培养基灭菌精选PPT.ppt
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1、关于培养基灭菌第1页,讲稿共68张,创作于星期日培养基灭菌程度培养基灭菌程度N/NN/N0 0培培养养基基灭灭菌菌程程度度的的要要求求因因发发酵酵系系统统而而异异。某某些些培培养养过过程程,由由于于培培养养基基中中的的基基质质不不易易被被一一般般微微生生物物利利用用,或或温温度度、pHpH不不适适于于一一般般微微生生物物的的生生长长,则则对对无无菌菌程程度度要要求求低低;但但是是有有一一些些培培养养过过程程对对无无菌菌程程度度要要求求高高,例如抗生素的生产过程。例如抗生素的生产过程。第2页,讲稿共68张,创作于星期日第一节第一节 分批灭菌分批灭菌一、微生物的热死灭动力学一、微生物的热死灭动力学
2、 对对培培养养基基进进行行湿湿热热灭灭菌菌时时,培培养养基基中中的的微微生生物物受受热热死死亡亡(微微生生物物体体内内蛋蛋白白质质变变性性)的的速速率率与与残存的微生物数量成正比。残存的微生物数量成正比。ln(N/N0)=-Kt均相系统,它符均相系统,它符合化学反应的一合化学反应的一级反应动力学。级反应动力学。第3页,讲稿共68张,创作于星期日K K(比热死亡速率常数)(比热死亡速率常数)由两个因素均定由两个因素均定1 1、微生物的种类、微生物的种类2 2、灭菌温度。、灭菌温度。第4页,讲稿共68张,创作于星期日 ln(N/N0)=-K t ln(C/C0)=-Kd t杂菌杂菌营养物质营养物质
3、T ,K,Kd也就是也就是K K对对T T的变化率是怎么样的?的变化率是怎么样的?第5页,讲稿共68张,创作于星期日灭菌动力学的重要结论灭菌动力学的重要结论细细菌菌孢孢子子热热死死灭灭反反应应的的E E很很高高,而而大大部部分分营营养养物物质质热热破破坏坏反反应应的的E E很很低低,因因而而将将T T提提高高到到一一定定程程度度会会加加速速细细菌菌孢孢子子的的死死灭灭速速率率,从从而而缩缩短短在在升升高高温温度度下下的的灭灭菌菌时时间间(ln(N/Nln(N/N0 0)=-K K t t);由由于于营营养养成成分分热热破破坏坏的的E E很很低低,上上述述的的温温度度提提高高只只能能稍稍微微增增
4、大大其其热热破破坏坏温温度度,但但由由于于灭灭菌菌时时间间的的显显著著缩缩短短,结结果是营养成分的破坏量在允许的范围内。果是营养成分的破坏量在允许的范围内。第6页,讲稿共68张,创作于星期日第一节第一节 分批灭菌分批灭菌二二 分批灭菌的设计分批灭菌的设计1 1、分批灭菌的操作、分批灭菌的操作 将配好的培养基打入发酵罐,通入将配好的培养基打入发酵罐,通入蒸汽将培养基和所用的设备一起进行灭蒸汽将培养基和所用的设备一起进行灭菌,也称菌,也称实罐灭菌实罐灭菌。优点优点:(1 1)不需专门的灭菌设备。不需专门的灭菌设备。(2 2)对蒸汽的压力要求较低,在)对蒸汽的压力要求较低,在3 34105Pa410
5、5Pa(表压)就可满足要求。(表压)就可满足要求。缺点缺点:在灭菌过程中,蒸汽用量波动大,:在灭菌过程中,蒸汽用量波动大,造成锅炉负荷波动大。造成锅炉负荷波动大。第7页,讲稿共68张,创作于星期日第一节第一节 分批灭菌分批灭菌 二二 分批灭菌的设计分批灭菌的设计1 1、分批灭菌的操作、分批灭菌的操作 第8页,讲稿共68张,创作于星期日第9页,讲稿共68张,创作于星期日第10页,讲稿共68张,创作于星期日第11页,讲稿共68张,创作于星期日高压蒸汽锅高压蒸汽锅第12页,讲稿共68张,创作于星期日第一节第一节 分批灭菌分批灭菌 二二 分批灭菌的设计分批灭菌的设计2 2、分批灭菌的设计、分批灭菌的设
6、计 要求绝对的无菌在工业上很难做到,要求绝对的无菌在工业上很难做到,因为:因为:N=0,则e-kt=0,1/ekt=0,ekt=,t=因此,绝对的无菌很难做到。因此,绝对的无菌很难做到。第13页,讲稿共68张,创作于星期日第一节第一节 分批灭菌分批灭菌 二二 分批灭菌的设计分批灭菌的设计 而而且且绝绝对对的的无无菌菌也也是是不不必必要要的的,工工程程上上只只要要求求培培养养基基中中杂杂菌菌降降低低到到合合理理的的程程度度,然然后进行细胞的培养,失败的可能性很小。后进行细胞的培养,失败的可能性很小。那么无菌程度降低到多少为好呢?那么无菌程度降低到多少为好呢?有一个设计标准(判据)有一个设计标准(
7、判据)N N0 0:未灭菌培养基的含菌数。:未灭菌培养基的含菌数。N N:灭菌后培养基中存活的菌体数,:灭菌后培养基中存活的菌体数,第14页,讲稿共68张,创作于星期日第一节第一节 分批灭菌分批灭菌 二二 分批灭菌的设计分批灭菌的设计常取常取N=10N=10-3-3个个/罐。罐。它它的的意意义义是是:灭灭菌菌10103 3次次,存存活活一一个个活活菌菌孢子的机会为孢子的机会为1 1次。次。例例如如:培培养养基基100m100m3 3,含含菌菌10105 5个个/ml,/ml,,要要求灭菌后存活菌数求灭菌后存活菌数1010-3-3个个/罐罐=那么那么为计算方便为计算方便 LnLn(N N0 0/
8、N/N)=36.836.8 第15页,讲稿共68张,创作于星期日第一节第一节 分批灭菌分批灭菌 二二 分批灭菌的设计分批灭菌的设计分分批批灭灭菌菌过过程程:升升温温、保保温温和和降降温温,灭灭菌菌主主要要是是在在保保温温过过程程中中实实现现的的,在在升升温温的的后后期期和和冷冷却却的的初初期期,培培养养基基的的温温度度很很高高,因因而而对对灭灭菌菌也也有有一一定定贡献。贡献。第16页,讲稿共68张,创作于星期日T灭菌温度tot1t2t3timeN1N2N升温保温降温N0Ln(N0/N1)Ln(N2/N)Ln(N1/N2)Ln Ln N N0 0/N/N=36.8=36.8是总的判据,是由是总的
9、判据,是由升温、保温、降温三段实现的升温、保温、降温三段实现的ln ln(N N0 0/N/N)=lnln()ln ln N N0 0/N/N=lnln+lnln+lnln第17页,讲稿共68张,创作于星期日第一节第一节 分批灭菌分批灭菌 二二 分批灭菌的设计分批灭菌的设计在在灭灭菌菌过过程程中中,必必需需设设计计出出灭灭菌菌过过程的程的操作时间和温度操作时间和温度。首首先先根根据据培培养养过过程程对对培培养养基基无无菌菌程程度度的的要要求求提提出出无无菌菌判判据据(ln ln ),然然后后依依据据所所使使用用的的灭灭菌菌设设备备,和和设设计计出出的的灭灭菌菌温温度度和和时时间间来来计计算算出
10、出实实际际的的ln ln ,看能否达到开始提出的无菌要求。,看能否达到开始提出的无菌要求。第18页,讲稿共68张,创作于星期日ln(Nln(N0 0/N/N1 1)=)=K K(t(t1 1-t-t0 0)K K是变数,是变数,t t变化,变化,T T变化,变化,K K也变化也变化。升温段:升温段:T灭菌温度tot1t2t3timeN1N2N升温保温降温N0ln(N0/N1)ln(N2/N)ln(N1/N2)第19页,讲稿共68张,创作于星期日T灭菌温度tot1t2t3timeN1N2N升温保温降温N0ln(N0/N1)ln(N2/N)保温段:保温段:Ln(NLn(N1 1/N/N2 2)=)
11、=K K(t(t2 2-t-t1 1)T T一定,一定,K K是常数。是常数。ln(N1/N2)降温段:降温段:这三个判据中,这三个判据中,保温段可以算出,升温段和保温段可以算出,升温段和降温段不好办,降温段不好办,因为不知道因为不知道T T和和t t之间的函数关系。之间的函数关系。第20页,讲稿共68张,创作于星期日是否有这样的函数关系呢?是否有这样的函数关系呢?一一些些学学者者已已经经作作出出的的常常用用的的换换热热方方式式T-tT-t关系式。关系式。第21页,讲稿共68张,创作于星期日除了这种积除了这种积分方式以外,分方式以外,工程上还常工程上还常用图解积分用图解积分法,即从设法,即从设
12、计的计的T-tT-t数数据换算成据换算成K-K-t t数据,进数据,进行图解积分。行图解积分。第一节第一节 分批灭菌分批灭菌 二二 分批灭菌的设计分批灭菌的设计第22页,讲稿共68张,创作于星期日第一节第一节 分批灭菌分批灭菌 二二 分批灭菌的设计分批灭菌的设计例例如如:某某发发酵酵罐罐分分批批灭灭菌菌最最高高温温度度120120,保保持持5min5min,设设计计的的温温度度和和时间关系如下:时间关系如下:(A=7.9410A=7.94103838minmin-1-1;E=278441J/mol;R=8.28J/molKE=278441J/mol;R=8.28J/molK)t01030364
13、35055586370102120140T30509010011012012011010090604433K0000.030.363.593.590.360.03000t t:min,T:,K:minmin,T:,K:min-1-1,发酵罐发酵罐6060m m3 3,N N0 0=10=105 5个个/mlml,N=10N=10-3-3问设计的问设计的T-tT-t过程是否达到灭菌要求,如不能,应如何改进?过程是否达到灭菌要求,如不能,应如何改进?第23页,讲稿共68张,创作于星期日第一节第一节 分批灭菌分批灭菌 二二 分批灭菌的设计分批灭菌的设计解:先计算无菌程度的判据:解:先计算无菌程度的判
14、据:N0/N=61015ln(N0/N)=36.3K K的数据值是由已知数据计算出的的数据值是由已知数据计算出的根据已有的数据作出根据已有的数据作出T-tT-t和和K-tK-t图图第24页,讲稿共68张,创作于星期日ln(N0/N3)=ln(N0/N1)+ln(N1/N2)+ln(N2/N3)=36.3 ln(N1/N2)=Kt=3.595=17.95 第25页,讲稿共68张,创作于星期日第一节第一节 分批灭菌分批灭菌 二二 分批灭菌的设计分批灭菌的设计ln(N0/N1)+ln(N2/N3)按图解积分图解积分,求得:ln(N0/N1)+ln(N2/N3)=15.85 ln(N0/N3)=t=3
15、4mint=34min以前和以前和t=64mint=64min以后,以后,K K值太小,值太小,忽略不计忽略不计.没有达到没有达到N N3 3=10=10-3-3的要求的要求 ,残留菌数残留菌数N N3 3=N=N0 0e e-Kt-Kt=N=N0 0 e e-33.8-33.8=1.2610=1.2610-2-2第26页,讲稿共68张,创作于星期日第一节第一节 分批灭菌分批灭菌 二二 分批灭菌的设计分批灭菌的设计保温阶段对杀死孢子的贡献保温阶段对杀死孢子的贡献:17.95/33.8=53%17.95/33.8=53%,而保温阶段时间只有,而保温阶段时间只有5min5min。那么那么如何改进设
16、计呢?如何改进设计呢?(1)(1)增加保温时间增加保温时间,如果增加,如果增加1min,1min,那么那么ln ln(N(N1 1/N/N2 2)=3.596=21.54=3.596=21.54 那么那么ln(Nln(N0 0/N/N3)3)=21.54+15.85=38.39=21.54+15.85=38.39,达到了设计要求。达到了设计要求。(2)(2)可以提高灭菌温度可以提高灭菌温度。间间歇歇灭灭菌菌的的提提温温阶阶段段和和降降温温阶阶段段对对灭灭菌菌的的贡贡献献相相对对较较小小,而而对对培培养养基基中中维维生生素素类类物物质质的的破破坏坏作作用用则则可可能能很很严重。应尽量缩短提温和降
17、温阶段。严重。应尽量缩短提温和降温阶段。第27页,讲稿共68张,创作于星期日第二节第二节 连续灭菌连续灭菌一、连续灭菌方法一、连续灭菌方法第28页,讲稿共68张,创作于星期日第29页,讲稿共68张,创作于星期日第30页,讲稿共68张,创作于星期日第31页,讲稿共68张,创作于星期日第32页,讲稿共68张,创作于星期日第二节第二节 连续灭菌连续灭菌 一、连续灭菌方法一、连续灭菌方法与间歇灭菌相比,连续灭菌的优点:与间歇灭菌相比,连续灭菌的优点:1 1 升温和降温速度快升温和降温速度快2 2 灭菌温度高,保温时间短灭菌温度高,保温时间短3 3 蒸汽用量平稳蒸汽用量平稳缺点:缺点:1 1 设备复杂,
18、投资大。设备复杂,投资大。第33页,讲稿共68张,创作于星期日第二节第二节 连续灭菌连续灭菌 一、连续灭菌方法一、连续灭菌方法空罐灭菌空罐灭菌加加热热器器、维维持持罐罐和和冷冷却器也先进行灭菌。却器也先进行灭菌。耐耐热热性性物物料料和和不不耐耐热热性物料可分开灭菌。性物料可分开灭菌。糖和氮源分开灭菌。糖和氮源分开灭菌。第34页,讲稿共68张,创作于星期日第二节第二节 连续灭菌连续灭菌二、连续灭菌反应器的流体流动模型二、连续灭菌反应器的流体流动模型 =式中:式中:反应器中液体所占的体积(反应器中液体所占的体积(L L,m m3 3)Q Q:通过反应器的流体流速(:通过反应器的流体流速(L/min
19、L/min,m m3 3/min/min)在在设设计计连连续续灭灭菌菌设设备备时时,必必须须认认识识到到并并不不是是培培养养基基的每一质点都在反应器中停留同样的时间。的每一质点都在反应器中停留同样的时间。第35页,讲稿共68张,创作于星期日活塞流(理想)活塞流(理想)滞流,滞流,V=0.82VmaxV=0.82Vmax湍流湍流,V=0.5 VmaxV=0.5 Vmax实际的反应器中,与流动方向相垂直的截面上各质点实际的反应器中,与流动方向相垂直的截面上各质点(微团)的流速不同(有流速分布)。(微团)的流速不同(有流速分布)。第36页,讲稿共68张,创作于星期日第二节第二节 连续灭菌连续灭菌实际
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