微生物的实验室培养详解精选PPT.ppt
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1、关于微生物的实验室培养详解第1页,讲稿共63张,创作于星期日微生物包括:微生物包括:细菌、蓝藻、细菌、蓝藻、放线菌、支原体、放线菌、支原体、衣原体衣原体原核生物界原核生物界真菌真菌 原生生物原生生物病毒病毒没有细胞结构的生物没有细胞结构的生物真核真核生物生物有细有细胞结胞结构的构的生物生物第2页,讲稿共63张,创作于星期日菌落:菌落:不同的细菌的菌落特征不不同的细菌的菌落特征不同同菌落是鉴定菌种的重要依菌落是鉴定菌种的重要依据。据。一个细胞繁殖而一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子来的肉眼可见的子细胞群体。细胞群体。第3页,讲稿共63张,创作于星期日第4页,讲稿共63张,创作于星期日培养皿培养皿第5
2、页,讲稿共63张,创作于星期日按成分分按成分分按按功能分功能分按物理状态分按物理状态分培养基类型培养基类型合成培养基合成培养基天然培养基天然培养基基本培养基基本培养基选择培养基选择培养基鉴别培养基鉴别培养基固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基分类:分类:(一)培养基:(一)培养基:人们按照微生物对营养人们按照微生物对营养物质的不同需求,物质的不同需求,配制出供其生长繁殖配制出供其生长繁殖的营养的营养基质。基质。第6页,讲稿共63张,创作于星期日选择培养基加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基加入高浓度食盐的培养基:分离金黄色
3、葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基:分离固氮菌分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基:分离自养型微生物分离自养型微生物加入青霉素等抗生素的培养基加入青霉素等抗生素的培养基:分离导入了目的基因的受体细胞分离导入了目的基因的受体细胞第7页,讲稿共63张,创作于星期日根据微生物的代谢特点,在培养基中加入某种指示剂根据微生物的代谢特点,在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成,用以鉴别不同种类的微生物。或化学药品配制而成,用以鉴别不同种类的微生物。例如,在培养基中加入伊红和美蓝,可以用来鉴别饮例如,在培养基中加入伊红和美蓝,可以用来鉴别饮用水和
4、乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌:如果有用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌:如果有大大肠杆菌肠杆菌,其代谢产物就与,其代谢产物就与伊红和美蓝伊红和美蓝结合,使菌落呈结合,使菌落呈深紫色深紫色,并,并带有金属光泽带有金属光泽。鉴别培养基鉴别培养基第8页,讲稿共63张,创作于星期日不管哪种培养基,一般都含有不管哪种培养基,一般都含有水水、碳源碳源、和、和氮源氮源、无机盐无机盐等营养物质,另外还需要满足等营养物质,另外还需要满足微生物生长对微生物生长对pHpH、特殊营养物质特殊营养物质,例如例如:生长生长因子因子(即细菌生长必需,而自身不能合成的化合即细菌生长必需,而自身不能合成的化合物物,如维生素
5、、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及以及氧气氧气、二氧化碳二氧化碳、渗透压渗透压等等的要求。的要求。培养基的营养物质培养基的营养物质第9页,讲稿共63张,创作于星期日1、获得纯净培养物的关键是什么?2、避免杂菌污染的方法主要包括哪四个方面3、什么是消毒、灭菌,常用方法有哪些?(二)无菌技术(二)无菌技术第10页,讲稿共63张,创作于星期日消毒与灭菌消毒与灭菌消毒:指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子)。灭菌:指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有微生物,包括芽孢和孢子。灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也灭菌与
6、消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。是最重要的技术。第11页,讲稿共63张,创作于星期日消毒的方法:消毒的方法:1、煮沸消毒法、煮沸消毒法:100煮沸煮沸5-6min2、巴氏消毒法:、巴氏消毒法:70-75下煮下煮30min或或80下煮下煮15min3、化学药剂消毒法、化学药剂消毒法:用用75%酒精、新洁尔灭等酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒进行皮肤消毒;氯气消毒水源氯气消毒水源4、紫外线或化学药物消毒、紫外线或化学药物消毒第12页,讲稿共63张,创作于星期日灭菌的方法:灭菌的方法:1、灼烧灭菌、灼烧灭菌2、干热灭菌:、干热灭菌:160-170下加热下加热1-2h。3、高压蒸汽灭菌:
7、、高压蒸汽灭菌:100kPa、121下维持下维持15-30min.第13页,讲稿共63张,创作于星期日1.1.无菌技术除了用来防止实验室的培养无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外,还有什么目物被其他外来微生物污染外,还有什么目的?的?答:无菌技术还能有效避免操作者自身答:无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。被微生物感染。第14页,讲稿共63张,创作于星期日2.2.请你判断以下材料或用具是否需要请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要,请选择合适的消毒或灭菌。如果需要,请选择合适的方法。方法。(1 1)培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培养基与培养皿(2
8、 2)玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管(3 3)实验操作者的双手实验操作者的双手答:(答:(1)、()、(2)需要灭菌;()需要灭菌;(3)需要)需要消毒。消毒。第15页,讲稿共63张,创作于星期日实验操作实验操作本实验用牛肉膏蛋白胨固体培养基本实验用牛肉膏蛋白胨固体培养基进行大肠杆菌的纯化培养,可分为进行大肠杆菌的纯化培养,可分为制备培养基制备培养基和和纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌两个阶段两个阶段进行。进行。第16页,讲稿共63张,创作于星期日2.1微生物的实验室培养.flv第17页,讲稿共63张,创作于星期日第18页,讲稿共63张,创作于星期日 1.1.培养基灭菌后,需要冷却到培养
9、基灭菌后,需要冷却到50 50 左右时,才左右时,才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度?能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度?答:答:可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶,可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶,感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时,就可感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时,就可以进行倒平板了。以进行倒平板了。2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰?为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰?答:通过灼烧灭菌,防止瓶口的微生答:通过灼烧灭菌,防止瓶口的微生物污染培养基。物污染培养基。第19页,讲稿共63张,创作于星期日3.3.平板冷凝后,为什么要将平板倒置?平板冷凝后,为什么要将平板倒
10、置?4.4.在倒平板的过程中,如果不小心将培养基溅在皿在倒平板的过程中,如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位,这个平板还能用来培养微生盖与皿底之间的部位,这个平板还能用来培养微生物吗?为什么?物吗?为什么?答:平板冷凝后,皿盖上会凝结水珠,将平板倒答:平板冷凝后,皿盖上会凝结水珠,将平板倒置,既可以防止皿盖上的水珠落入培养基,造成污置,既可以防止皿盖上的水珠落入培养基,造成污染,又可避免培养基中的水分过快地挥发。染,又可避免培养基中的水分过快地挥发。答:空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培答:空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生,因此最好不要用这个平板培养微生物。养基上滋生
11、,因此最好不要用这个平板培养微生物。第20页,讲稿共63张,创作于星期日纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌接种方法有:接种方法有:平板划线法和稀释涂布平板法平板划线法和稀释涂布平板法第21页,讲稿共63张,创作于星期日 平板划线法平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养基通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作表面连续划线的操作,将聚集的菌钟逐步稀释分将聚集的菌钟逐步稀释分散到培养基的表面散到培养基的表面.在数次划线后在数次划线后,可以分离到由一个细胞可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是这就是菌落菌落.第22页,讲稿共63张,创作于星期日第23页,讲稿
12、共63张,创作于星期日微生物的恒温培养微生物的恒温培养第24页,讲稿共63张,创作于星期日 1.1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环?在划线操作结束时,仍然需要灼烧要灼烧接种环?在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗?为什么?接种环吗?为什么?答:操作的答:操作的第一步灼烧第一步灼烧接种环是为了接种环是为了避免接种环避免接种环上可能存在的微生物污染培养物上可能存在的微生物污染培养物;每次划线前灼烧每次划线前灼烧接接种环是为了种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种种,使下一次划线时,接种环上的菌种直
13、接来源于上,使下一次划线时,接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端,从而通过划线次数的增加,使每次划次划线的末端,从而通过划线次数的增加,使每次划线时菌种的数目逐渐减少,以便得到菌落。划线线时菌种的数目逐渐减少,以便得到菌落。划线结束结束后灼烧后灼烧接种环,能接种环,能及时杀死接种环上残留的菌种及时杀死接种环上残留的菌种,避,避免细菌污染环境和感染操作者。免细菌污染环境和感染操作者。第25页,讲稿共63张,创作于星期日 2.2.在灼烧接种环之后,为什么要等其冷却在灼烧接种环之后,为什么要等其冷却后再进行划线?后再进行划线?答:以免接种环温度太高,杀死菌种。答:以免接种环温度太高,杀死菌种。3.
14、3.在作第二次以及其后的划线操作时,为什么在作第二次以及其后的划线操作时,为什么总是从上一次划线的末端开始划线总是从上一次划线的末端开始划线?答:划线后,线条末端细菌的数目比线条起答:划线后,线条末端细菌的数目比线条起始处要少,每次从上一次划线的末端开始,能使始处要少,每次从上一次划线的末端开始,能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少,最细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少,最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。第26页,讲稿共63张,创作于星期日第27页,讲稿共63张,创作于星期日第28页,讲稿共63张,创作于星期日 涂布平板的所有操作都应在火焰附近涂布
15、平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求,想一想,第作要求,想一想,第2 2步应如何进行无菌操步应如何进行无菌操作?作?应从操作的各个细节保证应从操作的各个细节保证“无菌无菌”。例如,。例如,酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。等。第29页,讲稿共63张,创作于星期日固体培养基:菌落固体培养基:菌落第30页,讲稿共63张,创作于星期日菌种的保存菌种的保存 1 1、临时保藏:接、临时保藏:接种到固体斜面培
16、养基,种到固体斜面培养基,菌落长成后置于菌落长成后置于44冰箱保存。冰箱保存。2 2、长期保存:甘、长期保存:甘油冷冻管藏法油冷冻管藏法第31页,讲稿共63张,创作于星期日第32页,讲稿共63张,创作于星期日课题课题2 2土壤中分解尿素的细菌的土壤中分解尿素的细菌的分离与计数分离与计数第33页,讲稿共63张,创作于星期日一、课题背景一、课题背景1 1、尿素的利用、尿素的利用 尿素尿素是一种重要的是一种重要的农业氮肥。农业氮肥。尿素尿素不能直接不能直接被被农作物农作物吸收。吸收。土壤中的细菌将尿素土壤中的细菌将尿素分解成氨分解成氨之后才之后才能被植物利用。能被植物利用。2 2、细菌利用尿素的原因
17、、细菌利用尿素的原因土壤中的细菌分解尿素是因为它们土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶能合成脲酶CO(NHCO(NH2 2)脲酶脲酶+CO+CO2 2NHNH3 3+H+H2 2O O第34页,讲稿共63张,创作于星期日4 4、课题目的、课题目的从土壤中分离出能够分解尿素的细菌从土壤中分离出能够分解尿素的细菌统计每克土壤样品中究竟含有多少这样统计每克土壤样品中究竟含有多少这样 的细菌的细菌第35页,讲稿共63张,创作于星期日一一.研究思路研究思路.筛选菌株筛选菌株.统计菌落数目统计菌落数目.设置对照设置对照第36页,讲稿共63张,创作于星期日 1 1、实例:、实例:启示:启示:寻找目的菌种
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