氨基酸与蛋白质的一级结构精选PPT.ppt

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1、关于氨基酸与蛋白质的一级结构第1页，讲稿共69张，创作于星期二蛋白质种类与功能的多样性蛋白质种类与功能的多样性 1010-1012结构蛋白贮藏蛋白收缩蛋白转运蛋白第2页，讲稿共69张，创作于星期二第一节第一节 氨基酸氨基酸l180180多种天然多种天然AAAA，大多数是不参与蛋白质组，大多数是不参与蛋白质组成的。这些成的。这些AAAA被称为非蛋白质被称为非蛋白质AAAA。l参与蛋白质组成的参与蛋白质组成的AAAA为为蛋白质蛋白质AAAA，常见的常见的只有只有2020种种 基本氨基酸，标准氨基酸基本氨基酸，标准氨基酸l 表达方式：表达方式：三字母三字母或或单字母的简写符号单字母的简写符号第3页，

2、讲稿共69张，创作于星期二（一）（一）-氨基酸的结构通式l除脯氨酸外，其他除脯氨酸外，其他1919种均具有如下结构通式。种均具有如下结构通式。各种氨基酸的区别在于侧链各种氨基酸的区别在于侧链R R基基的不同。的不同。-氨基酸氨基酸可变部分可变部分不变部分不变部分一、基本氨基酸第4页，讲稿共69张，创作于星期二(二二)常见的标准常见的标准AAAA2020种种1,1,按按侧链侧链R R基的化学结构基的化学结构，分为三类，分为三类l脂肪族氨基酸脂肪族氨基酸15种种C2:1 C3:3 C4:3 C5:4 C6:4l芳香族氨基酸芳香族氨基酸3种种l杂环族氨基酸杂环族氨基酸2种种第5页，讲稿共69张，创作

3、于星期二脂肪族氨基酸脂肪族氨基酸第6页，讲稿共69张，创作于星期二芳香族氨基酸芳香族氨基酸3 3种种第7页，讲稿共69张，创作于星期二杂杂 环环 族族 氨氨 基基 酸酸第8页，讲稿共69张，创作于星期二GlyAlaValLeuIlePheTyrTrpCysMetSS氨基酸氨基酸的的R R基大小基大小第9页，讲稿共69张，创作于星期二2，根据酸碱性分类，根据酸碱性分类:酸性氨基酸酸性氨基酸:2 个个COOH、1个个-NH2 Asp，Glu 碱性氨基酸碱性氨基酸:1 个个COOH、2个碱性基团个碱性基团 （胍基、氨基、咪唑基）（胍基、氨基、咪唑基）（胍基、氨基、咪唑基）（胍基、氨基、咪唑基）Arg

4、，Lys，His 中性氨基酸中性氨基酸:1 个个COOH、1个个-NH2 第10页，讲稿共69张，创作于星期二3，按，按R基的极性性质基的极性性质l分为分为4 4类：类：l非极性氨基酸：非极性氨基酸：9 9l 极性不解离：极性不解离：6 6l极性氨基酸极性氨基酸 解离带负电荷：解离带负电荷：2 2酸性酸性l 极性解离极性解离l 解离带正电荷：解离带正电荷：3 3碱性碱性l第11页，讲稿共69张，创作于星期二POLARNON-POLARTyrHisGly酸性酸性中性中性BasicAspGluGlnCysAsnSerThrLysArgAlaValIleLeuMetPheTrpPro氨基酸的极性分类

5、氨基酸的极性分类极极性或非性或非极极性，是性，是影响影响蛋白蛋白质结构与性质的关键质结构与性质的关键第12页，讲稿共69张，创作于星期二-+SS有大有小有正有负有极性非极性 形形色色的氨基酸側基 第13页，讲稿共69张，创作于星期二特 殊 氨 基 酸l含硫氨基酸含硫氨基酸l含羟基氨基酸含羟基氨基酸l-C-C带分支氨基酸带分支氨基酸l二羧基一氨基氨基酸二羧基一氨基氨基酸l二氨基一羧基氨基酸二氨基一羧基氨基酸l亚氨基酸亚氨基酸第14页，讲稿共69张，创作于星期二三、氨基酸的构型和旋光性*除甘氨酸外，除甘氨酸外，皆含皆含手性手性C C，皆为，皆为L-L-构型（构型（蛋白中的蛋白中的氨基酸）；氨基酸）

6、；旋光方向不同。左或右旋。旋光仪测定。旋光方向不同。左或右旋。旋光仪测定。比旋光度比旋光度D D2525(单位浓度、单位长度下的旋光度，单位浓度、单位长度下的旋光度，/c*l)/c*l)是氨基酸的重要物理常数之一，是鉴别各种氨基酸的重是氨基酸的重要物理常数之一，是鉴别各种氨基酸的重要依据要依据 。第15页，讲稿共69张，创作于星期二四：特征光吸收四：特征光吸收l在近紫外区在近紫外区(200-400nm)(200-400nm)只只有酪氨酸、苯丙氨酸和色有酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸有吸收光的能力。氨酸有吸收光的能力。l酪氨酸酪氨酸的的 maxmax275nm275nm，l色氨酸色氨酸的的 maxma

7、x280nm280nml苯丙氨酸的苯丙氨酸的 maxmax257nm257nm第16页，讲稿共69张，创作于星期二五五 氨基酸的酸碱性质氨基酸的酸碱性质l一）氨基酸的兼性离子形式：一）氨基酸的兼性离子形式：氨基酸的两个重要性质：氨基酸晶体的氨基酸的两个重要性质：氨基酸晶体的熔点高（熔点高（200200 C C）；氨基酸使水的介电）；氨基酸使水的介电常数增高。常数增高。AA是两性电解质第17页，讲稿共69张，创作于星期二COOHNH2 H+COO-R-C-HNH2 H+R-C-HCOO-NH2R-C-H酸性环境酸性环境中性中性环境环境碱性环境碱性环境+1-10pK1 2pK2 9.4等电点等电点

8、6.0等等电点电点pIpI：所带净电荷为零。电场中不移动。：所带净电荷为零。电场中不移动。第18页，讲稿共69张，创作于星期二此此氨基酸氨基酸在在 pH pH 2 2 或或 9 9 附近，有附近，有缓冲缓冲作用作用。第19页，讲稿共69张，创作于星期二第20页，讲稿共69张，创作于星期二赖氨酸的解离及等电点计算赖氨酸的解离及等电点计算HA2+A+A0A-第21页，讲稿共69张，创作于星期二l等等电电点点(isoelectric(isoelectric point,pI)point,pI)：分分子子呈呈电电中中性性时时溶溶液液的的pHpH值值。为为兼兼性性离离子子两两侧侧解解离离基基团的算术平均

9、值。团的算术平均值。l中中性性氨氨基基酸酸：酸酸性性和和碱碱性性基基团团的的算算术术平平均均值值：p pI I=(p=(pK K-COO-COO-+p-+pK K-NH2-NH2)/2)/2，pIpI6 6l l酸酸性性氨氨基基酸酸：两两个个酸酸性性解解离离基基团团的的算算术术平平均均值值p pI I =(p(pK K-COO-COO-+p-+pK KR-COOR-COO-)/2)/2，pIpI2 2l碱碱性性氨氨基基酸酸：两两个个碱碱性性解解离离基基团团的的算算术术平平均均值值p pI I =(p(pK K-NH2-NH2+p+pK KR-NH2 R-NH2)/2)/2，pI7pI7 第22

10、页，讲稿共69张，创作于星期二不同不同pH值时所带电荷值时所带电荷l l pH=pI pH=pI 氨基酸呈电中性，电泳不移动氨基酸呈电中性，电泳不移动l l pHpI pHpI pHpI 氨基酸带负电荷氨基酸带负电荷，向阳极移动，向阳极移动 在在一一定定pHpH范范围围中中，溶溶液液的的pHpH离离AAAA等等电电点点愈愈远远，AAAA带净电荷愈多，泳动速度越快。带净电荷愈多，泳动速度越快。第23页，讲稿共69张，创作于星期二补充：化学性质补充：化学性质亚硝酸反应亚硝酸反应烃基化反应烃基化反应酰化反应酰化反应脱氨基反应脱氨基反应西佛碱反应西佛碱反应成盐成酯反应成盐成酯反应成酰氯反应成酰氯反应脱

11、羧基反应脱羧基反应叠氮反应叠氮反应侧链反应侧链反应茚三酮反应茚三酮反应成成 肽肽 反反 应应第24页，讲稿共69张，创作于星期二除除ProPro生成黄色化合物外生成黄色化合物外,其它其它AAAA生成生成蓝紫蓝紫色化合物（色化合物（570nm570nm）;与茚三酮反应（27）用途用途：常用于氨基酸的定性或定量分析。常用于氨基酸的定性或定量分析。茚三酮茚三酮水合茚三酮水合茚三酮第25页，讲稿共69张，创作于星期二补充：含氮量稳定补充：含氮量稳定l氨基酸的结构通式为氨基酸的结构通式为氨基酸。蛋白质氨基酸。蛋白质除含除含C,H,OC,H,O外，还含有外，还含有N N。AAAA平均分子量平均分子量为为1

12、10110。l不同蛋白的含氮量皆在不同蛋白的含氮量皆在16%16%左右。只需测左右。只需测定定N N含量，含量，N N含量含量/16%/16%即为蛋白含量。即为蛋白含量。l l -凯氏定氮法的理论基础凯氏定氮法的理论基础第26页，讲稿共69张，创作于星期二第二节、氨基酸的分离分析第二节、氨基酸的分离分析l根据根据R R基的极性。原理：分配层析。基的极性。原理：分配层析。l 滤纸层析滤纸层析：l 薄层层析薄层层析：l根据氨基酸的净电荷及根据氨基酸的净电荷及R R基的极性：基的极性：l 离子交换层析离子交换层析：l阴离子交换树脂-N(CH3)3OH，阳离子交换树脂-SO3Hl根据氨基酸的净电荷及质

13、点大小：根据氨基酸的净电荷及质点大小：l 电泳电泳：第27页，讲稿共69张，创作于星期二分配层析的一般原理分配层析的一般原理l层析法层析法色层分析法（色谱）色层分析法（色谱）系统的组成固定相（静相）系统的组成固定相（静相）流动相（动相）流动相（动相）l分配定律分配定律当溶质在两种给定的当溶质在两种给定的互不相互不相溶溶的溶剂中分配时，在一定的温度下达到的溶剂中分配时，在一定的温度下达到平衡后，溶质在两相中的浓度比值为一常平衡后，溶质在两相中的浓度比值为一常数数.此比值即分配系数（此比值即分配系数（kdkd）。）。第28页，讲稿共69张，创作于星期二一）纸层析l 固定相：固定相：纤维素上吸附的水

14、纤维素上吸附的水流动相：展层溶剂，有机相流动相：展层溶剂，有机相层析时，混合层析时，混合AAAA在两相中不断分配，在两相中不断分配，疏水性强的疏水性强的AAAA在在固定相水中溶解度固定相水中溶解度较较小，与水的作用力也较小，小，与水的作用力也较小，随展随展层剂的展层（移动）也移动较远距离（迁移率层剂的展层（移动）也移动较远距离（迁移率RfRf大）大）。l极性强的极性强的RfRf值小，疏水性强的值小，疏水性强的RfRf大。大。l分离、鉴定分离、鉴定AAAA混合物的方法。混合物的方法。第29页，讲稿共69张，创作于星期二l将下列每组混合物分别用正丁醇将下列每组混合物分别用正丁醇-醋酸醋酸-水进行纸

15、层析，指出每组的相对迁移率。水进行纸层析，指出每组的相对迁移率。l(1)Val(1)Val和和Lys;Lys;l(2)Phe(2)Phe和和Ser;Ser;l(3)Leu(3)Leu、AlaAla、SerSer第30页，讲稿共69张，创作于星期二 第三节第三节 肽和蛋白质肽和蛋白质l一个氨基酸的羧基与一个氨基酸的羧基与另一个氨基酸的氨基另一个氨基酸的氨基之间失水形成的酰胺之间失水形成的酰胺键称为键称为肽键肽键，所形成，所形成的化合物称为肽。的化合物称为肽。一、肽、肽键与肽链一、肽、肽键与肽链由由两两个个氨氨基基酸酸组组成成的的肽肽称称为为二二肽肽，由由几几个个到到几几十十个个氨氨基基酸酸组组成

16、成的的肽肽称称为为寡寡肽肽，由由更更多多个个氨氨基基酸酸组组成成的的肽肽则则称称为为多肽。组成肽链的氨基酸单元称为多肽。组成肽链的氨基酸单元称为氨基酸残基氨基酸残基。第31页，讲稿共69张，创作于星期二l在多肽链中，氨基酸残基按一定的顺序排列，这种排列顺序称为氨基酸残基按一定的顺序排列，这种排列顺序称为氨基酸顺序。氨基酸顺序。l方向性：方向性：一条多肽链有两个末端，自由-氨基，称为氨基氨基，称为氨基端或端或N-N-端；端；游离-羧基，称为羧基端或羧基，称为羧基端或C-C-端。端。l氨基酸的顺序：氨基酸的顺序：N-N-端端C-C-端端l如上述五肽可表示为：Ser-Val-Tyr-Asp-Glul

17、 丝氨丝氨酰酰缬氨缬氨酰酰酪氨酪氨酰酰天冬氨天冬氨酰酰谷氨谷氨酸酸肽单位肽单位主链：侧链第32页，讲稿共69张，创作于星期二二、肽的解离性质二、肽的解离性质 肽具有酸碱两性性质和等电点。肽具有酸碱两性性质和等电点。肽的酸肽的酸碱性质主要来自游离末端碱性质主要来自游离末端-NH-NH2 2和游离和游离末端末端-COOH-COOH以及侧链以及侧链R R上可解离的基上可解离的基团。每一种肽都有其相应的等电点。团。每一种肽都有其相应的等电点。末末端端-NHNH2,2,-COOHCOOH比游离氨基酸的酸比游离氨基酸的酸碱度降低。碱度降低。第33页，讲稿共69张，创作于星期二第34页，讲稿共69张，创作于

18、星期二三、生物活性肽三、生物活性肽l在生物体中，多肽最重要的存在形式是在生物体中，多肽最重要的存在形式是作为蛋白质的亚单位。作为蛋白质的亚单位。l但是，也有许多分子量比较小的多肽以但是，也有许多分子量比较小的多肽以游离状态存在。这类多肽通常都具有特游离状态存在。这类多肽通常都具有特殊的生理功能，常称为活性肽。殊的生理功能，常称为活性肽。l如：脑啡肽；激素类多肽；抗生素类多如：脑啡肽；激素类多肽；抗生素类多肽；肽；谷胱甘肽谷胱甘肽；蛇毒多肽等。；蛇毒多肽等。l部分肽中含有部分肽中含有D-D-氨基酸。氨基酸。第35页，讲稿共69张，创作于星期二l CO-NH-CH-CO-NH-CH2-COOHCH

19、CH2 2CHCH2 2CHNHCHNH2 2COOHCOOHCHCH2 2SHSH 1.参与体内氧化还原反应参与体内氧化还原反应 2.作为辅酶参与氧化还原反应作为辅酶参与氧化还原反应 保护巯基酶或含保护巯基酶或含Cys的蛋白质中的蛋白质中 SH的还原性的还原性 防止氧化物积累防止氧化物积累GSH+GSH-GSSG第36页，讲稿共69张，创作于星期二 第四节、蛋白的分离根据：根据：所要提取的蛋白（目的蛋白）与其它所要提取的蛋白（目的蛋白）与其它蛋白（杂蛋白）的不同进行分离。蛋白（杂蛋白）的不同进行分离。溶解度不同溶解度不同:反相柱层析；反相柱层析；盐析盐析 分子量不同分子量不同:透析；透析；凝

20、胶过滤法凝胶过滤法 所带电荷不同所带电荷不同:电泳；离子交换层析电泳；离子交换层析 特有的亲和力：特有的亲和力：亲和层析亲和层析第37页，讲稿共69张，创作于星期二一）盐析法：溶解度不同溶解度不同l不同的蛋白质溶解度不同。且溶解度随外界不同的蛋白质溶解度不同。且溶解度随外界条件如盐浓度，条件如盐浓度，pHpH值，温度等而变。值，温度等而变。盐对蛋白质浓度的影响 盐盐溶溶 Salting-in:加少量盐使蛋白质溶解度变大 盐析盐析 Salting-out:加大量盐使蛋白质由溶液中沉淀出來第38页，讲稿共69张，创作于星期二 蛋白质蛋白质溶解度溶解度和和pH值及盐浓度有关值及盐浓度有关0.0010

21、.0050.01 0.02 NaCl(mol/L)pI4.8 5.0 5.2 5.4 5.6pH溶解度蛋白的稳定因素：蛋白的稳定因素：（1 1）带电层）带电层（2 2）水化层）水化层加入少量盐：增加入少量盐：增加带电层，促进加带电层，促进溶解。溶解。-盐溶盐溶第39页，讲稿共69张，创作于星期二Aggregate蛋白质蛋白质分子表面的疏水性分子表面的疏水性区域区域，聚集許多水分子，聚集許多水分子，当当加入加入盐时盐时，這些水分子被抽出，暴露出來的疏水性，這些水分子被抽出，暴露出來的疏水性区区域域互相互相结合结合，形成，形成沉淀沉淀。盐析盐析 Salting-out Salting-out：Io

22、nic strength溶解度+-+-+AmmoniumsulfateSodiumsulfateA little salting-in effectNH4+SO42-=hydrophobic第40页，讲稿共69张，创作于星期二不同蛋白的溶解度曲线 硫酸铵分级沉淀硫酸铵分级沉淀第41页，讲稿共69张，创作于星期二二）凝胶过滤法：二）凝胶过滤法：分子量不同分子量不同l又称为分子筛层析。依蛋白质分子量的差异，通过具又称为分子筛层析。依蛋白质分子量的差异，通过具有有分子筛性质的凝胶分子筛性质的凝胶而分离。而分离。l葡聚糖凝胶葡聚糖凝胶G10-G200G10-G200l琼脂糖凝胶琼脂糖凝胶2B,4B,6

23、B2B,4B,6Bl聚丙烯酰胺凝胶聚丙烯酰胺凝胶S100S100S600S600第42页，讲稿共69张，创作于星期二 凝胶颗粒第43页，讲稿共69张，创作于星期二小分子进入凝胶小分子进入凝胶分子内，被滞留分子内，被滞留大分子在凝大分子在凝胶颗粒间移胶颗粒间移动，较快流动，较快流出出溶剂流动方向溶剂流动方向按按分分子子量量从从大大到到小小依依次次流流出出第44页，讲稿共69张，创作于星期二问问 题题：已知下列蛋白的分子量。问以凝胶已知下列蛋白的分子量。问以凝胶过滤法洗脱时蛋白质的洗脱顺序如何？（凝过滤法洗脱时蛋白质的洗脱顺序如何？（凝胶分级范围为胶分级范围为50005000400400，0000

24、00）第45页，讲稿共69张，创作于星期二三）亲和层析法：三）亲和层析法：特定亲和力特定亲和力l如如两两分分子子间间有有专专一一性性亲亲和和力力（特特别别的的结结合合和和识识别别能能力力，具具有有针针对对性性），以以其其中中一一种种作作为为“鱼鱼饵饵”，可可把把另另外外一一种种“钓钓”出出来来。其其它它蛋蛋白不被吸引而结合不上。白不被吸引而结合不上。第46页，讲稿共69张，创作于星期二 亲和层析亲和层析法的作用法的作用机理机理：固相载体(1)(2)(3)ABSampleWashingElutionXB亲和基团的配体XBAA第47页，讲稿共69张，创作于星期二四）蛋白电泳四）蛋白电泳l在外电场的

25、作用下，带电颗粒向着与其电性在外电场的作用下，带电颗粒向着与其电性相反的电极移动，这种现象称为电泳。相反的电极移动，这种现象称为电泳。l蛋白质有各自的等电点。在非等电点时，蛋蛋白质有各自的等电点。在非等电点时，蛋白质颗粒均带有不同的电荷。白质颗粒均带有不同的电荷。l蛋白质颗粒在电场中移动的速度（蛋白质颗粒在电场中移动的速度（v v）取决于）取决于电场强度电场强度(E)(E)，所带的，所带的净电荷净电荷(q)(q)以及与以及与介质介质的摩擦系数的摩擦系数(f(f，即颗粒大小及形状，即颗粒大小及形状)。第48页，讲稿共69张，创作于星期二SDS-SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳lSDS

26、SDS（十二烷基（十二烷基磺酸钠磺酸钠）是一种阴离子型表）是一种阴离子型表面活性剂，它能够与蛋白质中的氨基酸残基面活性剂，它能够与蛋白质中的氨基酸残基按大约按大约1 1 2 2比例结合，使比例结合，使蛋白以一条无构型蛋白以一条无构型的长条分子存在的长条分子存在，且分子表面均匀结合一层，且分子表面均匀结合一层负的负的SDSSDS的电荷，蛋白质分子的电荷，蛋白质分子原有电荷间的原有电荷间的差别则可以忽略差别则可以忽略。l用已知分子量的蛋白质作为标准，则可以估用已知分子量的蛋白质作为标准，则可以估算出不同蛋白质的分子量。算出不同蛋白质的分子量。第49页，讲稿共69张，创作于星期二第50页，讲稿共69

27、张，创作于星期二第五节第五节 蛋白质一级结构的测定蛋白质一级结构的测定 定义定义 1969年，年，国际纯化学与应国际纯化学与应用化学委员会用化学委员会（IUPAC）规定：规定：蛋白质的一级结蛋白质的一级结构指构指蛋白质多肽蛋白质多肽连中连中AA的排列顺的排列顺序，包括二硫键序，包括二硫键的位置。的位置。第51页，讲稿共69张，创作于星期二F.Sanger (1953,Cambridge U)Insulin 胰岛素(A,B chains)以传统氨基酸定序法决定蛋白质序列S SSSS S+NH3NH3+-OOCQGIVEQCCTSI C SLYLENYCNCOO-FSFVNQHLCGHLVEALY

28、LVCGERGFYTPKT B-chain A-chain第52页，讲稿共69张，创作于星期二一）、Edman degradation降解法测定氨基酸顺序的一般测定步骤 l（1）测定多肽链的数目，拆分多肽链，测定多肽链的数目，拆分多肽链，分析多分析多肽链的肽链的N末端和末端和C末端残基末端残基l（2）断裂多肽链内、间的二硫键）断裂多肽链内、间的二硫键l（3）测定每条多肽链的测定每条多肽链的AA组成组成l（4）多肽链断裂成小肽段多肽链断裂成小肽段 （5）测定各个肽段的测定各个肽段的AA顺序顺序 l（6）确定肽段在多肽链中的次序确定肽段在多肽链中的次序（7）确定原多肽链中二硫键的位置确定原多肽链中

29、二硫键的位置第53页，讲稿共69张，创作于星期二lSangerSanger法。法。2,4-2,4-二硝基氟苯在碱性条件下，能够二硝基氟苯在碱性条件下，能够与肽链与肽链N-N-端的游离氨基作用，生成二硝基苯衍生端的游离氨基作用，生成二硝基苯衍生物（物（DNP-DNP-肽）。肽）。l酸解，得黄色酸解，得黄色DNP-DNP-氨基酸，用乙醚抽提分离。不同氨基酸，用乙醚抽提分离。不同的的DNP-DNP-氨基酸可以用色谱法进行鉴定。氨基酸可以用色谱法进行鉴定。（一一）N N末末端端分分析析法法 二硝基氟苯（二硝基氟苯（DNFBDNFB）法法是游离氨基酸、多肽及蛋白共有的一个反应是游离氨基酸、多肽及蛋白共有

30、的一个反应第54页，讲稿共69张，创作于星期二用途用途：可以用来鉴定多肽或蛋白质可以用来鉴定多肽或蛋白质NH2末端氨基酸末端氨基酸.DNSDNS +AA AA 多肽多肽 蛋白蛋白弱碱弱碱DNS-DNS-AA AA 多肽多肽 蛋白蛋白酸酸DNS-AADNS-AA +游离游离AAAA（乙醚抽提，有荧光）（乙醚抽提，有荧光）丹磺酰氯法丹磺酰氯法第55页，讲稿共69张，创作于星期二(二二)二硫键的断裂二硫键的断裂l在可用在可用8mol/L8mol/L尿素或尿素或6mol/L6mol/L盐酸胍（使蛋白盐酸胍（使蛋白变性，亚基分开）存在下，变性，亚基分开）存在下，使使用过量的用过量的-巯巯基乙醇基乙醇，使

31、二硫键还原为巯基，然后用，使二硫键还原为巯基，然后用烷烷基化试剂基化试剂保护生成的巯基，以防止它重新被保护生成的巯基，以防止它重新被氧化氧化。第56页，讲稿共69张，创作于星期二(三三)氨基氨基酸组成的酸组成的分析：分析：酸，碱解后酸，碱解后氨基酸分析氨基酸分析仪测定仪测定第57页，讲稿共69张，创作于星期二（四）多肽链的部分水解（四）多肽链的部分水解l1 1、酶裂解法酶裂解法 胰蛋胰蛋白酶白酶蛋白水解酶（蛋白酶）：蛋白水解酶（蛋白酶）：糜蛋糜蛋白酶（肽链内切酶）白酶（肽链内切酶）嗜热嗜热菌蛋白酶菌蛋白酶胃蛋胃蛋白酶白酶第58页，讲稿共69张，创作于星期二l胰蛋白酶胰蛋白酶Trypsin ：R

32、 R1 1=赖氨酸赖氨酸LysLys和精氨酸和精氨酸ArgArg侧链侧链（专一性较强，水解速度快）（专一性较强，水解速度快）。l胰凝乳（糜）蛋白酶：专一性胰凝乳（糜）蛋白酶：专一性胰蛋白酶胰蛋白酶断裂断裂Phe,Trp,TyrPhe,Trp,Tyr等芳香族等芳香族AAAA的羧基形成的肽键。的羧基形成的肽键。水解位点水解位点2、化学试剂法：溴化氰。R1=R1=甲硫氨酸。第59页，讲稿共69张，创作于星期二五）氨基酸序列的测定五）氨基酸序列的测定l1 1、EdmanEdman化学降解法化学降解法lEdmanEdman（苯异硫氰酸酯法）氨基酸顺序分（苯异硫氰酸酯法）氨基酸顺序分析法实际上也是一种析法

33、实际上也是一种N-N-端分析法端分析法。此法。此法的特点是能够不断重复循环，将肽链的特点是能够不断重复循环，将肽链N-N-端氨基酸残基逐一进行标记和解离。端氨基酸残基逐一进行标记和解离。第60页，讲稿共69张，创作于星期二 用途用途：可以用来鉴定多肽或蛋白质可以用来鉴定多肽或蛋白质NH2末端氨基末端氨基酸。酸。亦称亦称EdmanEdman反应反应弱碱弱碱 AAAAPITC+PITC+多肽多肽 蛋白蛋白 AAAAPTCPTC多肽多肽 蛋白蛋白无水甲酸无水甲酸或或HFHFPTH-AA+PTH-AA+少一个少一个AAAA的多肽或蛋白的多肽或蛋白（乙酸乙酯抽提）（乙酸乙酯抽提）苯异硫氰酸酯（苯异硫氰酸

34、酯（PITC）法：法：第61页，讲稿共69张，创作于星期二此反应可循环进行此反应可循环进行 进行进行n n轮反应，可测出轮反应，可测出n n个个残基顺序残基顺序一次：一次：60607070个残基的肽段顺序个残基的肽段顺序 第62页，讲稿共69张，创作于星期二(六六)肽段的次序肽段的次序重叠肽法重叠肽法l采用两种或多种采用两种或多种不同的断裂方法不同的断裂方法将多肽将多肽样品断裂成两套或多套肽段或肽碎片，样品断裂成两套或多套肽段或肽碎片，并将其分离开来。并将其分离开来。l利用利用两套或多套肽段两套或多套肽段的氨基酸顺序彼此的氨基酸顺序彼此间的交错重叠，间的交错重叠，拼凑拼凑出整条多肽链的氨出整条

35、多肽链的氨基酸顺序基酸顺序。第63页，讲稿共69张，创作于星期二 示例示例(十肽的水解十肽的水解)A A法水解得到四个小肽：法水解得到四个小肽：A1 Ala-PheA1 Ala-Phe A2 Gly-Lys-Asn-Tyr A2 Gly-Lys-Asn-Tyr A3 Arg-Tyr A3 Arg-Tyr A4 His-Val A4 His-ValB B法水解得到三个小肽：法水解得到三个小肽：B1 Ala-Phe-Gly-LysB1 Ala-Phe-Gly-Lys B2 Asn-Tyr-Arg B2 Asn-Tyr-Arg B3 Tyr-His-Val B3 Tyr-His-Val第64页，讲稿

36、共69张，创作于星期二 二、测定基因序列得蛋白二、测定基因序列得蛋白一级结构 如何定出如何定出一级结构一级结构：蛋白质的氨基酸顺序蛋白质的氨基酸顺序(1)直接测定氨基酸测序：Edman degradationF.Sanger(Cambridge U.)Insulin 胰島素(A,B chains)(2)由 cDNA 序列反推氨基酸序列：第65页，讲稿共69张，创作于星期二五、血红蛋白分子病（五、血红蛋白分子病（4747）l分子病指蛋白质分子中由于分子病指蛋白质分子中由于AAAA排列顺序与正常蛋白质排列顺序与正常蛋白质不同而发生的一种遗传病不同而发生的一种遗传病(基因突变造成的基因突变造成的)。l镰刀状细胞贫血病：病人体内血红细胞的量及红蛋镰刀状细胞贫血病：病人体内血红细胞的量及红蛋白的含量都较正常人少，且红细胞的白的含量都较正常人少，且红细胞的形状为新月形，形状为新月形，即镰刀状即镰刀状。l病因：血红蛋白病因：血红蛋白AAAA顺序的细微变化顺序的细微变化l 正常人正常人HbA N6Glul 病病 人人 HbS N6Val第66页，讲稿共69张，创作于星期二第67页，讲稿共69张，创作于星期二镰镰刀刀型型血血红红蛋蛋白白分分子子第68页，讲稿共69张，创作于星期二感感谢谢大大家家观观看看第69页，讲稿共69张，创作于星期二