节光轴中心调节光轴中心调节螺钉螺钉螺钉螺钉 视场视场视场视场光栏光栏光栏光栏 孔径孔径孔径孔径光栏光栏光栏光栏10X10X10X10X物物物物镜镜镜镜 标标标标本本本本 聚光镜升降聚光镜升降聚光镜升降聚光镜升降旋钮旋钮旋钮旋钮第23页，讲稿共36张，创作于星期日孔径光栏调节孔径光栏调节N.A聚=(0 0.6-06-0.8 8)N.A物第24页，讲稿共36张，创作于星

15、期日孔径光栏开度与图象孔径光栏开度与图象100%70%30%第25页，讲稿共36张，创作于星期日孔径光栏的运用孔径光栏的运用第26页，讲稿共36张，创作于星期日操作步骤如下操作步骤如下:(1 (1）可变光栏的中心对准聚光镜的中心。如果可变光栏的水平）可变光栏的中心对准聚光镜的中心。如果可变光栏的水平是固定的，则装配时已保证它与聚光镜合轴，不必调整是固定的，则装配时已保证它与聚光镜合轴，不必调整;如果可变光如果可变光栏的水平位置可以移动，则应把可变光栏关到最小，使它的中心孔对准栏的水平位置可以移动，则应把可变光栏关到最小，使它的中心孔对准聚光镜下方的透镜中心。聚光镜下方的透镜中心。(2)(2)载

16、物台上放置观察标本，把聚光器上升到它上端透镜平面稍低于载物台上放置观察标本，把聚光器上升到它上端透镜平面稍低于载物台平面的高度，并将它的可变光栏开到最大，用低倍物镜，进行调焦载物台平面的高度，并将它的可变光栏开到最大，用低倍物镜，进行调焦到能看见标本，可调反射镜使视野得到最亮和最均匀到能看见标本，可调反射镜使视野得到最亮和最均匀 的照明，或把光栏关的照明，或把光栏关小，最亮的照明区正处在视野的中央。小，最亮的照明区正处在视野的中央。(3)(3)转到高倍镜，并调焦到看清标本，然后去掉标本，拔出目镜，转到高倍镜，并调焦到看清标本，然后去掉标本，拔出目镜，眼睛直接向镜筒观察，并把可变眼睛直接向镜筒观

17、察，并把可变 光栏关小，看其亮点是否在视野中光栏关小，看其亮点是否在视野中心，如果不是，就要转动聚光器的调节螺旋，把亮点调到视野中心，如果不是，就要转动聚光器的调节螺旋，把亮点调到视野中 央，央，再慢慢开启可变光栏，使视野看到光栏边缘和聚光镜的边缘相接为再慢慢开启可变光栏，使视野看到光栏边缘和聚光镜的边缘相接为止。止。第27页，讲稿共36张，创作于星期日3.观察操作：观察操作：(1)(1)低、高倍镜的使用低、高倍镜的使用:先把低倍的物镜用粗调焦螺旋下降至离盖玻片先把低倍的物镜用粗调焦螺旋下降至离盖玻片0.5cm0.5cm处，处，然后一边观察视野一边上升物镜，直至看到图像，再将标本移到视野中心，

18、用细调焦螺旋把然后一边观察视野一边上升物镜，直至看到图像，再将标本移到视野中心，用细调焦螺旋把物镜调至最清晰处，若要用高倍镜观察时，把所要进一步放大观察的部位移至视野中央，直物镜调至最清晰处，若要用高倍镜观察时，把所要进一步放大观察的部位移至视野中央，直接顺时针转换成高倍物镜，然后用细调焦螺旋调焦，至看清物像。接顺时针转换成高倍物镜，然后用细调焦螺旋调焦，至看清物像。第28页，讲稿共36张，创作于星期日(2)(2)兔肝细胞苏木精兔肝细胞苏木精-伊红伊红(HE)(HE)染色玻片标本的观察染色玻片标本的观察 先在干燥系物镜下观察肝小叶的概况，辨认肝细胞，然后用油镜仔细观察肝细胞先在干燥系物镜下观察肝小叶的概况，辨认肝细胞，然后用油镜仔细观察肝细胞的显微结构。注意肝细胞的形状，细胞核和核仁的形状和数量，细胞核和细胞质的染的显微结构。注意肝细胞的形状，细胞核和核仁的形状和数量，细胞核和细胞质的染色区别等。色区别等。第29页，讲稿共36张，创作于星期日（二）观察标本第30页，讲稿共36张，创作于星期日第31页，讲稿共36张，创作于星期日第32页，讲稿共36张，创作于星期日第33页，讲稿共36张，创作于星期日第34页，讲稿共36张，创作于星期日第35页，讲稿共36张，创作于星期日感感谢谢大大家家观观看看第36页，讲稿共36张，创作于星期日