《基因工程的基本操作程序》.doc

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1、 . . . . 基因工程的基本操作程序教学目标1.简述基因工程原理与基本操作程序。2.尝试设计某一转基因生物的研制过程。3.培养学生探索科学的严谨态度教学重难点教学重点 基因工程基本操作程序的四个步骤。教学难点（1）从基因文库中获取目的基因。（2）利用PCR技术扩增目的基因。教学工具多媒体教学过程复习提问：1.DNA重组技术的基本工具有那些，各自的作用和特点是什么？2.我们所学过的育种方法有那些？其中基因工程育种有那些优点？导入：通过基因工程的概念我们可知,我们能够应用DNA重组技术和转基因技术赋予生物以新的遗传特征，但是无论是DNA重组技术还是转基因技术都需要找到对我们有利的目的基因，我们

2、该如何去寻找目的基因哪，目的基因又将如何连接到载体上哪，以与如何将载体导入受体？这些都是我们所要共同探究的问题!现在让我们共同学习一下1.2基因工程的基本操作。思考1.我们在前面提到的云芽孢杆菌中的抗虫基因、胰岛素基因、干扰素基因等都可以作目的基因。可是要在浩瀚的“基因海洋”中，找到特定的目的基因可以用什么样的方法和途径呢？2、基因工程的基本操作程序主要包括： 、 、 新课教学：基因工程的基本操作步骤主要包括：目的基因的获取；基因表达载体的构建；将目的基因导入受体细胞；目的基因的检测与鉴定。一目的基因的获取1目的基因：主要是指编码蛋白质的结构基因。2目的基因的获取方法：（1）从基因文库中获取基

3、因文库：将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因。构建基因文库的目的：为了在不知目的基因序列的情况下，便于获得所需的目的基因。基因组文库：含有一种生物的所有基因。部分基因文库（如cDNA文库）：含部分基因，可由mRNA反转录而来。（2）利用PCR技术扩增目的基因PCR：是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。原理：DNA双链复制原料：模板DNA；RNA引物；四种脱氧核苷酸；热稳定DNA聚合酶（Taq酶）；离子方法：DNA受热变性解旋为单链、冷却后RNA引物与单链相应互补序列结合、DNA聚合酶作用下延伸合成互补链。特点：指数形

4、式扩增二基因表达载体的构建1目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在；可以遗传给下一代；使目的基因能够表达和发挥作用。 目的基因：2基因表达 启动子：位于基因首端，RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动转录基因载体的组成 终止子：位于基因尾端，使转录在所需要的地方停下来 标记基因：鉴别受体细胞中是否含有目的基因3方法：同种限制酶分别切割载体和目的基因，再用DNA连接酶把两者连接。目的基因与运载体结合（以质粒为运载体）4条件：同种限制酶、DNA连接酶、ATP（目的基因、启动子、终止子、标记基因）三将目的基因导入受体细胞 转化：目的基因进入受体细胞，并且在受体细胞维持稳定和表达的过程。 导入植物细胞：农杆

5、菌转化法（表达载体导入农杆菌，再让农杆菌感染植物细胞）将目的基因导入受体细胞导入动物细胞：显微注射法（将基因表达载体提纯，用显微仪注射到受精卵中）导入微生物细胞：Ca2处理受体细胞成为感受态细胞，再进行混合。提示：农杆菌转化法的原理是利用农杆菌（胞寄生菌）对植物的感染而把目的基因导入受体细胞。四目的基因的检测和鉴定检测是否插入目的基因，利用DNA分子杂交技术，目的基因DNA一条链（作探针）与受体细胞中提取的DNA杂交，看是否有杂交带。检测是否转录出了mRNA，利用DNA分子杂交技术，目的基因DNA一条链（作探针）与受体细胞中提取的mRNA杂交，看是否有杂交带。检测目的基因是否翻译成蛋白质。抗体

6、与蛋白质进行抗原抗体杂交，看是否有杂交带。还可以进行个体水平的鉴定，根据其性状。提示：DNA分子杂交技术首先提取受体细胞中的DNA，然后高温解成单链，再与同位素标记的DNA探针杂交；抗原抗体杂交所用到的抗体是用表达出的蛋白质注射动物进行免疫，产生相应的抗体，并提取出而来的。将目的基因导入受体细胞课后小结本节学习的基因工程的基本操作程序和方法是对转基因植物、动物、微生物的概括。如果在本课将要完毕时，做个练习，带领学生结合设计某一转基因生物的具体过程，可将基因工程操作程序有机地串起来，从而加深对这一程序的认识。例如，烟草是人类健康的“杀手”。如果让它生产出人类需要的药物蛋白，应如何操作？通过这一实

7、例引导学生结合目的基因从何而来，表达载体如何构建，如何导入烟草，如何检测药物蛋白产生与否等问题加以设计。可加深学生对基因工程原理的理解。不同学生会有不同的方法，让学生通过相互比较，相互借鉴，达到相互学习的目的。学生在课下还可查阅科学杂志等参考读物，了解科学家成功的做法。课后习题1基因工程的正确操作步骤是()使目的基因与载体相结合将目的基因导入受体细胞验证目的基因的表达是否符合特定性状要求提取目的基因A BC D解析：选C。在基因工程操作中，首先要提取目的基因，然后使目的基因与载体结合，再将目的基因导入受体细胞，最后是目的基因的检测与表达。2以下获取目的基因的方法中需要模板的是()从基因文库中获

8、取目的基因利用PCR技术扩增目的基因反转录法通过DNA合成仪利用化学方法人工合成DNAA BC D解析：选D。PCR技术利用的是DNA双链复制原理。即将DNA双链之间的氢键打开，变成单链DNA，作为聚合反应的模板。反转录法是以目的基因转录成的信使RNA为模板，在逆转录酶的作用下，先反转录形成互补的单链DNA，再合成双链DNA。则均不需要模板。3聚合酶链式反应(PCR)是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。PCR过程一般经历下述30多次循环：95下使模板DNA变性、解链55 下复性(引物与DNA模板链结合)72下引物链延伸(形成新的脱氧核苷酸链)。以下有关PCR过程的表达中不正确的是()A变性过程

9、中破坏的是DNA分子碱基对之间的氢键，也可利用解旋酶实现B复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成C延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP、四种核糖核苷酸DPCR与细胞DNA复制相比所需酶的最适温度较高解析：选C。此题考查PCR扩增过程。解题的关键是要全面理解PCR扩增过程。DNA分子被破坏是指DNA分子被解旋成两条长链，破坏的部位是连接两条长链之间的氢键，方法有多种，用解旋酶、高温等都可使DNA解旋。B项中引物有两种，分别与模板DNA链3端的互补序列互补配对。C项中的原料不正确，合成DNA的原料是四种脱氧核苷酸。PCR技术中DNA合成过程中的温度在7075。板书1.2 基因工程的基本操作程序一、 目的基因的获取二、基因表达载体的构建（基因工程的核心）三、将目的基因导入受体细胞四、目的基因的检测和鉴定5 / 5