菊花组织培养 (2)精选PPT.ppt

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1、关于菊花组织培养关于菊花组织培养关于菊花组织培养关于菊花组织培养 (2)(2)第1页，讲稿共91张，创作于星期三课题背景课题背景植物细胞或组织，发育成完整植物细胞或组织，发育成完整植株，需要什么条件？植株，需要什么条件？什么叫植物细胞的全能性什么叫植物细胞的全能性？（1 1）概念）概念：具有某种生物全部遗传信息具有某种生物全部遗传信息的的任何一个细胞任何一个细胞，具有发，具有发育成完整个体的潜能。育成完整个体的潜能。.植物细胞全能性表现的条件：植物细胞全能性表现的条件：离体、适宜营养、一定比例的激素、离体、适宜营养、一定比例的激素、无菌条件、适宜温度、光照无菌条件、适宜温度、光照当植物细胞，脱

2、离了原来所在的植物体的器官或组织，而处于当植物细胞，脱离了原来所在的植物体的器官或组织，而处于离体离体状态状态时，在一定的时，在一定的营养物质营养物质、激素激素和和其它外界条件其它外界条件的作用下，就可能的作用下，就可能表现出全能性，发育成表现出全能性，发育成完整植株完整植株。.植物细胞具有全能性植物细胞具有全能性（3 3）过程机理：过程机理：过程机理：过程机理：在特定条件刺激下，在特定的时间和空间里，在特定条件刺激下，在特定的时间和空间里，在特定条件刺激下，在特定的时间和空间里，在特定条件刺激下，在特定的时间和空间里，基因基因基因基因（遗传信息）（遗传信息）（遗传信息）（遗传信息）选择性地表

3、达选择性地表达选择性地表达选择性地表达出了特定的出了特定的出了特定的出了特定的结构和功能蛋白结构和功能蛋白结构和功能蛋白结构和功能蛋白。（2 2）原因）原因：细胞内，含有：细胞内，含有某种生物全部遗传信息某种生物全部遗传信息第2页，讲稿共91张，创作于星期三植物细胞全能性的表现为什么一植物细胞全能性的表现为什么一定需要离体条件？定需要离体条件？（一）植物组织培养的过程：（一）植物组织培养的过程：、细胞的分化、细胞的分化、细胞的分化、细胞的分化（必修（必修（必修（必修1 1 1 1第第第第117117117117118118118118页）页）页）页）（1 1 1 1）概念：）概念：）概念：）概

4、念：在植物的个体发育过程中，由一个或一种细胞增殖的后代，在植物的个体发育过程中，由一个或一种细胞增殖的后代，在植物的个体发育过程中，由一个或一种细胞增殖的后代，在植物的个体发育过程中，由一个或一种细胞增殖的后代，在形态、结构、生理功能上发生稳定性差异的过程。在形态、结构、生理功能上发生稳定性差异的过程。在形态、结构、生理功能上发生稳定性差异的过程。在形态、结构、生理功能上发生稳定性差异的过程。（3 3 3 3）机理：）机理：）机理：）机理：（2 2 2 2）过程：）过程：）过程：）过程：受精卵增殖、生长、分化形成组织、器官、系统受精卵增殖、生长、分化形成组织、器官、系统受精卵增殖、生长、分化形

5、成组织、器官、系统受精卵增殖、生长、分化形成组织、器官、系统基因基因基因基因在特定的时间和空间里，在特定的时间和空间里，在特定的时间和空间里，在特定的时间和空间里，选择性地表达选择性地表达选择性地表达选择性地表达出了特定出了特定出了特定出了特定结结结结构和功能构和功能构和功能构和功能的的的的蛋白质蛋白质蛋白质蛋白质。基因表达的程序基因表达的程序基因表达的程序基因表达的程序，在个体发育的，在个体发育的，在个体发育的，在个体发育的很早时期很早时期很早时期很早时期，就已经预定下来，由于机体各，就已经预定下来，由于机体各，就已经预定下来，由于机体各，就已经预定下来，由于机体各部位间分工协作的需要，原预

6、定程序是不可更改的。所以，在生物体部位间分工协作的需要，原预定程序是不可更改的。所以，在生物体部位间分工协作的需要，原预定程序是不可更改的。所以，在生物体部位间分工协作的需要，原预定程序是不可更改的。所以，在生物体内，已经分化的细胞是不可能表现出全能性的。内，已经分化的细胞是不可能表现出全能性的。内，已经分化的细胞是不可能表现出全能性的。内，已经分化的细胞是不可能表现出全能性的。即在个体发育的不同时期，生物体不同部位的细胞表达的即在个体发育的不同时期，生物体不同部位的细胞表达的即在个体发育的不同时期，生物体不同部位的细胞表达的即在个体发育的不同时期，生物体不同部位的细胞表达的基因不同，合成了不

7、一样的蛋白质。基因不同，合成了不一样的蛋白质。基因不同，合成了不一样的蛋白质。基因不同，合成了不一样的蛋白质。第3页，讲稿共91张，创作于星期三（4 4 4 4）细胞分化的特点：）细胞分化的特点：）细胞分化的特点：）细胞分化的特点：持久性：持久性：持久性：持久性：细胞分化细胞分化细胞分化细胞分化是一种持久性的变化是一种持久性的变化是一种持久性的变化是一种持久性的变化，一般来说，分化了的细胞将，一般来说，分化了的细胞将，一般来说，分化了的细胞将，一般来说，分化了的细胞将一直保持分化后的状态，直到死亡。一直保持分化后的状态，直到死亡。一直保持分化后的状态，直到死亡。一直保持分化后的状态，直到死亡。

8、普遍性：普遍性：普遍性：普遍性：由于不同生物细胞分化的机理是大致相同的，所以细由于不同生物细胞分化的机理是大致相同的，所以细由于不同生物细胞分化的机理是大致相同的，所以细由于不同生物细胞分化的机理是大致相同的，所以细胞分化现象，在具细胞结构的生物体内是一种普遍存胞分化现象，在具细胞结构的生物体内是一种普遍存胞分化现象，在具细胞结构的生物体内是一种普遍存胞分化现象，在具细胞结构的生物体内是一种普遍存在的生理现象。在的生理现象。在的生理现象。在的生理现象。重要性：重要性：重要性：重要性：多细胞植物体的细胞分化，是建立在多细胞植物体的细胞分化，是建立在多细胞植物体的细胞分化，是建立在多细胞植物体的细

9、胞分化，是建立在有丝分裂有丝分裂有丝分裂有丝分裂基础上的，基础上的，基础上的，基础上的，如果只有细胞分裂，如果只有细胞分裂，如果只有细胞分裂，如果只有细胞分裂，细胞彼此一样细胞彼此一样细胞彼此一样细胞彼此一样，生物体的各部分之间，生物体的各部分之间，生物体的各部分之间，生物体的各部分之间，就就就就不能进行分工协作不能进行分工协作不能进行分工协作不能进行分工协作了。正是有了细胞分化，才使多细了。正是有了细胞分化，才使多细了。正是有了细胞分化，才使多细了。正是有了细胞分化，才使多细胞生物体中的细胞胞生物体中的细胞胞生物体中的细胞胞生物体中的细胞趋向专门化趋向专门化趋向专门化趋向专门化，才能，才能，

10、才能，才能提高了机体各种生理功提高了机体各种生理功提高了机体各种生理功提高了机体各种生理功能的效率。能的效率。能的效率。能的效率。全能性：全能性：全能性：全能性：多细胞植物内已分化细胞，尽管形态、结构和功能各异，多细胞植物内已分化细胞，尽管形态、结构和功能各异，多细胞植物内已分化细胞，尽管形态、结构和功能各异，多细胞植物内已分化细胞，尽管形态、结构和功能各异，但它们都由一个细胞（如受精卵）有丝分裂来的，细胞内但它们都由一个细胞（如受精卵）有丝分裂来的，细胞内但它们都由一个细胞（如受精卵）有丝分裂来的，细胞内但它们都由一个细胞（如受精卵）有丝分裂来的，细胞内仍保留着仍保留着仍保留着仍保留着某种某

11、种某种某种生物的全部遗传信息，仍具有发育成完整生物的全部遗传信息，仍具有发育成完整新个体的新个体的潜能潜能潜能潜能。第4页，讲稿共91张，创作于星期三2 2 2 2、植物组织培养的基本过程、植物组织培养的基本过程、植物组织培养的基本过程、植物组织培养的基本过程离体条件下，尽管有改变细胞内离体条件下，尽管有改变细胞内离体条件下，尽管有改变细胞内离体条件下，尽管有改变细胞内原来预定原来预定原来预定原来预定的基因选择性表达程序的可能，但要的基因选择性表达程序的可能，但要的基因选择性表达程序的可能，但要的基因选择性表达程序的可能，但要让让让让离体细胞发育成完整的植株，并不容易。离体细胞发育成完整的植株

12、，并不容易。离体细胞发育成完整的植株，并不容易。离体细胞发育成完整的植株，并不容易。离体的植物离体的植物组织或细胞组织或细胞外植体外植体有丝分裂有丝分裂脱分化脱分化愈伤愈伤组织组织长出丛芽长出丛芽生根生根移栽成活移栽成活长成植株长成植株再分化再分化第5页，讲稿共91张，创作于星期三外植体：外植体：从活植物体上切下，用于进行离体培养的植物从活植物体上切下，用于进行离体培养的植物从活植物体上切下，用于进行离体培养的植物从活植物体上切下，用于进行离体培养的植物器官或组织片段。器官或组织片段。器官或组织片段。器官或组织片段。愈伤组织愈伤组织:细胞排列疏松而无规则细胞排列疏松而无规则细胞排列疏松而无规则

13、细胞排列疏松而无规则,是高度液泡化的、呈是高度液泡化的、呈无定形状态的薄壁细胞无定形状态的薄壁细胞脱分化脱分化脱分化脱分化：脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官，这个过程叫再以重新分化成根或芽等器官，这个过程叫再分化。分化。由高度分化的植物组织或细胞，产生愈伤组由高度分化的植物组织或细胞，产生愈伤组织的过程。织的过程。再分化：再分化：再分化：再分化：启动启动脱分化、再分化，往往需要使用脱分化、再分化，往往需要使用脱分化、再分化，往往需要使用脱分化、再分化，往往需要使用植物激素，植物激素，植物激素，植物激素，人为地进行人为地进行控制

14、；其中控制；其中细胞分裂素、生长素细胞分裂素、生长素细胞分裂素、生长素细胞分裂素、生长素是关键激素。是关键激素。第6页，讲稿共91张，创作于星期三（二）影响植物组织培养的因素：（二）影响植物组织培养的因素：1.1.植物材料的选择植物材料的选择（1 1）不同的植物组织，培养的难易程度差别很大）不同的植物组织，培养的难易程度差别很大）不同的植物组织，培养的难易程度差别很大）不同的植物组织，培养的难易程度差别很大烟草和胡萝卜的组织培养较为容易烟草和胡萝卜的组织培养较为容易烟草和胡萝卜的组织培养较为容易烟草和胡萝卜的组织培养较为容易枸杞愈伤组织的芽诱导比较难枸杞愈伤组织的芽诱导比较难（2 2）同一植物

15、材料的年龄、保存时间的长短会影响实验）同一植物材料的年龄、保存时间的长短会影响实验结果结果菊花的组织培养，一般选择未开花植株的茎上部，菊花的组织培养，一般选择未开花植株的茎上部，新萌生的侧枝。新萌生的侧枝。（内因）（内因）（内因）（内因）2.2.2.2.不同的离体组织和细胞对营养、环境等条件的要求相对不同的离体组织和细胞对营养、环境等条件的要求相对不同的离体组织和细胞对营养、环境等条件的要求相对不同的离体组织和细胞对营养、环境等条件的要求相对特殊，需配置不同的培养基特殊，需配置不同的培养基特殊，需配置不同的培养基特殊，需配置不同的培养基（外因）（外因）（外因）（外因）第7页，讲稿共91张，创作

16、于星期三MSMS培养基配方培养基配方（P84P84P84P84页，附录页，附录页，附录页，附录3 3 3 3八）八）八）八）第8页，讲稿共91张，创作于星期三A A A A、大量元素、大量元素、大量元素、大量元素:N:N:N:N、P P、S S、K K K K、CaCaCaCa、MgMg等等等等B B、微量元素、微量元素、微量元素、微量元素:B:B、MnMnMnMn、CuCu、ZnZn、FeFeFeFe、Co Co Co Co、I I I I、MoMo等等C C、有机物、植物激素、有机物、植物激素MSMS培养基主要成分包括培养基主要成分包括：你能说出各种营养物质的作用吗？你能说出各种营养物质的

17、作用吗？同专题同专题2 2 2 2中微生物培养基的配方相比，中微生物培养基的配方相比，中微生物培养基的配方相比，中微生物培养基的配方相比，MSMSMSMS培养基的培养基的培养基的培养基的配方有哪些明显的不同？配方有哪些明显的不同？配方有哪些明显的不同？配方有哪些明显的不同？微量、大量元素：微量、大量元素：提供植物细胞生活所必需的无机盐；提供植物细胞生活所必需的无机盐；提供植物细胞生活所必需的无机盐；提供植物细胞生活所必需的无机盐；蔗糖：蔗糖：提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压；提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压；甘氨酸、维生素等物质：甘氨酸、维生素等物质：主要是为了满足离体植物细胞对特主要是为

18、了满足离体植物细胞对特主要是为了满足离体植物细胞对特主要是为了满足离体植物细胞对特殊营养的需求。殊营养的需求。殊营养的需求。殊营养的需求。微生物培养基，以微生物培养基，以有机营养有机营养有机营养有机营养为主。为主。为主。为主。MSMS培养基，则需提供培养基，则需提供大量无机营养大量无机营养。第9页，讲稿共91张，创作于星期三（1 1）常用的植物激素：）常用的植物激素：生长素、细胞分裂素和赤霉素生长素、细胞分裂素和赤霉素生长素、细胞分裂素和赤霉素生长素、细胞分裂素和赤霉素生长素类：生长素类：2 2 2 2，4 4二氯苯氧乙酸二氯苯氧乙酸（2 2，4 4D D D D）吲哚乙酸吲哚乙酸吲哚乙酸吲哚

19、乙酸（IAAIAA）萘乙酸萘乙酸萘乙酸萘乙酸（NAANAANAANAA）吲哚丁酸吲哚丁酸吲哚丁酸吲哚丁酸（IBAIBAIBAIBA）细胞分裂素类：细胞分裂素类：细胞分裂素类：细胞分裂素类：激动素激动素（KTKT）6 6 6 6苄基嘌呤苄基嘌呤（6 6 6 6BABA）玉米素玉米素玉米素玉米素（ZTZTZTZT）赤霉素类：赤霉素类：赤霉酸赤霉酸（GA3GA3GA3GA3）3 3、植物激素的影响、植物激素的影响第10页，讲稿共91张，创作于星期三（2 2）生长素和细胞分裂素作用）生长素和细胞分裂素作用植物中植物中生长素和细胞分裂素生长素和细胞分裂素，是启动细胞分裂、脱分化，是启动细胞分裂、脱分化和

20、再分化的关键性激素。和再分化的关键性激素。在生长素存在的情况下，细胞在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强的趋势。分裂素的作用呈现加强的趋势。使用顺序实验结果同时使用同时使用同时使用同时使用先使用细胞分裂素先使用细胞分裂素后使用生长素后使用生长素先使用生长素，先使用生长素，先使用生长素，先使用生长素，后使用细胞分裂素后使用细胞分裂素有利于细胞分裂，有利于细胞分裂，但不利分化但不利分化但不利分化但不利分化细胞既分裂也分化细胞既分裂也分化细胞既分裂也分化细胞既分裂也分化分化频率提高分化频率提高分化频率提高分化频率提高第11页，讲稿共91张，创作于星期三生长素生长素细胞分裂素细胞分裂素 有利

21、于根的分化有利于根的分化有利于根的分化有利于根的分化生长素生长素细胞分裂素细胞分裂素 有利于芽的分化有利于芽的分化抑制根的分化抑制根的分化生长素生长素细胞分裂素细胞分裂素促进愈伤组织生长促进愈伤组织生长（3）生长素和细胞分裂素生长素和细胞分裂素生长素和细胞分裂素生长素和细胞分裂素同时使用同时使用同时使用同时使用，用量的比例用量的比例用量的比例用量的比例对植物细胞对植物细胞发育方向发育方向的影响的影响的影响的影响（4 4 4 4）pHpH、温度、光照、温度、光照、温度、光照、温度、光照进行菊花组织培养时：进行菊花组织培养时：不同植物，对各种条件的要求往往不同。不同植物，对各种条件的要求往往不同。

22、pHpHpHpH控制在控制在5.85.8左右，左右，左右，左右，温度温度温度温度控制在控制在控制在控制在181822OC.22OC.22OC.22OC.每日用每日用日光灯日光灯照射照射照射照射 1212h h h h。第12页，讲稿共91张，创作于星期三菊花组织培养的实验操作程序（一）制备MS固体培养基（二）外植体消毒（二）外植体消毒（三）接种（三）接种（四）培养（四）培养（五）移栽（五）移栽（六）栽培（六）栽培第13页，讲稿共91张，创作于星期三（一）制备（一）制备（一）制备（一）制备MSMSMSMS固体培养基固体培养基配制母液配制母液配制母液配制母液配制配制配制配制MSMSMSMS固体培养

23、基固体培养基高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌1.1.配制各种母液配制各种母液 大量元素：浓缩大量元素：浓缩1010倍；倍；微量元素：浓缩微量元素：浓缩100100倍；倍；二者均常温保存二者均常温保存激素、维生素类激素、维生素类用量少的有机物用量少的有机物按按1mg/mL1mg/mL配成母液配成母液（1 1）一般要求）一般要求 （2 2）配制母液的意义：）配制母液的意义：减少工作量；减少工作量；减少微量试剂称量所造成减少微量试剂称量所造成的误差的误差 第14页，讲稿共91张，创作于星期三（3 3）配制母液流程：）配制母液流程：称量称量溶解溶解混合混合定容定容标记标记保存（保存（4 4O OC C）（2

24、2）配制母液的意义：）配制母液的意义：减少工作量；减少工作量；减少微量试剂称量所造成的误差减少微量试剂称量所造成的误差 微量元素微量元素 大量元素大量元素有机物有机物铁盐铁盐第15页，讲稿共91张，创作于星期三2.2.配制培养基，高压蒸汽灭菌配制培养基，高压蒸汽灭菌 依次加入大量元素、微量元素、有机物、激素依次加入大量元素、微量元素、有机物、激素母液母液根据各种母液的浓缩倍数，根据各种母液的浓缩倍数，计算计算用量用量将称好的将称好的琼脂琼脂加入加入800mL800mL蒸馏水，加热，蒸馏水，加热，熔化熔化琼脂琼脂加入加入30g30g蔗糖蔗糖，搅拌均匀，搅拌均匀加蒸馏水加蒸馏水定容定容到到1000

25、mL1000mL调节调节pHpH 分装分装到锥形瓶中到锥形瓶中（每瓶（每瓶50mL50mL100mL100mL）高压蒸汽高压蒸汽灭菌灭菌(培养基培养基培养基培养基+其他器械其他器械其他器械其他器械)立式高压灭菌锅立式高压灭菌锅第16页，讲稿共91张，创作于星期三1.1.1.1.选材：选材：选材：选材：（二）外植体消毒（二）外植体消毒2.2.2.2.消毒消毒流水冲洗流水冲洗菊花茎段用流水冲洗后菊花茎段用流水冲洗后菊花茎段用流水冲洗后菊花茎段用流水冲洗后可加少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗可加少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗可加少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗可加少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗刷洗后

26、在流水下冲洗刷洗后在流水下冲洗刷洗后在流水下冲洗20min20min20min20min左右左右左右左右酒精处理酒精处理用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数放入体积分数放入体积分数放入体积分数为为为为70707070的酒精中摇动的酒精中摇动的酒精中摇动的酒精中摇动2 2 2 23 3 3 3次，持续次，持续次，持续次，持续6 6 6 67s7s7s7s，立即将外植立即将外植立即将外植立即将外植体取出，在无菌水中清洗体取出，在无菌水中清洗体取出，在无菌水中清洗体取出，在无菌水中清洗 消

27、毒液处理消毒液处理消毒液处理消毒液处理取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入质量分数为放入质量分数为放入质量分数为放入质量分数为0.10.10.10.1的氯化汞溶液中的氯化汞溶液中的氯化汞溶液中的氯化汞溶液中1 1 1 12min2min2min2min，取出后在取出后在取出后在取出后在无菌水无菌水无菌水无菌水中至少清洗中至少清洗中至少清洗中至少清洗3 3 3 3次，漂净消毒液。次，漂净消毒液。次，漂净消毒液。次，漂净消毒液。取菊花未开花植株，茎上部生长旺盛的嫩枝取菊花

28、未开花植株，茎上部生长旺盛的嫩枝取菊花未开花植株，茎上部生长旺盛的嫩枝取菊花未开花植株，茎上部生长旺盛的嫩枝 要兼顾要兼顾药剂的消毒效果和外植体的耐受力药剂的消毒效果和外植体的耐受力幼叶、幼茎（枝）、花瓣、嫩芽等生长旺盛的幼嫩组织幼叶、幼茎（枝）、花瓣、嫩芽等生长旺盛的幼嫩组织 花药（花粉）花药（花粉）第17页，讲稿共91张，创作于星期三进行消毒进行消毒外植体外植体消毒液要完全浸消毒液要完全浸没外植体没外植体 消毒液：消毒液：70%70%酒精、酒精、0.1%HgCl0.1%HgCl、10%10%次氯酸钠次氯酸钠消毒时间依消毒时间依据材料而定据材料而定外植体外植体第18页，讲稿共91张，创作于星

29、期三（三）接种（三）接种1.1.接种前准备接种前准备 污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种环境的消接种环境的消毒毒是至关重要的。如果条件允许，接种外植体，要在超净是至关重要的。如果条件允许，接种外植体，要在超净工作台中进行，确保无菌操作。工作台中进行，确保无菌操作。接种前一天，用接种前一天，用接种前一天，用接种前一天，用7070的酒精的酒精喷雾消毒空气，喷雾消毒空气，用用用用酒精酒精或或新新洁尔灭洁尔灭擦试工作台，并用紫外擦试工作台，并用紫外擦试工作台，并用紫外擦试工作台，并用紫外线

30、照射线照射线照射线照射2020分钟。分钟。接种室，超净工作台的消毒接种室，超净工作台的消毒接种前，接种前，接种前，接种前，启动超净工作台启动超净工作台，如打开吹风和照明灯开关等如打开吹风和照明灯开关等等。等。第19页，讲稿共91张，创作于星期三做好接种准备工作做好接种准备工作在等待外植体消毒的同时，做好接种准备工作：在等待外植体消毒的同时，做好接种准备工作：用酒精进行桌用酒精进行桌面消毒。面消毒。用酒精棉球对培用酒精棉球对培养基和培养基瓶养基和培养基瓶口进行消毒。口进行消毒。准备无菌纸准备无菌纸点燃酒精灯点燃酒精灯第20页，讲稿共91张，创作于星期三2.2.2.2.接种时的无菌操作要求接种时的

31、无菌操作要求接种操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都接种操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。灼烧接种工具时，要注意安全灼烧接种工具时，要注意安全第21页，讲稿共91张，创作于星期三将装有培养基的锥形瓶整齐地排列在酒精灯左侧。将装有培养基的锥形瓶整齐地排列在酒精灯左侧。将消过毒的菊花茎段，在无菌培养皿中切成小段将消过毒的菊花茎段，在无菌培养皿中切成小段（长约（长约（长约（长约0.50.51cm1cm）。）。左手持锥形瓶，左手持锥形瓶，左手持锥形瓶，左手持锥形瓶，右手拉开捆扎锥形瓶的绳子，并将封右手拉开

32、捆扎锥形瓶的绳子，并将封口膜攥于右手心，口膜攥于右手心，以避免封口膜接触瓶口的一面被污染。以避免封口膜接触瓶口的一面被污染。以避免封口膜接触瓶口的一面被污染。以避免封口膜接触瓶口的一面被污染。左手持锥形瓶，瓶口旋转通过火焰；右手用镊子左手持锥形瓶，瓶口旋转通过火焰；右手用镊子夹取菊花茎段插入培养基中夹取菊花茎段插入培养基中（不要倒插）（不要倒插）（不要倒插）（不要倒插）接种后，将封口膜重新扎好接种后，将封口膜重新扎好接种后，将封口膜重新扎好接种后，将封口膜重新扎好瓶外壁贴上标签：植物名称、接种日期、姓名等瓶外壁贴上标签：植物名称、接种日期、姓名等3.3.接种过程接种过程第22页，讲稿共91张，

33、创作于星期三接种后，在酒精灯火焰上转动灼烧瓶口，加盖接种后，在酒精灯火焰上转动灼烧瓶口，加盖贴标签：贴标签：植物名称植物名称接种日期接种日期姓名等姓名等第23页，讲稿共91张，创作于星期三【接种注意事项接种注意事项】每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为7070的酒精的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍，冷却后再溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种接种外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根据锥形瓶

34、的大小确定，一般胡萝卜据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜3 3 3 34 4块，菊的茎或叶块，菊的茎或叶6 68 8 8 8块，也不要太少，以充分利用培养基中的营养成分块，也不要太少，以充分利用培养基中的营养成分和光照条件和光照条件插入时应注意方向，不要倒插。茎段、茎尖插入时应注意方向，不要倒插。茎段、茎尖基部基部插入插入插入插入培养基，利于吸收水分和养分培养基，利于吸收水分和养分培养基，利于吸收水分和养分培养基，利于吸收水分和养分第24页，讲稿共91张，创作于星期三（四）培养（四）培养（四）培养（四）培养 接种后的锥形瓶最好放在接种后的锥形瓶最好放在无菌箱无菌箱无菌箱无菌箱中培养，培养期间应定中

35、培养，培养期间应定期消毒。培养温度控制在期消毒。培养温度控制在181820200 0C C，并且每日用日光灯光，并且每日用日光灯光，并且每日用日光灯光，并且每日用日光灯光照照照照12h.12h.1 1、愈伤组织的培养、愈伤组织的培养2 2周后，周后，培养基成分接近耗尽，必须更换培养基，进行培养基成分接近耗尽，必须更换培养基，进行继继继继代培养（即分瓶扩大培养）代培养（即分瓶扩大培养）代培养（即分瓶扩大培养）代培养（即分瓶扩大培养）.从接种外植体到出现愈伤组织需经过从接种外植体到出现愈伤组织需经过2 2周周周周时间。时间。2 2周之内周之内可以看到，外植体上逐渐长出可以看到，外植体上逐渐长出乳白

36、色或黄白色乳白色或黄白色的瘤的瘤的瘤的瘤状愈伤组织。状愈伤组织。状愈伤组织。状愈伤组织。首次首次首次首次培养愈伤组织时，恒温箱的门应该关闭培养愈伤组织时，恒温箱的门应该关闭不必见光，不必见光，不必见光，不必见光，因为因为在无光条件下愈伤组织长的更快。在无光条件下愈伤组织长的更快。第25页，讲稿共91张，创作于星期三愈伤组织开始分化愈伤组织开始分化愈伤组织愈伤组织培养室里培养箱中的培养培养室里培养箱中的培养第26页，讲稿共91张，创作于星期三2.2.愈伤组织的继代培养愈伤组织的继代培养愈伤组织的继代培养愈伤组织的继代培养（切割、分瓶扩大培养）（切割、分瓶扩大培养）继代培养所用的培养基与培养愈伤组

37、织的相同，在严继代培养所用的培养基与培养愈伤组织的相同，在严格的无菌条件下，将愈伤组织连同原来的外植体一起移格的无菌条件下，将愈伤组织连同原来的外植体一起移到新培养基上，进行继代培养。到新培养基上，进行继代培养。继代培养继代培养继代培养继代培养一代一代一代一代为为20d20d。若时间过长，因培养基中营养物质减若时间过长，因培养基中营养物质减若时间过长，因培养基中营养物质减若时间过长，因培养基中营养物质减少，外植体会分泌有毒物质，造成自身中毒。少，外植体会分泌有毒物质，造成自身中毒。少，外植体会分泌有毒物质，造成自身中毒。少，外植体会分泌有毒物质，造成自身中毒。如果愈伤组织长到直径为如果愈伤组织

38、长到直径为如果愈伤组织长到直径为如果愈伤组织长到直径为1 11.5cm1.5cm1.5cm1.5cm时，就可以进行时，就可以进行时，就可以进行时，就可以进行试管苗试管苗培养培养，否则还需进行第二代继代培养，否则还需进行第二代继代培养，否则还需进行第二代继代培养，否则还需进行第二代继代培养.继代培养期间恒温箱的门要打开，让愈伤组织继代培养期间恒温箱的门要打开，让愈伤组织见光，见光，见光见光见光见光后，愈伤组织颜色逐渐转为后，愈伤组织颜色逐渐转为后，愈伤组织颜色逐渐转为后，愈伤组织颜色逐渐转为绿色绿色绿色绿色3.3.3.3.试管苗的培养试管苗的培养试管苗的培养试管苗的培养愈伤组织长到直径为愈伤组织

39、长到直径为愈伤组织长到直径为愈伤组织长到直径为1 1 1 11.5cm1.5cm时，更换培时，更换培时，更换培时，更换培养基，进行试管苗的养基，进行试管苗的养基，进行试管苗的养基，进行试管苗的见光培养见光培养.第27页，讲稿共91张，创作于星期三切割、分瓶扩大繁殖切割、分瓶扩大繁殖第28页，讲稿共91张，创作于星期三无菌室里超净工作台上的切割过程无菌室里超净工作台上的切割过程无菌室里超净工作台上的切割过程无菌室里超净工作台上的切割过程第29页，讲稿共91张，创作于星期三（五）移栽（练苗、移栽、栽培）五）移栽（练苗、移栽、栽培）在移栽在移栽生根的菊花试管苗生根的菊花试管苗之前，应先打之前，应先打

40、开培养瓶的开培养瓶的封口膜，封口膜，封口膜，封口膜，让试管苗在让试管苗在让试管苗在让试管苗在培养间培养间培养间培养间生生生生长几日长几日长几日长几日.1.1.打开封口膜：打开封口膜：打开封口膜：打开封口膜：2.2.2.2.清洗转移：清洗转移：用流水清洗根部的培养基，用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到将幼苗移植到消过毒的消过毒的蛭石或珍珠岩蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时等环境下生活一段时等环境下生活一段时等环境下生活一段时间间间间3.3.3.3.移移移移 栽：栽：栽：栽：幼苗长壮后，移栽到土壤中幼苗长壮后，移栽到土壤中幼苗长壮后，移栽到土壤中幼苗长壮后，移栽到土壤中珍珠岩珍珠岩：是一种火山喷发

41、的酸性熔岩，是一种火山喷发的酸性熔岩，经急剧冷却而经急剧冷却而成的玻璃质岩石，有弧形或圆形裂隙，成的玻璃质岩石，有弧形或圆形裂隙，如珍珠的如珍珠的结构，所以被命名为珍珠岩。结构，所以被命名为珍珠岩。是一种天然、无毒，在高温作用下会膨胀是一种天然、无毒，在高温作用下会膨胀比较少见的矿物质。属于硅酸盐。比较少见的矿物质。属于硅酸盐。蛭蛭 石：石：特特特特 点：点：点：点：固体基质，含水量高、蓄水性强、透性好，适合栽培固体基质，含水量高、蓄水性强、透性好，适合栽培固体基质，含水量高、蓄水性强、透性好，适合栽培固体基质，含水量高、蓄水性强、透性好，适合栽培第30页，讲稿共91张，创作于星期三六、炼苗、

42、移栽六、炼苗、移栽移植到消过毒的移植到消过毒的移植到消过毒的移植到消过毒的蛭石或珍珠岩蛭石或珍珠岩上的幼苗上的幼苗上的幼苗上的幼苗第31页，讲稿共91张，创作于星期三（六）栽培（六）栽培 幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情况，况，适时浇水、施肥，直至开花适时浇水、施肥，直至开花第32页，讲稿共91张，创作于星期三1、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）2、外植体的消毒（酒精、氯化汞）、外植体的消毒（酒精、氯化汞）3、接种的无菌操作（酒精、酒精灯、接种的无菌操作（酒精、酒精灯灼烧）灼烧）4、无菌箱中的培养；、无菌箱中的培养；5、移栽

43、到消过毒的环境中生存一段时间。、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。在整个操作过程中，在整个操作过程中，是如何来实现是如何来实现无菌无菌环境的？环境的？第33页，讲稿共91张，创作于星期三你打算做几组重复？你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？你打算设置对照实验吗？设置对照实验设置对照实验，可以取用一个经过灭菌的，可以取用一个经过灭菌的，可以取用一个经过灭菌的，可以取用一个经过灭菌的装有装有装有装有培养基的锥形瓶，培养基的锥形瓶，培养基的锥形瓶，培养基的锥形瓶，与与接种操作后的锥形瓶接种操作后的锥形瓶接种操作后的锥形瓶接种操作后的锥形瓶一同培一同培养，用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污养，用

44、以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。染。答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。第34页，讲稿共91张，创作于星期三2.外植体的生理状态外植体的生理状态是成功进行组织培养的重要条件之是成功进行组织培养的重要条件之一。一。生长旺盛的嫩枝生理状况好生长旺盛的嫩枝生理状况好，容易诱导脱分化和再，容易诱导脱分化和再分化。分化。第第36363636页练习题页练习题页练习题页练习题1 11.1.植物组织培养所利用的植物材料，植物组织培养所利用的植物材料，体积小、抗性差，体积小、

45、抗性差，对培养条件的要求对培养条件的要求较高较高。用于植物组织培养的培养基，。用于植物组织培养的培养基，同样同样适合于某些微生物的生长适合于某些微生物的生长，如一些细菌、真菌等，如一些细菌、真菌等的生长。而培养物一旦受到微生物的污染，就会导致实的生长。而培养物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。验前功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。第第36363636页练习题页练习题页练习题页练习题2 2第35页，讲稿共91张，创作于星期三(1)(1)培育培育培育培育无病毒植株无病毒植株4 4、植物组织培养的应用：、植物组织培养的应用：(2)(2)(2)(2)实现优良品种的实

46、现优良品种的实现优良品种的实现优良品种的快速繁殖快速繁殖，保持，保持，保持，保持遗传性状遗传性状遗传性状遗传性状的一致的一致(3)(3)实现花卉的实现花卉的连续生产连续生产连续生产连续生产，不受季节的限制，不受季节的限制因为，植物的因为，植物的根尖，芽尖的分生组织根尖，芽尖的分生组织根尖，芽尖的分生组织根尖，芽尖的分生组织，由于细胞分裂、，由于细胞分裂、增殖快，常常没有病毒；以此为外植体，通过组织培增殖快，常常没有病毒；以此为外植体，通过组织培养繁殖而的植株，一般没有病毒。养繁殖而的植株，一般没有病毒。因为，花卉组织培养是在实验室中进行，条件因为，花卉组织培养是在实验室中进行，条件是可控的。是

47、可控的。第36页，讲稿共91张，创作于星期三(4)(4)培养紫草愈伤组织培养紫草愈伤组织,提取紫草素（治疗烫伤和割伤的提取紫草素（治疗烫伤和割伤的提取紫草素（治疗烫伤和割伤的提取紫草素（治疗烫伤和割伤的药物以及染料和化妆品的原料）药物以及染料和化妆品的原料）药物以及染料和化妆品的原料）药物以及染料和化妆品的原料）(6)(6)基因工程中亦需用到植物组织培养的方法基因工程中亦需用到植物组织培养的方法基因工程中亦需用到植物组织培养的方法基因工程中亦需用到植物组织培养的方法(5)(5)诱导离体的植物组织形成具有诱导离体的植物组织形成具有生根发芽能力的胚状结构，生根发芽能力的胚状结构，包裹上人造种皮，制

48、成人工包裹上人造种皮，制成人工种子，可以解决种子，可以解决有些作物品有些作物品种繁殖能力差，结子困难或种繁殖能力差，结子困难或发芽率低等问题发芽率低等问题.第37页，讲稿共91张，创作于星期三三、课题延伸三、课题延伸1 1、一般来说，容易进行无性繁殖的植物，也容易进、一般来说，容易进行无性繁殖的植物，也容易进行组织培养行组织培养2 2、实例：芦荟、豆瓣绿、秋海棠、月季、实例：芦荟、豆瓣绿、秋海棠、月季第38页，讲稿共91张，创作于星期三此时的组织或细胞为离体的，即细胞所生活的环境为液此时的组织或细胞为离体的，即细胞所生活的环境为液体有机物营养环境，而不是能体现其整个植物体的光能体有机物营养环境

49、，而不是能体现其整个植物体的光能自养自养在培养过程中，是脱分化、再分化的过程，随着芽和根的在培养过程中，是脱分化、再分化的过程，随着芽和根的形成，就具有了自养的能力，是由细胞到一个个体的演变形成，就具有了自养的能力，是由细胞到一个个体的演变过程过程1、高等植物是光能自养型生物，为什么在植物组织培养、高等植物是光能自养型生物，为什么在植物组织培养过程中还需要提供有机物培养基？过程中还需要提供有机物培养基？2、培养过程中为什么需要进行光照、培养过程中为什么需要进行光照思思 考考第39页，讲稿共91张，创作于星期三1、外植体带菌、外植体带菌2、培养基及接种、培养基及接种器具灭菌不彻底器具灭菌不彻底3

50、、接种操作时带入、接种操作时带入4、环境不清洁、环境不清洁结合录像结合录像外植体灭菌与接种操作外植体灭菌与接种操作，谈谈组织培养污染的主要，谈谈组织培养污染的主要途径及怎样预防污染？途径及怎样预防污染？第40页，讲稿共91张，创作于星期三第41页，讲稿共91张，创作于星期三菊花的组织培养JLSSYJLSSYBYHBYH第42页，讲稿共91张，创作于星期三第43页，讲稿共91张，创作于星期三第44页，讲稿共91张，创作于星期三 菊花是菊科菊属的多年生宿根草本植物,是我国的传统名花和世界四大切花之一 长期以来菊花采用分株、扦插等无性繁殖方法进行繁殖 但是传统的繁殖方法易受环境影响,繁殖周期长,随着