物质的跨膜运输翟中和细胞生物学精选PPT.ppt
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1、关于物质的跨膜运输翟中和细胞生物学第1页,讲稿共50张,创作于星期二第一节第一节 膜转运蛋白与物质的跨膜运输膜转运蛋白与物质的跨膜运输一、脂双层的不透性和膜转一、脂双层的不透性和膜转运蛋白运蛋白 细胞内外的离子差别分布细胞内外的离子差别分布主要由两种机制作控制:主要由两种机制作控制:1.1.取决于一套特殊的膜转运取决于一套特殊的膜转运蛋白的活性;蛋白的活性;2.2.取决于质膜本身的脂双层所取决于质膜本身的脂双层所具有的疏水性特征。具有的疏水性特征。组分组分细胞内浓度细胞内浓度/(mmol.L-1)细胞外浓度细胞外浓度/(mmol.L-1)阳离子阳离子Na+5-15145K+1405Mg2+0.
2、51-2Ca2+10-41-2H+7 10-8(pH7.2)4 10-8(pH7.4)阴离子阴离子Cl-5-15110固定的阴固定的阴离子离子高高0典型哺乳类细胞内外离子浓度的比较典型哺乳类细胞内外离子浓度的比较第2页,讲稿共50张,创作于星期二一、脂双层的不透性和膜转运蛋白一、脂双层的不透性和膜转运蛋白 载体蛋白载体蛋白 通道蛋白通道蛋白 通道蛋白与载体蛋白的异同通道蛋白与载体蛋白的异同第3页,讲稿共50张,创作于星期二、载体蛋白、载体蛋白结构结构:多次跨膜的整合性膜蛋白多次跨膜的整合性膜蛋白机制机制:通过通过构象的改变构象的改变介导介导与之结合的溶质分子与之结合的溶质分子的跨膜转运的跨膜转
3、运特征特征:如同酶具有特异性结合位点如同酶具有特异性结合位点,具有高度的选择性具有高度的选择性一次只能与膜一侧的一种溶质结合一次只能与膜一侧的一种溶质结合,经构象变化转运溶质经构象变化转运溶质转运过程具有类似于酶与底物作用的饱和动力学特征转运过程具有类似于酶与底物作用的饱和动力学特征 与酶不同对转运的溶质分子不作任何的共价修饰与酶不同对转运的溶质分子不作任何的共价修饰 载载体体蛋蛋白白-通通透透酶酶(permeasepermease):既既可可被被底底物物类类似似物物竞竞争争性性地地抑抑制制,又又可被某种抑制剂非竞争性抑制以及对可被某种抑制剂非竞争性抑制以及对pHpH有依赖性等。有依赖性等。第
4、4页,讲稿共50张,创作于星期二 载体蛋白的载体蛋白的类型类型 介导被动运输介导被动运输 易易化化转转运运蛋蛋白白:不不与与能能量量释释放放体体系系相相偶偶联联,主主要要介介导导协协助助扩扩散散(易化扩散),物质跨膜运动可以在任一方向发生。(易化扩散),物质跨膜运动可以在任一方向发生。介导主动运输(激活转运蛋白)介导主动运输(激活转运蛋白)ATPATP驱驱动动泵泵蛋蛋白白:离离子子泵泵的的主主要要成成分分,由由ATPATP直直接接水水解解供供能能,单单方方向逆着浓度梯度运送离子。向逆着浓度梯度运送离子。协协同同转转运运蛋蛋白白:利利用用储储存存在在一一种种溶溶质质(离离子子)电电化化学学梯梯度
5、度中中的的自由能来转运另外一种溶质,单方向逆着浓度梯度运送离子。自由能来转运另外一种溶质,单方向逆着浓度梯度运送离子。光驱动泵蛋白光驱动泵蛋白:利用光能,单方向逆着浓度梯度转运质子。利用光能,单方向逆着浓度梯度转运质子。第5页,讲稿共50张,创作于星期二、通道蛋白、通道蛋白 通道蛋白的通道蛋白的结构结构 通道蛋白的通道蛋白的特征特征 通道蛋白的类型通道蛋白的类型第6页,讲稿共50张,创作于星期二结结 构构 通道蛋白形成跨膜的离子选择性通道。通道蛋白形成跨膜的离子选择性通道。对对离离子子的的选选择择性性依依赖赖于于通通道道的的直直径径和和形形状状以以及及通道内衬带电荷氨基酸的分布。通道内衬带电荷
6、氨基酸的分布。它它所所介介导导的的被被动动运运输输不不需需要要与与溶溶质质分分子子结结合,只有大小和电荷适宜的离子才能通过。合,只有大小和电荷适宜的离子才能通过。第7页,讲稿共50张,创作于星期二特特 征征具有极高的具有极高的转运速率转运速率 驱驱动动带带电电荷荷离离子子的的跨跨膜膜转转运运动动力力来来自自溶溶质质的的浓浓度度梯梯度度和和跨跨膜膜电电位位差差两两种种力力的的合合力力跨跨膜膜的的电电化化学学梯梯度度,运运输输方方向向顺顺电电化学梯度进行。化学梯度进行。离子通道没有饱和值离子通道没有饱和值 即即使使在在很很高高的的离离子子浓浓度度下下它它们们通通过过的的离离子子量量依依然然没没有有
7、最大值。最大值。是是非非连连续续性性开开放放,而而是是门门控控的的,即即离离子子通通道道的的活活性性由由通通道道开开或关两种构象调节。或关两种构象调节。通道打开时,同时结合膜两侧的离子通道打开时,同时结合膜两侧的离子.第8页,讲稿共50张,创作于星期二类类 型型 电压门通道电压门通道带电荷的蛋白结构域会随跨膜电带电荷的蛋白结构域会随跨膜电位梯度的改变发生相应位移。位梯度的改变发生相应位移。配体门通道配体门通道细胞内外的某些小分子配体与通细胞内外的某些小分子配体与通道蛋白结合继而引起通道蛋白构道蛋白结合继而引起通道蛋白构象的改变。象的改变。应力激活通道应力激活通道通道蛋白感应应力而改变构象,通道
8、蛋白感应应力而改变构象,从而开启通道形成离子流,产从而开启通道形成离子流,产生信号。生信号。第9页,讲稿共50张,创作于星期二、通道蛋白与载体蛋白的异同、通道蛋白与载体蛋白的异同主要不同在于它们以不同的方式辨别溶质,即决定运输某主要不同在于它们以不同的方式辨别溶质,即决定运输某些溶质而不运输另外的溶质:些溶质而不运输另外的溶质:1.1.通道蛋白通道蛋白:根据溶质大小和电荷进行辨别,假如通道处于根据溶质大小和电荷进行辨别,假如通道处于开放状态,那么足够小的和带有适当电荷的分子或离子就能开放状态,那么足够小的和带有适当电荷的分子或离子就能通过。通过。2.2.载体蛋白载体蛋白:只容许与载体蛋白上结合
9、部位相适合的溶质分只容许与载体蛋白上结合部位相适合的溶质分子通过,而且载体蛋白每次转运都发生自身构象的改变。子通过,而且载体蛋白每次转运都发生自身构象的改变。第10页,讲稿共50张,创作于星期二二、被动运输与主动运输二、被动运输与主动运输 被动运输(被动运输(passive transportpassive transport)主动运输(主动运输(active transportactive transport)物质的物质的跨膜运输跨膜运输是细胞维持正常生命活动的基础之一是细胞维持正常生命活动的基础之一 第11页,讲稿共50张,创作于星期二二、被动运输与主动运输二、被动运输与主动运输概念概念
10、被被动动运运输输:是是指指通通过过简简单单扩扩散散或或协协助助扩扩散散实实现现物物质质由由高高浓浓度度向向低低浓浓度方向的跨膜转运。度方向的跨膜转运。转运的动力来自物质的浓度梯度,不需要细胞提供代谢能量。转运的动力来自物质的浓度梯度,不需要细胞提供代谢能量。类型类型 简单扩散(简单扩散(simple diffusionsimple diffusion)水孔蛋白(水孔蛋白(aquaporin,AQP)aquaporin,AQP)协助扩散(协助扩散(facilitated diffusionfacilitated diffusion)第12页,讲稿共50张,创作于星期二(一一)简单扩散简单扩散 疏
11、水的小分子或疏水的小分子或小的不带电荷的极性小的不带电荷的极性分子进行跨膜转运时,分子进行跨膜转运时,不需要细胞提供能量,不需要细胞提供能量,也无需膜蛋白的协助,也无需膜蛋白的协助,因此称为简单扩散。因此称为简单扩散。不同小分子物质跨膜不同小分子物质跨膜转运的速率差异极大转运的速率差异极大不同分子的通透系数有很不同分子的通透系数有很大区别。大区别。人工脂双层膜对不人工脂双层膜对不同分子的相对透性同分子的相对透性 不同分子通过人工不同分子通过人工脂脂双层膜渗透系数双层膜渗透系数第13页,讲稿共50张,创作于星期二决定通透性的因素决定通透性的因素 其通透性主要取决于分子的大小和分子的极性:其通透性
12、主要取决于分子的大小和分子的极性:小分子比大分子容易穿膜小分子比大分子容易穿膜 非极性分子比极性分子容易穿膜非极性分子比极性分子容易穿膜 带电荷的离子跨膜需要更高的自由能带电荷的离子跨膜需要更高的自由能无膜蛋白的无膜蛋白的人工脂双层对带电荷的离子是高度不透的。人工脂双层对带电荷的离子是高度不透的。第14页,讲稿共50张,创作于星期二为什么具有极性的水分子容易穿膜?为什么具有极性的水分子容易穿膜?可能是因为水分子非常小,可以通过由于膜质运动可能是因为水分子非常小,可以通过由于膜质运动而产生的间隙的缘故。而产生的间隙的缘故。但是,速度缓慢。但是,速度缓慢。水分子快速跨膜运动是以何种方式实现的?水分
13、子快速跨膜运动是以何种方式实现的?水孔蛋白水孔蛋白 第15页,讲稿共50张,创作于星期二(二二)水孔蛋白水孔蛋白 水孔蛋白的发现水孔蛋白的发现 水孔蛋白的结构水孔蛋白的结构 水孔蛋白的选择性水孔蛋白的选择性 第16页,讲稿共50张,创作于星期二水孔蛋白的发现水孔蛋白的发现 长期以来长期以来,普遍认为细胞内外的水分子是以简单扩散普遍认为细胞内外的水分子是以简单扩散的方式透过脂双层膜。后来发现某些细胞在低渗溶液中的方式透过脂双层膜。后来发现某些细胞在低渗溶液中对水的通透性很高对水的通透性很高,很难以简单扩散来解释。很难以简单扩散来解释。例如,将红细胞移入低渗溶液后,很快吸水膨胀而溶例如,将红细胞移
14、入低渗溶液后,很快吸水膨胀而溶血,而水生动物的卵母细胞在低渗溶液不膨胀。血,而水生动物的卵母细胞在低渗溶液不膨胀。因此,人们推测水的跨膜转运除了简单扩散外因此,人们推测水的跨膜转运除了简单扩散外,还还存在某种特殊的机制存在某种特殊的机制,并提出了并提出了水通道水通道的概念。的概念。第17页,讲稿共50张,创作于星期二 19881988年年AgreAgre在在分分离离纯纯化化红红细细胞胞膜膜上上的的RhRh血血型型抗抗原原时时,发发现现了了一一个个疏疏水水性性跨跨膜膜蛋蛋白白,称称为为CHIP28 CHIP28(Channel-Forming(Channel-Forming integral i
15、ntegral membrane membrane protein)protein)。19911991年年得得到到CHIP28CHIP28的的cDNAcDNA序序列列,AgreAgre将将CHIP28CHIP28的的mRNAmRNA注注入入非非洲洲爪爪蟾蟾的的卵卵母母细细胞胞中中,在在低低渗渗溶溶液液中中,卵卵母母细细胞胞迅迅速速膨膨胀胀,并并于于5 5分分钟钟内内破破裂裂,纯纯化化的的CHIP28CHIP28置置入入脂脂质质体体,也也会会得得到到同同样样的的结结果果。细细胞胞的的这这种种吸吸水水膨膨胀胀现现象象会会被被HgHg2+2+抑抑制制,而而这这是是已已知知的的抑抑制制水水通通透透的的
16、处处理理措措施施。这这一一发发现现揭揭示示了了细细胞胞膜膜上上确确实实存存在在水水通通道道,AgreAgre因因此此而而与与离离子子通通道的研究者共享道的研究者共享20032003年的诺贝尔化学奖。年的诺贝尔化学奖。目目前前在在人人类类细细胞胞中中已已发发现现的的此此类类蛋蛋白白至至少少有有1010种种,被被命名为水通道蛋白(命名为水通道蛋白(AquaporinAquaporin,AQPAQP)第18页,讲稿共50张,创作于星期二水孔蛋白的结构水孔蛋白的结构水孔蛋白是由四个亚基组成的四聚体。水孔蛋白是由四个亚基组成的四聚体。每个亚基由每个亚基由6 6个跨膜个跨膜螺旋组成,相对分子质量为螺旋组成
17、,相对分子质量为28 00028 000。每个每个水孔蛋白亚基单独形成一个供水分子运动的中央孔。水孔蛋白亚基单独形成一个供水分子运动的中央孔。中央孔的直径稍大于水分子的直径,约中央孔的直径稍大于水分子的直径,约0.28 nm0.28 nm,水孔长约为,水孔长约为2 nm2 nm。第19页,讲稿共50张,创作于星期二水孔蛋白的选择性水孔蛋白的选择性 水水孔孔蛋蛋白白形形成成对对水水分分子子高高度度特特异异的的亲亲水水通通道道,只只容容许许水水而而不不容许离子或其他小分子溶质通过。容许离子或其他小分子溶质通过。源源于于通通道道内内高高度度保保守守的的氨氨基基酸酸残残基基侧侧链链与与通通过过的的水水
18、分分子子形成氢键。形成氢键。源于非常狭窄的孔径。源于非常狭窄的孔径。第20页,讲稿共50张,创作于星期二(三三)协助扩散协助扩散概念:概念:各种极性分子和无机离子,如糖、氨基酸、核苷酸以及细胞各种极性分子和无机离子,如糖、氨基酸、核苷酸以及细胞代谢物等顺其浓度梯度或电化学梯度减小方向的跨膜转运。代谢物等顺其浓度梯度或电化学梯度减小方向的跨膜转运。该过程不需要细胞提供能量,这与简单扩散相同,因此两者都称该过程不需要细胞提供能量,这与简单扩散相同,因此两者都称为被动运输。为被动运输。但在但在协助扩散协助扩散中,物质跨膜转运需要特异性的膜转运蛋中,物质跨膜转运需要特异性的膜转运蛋白白“协助协助”,从
19、而使其转运速率增加,转运特异性增强。,从而使其转运速率增加,转运特异性增强。第21页,讲稿共50张,创作于星期二 绝大多数哺乳类细胞都是利用血糖作为细胞的主要能源,人类基绝大多数哺乳类细胞都是利用血糖作为细胞的主要能源,人类基因组编码因组编码1212种与糖转运相关的载体蛋白种与糖转运相关的载体蛋白GLUT1GLUT1 GLUT12GLUT12,构成葡萄,构成葡萄糖载体(糖载体(GLUTGLUT)蛋白家族。)蛋白家族。(三三)协助扩散协助扩散 用红细胞和肝细胞设计用红细胞和肝细胞设计葡萄糖摄取实验,发现由葡萄糖摄取实验,发现由GLUT蛋白所介导的细胞蛋白所介导的细胞对葡萄糖的摄取表现酶动对葡萄糖
20、的摄取表现酶动力学基本特征,与简单扩力学基本特征,与简单扩散相比极大地提高了摄入散相比极大地提高了摄入速率。速率。第22页,讲稿共50张,创作于星期二特征:特征:葡萄糖载体介导的葡萄糖载体介导的协助扩散协助扩散比简单扩散转运速率高。比简单扩散转运速率高。膜转运蛋白协助的结果膜转运蛋白协助的结果与酶催反应相似与酶催反应相似,存在最大的转运速率,因此可用达到最大转存在最大的转运速率,因此可用达到最大转运速率一半时的葡萄糖浓度作为其运速率一半时的葡萄糖浓度作为其KmKm值,用以衡量某种物质的值,用以衡量某种物质的转运速率。转运速率。膜转运蛋白的数量有限。在一定限度内运输速率同物质膜转运蛋白的数量有限
21、。在一定限度内运输速率同物质浓度成正比。如超过一定限度,浓度再增加,运输也不浓度成正比。如超过一定限度,浓度再增加,运输也不再增加。因膜上载体蛋白的结合位点已达饱和。再增加。因膜上载体蛋白的结合位点已达饱和。比较不同分子的比较不同分子的KmKm值,可以发现不同载体蛋白对溶质的亲值,可以发现不同载体蛋白对溶质的亲和性不同。和性不同。实验还发现,不同的载体蛋白具有的转运特异性溶质的偏实验还发现,不同的载体蛋白具有的转运特异性溶质的偏好性。好性。(三三)协助扩散协助扩散第23页,讲稿共50张,创作于星期二、主动运输、主动运输定义:是由载体蛋白所介导的物质逆浓度梯度或电化学梯度由浓度定义:是由载体蛋白
22、所介导的物质逆浓度梯度或电化学梯度由浓度低的一侧向高浓度的一侧进行跨膜转运的方式。低的一侧向高浓度的一侧进行跨膜转运的方式。类型(根据能量来源):类型(根据能量来源):ATP直接供能直接供能(ATP驱动泵驱动泵)、ATP间接提供能间接提供能量量(耦联转运蛋白耦联转运蛋白)、光能驱动、光能驱动 Fig.Fig.驱动主动运输的三种类型驱动主动运输的三种类型第24页,讲稿共50张,创作于星期二Fig.NaFig.Na+-K-K+泵的结构与工作模式示意图泵的结构与工作模式示意图1.由由ATP直接提供能量的主动运输直接提供能量的主动运输钠钾泵钠钾泵ATPATP催化位点催化位点结构:结构:(MW=120,
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