高中生物选修一微生物的实验室培养 (2)课件.ppt
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1、关于高中生物选修一微生物的实验室培养(2)第1页,此课件共78页哦专题专题2:2:微生物的培养与应用微生物的培养与应用第2页,此课件共78页哦第3页,此课件共78页哦一、基础知识:一、基础知识:(一)培养基(一)培养基 人们按照微生物对营养物质的不同需求,人们按照微生物对营养物质的不同需求,配制出供其生长繁殖的营养基质配制出供其生长繁殖的营养基质。(1 1)按物理状态分:)按物理状态分:固体培养基、液体培养基固体培养基、液体培养基和和半固体培养基半固体培养基。(2 2)按功能分:)按功能分:选择培养基选择培养基和和鉴别培养基鉴别培养基。(3 3)按成分分:)按成分分:天然培养基天然培养基和和合
2、成培养基合成培养基。1.1.培养基的类型和用途培养基的类型和用途第4页,此课件共78页哦固体培养基固体培养基:(在培养液中加了琼脂,一种凝固剂,在在培养液中加了琼脂,一种凝固剂,在44度以下都呈凝固状度以下都呈凝固状 )用于菌种保存及分离、鉴定菌落、活菌计数等用于菌种保存及分离、鉴定菌落、活菌计数等第5页,此课件共78页哦液体培养基:液体培养基:表面生长表面生长均匀混浊生长均匀混浊生长沉淀生长沉淀生长常用于发酵工业。常用于发酵工业。第6页,此课件共78页哦选择培养基选择培养基:在培养基中加在培养基中加入某种化学物质,以抑制入某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,不需要的微生物的生长,促进所
3、需要的微生物的生促进所需要的微生物的生长。长。加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基加入高浓度食盐的培养基:分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基:分离固氮菌分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基:分离自养型微生物分离自养型微生物鉴别培养基鉴别培养基:根据微生物的代根据微生物的代谢特点,在培养基中加入某谢特点,在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而种指示剂或化学药品配制而成,用以鉴别不同种类的微成,用以鉴别不同种类的微生物。生物。例如,在培养基中加入例如,在培养基中
4、加入伊伊红红和和美蓝美蓝,可以用来鉴别饮用,可以用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌:如果有大肠杆菌,菌等细菌:如果有大肠杆菌,其代谢产物就与伊红和美蓝其代谢产物就与伊红和美蓝结合,使菌落呈深紫色,并结合,使菌落呈深紫色,并带有金属光泽。带有金属光泽。第7页,此课件共78页哦天然培养基有血清、血浆、和天然培养基有血清、血浆、和组织提取液(如鸡胚和牛胚浸组织提取液(如鸡胚和牛胚浸液)。液)。优点:优点:营养成分丰富,培养营养成分丰富,培养效果好效果好缺点:缺点:来源受限来源受限;成分复杂,成分复杂,影响对某些实验产物的提影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析
5、取和实验结果的分析;易发易发生支原体污染生支原体污染;根据细胞生存所需物质的种类根据细胞生存所需物质的种类和数量,用人工方法模拟合成的。和数量,用人工方法模拟合成的。合成培养基主要成分是氨基合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。机盐和其它一些辅助物质。优点:优点:标准化生产,组分和标准化生产,组分和含量相对固定含量相对固定;成本低成本低 缺点:缺点:缺少某些成分,不缺少某些成分,不能完全满足体外细胞生长需要。能完全满足体外细胞生长需要。合成培养基合成培养基:天然培养基:天然培养基:第8页,此课件共78页哦3.3.不管哪种培养基,一般
6、都含有不管哪种培养基,一般都含有水水、碳源碳源、和、和氮源氮源、无机盐无机盐、等等营养物质,营养物质,另外还需要满足微生物生长的特殊要求:另外还需要满足微生物生长的特殊要求:1 1)特殊营养物质)特殊营养物质 如如:维生素、氨基酸、碱基等维生素、氨基酸、碱基等 如培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加如培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素。维生素。第9页,此课件共78页哦营养物质营养物质 定义定义作用作用主要来源主要来源碳源碳源凡能提凡能提供所需供所需碳元素碳元素的物质的物质构成生物构成生物体的细胞体的细胞物质和一物质和一些代谢产些代谢产物,有些物,有些是异养生是异养生物的能源物的能源物质物质无机
7、无机C源:源:CO2、碳酸、碳酸盐,只能被自养微生物盐,只能被自养微生物利用利用有机有机C源:各种糖类,源:各种糖类,其次是有机酸、醇类、其次是有机酸、醇类、脂类和烃类化合物脂类和烃类化合物 第10页,此课件共78页哦营养物质定义作用主要来源氮源凡能提供所需氮元素的物质合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物无机化合物:N2、NH3、铵盐、硝酸盐有机化合物:尿素、牛肉膏、蛋白胨等生长因子生长必不可少的微量有机物酶和核酸的组成成分维生素、氨基酸、碱基等第11页,此课件共78页哦第12页,此课件共78页哦2)pH 细菌细菌pH为:为:6.5-7.5;放线菌放线菌pH为:为:7.5-8.5;真菌真菌pH为
8、:为:5.0-6.0。3)氧气)氧气 培养厌氧微生物时则需要提供培养厌氧微生物时则需要提供无氧无氧条件条件另外还需要满足微生物生长的特殊要求:另外还需要满足微生物生长的特殊要求:第13页,此课件共78页哦二、无菌技术二、无菌技术1.1.无菌技术的概念无菌技术的概念 无菌操作泛指无菌操作泛指在培养微生物的操作中,所在培养微生物的操作中,所有防止杂菌污染的方法。有防止杂菌污染的方法。无论是随后将要学到无论是随后将要学到的的倒平板倒平板、平板划线平板划线操作,还是操作,还是稀释涂布平板法稀释涂布平板法,其操作中的每一步都需要做到其操作中的每一步都需要做到“无菌无菌”,即,即防止杂菌污染。只有熟练、规
9、范地进行无菌防止杂菌污染。只有熟练、规范地进行无菌操作,才可能成功地培养微生物。操作,才可能成功地培养微生物。第14页,此课件共78页哦 有些细菌在一定的条件下,细胞里面形成一个椭圆形的有些细菌在一定的条件下,细胞里面形成一个椭圆形的休眠体休眠体,叫做,叫做芽孢芽孢。芽孢的壁很厚,对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的。芽孢的壁很厚,对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如,有的细菌的芽孢,煮沸抵抗力。例如,有的细菌的芽孢,煮沸3 3小时以后才死亡。芽孢又小小时以后才死亡。芽孢又小又轻,可以随风飘散。当环境适宜(如温度、水分适宜)的时候,芽又轻,可以随风飘散。当环境适宜(如温度、水分
10、适宜)的时候,芽孢又可以萌发,形成一个细菌孢又可以萌发,形成一个细菌.第15页,此课件共78页哦孢子在生物体的一定部位产生一种特殊的生殖生殖细胞细胞叫孢子。孢子的特点是能直接长成新个体。第16页,此课件共78页哦比比较较项项理化因素的理化因素的作用强度作用强度消灭微生物消灭微生物的数量的数量芽孢和孢子芽孢和孢子能否被消灭能否被消灭消消毒毒较为温和较为温和部分生活状部分生活状态的微生物态的微生物不能不能灭灭菌菌强烈强烈全部微生物全部微生物能能消毒与灭菌的比较消毒与灭菌的比较第17页,此课件共78页哦1 1、煮沸消毒法煮沸消毒法:100100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2、巴氏消毒法巴氏消
11、毒法:70-75 70-75 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮15min15min3 3、化学药剂消毒法化学药剂消毒法:用用75%75%酒精、新洁尔酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源氯气消毒水源4 4、紫外线消毒紫外线消毒 照射前,适量喷洒照射前,适量喷洒石炭酸石炭酸或或煤酚皂煤酚皂溶液溶液等消毒液可以加强消毒效果。等消毒液可以加强消毒效果。(1)消毒的方法:消毒的方法:3.3.常用的消毒与灭菌的方法常用的消毒与灭菌的方法第18页,此课件共78页哦1 1、灼烧灭菌灼烧灭菌接种环、接种针、接种环、接种针、试管口试管口2 2、干热灭菌:干热灭菌:160
12、-160-170 170 下加热下加热1-2h1-2h。3 3、高压蒸气灭菌:高压蒸气灭菌:100kPa100kPa、121 121 下下维持维持15-30min.15-30min.(2)灭菌的方法:灭菌的方法:第19页,此课件共78页哦 最常用的灭菌方法是最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌,它可以杀灭,它可以杀灭所有所有的生物,包括最耐热的某些微生物的的生物,包括最耐热的某些微生物的休眠体休眠体,同,同时可以基本时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏保持培养基的营养成分不被破坏。有些玻璃器皿如吸管、培养皿和金属用具等也可采有些玻璃器皿如吸管、培养皿和金属用具等也可采用用 干热灭菌干热
13、灭菌。培养微生物的培养皿是由培养微生物的培养皿是由正反两平面板互扣而成正反两平面板互扣而成,这种器具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。这种器具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。第20页,此课件共78页哦1.1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外,还有什么目的?他外来微生物污染外,还有什么目的?2.2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要,请选择合适的方法。果需要,请选择合适的方法。(1 1)培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培养基与培养皿(2 2)玻棒、试管、烧瓶和
14、吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管(3 3)实验操作者的双手实验操作者的双手 答:无菌技术还能有效避免操作者自身被答:无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。微生物感染。答:(答:(1)、()、(2)需要灭菌;()需要灭菌;(3)需要消毒)需要消毒。第21页,此课件共78页哦微生物实验室培养的基本操作程序微生物实验室培养的基本操作程序1 1、器具的灭菌、器具的灭菌2 2、培养基的配制、培养基的配制3 3、培养基的灭菌、培养基的灭菌4 4、倒平板、倒平板5 5、微生物接种、微生物接种6 6、恒温箱中培养、恒温箱中培养7 7、菌种的保存、菌种的保存第22页,此课件共78页哦三、实验操作三、实验操作(一
15、一)制备牛肉膏蛋白胨培养基(用于培养细菌)制备牛肉膏蛋白胨培养基(用于培养细菌)第23页,此课件共78页哦1 1计算计算2 2称量称量3 3溶化溶化4 4灭菌灭菌5 5倒平板倒平板操作步骤操作步骤(阅读阅读P16-17)第24页,此课件共78页哦 1.1.培养基灭菌后,需要冷却到培养基灭菌后,需要冷却到50 50 左右时,才左右时,才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度?能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度?答:答:可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶,感觉锥可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶,感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时,就可以进行倒平板了。形瓶的温度下降到刚刚不烫手时,就可以进
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