化学发光原理以及应用.ppt

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1、关于化学发光原理及应用第一张，PPT共三十六页，创作于2022年6月主要内容主要内容n n化学发光基本原理化学发光基本原理n n化学发光的分类化学发光的分类n n化学发光法的临床应用n n化学发光免疫测定的特点化学发光免疫测定的特点第二张，PPT共三十六页，创作于2022年6月Part I.化学发光基本原理化学发光基本原理一、化学发光原理一、化学发光原理：伴随化学反应的光发射现象：伴随化学反应的光发射现象：伴随化学反应的光发射现象：伴随化学反应的光发射现象 某些物质在进行化学反应过程中，由于吸收了反应产生的化化学学能能而被激发，从激发态返回基态时，发射出一定波长的光，这种吸收化学能使分子发光的

2、过程称为化化学学发发光光(chemiluminescence)。化学发光反应存在于生物体(萤火虫、海洋发光生物)中，称生生物物发发光光(bioluminescence)。生物发光的本质是化学发光生物发光的本质是化学发光第三张，PPT共三十六页，创作于2022年6月1877年年 洛粉碱洛粉碱CLCL19051905年年年年 洛粉碱类似物洛粉碱类似物洛粉碱类似物洛粉碱类似物19281928年年年年 鲁米诺鲁米诺鲁米诺鲁米诺19351935年年年年 光泽精光泽精光泽精光泽精 发现许多有机反应可产生发现许多有机反应可产生CLCL 生物体化学发光现象的研究起源于古代，但是，生物体化学发光现象的研究起源于

3、古代，但是，生物体化学发光现象的研究起源于古代，但是，生物体化学发光现象的研究起源于古代，但是，直到十九世纪末，这种现象与简单的有机反应相联系直到十九世纪末，这种现象与简单的有机反应相联系直到十九世纪末，这种现象与简单的有机反应相联系直到十九世纪末，这种现象与简单的有机反应相联系才得到解释。才得到解释。才得到解释。才得到解释。第四张，PPT共三十六页，创作于2022年6月二、化学发光反应发生的条件二、化学发光反应发生的条件化学反应是放热反应。化学反应是放热反应。必须存在形成电子激发态的通道。必须存在形成电子激发态的通道。激发态分子必须以辐射光子的形式回到激发态分子必须以辐射光子的形式回到 基态

4、基态,或将能量传递给荧光分子。或将能量传递给荧光分子。能量，通道，荧光物质能量，通道，荧光物质第五张，PPT共三十六页，创作于2022年6月北京源德化学发光分析仪第六张，PPT共三十六页，创作于2022年6月MAGLUMI 化学发光分析仪第七张，PPT共三十六页，创作于2022年6月Part.化学发光的分类n n按化学反应类型可分为：酶促化学发光和非酶促化学发光两类n n按发光持续时间可分为：闪光和辉光两类第八张，PPT共三十六页，创作于2022年6月Part III.化学发光法的临床应用化学发光法的临床应用n n 甲状腺功能的免疫分析甲状腺功能的免疫分析n n 糖代谢紊乱的免疫分析糖代谢紊乱

5、的免疫分析n n 常见肿瘤标志物及其免疫分析常见肿瘤标志物及其免疫分析n n 常见传染性疾病的免疫检测常见传染性疾病的免疫检测n n病毒性肝炎病毒性肝炎病毒性肝炎病毒性肝炎n nHIVHIV感染感染感染感染n n严重急性呼吸综合征（严重急性呼吸综合征（严重急性呼吸综合征（严重急性呼吸综合征（SARS)SARS)n n其他免疫检测项目其他免疫检测项目第九张，PPT共三十六页，创作于2022年6月甲状腺功能的免疫分析n n甲状腺机能的常见评价指标及其临床意义 1.甲状腺机能亢进 2.甲状腺功能减退 3.低T3和低T3、T4综合征 第十张，PPT共三十六页，创作于2022年6月一、甲状腺机能亢进 1

6、9721972年提出年提出T3T3型甲亢的诊断标准：型甲亢的诊断标准：1.1.甲亢的症状和体征，常无突眼征，但心血管症状较明显；甲亢的症状和体征，常无突眼征，但心血管症状较明显；2.2.血清血清TT4TT4、FT4FT4值正常；值正常；3.TT33.TT3、FT3FT3值升高；值升高；T3T3型甲亢在临床上并非罕见，特别是缺碘地区患功能自主型甲亢在临床上并非罕见，特别是缺碘地区患功能自主性腺瘤的部分患者，或用性腺瘤的部分患者，或用T3T3治疗后出现的碘甲亢，目前认为治疗后出现的碘甲亢，目前认为T3T3型甲亢不能算作一种独立疾病，因为发现型甲亢不能算作一种独立疾病，因为发现T3T3型甲亢病人中有

7、一部分型甲亢病人中有一部分虽然虽然TT3TT3升高但升高但FT3FT3正常或低于正常，因此改称高正常或低于正常，因此改称高T3T3综合征为妥。综合征为妥。T4T4型甲亢，即型甲亢，即T4T4毒症患者血清毒症患者血清T3T3、FT3FT3浓度正常；而浓度正常；而T4T4、FT4FT4浓浓度升高。度升高。TSHTSH值为正常低值或低于正常，并伴甲亢临床症状。值为正常低值或低于正常，并伴甲亢临床症状。第十一张，PPT共三十六页，创作于2022年6月二、甲状腺功能减退n n甲减为甲状腺激素分泌不足引起的代谢性疾病。临床上分为原发性甲减，又称魏甲状腺性甲减；以及继发性甲减，又称垂体-下丘脑甲减两类。血循

8、环中甲状腺激素浓度的测定在诊断甲减方面，TSHTSH和FT3FT3、FT4FT4是灵敏的诊断指标，明显优于总甲状腺激素，如是灵敏的诊断指标，明显优于总甲状腺激素，如TT3TT3、TT4TT4等。其价值依次为等。其价值依次为TSH=FT4TT4FT3TT3.TSH=FT4TT4FT3TT3.第十二张，PPT共三十六页，创作于2022年6月三、低T3和低T3、T4综合征n n低低T3T3综合征是一种由于非甲状腺疾病综合征是一种由于非甲状腺疾病 造成的甲状腺激造成的甲状腺激素异常，其发生与机体的代谢状态，基础疾病的性质和素异常，其发生与机体的代谢状态，基础疾病的性质和严重程度以及外来因素，如用药等有

9、关。代谢状态差、严重程度以及外来因素，如用药等有关。代谢状态差、基础病情加重时其发生率随之增高；当病情好转、机体基础病情加重时其发生率随之增高；当病情好转、机体健康状况趋于正常时，低健康状况趋于正常时，低T3T3状态可自行消失。状态可自行消失。第十三张，PPT共三十六页，创作于2022年6月四、其他与甲状腺疾病有关的免疫学指标n n抗甲状腺球蛋白抗体（TGAb）多见于桥本氏甲状腺炎、自身免疫性甲状腺疾病、原发性甲状腺功能减退、甲状腺功能亢进患者等。n n抗甲状腺微粒体抗体（TMAb）多见于桥本氏甲状腺炎、自身免疫性甲状腺疾病、原发性甲状腺功能亢进、原发性甲状腺功能减退。第十四张，PPT共三十六

10、页，创作于2022年6月小结n n综上所述，若对甲状腺功能 指标进行全面评价，则上述各项指标对甲亢的诊断价值依次为FT3FT4TT3TT4；各项指标对甲减的诊断价值依次为FT4=TSHTT4FT3TT3第十五张，PPT共三十六页，创作于2022年6月二、糖尿病的免疫学检测 以下是临床上常见的有关糖代谢紊乱的免疫分析指标：1.C肽 2.胰岛素 3.胰岛素抗体 4.谷氨酸脱羧酶抗体（GAD-Ab）5.胰高血糖素第十六张，PPT共三十六页，创作于2022年6月C肽 C C肽测定用于了解肽测定用于了解II II型糖尿病人是否需要胰岛素治疗，如果型糖尿病人是否需要胰岛素治疗，如果C C肽水肽水平较低，葡

11、萄糖刺激反应差，则表示表明立即或最终需要胰岛素治疗，平较低，葡萄糖刺激反应差，则表示表明立即或最终需要胰岛素治疗，也可用于评价糖尿病酮症酸中毒病人的胰岛功能。也可用于评价糖尿病酮症酸中毒病人的胰岛功能。C C肽的另一个重要肽的另一个重要的临床用途是各种低血糖病因的鉴别。的临床用途是各种低血糖病因的鉴别。C C肽水平升高科见于轻型肽水平升高科见于轻型糖尿病患者，常见空腹血糖升高不多者糖尿病患者，常见空腹血糖升高不多者C C肽大多高于正常。胰肽大多高于正常。胰岛素瘤患者，如血中存在胰岛素抗体，血清岛素瘤患者，如血中存在胰岛素抗体，血清C C肽大都增高。胰腺肽大都增高。胰腺肿瘤患者行胰腺切除后，如血

12、清肿瘤患者行胰腺切除后，如血清C C肽仍可测出，提示手术未能肽仍可测出，提示手术未能全部切除胰腺组织。如果手术后一度阴性，后又称为阳性，全部切除胰腺组织。如果手术后一度阴性，后又称为阳性，提示肿瘤复发或转移。提示肿瘤复发或转移。在肝硬化时，血浆胰岛素有升高趋势，其原因在于肝脏摄取在肝硬化时，血浆胰岛素有升高趋势，其原因在于肝脏摄取和降解胰岛素减少；但空腹血糖正常。和降解胰岛素减少；但空腹血糖正常。第十七张，PPT共三十六页，创作于2022年6月胰岛素 胰岛素在糖尿病的分型和诊断中意义重大，其中胰岛素在糖尿病的分型和诊断中意义重大，其中 I型又称胰岛素依赖型糖尿病（IDDMIDDM），空腹血浆胰

13、岛素），空腹血浆胰岛素较低，口服葡糖糖试验（较低，口服葡糖糖试验（OGTT)或馒头餐后上升及下或馒头餐后上升及下降极缓慢，甚至无任何变化，说明其胰岛降极缓慢，甚至无任何变化，说明其胰岛 细胞功能极细胞功能极差。差。II型又称非胰岛素依赖型糖尿病（型又称非胰岛素依赖型糖尿病（NIDDM），包括），包括需胰岛素治疗和不需胰岛素治疗两类，其特点为空腹高胰需胰岛素治疗和不需胰岛素治疗两类，其特点为空腹高胰岛素血症；岛素血症；OGTTOGTT后胰岛素释放延迟，高峰后移，但总释放量不低，约12%12%的病人呈低反应或延迟反应说的病人呈低反应或延迟反应说明明II II型糖尿病和I I型糖尿病有本质的区别。型

14、糖尿病有本质的区别。另外胰岛素对肝病、胰岛素瘤、甲状腺功能亢进的诊另外胰岛素对肝病、胰岛素瘤、甲状腺功能亢进的诊断也有一定的意义。断也有一定的意义。第十八张，PPT共三十六页，创作于2022年6月常见肿瘤标志物及其检测n n胚胎性肿瘤标志物n n含糖物质类标志物n n酶类标志物n n激素类标志物第十九张，PPT共三十六页，创作于2022年6月胚胎性肿瘤标志物n n这一类肿瘤标志物是指那些原本只能在胎盘期出现，但在机体发生肿瘤时，其基因表达被再度激活，从而重新再成年个体出现的蛋白，其常见的检测标志如下：第二十张，PPT共三十六页，创作于2022年6月CEAn n原发性结肠癌，患者原发性结肠癌，患

15、者CEACEA升高者占升高者占45-90%.45-90%.n n胰腺癌、胆管癌、胃癌、食道癌、肺癌、乳腺癌和泌尿系肿瘤，胰腺癌、胆管癌、胃癌、食道癌、肺癌、乳腺癌和泌尿系肿瘤，阳性率阳性率50-70%50-70%。n n结肠癌患者手术切除后结肠癌患者手术切除后1-31-3周内血中周内血中CEACEA水平可降至正常水平。水平可降至正常水平。如术后如术后CEACEA持续阳性，说明手术切除不完全或癌肿发生转移，持续阳性，说明手术切除不完全或癌肿发生转移，提示病人预后较差或者有复发的可能。提示病人预后较差或者有复发的可能。n n良性肿瘤、炎症和退行性疾病，如结肠息肉、溃疡性结肠炎、良性肿瘤、炎症和退行

16、性疾病，如结肠息肉、溃疡性结肠炎、胰腺炎盒酒精性肝硬变病人胰腺炎盒酒精性肝硬变病人CEACEA也有部分升高，但远远低于恶性也有部分升高，但远远低于恶性肿瘤，一般小于肿瘤，一般小于2020 g/L.g/L.所以测定所以测定CEACEA可作为良性与恶性肿瘤的鉴可作为良性与恶性肿瘤的鉴别诊断依据。别诊断依据。n n吸烟也可能导致吸烟也可能导致CEACEA升高。升高。第二十一张，PPT共三十六页，创作于2022年6月AFPn n原发性肝癌：原发性肝癌：AFPAFP作为原发性肝癌重要指标之一，特异性强，灵敏度高。因此AFP为十分有价值的临床检为十分有价值的临床检查及普查项目，阳性率达查及普查项目，阳性率

17、达90%90%。血清含量大于。血清含量大于400400 g/Lg/L作为原发性肝癌的诊断阈值。n n孕妇血清孕妇血清AFPAFP与胎儿状态与胎儿状态 当胎儿患低氧症、宫内死亡、遗传缺陷、先天性神经管当胎儿患低氧症、宫内死亡、遗传缺陷、先天性神经管畸形、无脑儿、脊柱裂等，母体血清畸形、无脑儿、脊柱裂等，母体血清AFP异常增高。异常增高。n n其他肿瘤其他肿瘤 有报道指出，有报道指出，68%-92%68%-92%卵黄囊肿瘤患者血卵黄囊肿瘤患者血清清AFPAFP上升第二十二张，PPT共三十六页，创作于2022年6月含糖物质类标志物n nCA125 CA125 是上皮性卵巢癌和子宫内膜癌的标志物是上皮

18、性卵巢癌和子宫内膜癌的标志物n nCA153 CA153 存在于多种腺癌内，如乳腺癌、肺癌、肺胰癌及卵巢癌存在于多种腺癌内，如乳腺癌、肺癌、肺胰癌及卵巢癌等，是检测乳腺癌比较重要的抗原等，是检测乳腺癌比较重要的抗原n nCA199 CA199 通常作为胰腺癌和结、直肠癌的标志物通常作为胰腺癌和结、直肠癌的标志物n nCA50 CA50 是胰腺和结、直肠癌的标志物是胰腺和结、直肠癌的标志物n nCA72-4 CA72-4 其检测结果与其检测结果与CEACEA有互补作用，可用于检测原发性乳癌、有互补作用，可用于检测原发性乳癌、胃癌、直结肠癌以及卵巢癌患者残余肿瘤细胞，可与胃癌、直结肠癌以及卵巢癌患

19、者残余肿瘤细胞，可与CA-125CA-125联合用联合用于卵巢肿瘤的诊断及复发检测，可与于卵巢肿瘤的诊断及复发检测，可与CA-199CA-199联合应用于胃癌的诊联合应用于胃癌的诊断以提高阳性率，也可用于胃癌术后监测早期复发。断以提高阳性率，也可用于胃癌术后监测早期复发。n nCA242 CA242 可用于胃肠道恶性肿瘤病人的治疗监控和复发检测。可用于胃肠道恶性肿瘤病人的治疗监控和复发检测。第二十三张，PPT共三十六页，创作于2022年6月酶类标志物n n前列腺特异性抗原 PSA是前列腺癌的特异性标志物，也是目前少数几个器官特异性肿瘤标志物之一。前列腺癌是男性泌尿系统的主要囊性肿瘤，血清PSA

20、定量测定的阳性临界值大于10g/L,此时前列腺癌的诊断特异性达90-97%。n n神经元特异性烯醇化酶（NSE）对小细胞肺癌的诊断，鉴别诊断、病情判断及疗效的估计都有实际的意义。第二十四张，PPT共三十六页，创作于2022年6月激素类标志物n n降钙素降钙素 ：（：（1 1）甲状腺髓样癌）甲状腺髓样癌 此种癌起源于甲状腺滤此种癌起源于甲状腺滤泡旁细胞，可产生多种生物活性物质，其中以降钙素泡旁细胞，可产生多种生物活性物质，其中以降钙素为主，患者血清降钙素水平高于正常数十到数百倍。为主，患者血清降钙素水平高于正常数十到数百倍。（2）肺小细胞癌）肺小细胞癌n n人绒毛膜促性腺激素（人绒毛膜促性腺激素

21、（HCGHCG）HCGHCG测定对葡萄胎、绒癌的诊断和化疗后的疗效观察，以测定对葡萄胎、绒癌的诊断和化疗后的疗效观察，以及葡萄胎终止后的随访有重大意义，一般而言，良性葡萄及葡萄胎终止后的随访有重大意义，一般而言，良性葡萄胎、恶性葡萄胎、绒癌治疗前胎、恶性葡萄胎、绒癌治疗前HCG均增高，其升高顺序均增高，其升高顺序为：绒癌为：绒癌 恶性葡萄胎恶性葡萄胎 良性葡萄胎。第二十五张，PPT共三十六页，创作于2022年6月常见传染性疾病的免疫检测n n病毒性肝炎n nHIV感染及艾滋病（AIDS）n n严重急性呼吸综合征第二十六张，PPT共三十六页，创作于2022年6月病毒性肝炎n n甲型病毒性肝炎甲型

22、病毒性肝炎 通过粪通过粪-口途径传播引起的急性传染性口途径传播引起的急性传染性肝炎，目前尚未发现有慢性病例。肝炎，目前尚未发现有慢性病例。n n乙型病毒性肝炎乙型病毒性肝炎 是由乙型肝炎病毒（是由乙型肝炎病毒（HBVHBV）引起的肝脏炎性损害，是我国当前流行最广泛、危害最严重的一种转染病。乙肝常见免疫学指标有：A、潜伏期,HBsAg,HBsAg阳性或伴有乙肝病毒脱氧核糖核酸聚合酶阳性或伴有乙肝病毒脱氧核糖核酸聚合酶(HBVDNAP)(HBVDNAP)和和HBsAgHBsAg阳性。阳性。B B、急性期，HBsAg，HBeAg,HBcAg,HBV-DNA,HBVDNAP，前，前S蛋白均可阳蛋白均可

23、阳性。性。第二十七张，PPT共三十六页，创作于2022年6月乙肝定量检测的方法及其优点 a.a.检测方法：目前有时间分辨，荧光定量检测方法：目前有时间分辨，荧光定量PCRPCR定量检测，化学发光法。定量检测，化学发光法。由于乙肝病毒容易发生变异，再加上乙肝定性实验的局限性，会出现假阴性结果，由于乙肝病毒容易发生变异，再加上乙肝定性实验的局限性，会出现假阴性结果，导致不能及时发现乙肝的感染，也就不能及时的得到治疗，对医护人员和其他的导致不能及时发现乙肝的感染，也就不能及时的得到治疗，对医护人员和其他的患者也存在被传染的威胁。乙肝五项定量检测目前最先进的化学发光法，避免了患者也存在被传染的威胁。乙

24、肝五项定量检测目前最先进的化学发光法，避免了假阴性和漏检的问题，而且准确，尤其对乙肝病人的疗效观察提供了依据，这是假阴性和漏检的问题，而且准确，尤其对乙肝病人的疗效观察提供了依据，这是检验发展的趋势。检验发展的趋势。n n乙肝五项定量检测的独特优点：乙肝五项定量检测的独特优点：一、对于乙肝患者而言：一、对于乙肝患者而言：1 1、通过定量检测、通过定量检测乙肝标志物，能直观地显示体内五项指标的具体情况，不再是简单的乙肝标志物，能直观地显示体内五项指标的具体情况，不再是简单的“阴性阴性”和和“阳性阳性”，有利于动态观察病情，为选择治疗方案提供重要依据；，有利于动态观察病情，为选择治疗方案提供重要依

25、据；2 2、定量检测、定量检测方法更灵敏，能测出低水平复制的样本，特别是方法更灵敏，能测出低水平复制的样本，特别是“窗口期窗口期”的感染者，的感染者，定量检测法可以有效检出，能减少漏诊；定量检测法可以有效检出，能减少漏诊；3 3、定量检测的测定范围更宽，定、定量检测的测定范围更宽，定性检测时候，高浓度的乙肝表面抗原样本需要稀释，否则会有假阴性出现，但是，性检测时候，高浓度的乙肝表面抗原样本需要稀释，否则会有假阴性出现，但是，定量检测能有效检出高浓度的乙肝表面抗原样本。定量检测能有效检出高浓度的乙肝表面抗原样本。二、对正常体检者而言：二、对正常体检者而言：1 1、可反映可反映HBV-HBV-抗体

26、的浓度变化，有利于对机体免疫状况进行评估，对注射乙肝抗体的浓度变化，有利于对机体免疫状况进行评估，对注射乙肝疫苗有指导意义。疫苗有指导意义。第二十八张，PPT共三十六页，创作于2022年6月几种常见的乙肝模式第二十九张，PPT共三十六页，创作于2022年6月几种少见模式第三十张，PPT共三十六页，创作于2022年6月病毒性肝炎n n丙型病毒性肝炎 是由丙型肝炎即HCV感染所致。其传播途径与乙肝类似，主要包括血液传播、性接触传播、母婴传播、日常生活接触等。第三十一张，PPT共三十六页，创作于2022年6月其他检测项目n n临床常见药物的浓度检测临床常见药物的浓度检测 1.1.抗心甙类：西地兰、地

27、高辛、洋地黄毒等；抗心甙类：西地兰、地高辛、洋地黄毒等；2.2.抗癫痫药：苯妥英、苯巴比妥、酰胺咪嗪、乙琥胺等；抗癫痫药：苯妥英、苯巴比妥、酰胺咪嗪、乙琥胺等；3.3.三环类抗抑郁药：丙咪嗪、去甲丙咪嗪、去甲替林、阿米替林、多虑平等；三环类抗抑郁药：丙咪嗪、去甲丙咪嗪、去甲替林、阿米替林、多虑平等；4.4.茶碱：氨茶碱；茶碱：氨茶碱；5.5.抗心律失常药；抗心律失常药；6.6.氨基甙类抗生素：链霉素、庆大霉素、卡那霉素、丁胺卡那霉素；氨基甙类抗生素：链霉素、庆大霉素、卡那霉素、丁胺卡那霉素；7.7.环孢素环孢素A A。n n肾上腺激素：儿茶酚胺类激素等肾上腺激素：儿茶酚胺类激素等n n性激素测

28、定：促黄体生成素、卵泡刺激素、垂体泌乳素、睾酮、孕酮、雌二醇。性激素测定：促黄体生成素、卵泡刺激素、垂体泌乳素、睾酮、孕酮、雌二醇。n n内分泌免疫分析：腺垂体激素、生长激素、促肾上腺皮质激素等。内分泌免疫分析：腺垂体激素、生长激素、促肾上腺皮质激素等。第三十二张，PPT共三十六页，创作于2022年6月Part.Part.化学发光免疫检测的特点化学发光免疫检测的特点n n敏感度高，甚至超过RIAn n精密度和准确性均可与RIA相比n n试剂稳定，无毒害n n测定耗时短n n发展成自动化系统第三十三张，PPT共三十六页，创作于2022年6月n n有专家做过试验，用化学发光法和放射免疫法同时测有专

29、家做过试验，用化学发光法和放射免疫法同时测定定6060例甲胎蛋白（例甲胎蛋白（AFPAFP）含量，结果表明，两种方法的相关性良好（=0.995=0.995），但化学发光免疫法的精密度和准确性均优于放射免疫法。另外，化学发光免疫技术具有发光检测的高度敏感性，又具有免疫分析的高度特异性，化学发光试剂作为标记物进行定量检测，其试剂具有稳定性高和无毒性等优点，可缩短测定时间，能满足临床的要求，化学发光标记物已广泛用于抗原、半抗原、抗体的检测。n n免疫学技术的迅速发展对精密度的要求越来越高，一般的免疫学技术的迅速发展对精密度的要求越来越高，一般的酶免技术已逐渐无法适应形势需求。发光免疫技术酶免技术已逐渐无法适应形势需求。发光免疫技术70年年以来得到快速发展，国际上已实现商品化，可以分为化学以来得到快速发展，国际上已实现商品化，可以分为化学发光、电化学发光等。发光、电化学发光等。第三十四张，PPT共三十六页，创作于2022年6月谢谢！谢谢！第三十五张，PPT共三十六页，创作于2022年6月感感谢谢大大家家观观看看2022/9/17第三十六张，PPT共三十六页，创作于2022年6月