组织制片技术概述精选PPT.ppt

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1、关于组织制片技术概述关于组织制片技术概述第1页，讲稿共63张，创作于星期三第2页，讲稿共63张，创作于星期三组织制片技术的概述组织制片技术的概述组织制片技术的方法组织制片技术的方法组织制片技术的基本程序组织制片技术的基本程序苏木精苏木精伊红染色伊红染色第3页，讲稿共63张，创作于星期三组织制片技术的发展史组织制片技术的发展史从从16世纪世纪60年代年代Hook发明显微镜，开始观察和描发明显微镜，开始观察和描述软木塞中的细胞至今，组织制片技术随着生命科学述软木塞中的细胞至今，组织制片技术随着生命科学的发展而不断进步。的发展而不断进步。第4页，讲稿共63张，创作于星期三组织制片技术的发展史组织制片

2、技术的发展史在在19世纪中期，随着生物、物理和化学等学科的飞速世纪中期，随着生物、物理和化学等学科的飞速发展，以及显微镜和切片机的逐步完善，组织学也建立起发展，以及显微镜和切片机的逐步完善，组织学也建立起一整套完整科学的组织制片技术。一整套完整科学的组织制片技术。第5页，讲稿共63张，创作于星期三组织制片技术的发展史组织制片技术的发展史特别是特别是20世纪世纪50年代以来，由于组织化学、免疫组年代以来，由于组织化学、免疫组织化学等新技术和新仪器的出现，使组织制片技术的应用织化学等新技术和新仪器的出现，使组织制片技术的应用领域进入了一个崭新的时期。领域进入了一个崭新的时期。第6页，讲稿共63张，

3、创作于星期三 利用组织制片技术的方法所制出的标本，显示了组利用组织制片技术的方法所制出的标本，显示了组织细胞的结构和形态、组织细胞之间的相互连接及组织细织细胞的结构和形态、组织细胞之间的相互连接及组织细胞中的某些化学成分的种类和含量。胞中的某些化学成分的种类和含量。组织制片是研究医学和生物学的一个组织制片是研究医学和生物学的一个最基本最基本的手段。的手段。组织制片的意义和目的组织制片的意义和目的第7页，讲稿共63张，创作于星期三组织制片技术的方法组织制片技术的方法 非组织切片法非组织切片法组织切片法组织切片法第8页，讲稿共63张，创作于星期三非组织切片法非组织切片法组织不经过切片制成观察标本的

4、方法。组织不经过切片制成观察标本的方法。非组织切片法的种类非组织切片法的种类涂片、压片、铺片、磨片、消化分离标本、活体涂片、压片、铺片、磨片、消化分离标本、活体标本、整装标本、血管注射标本。标本、整装标本、血管注射标本。第9页，讲稿共63张，创作于星期三涂片涂片将所采的血液、骨髓或者脱落细胞涂抹于载将所采的血液、骨髓或者脱落细胞涂抹于载玻片上经瑞氏、姬姆萨染色、常规玻片上经瑞氏、姬姆萨染色、常规HE染色。染色。第10页，讲稿共63张，创作于星期三压片压片 先将组织处理成小块物质，然后用化学药品先将组织处理成小块物质，然后用化学药品进行软化和染色，再用盖玻片压封于载玻片上。例如进行软化和染色，再

5、用盖玻片压封于载玻片上。例如运动终板和寄生虫标本等。运动终板和寄生虫标本等。第11页，讲稿共63张，创作于星期三铺片：将需要观察的薄片组织用手工的方法直接铺于铺片：将需要观察的薄片组织用手工的方法直接铺于载玻片上，然后经过固定、染色等程序制成。例如蛙载玻片上，然后经过固定、染色等程序制成。例如蛙的肠系膜铺片，大白鼠的皮下组织铺片等。的肠系膜铺片，大白鼠的皮下组织铺片等。第12页，讲稿共63张，创作于星期三磨片：对于骨，牙齿等组织，不经脱钙和切片，直接在磨片：对于骨，牙齿等组织，不经脱钙和切片，直接在磨石上用手工磨成大约磨石上用手工磨成大约50微米左右的薄片，然后再进微米左右的薄片，然后再进行染

6、色封固在载玻片上。行染色封固在载玻片上。第13页，讲稿共63张，创作于星期三消化分离标本：先将组织分离成小块，然后利用相消化分离标本：先将组织分离成小块，然后利用相应的化学物质将细胞间质消化溶解，再用机械分离应的化学物质将细胞间质消化溶解，再用机械分离的方法，如水的震荡冲击力，使小块组织分离成单的方法，如水的震荡冲击力，使小块组织分离成单个而又完整的细胞，经染色后涂于载玻片上进行封个而又完整的细胞，经染色后涂于载玻片上进行封固。例如平滑肌分离标本，脊髓的运动神经细胞等。固。例如平滑肌分离标本，脊髓的运动神经细胞等。第14页，讲稿共63张，创作于星期三 活体标本活体标本 将所采的观察标本加生理盐

7、水后直接滴于将所采的观察标本加生理盐水后直接滴于载玻片上在显微镜下观察：微生物运动载玻片上在显微镜下观察：微生物运动第15页，讲稿共63张，创作于星期三整装标本整装标本 将胚胎或小动物经前期固定后整体封藏于将胚胎或小动物经前期固定后整体封藏于盛满固定剂的透明容器中盛满固定剂的透明容器中。将发育至某一阶段的鸡胚整将发育至某一阶段的鸡胚整体取出，经固定、染色、脱水、透明后封固于载玻片上的标体取出，经固定、染色、脱水、透明后封固于载玻片上的标本。本。第16页，讲稿共63张，创作于星期三血管注射标本血管注射标本 将有色物质注射进血管，用酸或将有色物质注射进血管，用酸或硷将血管周围的组织腐蚀后做成的整体

8、封藏的血管标硷将血管周围的组织腐蚀后做成的整体封藏的血管标本。本。将有色物质注射进血管后，经一系列制片技术将有色物质注射进血管后，经一系列制片技术处理后封固于载玻片上供显微镜下观察的标本。处理后封固于载玻片上供显微镜下观察的标本。第17页，讲稿共63张，创作于星期三组织切片法组织切片法利用化学试剂将组织经过一系列的固定、脱水、利用化学试剂将组织经过一系列的固定、脱水、透明后，再利用石蜡、火棉胶或者明胶等支持物渗透透明后，再利用石蜡、火棉胶或者明胶等支持物渗透进组织内部，使组织保持一定的硬度，并包埋成块，进组织内部，使组织保持一定的硬度，并包埋成块，然后依靠切片机将包埋好的组织块切成以微米计的薄

9、然后依靠切片机将包埋好的组织块切成以微米计的薄片，再根据需要进行各种染色得到的供显微镜下观察片，再根据需要进行各种染色得到的供显微镜下观察的标本的方法。的标本的方法。第18页，讲稿共63张，创作于星期三组织切片法的种类组织切片法的种类 冰冻切片冰冻切片 石蜡切片、火棉胶切片、明胶切片石蜡切片、火棉胶切片、明胶切片第19页，讲稿共63张，创作于星期三 冰冻切片冰冻切片 将所取材的新鲜组织，经快速将所取材的新鲜组织，经快速冷冻后再切片，以保持组织内冷冻后再切片，以保持组织内所含的脂类或某些酶类的活性。所含的脂类或某些酶类的活性。为观察急待结果的组织，为观察急待结果的组织，如临床手术所取组织如临床手

10、术所取组织第20页，讲稿共63张，创作于星期三石蜡组织切片标本制作的基本程序石蜡组织切片标本制作的基本程序:1.取材取材 2.固定和固定后处理固定和固定后处理 3.脱水脱水 4.透明透明 5.浸蜡与浸蜡与包埋包埋 6.切片切片 7.染色染色 8.封固封固第21页，讲稿共63张，创作于星期三取取材材一、动物的处死一、动物的处死手法迅速、快捷。手法迅速、快捷。常用方法：常用方法：1.麻醉法：吸入麻醉（乙醚）和注射麻醉（乌拉坦或者戊巴比妥）。麻醉法：吸入麻醉（乙醚）和注射麻醉（乌拉坦或者戊巴比妥）。2.空气栓塞法空气栓塞法：耳静脉，：耳静脉，2030ml空气空气3.击头法：重物猛击，迅速致死。击头法

11、：重物猛击，迅速致死。4.颈椎脱臼法：颈椎脱臼法：小白鼠小白鼠5.破坏脑和脊髓：金属探针，蛙破坏脑和脊髓：金属探针，蛙6.股动脉放血：麻醉后放血使大动物迅速死亡。股动脉放血：麻醉后放血使大动物迅速死亡。第22页，讲稿共63张，创作于星期三二、取材的步骤二、取材的步骤1.选择动物选择动物2.选择取材部位选择取材部位3.选择切面方向选择切面方向第23页，讲稿共63张，创作于星期三应根据实验工作的目的和经济能力选择实验动物应根据实验工作的目的和经济能力选择实验动物肝脏肝脏猪肝猪肝卵巢卵巢猫猫胃胃狗狗运动终板运动终板爬虫类动物爬虫类动物肥大细胞肥大细胞大、小白鼠的皮下组织大、小白鼠的皮下组织间皮和内皮

12、间皮和内皮蛙的肠系膜蛙的肠系膜第24页，讲稿共63张，创作于星期三根据器官组织的结构特点选择取材部位根据器官组织的结构特点选择取材部位胰腺胰腺胰尾部胰尾部脊髓的运动神经元脊髓的运动神经元颈膨大和腰膨大处颈膨大和腰膨大处肺肺肺门肺门胃胃胃底部胃底部第25页，讲稿共63张，创作于星期三根据器官组织的结构特点选择取材时切面的方向根据器官组织的结构特点选择取材时切面的方向肾脏肾脏肾门处作纵切肾门处作纵切头皮头皮顺毛根的方向纵切顺毛根的方向纵切大小肠的环行皱襞大小肠的环行皱襞纵切纵切气管和食管气管和食管横切横切第26页，讲稿共63张，创作于星期三三、取材时应注意的问题三、取材时应注意的问题：组织新鲜：取

13、材动作快捷，迅速投入固定液组织新鲜：取材动作快捷，迅速投入固定液注意环境温度的影响：冰上取材或者冷固定注意环境温度的影响：冰上取材或者冷固定材料应小而薄：材料应小而薄：不超过不超过1.51.50.5cm3固定液会造成组织收缩，注意保持组织原有形态固定液会造成组织收缩，注意保持组织原有形态取材手术器械锋利规范操作，防止组织损害取材手术器械锋利规范操作，防止组织损害注意取材环境和器械干净，防止组织污染注意取材环境和器械干净，防止组织污染第27页，讲稿共63张，创作于星期三固定和固定后处理固定和固定后处理一、固定的目的一、固定的目的：固固定定剂剂使使细细胞胞的的成成分分凝凝固固，防防止止组组织织细细

14、胞胞自自溶溶和腐败，保持细胞生活时的状态。和腐败，保持细胞生活时的状态。固定剂的酶染作用使细胞各成分易于被染料着色。固定剂的酶染作用使细胞各成分易于被染料着色。使组织适度硬化，利于制作薄片。使组织适度硬化，利于制作薄片。第28页，讲稿共63张，创作于星期三二、固定的方法：二、固定的方法：1.直接固定：最常用。直接固定：最常用。2.蒸蒸汽汽固固定定：12锇锇酸酸或或者者甲甲醛醛挥挥发发的的蒸蒸汽汽，多用于涂片固定。多用于涂片固定。3.灌注固定：（必须进行后固定灌注固定：（必须进行后固定）局部灌注固定：肺、肾脏、眼球、肝脏局部灌注固定：肺、肾脏、眼球、肝脏全身灌注固定：神经系统全身灌注固定：神经系

15、统第29页，讲稿共63张，创作于星期三三、固定的注意事项：三、固定的注意事项：1.固定剂的用量固定剂的用量1.一般为组织块体积的一般为组织块体积的15倍左右倍左右2.固定剂的配制固定剂的配制现配现用现配现用3.预固定预固定4.固定的时间固定的时间一般过夜或者一般过夜或者24小时可达到固定要求。小时可达到固定要求。第30页，讲稿共63张，创作于星期三四、常用固定剂四、常用固定剂单纯固定剂单纯固定剂甲醛、乙醇、甲醛、乙醇、冰乙酸、升汞、苦味酸、冰乙酸、升汞、苦味酸、重铬酸钾、重铬酸钾、丙酮、丙酮、铬酸、四氧化锇铬酸、四氧化锇固定组织时，只单用某一种试剂尚难对各种组织固定组织时，只单用某一种试剂尚难

16、对各种组织成分有较理想的固定作用。因此，常加入其它试剂，成分有较理想的固定作用。因此，常加入其它试剂，根据对组织的作用与反应，配成混合固定剂，以求得根据对组织的作用与反应，配成混合固定剂，以求得补偿某试剂对组织所致的缺陷。补偿某试剂对组织所致的缺陷。混合固定剂混合固定剂4%多聚甲醛液、乙醇多聚甲醛液、乙醇甲醛液、甲醛液、Bouin氏液、氏液、苦味酸苦味酸硫酸液硫酸液、Carnoy氏液氏液、Helly氏液氏液第31页，讲稿共63张，创作于星期三甲醛甲醛(Formeldedhyde)固定浓度：固定浓度：4%甲醛溶液甲醛溶液固定时间：固定时间：12小时小时24小时小时固定后处理：固定后处理：流水冲洗

17、流水冲洗12小时小时24小时小时配制方法：配制方法：甲醛甲醛10ml+生理盐水生理盐水/蒸溜水蒸溜水90ml特性：特性：甲醛放置时间过长易产生白色沉淀甲醛放置时间过长易产生白色沉淀“三聚甲醛三聚甲醛”，氧化后变为甲酸，使溶液变为酸性，严重时可影响到，氧化后变为甲酸，使溶液变为酸性，严重时可影响到细胞着色。细胞着色。第32页，讲稿共63张，创作于星期三乙醇乙醇(Ethylalcohol)固定浓度：固定浓度：80%-90%乙醇液乙醇液固定时间：固定时间：一般一般4小时小时12小时小时固定后处理：固定后处理：直接入脱水剂直接入脱水剂配制方法：配制方法：无水乙醇无水乙醇+蒸馏水蒸馏水特性：特性：乙醇具

18、有固定、脱水等多种功能。组织在高浓度乙醇具有固定、脱水等多种功能。组织在高浓度乙醇中放置时间过长时，易发脆。乙醇中放置时间过长时，易发脆。50%以上浓度的乙醇可溶解组织内脂肪、类脂体、色素以上浓度的乙醇可溶解组织内脂肪、类脂体、色素等，注意制片的目的。等，注意制片的目的。第33页，讲稿共63张，创作于星期三4%多聚甲醛液多聚甲醛液配制方法：配制方法：多聚多聚甲醛甲醛4g0.1MPBS溶液溶液100ml固定时间：固定时间：24小时小时固定温度固定温度4固定后处理：固定后处理：流水冲洗流水冲洗24小时小时适用组织：适用组织：常用固定剂，适用广泛常用固定剂，适用广泛第34页，讲稿共63张，创作于星期

19、三乙醇乙醇甲醛液（甲醛液（AF液）液）配制方法：配制方法：95%乙醇乙醇90ml40%甲醛甲醛10ml固定时间：组织块固定固定时间：组织块固定412小时，小时，铺片固定铺片固定510分钟。分钟。固定后处理：直接入脱水剂。固定后处理：直接入脱水剂。适用组织：肥大细胞，糖原的固定适用组织：肥大细胞，糖原的固定。第35页，讲稿共63张，创作于星期三Bouin氏液氏液配制方法：饱和苦味酸溶液配制方法：饱和苦味酸溶液75ml40%甲醛甲醛25ml冰乙酸冰乙酸5ml固定时间：固定时间：1224h固定后处理：固定后处理：70%乙醇脱去苦味酸产生的黄色乙醇脱去苦味酸产生的黄色适用组织：常备固定液，特别适用于固

20、定皮肤和胚胎适用组织：常备固定液，特别适用于固定皮肤和胚胎组织。组织。第36页，讲稿共63张，创作于星期三五、固定后处理五、固定后处理 除去组织中渗入的固定液和一些由固定液产生的沉淀、结晶除去组织中渗入的固定液和一些由固定液产生的沉淀、结晶和色素的步骤称为固定后处理。和色素的步骤称为固定后处理。主要有以下六种方法：主要有以下六种方法：1.流水冲洗流水冲洗：重铬酸钾、甲醛固定的组织，要经过流水冲洗：重铬酸钾、甲醛固定的组织，要经过流水冲洗24h。2.酒精脱黄酒精脱黄:含有苦味酸的固定液固定的组织，必须经过含有苦味酸的固定液固定的组织，必须经过70乙乙醇洗涤脱去黄色。醇洗涤脱去黄色。第37页，讲稿

21、共63张，创作于星期三3.碘酒脱汞碘酒脱汞：氯化汞固定的组织有汞结晶，碘酒浸泡：氯化汞固定的组织有汞结晶，碘酒浸泡除去。除去。4.脱甲醛色素脱甲醛色素：甲醛长期固定的组织易产生黑色结晶，：甲醛长期固定的组织易产生黑色结晶，70乙醇浓氨水溶液除去。乙醇浓氨水溶液除去。5.组织漂白组织漂白：锇酸固定的组织为黑色。漂白液漂白才上：锇酸固定的组织为黑色。漂白液漂白才上色。色。6.脱钙：含钙组织骨、牙齿和内耳。脱钙：含钙组织骨、牙齿和内耳。第38页，讲稿共63张，创作于星期三脱脱水水一、一、脱水脱水用用某某种种能能与与透透明明剂剂互互溶溶的的化化学学试试剂剂将将组组织织内内的的水分逐渐置换出来的过程。水

22、分逐渐置换出来的过程。要点：缓慢、彻底、勿过度。要点：缓慢、彻底、勿过度。二、常用二、常用脱水剂脱水剂乙醇乙醇、丙酮、正丁醇丙酮、正丁醇第39页，讲稿共63张，创作于星期三乙醇乙醇固固定剂定剂+脱水剂脱水剂上行酒精脱水上行酒精脱水70%（30%）100%，以，以10递增。递增。丙酮丙酮脱水强，但对组织的收缩脆化作用也强；脱水强，但对组织的收缩脆化作用也强；主主要要用用于于组组织织的的固固定定兼兼脱脱水水或或切切片片的的快快速速脱脱水水，以以保保护护某某些特殊染色的标本不被褪色。些特殊染色的标本不被褪色。第40页，讲稿共63张，创作于星期三透透明明一、透明一、透明对组织的最后脱水处理。对组织的最

23、后脱水处理。在在经经过过前前一一阶阶段段的的“脱脱水水”后后，还还要要借借某某种种有有机机溶溶媒媒将将酒酒精精完完全全置置换换，使使组组织织与与所所用用的的包包埋埋介介质质相相溶溶而而浸浸渗。渗。二、常用透明剂二、常用透明剂二甲苯二甲苯、苯甲酸甲脂苯甲酸甲脂、三氯甲烷、三氯甲烷、冬青油、冬青油第41页，讲稿共63张，创作于星期三二甲苯二甲苯为为无无色色透透明明的的液液体体，易易挥挥发发，长长期期接接触触对对呼呼吸吸道道粘粘膜膜有有较较强的刺激作用强的刺激作用20分钟分钟1个小时，大块组织可适当延长时间。个小时，大块组织可适当延长时间。作用迅速，浸泡时间过长易发生过度收缩和脆化作用迅速，浸泡时间

24、过长易发生过度收缩和脆化苯甲酸甲脂苯甲酸甲脂为无色透明的液体，易挥发为无色透明的液体，易挥发透明作用较二甲苯缓慢，透明时间透明作用较二甲苯缓慢，透明时间12-24小时。小时。对组织块的收缩和脆化的影响较小。对组织块的收缩和脆化的影响较小。苯甲酸甲脂与火棉胶互溶，用于火棉胶切片的透明苯甲酸甲脂与火棉胶互溶，用于火棉胶切片的透明第42页，讲稿共63张，创作于星期三用石蜡做为支撑剂将组织包埋成块使其硬化的过程用石蜡做为支撑剂将组织包埋成块使其硬化的过程包括浸蜡和包埋两步包括浸蜡和包埋两步一、浸蜡一、浸蜡组织透明后，用石蜡置换组织内部的透明剂的过程称组织透明后，用石蜡置换组织内部的透明剂的过程称为为浸

25、蜡浸蜡。组织块浸蜡一般先经过低熔点蜡，再经过高熔点组织块浸蜡一般先经过低熔点蜡，再经过高熔点蜡。蜡。包包埋埋 第43页，讲稿共63张，创作于星期三高溶点蜡也称高溶点蜡也称硬蜡硬蜡溶点在溶点在60-62硬蜡箱的温度控制在硬蜡箱的温度控制在62-64之间之间组织浸蜡时间一般不超过组织浸蜡时间一般不超过1小时小时 低溶点蜡也称低溶点蜡也称软蜡软蜡溶点在溶点在48-50软蜡箱的温度控制在软蜡箱的温度控制在5254之间之间组织浸蜡时间一般可达组织浸蜡时间一般可达24小时小时第44页，讲稿共63张，创作于星期三二、包埋二、包埋组组织织浸浸蜡蜡完完成成后后，接接着着进进行行组组织织块块包包埋埋。用用于于包埋

26、的是硬蜡。包埋在包埋器中完成。包埋的是硬蜡。包埋在包埋器中完成。修修整整蜡蜡块块时时，组组织织块块应应距距蜡蜡块块边边缘缘23毫毫米米，以利于连续切片。以利于连续切片。第45页，讲稿共63张，创作于星期三切切片片 石蜡切片石蜡切片组组织织切切片片中中应应用用最最为为广广泛泛的的一一种种切切片片就就是是用用石石蜡蜡作作为为包包埋埋剂剂制制作作的的切切片片。易易于于制制作作大大量量菲菲薄薄的的组组织织标标本本，而且包埋块可长期保存。而且包埋块可长期保存。第46页，讲稿共63张，创作于星期三一、仪器及器材一、仪器及器材第47页，讲稿共63张，创作于星期三二、切片过程：二、切片过程：调节恒温水箱水温至

27、调节恒温水箱水温至47左右；左右；固定蜡块于固定器；固定蜡块于固定器；快修装置修整包埋面；快修装置修整包埋面；调节切片厚度至调节切片厚度至46微米；微米；连续切片；连续切片；摊片于水箱内；摊片于水箱内；将蜡片贴于涂好粘片剂的载玻片上；将蜡片贴于涂好粘片剂的载玻片上；置于温箱内烤片。置于温箱内烤片。第48页，讲稿共63张，创作于星期三三、切片的注意事项三、切片的注意事项切切片片前前要要将将切切片片机机各各部部位位的的螺螺丝丝旋旋紧紧，否否则则会会引引起起切片机各部件震动，造成切片厚薄不匀。切片机各部件震动，造成切片厚薄不匀。包包埋埋块块的的切切面面和和切切片片刀刀的的倾倾斜斜度度之之间间的的夹夹

28、角角应应按按切片机刀台上的刻度作适当调整。切片机刀台上的刻度作适当调整。恒温水箱的温度应比包埋蜡的溶点低恒温水箱的温度应比包埋蜡的溶点低5-6。第49页，讲稿共63张，创作于星期三染染色色 一、一、染料染料指指分分子子中中含含有有发发色色团团和和助助色色团团的的有有机机化化合合物物，有有鲜鲜艳艳的的色色彩，对于组织有极强的亲和力。彩，对于组织有极强的亲和力。根据根据来源来源可分为两类：可分为两类：天然染料（卡红、苏木精）天然染料（卡红、苏木精）人工合成染料（苦味酸、桔黄人工合成染料（苦味酸、桔黄G）根据其根据其化学性质化学性质分为：分为：碱性染料碱性染料(basicdye)酸性染料酸性染料(a

29、ciddye)中性中性(neutrophilia)染料等染料等第50页，讲稿共63张，创作于星期三二、染色的原理二、染色的原理 染色染色就是染料和组织细胞的分子相互结合，使组织和细胞着色。就是染料和组织细胞的分子相互结合，使组织和细胞着色。化化学学反反应应在在组组织织细细胞胞内内含含有有酸酸性性物物质质和和碱碱性性物物质质。染染色色时时酸酸性性物物质质与与碱碱性性染染料料结结合合；碱碱性性物物质质与与酸酸性性染染料料结结合合。细细胞胞核核中中主主要要由由酸酸性性物物质质组组成成（如如核核酸酸等等），所所以以与与苏苏木木精精等等碱碱性性染染料料有有很很强强的的亲亲和和力力。细细胞胞质质主主要要由

30、由碱碱性性物物质质组组成成，所所以与伊红等酸性染料有很强的亲和力。以与伊红等酸性染料有很强的亲和力。能被碱性染料着色的物质：嗜碱性能被碱性染料着色的物质：嗜碱性(basophilia)；能被酸性染料着色的物质：嗜酸性能被酸性染料着色的物质：嗜酸性(acidophilia)。第51页，讲稿共63张，创作于星期三物物理理反反应应 细细胞胞中中有有许许多多微微小小的的毛毛细细小小孔孔，染染料料的的色色素素离离子子通通过过这这些些小小孔孔渗渗入入细细胞胞内内，染染料料与与细细胞胞没没有有牢牢固固的的结结合合，但但分分散散的的色色素素离离子子和和组组织织细细胞胞分分子子之之间间通通过过分子间相互作用使细

31、胞着色。分子间相互作用使细胞着色。第52页，讲稿共63张，创作于星期三三、染色的注意事项：三、染色的注意事项：1.溶媒：水和乙醇。溶媒：水和乙醇。2.浓度：低浓度，长时间。浓度：低浓度，长时间。3.温度：高，染色效果明显。温度：高，染色效果明显。4.适当使用媒染剂、促染剂和分化剂。适当使用媒染剂、促染剂和分化剂。媒媒染染剂剂：能能增增强强染染料料对对组组织织的的着着色色能能力力，其其本本身身与与染染料料或或组组织织不不发发生生结结合的试剂。如配制各种苏木精染色液时添加的钾明矾、铵明矾等。合的试剂。如配制各种苏木精染色液时添加的钾明矾、铵明矾等。促促染染剂剂：能能增增强强染染料料对对组组织织的的

32、着着色色能能力力，本本身身并并不不参参与与染染色色反反应应。如如伊伊红红染色液中添加的冰乙酸等。染色液中添加的冰乙酸等。分分化化剂剂：能能除除去去组组织织上上和和切切片片上上过过染染的的染染色色液液，使使染染色色部部位位与与周周围围组组织织对对比比鲜鲜明明，着着色色深深浅浅适适当当；例例如如低低浓浓度度的的盐盐酸酸、醋醋酸酸、高高锰锰酸酸钾钾、重重铬铬酸钾等。酸钾等。第53页，讲稿共63张，创作于星期三封封固固一、封固一、封固最最后后一一道道程程序序是是滴滴加加封封固固剂剂，用用盖盖玻玻片片覆覆盖盖，以利于镜下观察。以利于镜下观察。阻阻断断组组织织片片与与外外界界的的接接触触，防防止止组组织织

33、片片脱脱片片、受潮、干裂、机械磨损等，延长切片的使用时间。受潮、干裂、机械磨损等，延长切片的使用时间。这一步骤称为封固。这一步骤称为封固。封固分为封固分为干封干封和和湿封湿封两种。两种。第54页，讲稿共63张，创作于星期三干封干封：切片染色经脱水和透明后，用中性树胶之类无：切片染色经脱水和透明后，用中性树胶之类无水封固剂封固。数年不褪色。水封固剂封固。数年不褪色。湿封湿封：切片染色后直接用含甘油、明胶及少量的水：切片染色后直接用含甘油、明胶及少量的水和防腐剂组成的封固剂封固。湿封的标本保存时和防腐剂组成的封固剂封固。湿封的标本保存时间不长，主要用于某些组织化学或特殊染色的标间不长，主要用于某些

34、组织化学或特殊染色的标本。本。第55页，讲稿共63张，创作于星期三二、封固时的注意事项：二、封固时的注意事项：封固时避免产生气泡。封固时避免产生气泡。封固剂应浓度适中。封固剂应浓度适中。选选择择大大小小合合适适的的盖盖玻玻片片，以以盖盖好好组组织织后后四四周周约约有有2毫米左右的间隙为适当。毫米左右的间隙为适当。封固剂应避光保存封固剂应避光保存。第56页，讲稿共63张，创作于星期三组织脱水、透明步骤组织脱水、透明步骤脱水：脱水：70%70%乙醇乙醇 3080%3080%乙醇乙醇3095%3095%乙醇乙醇20 20 95%95%乙醇乙醇20 100%20 100%乙醇乙醇20 100%20 1

35、00%乙醇乙醇2020透明：透明：苯甲酸甲酯苯甲酸甲酯 过夜过夜 第57页，讲稿共63张，创作于星期三苏木精苏木精(hematoxylin)-伊红伊红(eosin)（H-E染色）染色）一、脱蜡与入水一、脱蜡与入水1二甲苯二甲苯510分钟分钟2次；次；2无水乙醇无水乙醇5分钟分钟2次；次；395%乙醇乙醇5分钟；分钟；480%乙醇乙醇5分钟；分钟；570%乙醇乙醇5分钟；分钟；6自来水洗自来水洗5分钟；分钟；7蒸馏水洗蒸馏水洗5分钟。分钟。第58页，讲稿共63张，创作于星期三二、染色、分色与返蓝二、染色、分色与返蓝1苏木精苏木精5分钟；分钟；2自来水洗自来水洗1分钟；分钟；31%盐酸酒精盐酸酒精

36、分色数秒；分色数秒；4自自来来水水洗洗数数分分钟钟（此此时时可可镜镜下下检检查查，细细胞胞核核着蓝色，其它组织基本无色着蓝色，其它组织基本无色）；）；5饱和碳酸锂返蓝饱和碳酸锂返蓝1分钟；分钟；6自来水洗自来水洗2分钟；分钟；7.伊红伊红1分钟。分钟。第59页，讲稿共63张，创作于星期三180%乙醇乙醇2分钟；分钟；295%乙醇乙醇2分钟分钟2次；次；3无水乙醇无水乙醇2分钟分钟2次；次；4.二甲苯二甲苯5分钟分钟2次；次；5中性树胶封固。中性树胶封固。三、脱水、透明与封固三、脱水、透明与封固第60页，讲稿共63张，创作于星期三结果结果 细胞核蓝色，细胞质红色细胞核蓝色，细胞质红色第61页，讲稿共63张，创作于星期三伊红伊红-醛复红醛复红染色（染色（弹性纤维、胶原纤维弹性纤维、胶原纤维）1)1)组织铺片用组织铺片用95%95%乙醇固定乙醇固定5-105-10分钟分钟;2)2)醛复红溶液染色醛复红溶液染色4545分钟分钟(镜检）镜检）;3)95%3)95%酒精稍洗酒精稍洗;4)4)伊红伊红3030秒秒;5)5)无水酒精稍洗无水酒精稍洗;6)6)滤纸吸干滤纸吸干;7)7)二甲苯二甲苯2 2分钟分钟.8)8)二甲苯二甲苯2 2分钟分钟.9)9)中性树胶封片中性树胶封片.第62页，讲稿共63张，创作于星期三感感谢谢大大家家观观看看第63页，讲稿共63张，创作于星期三