多肽和蛋白质类药物.ppt

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1、关于多肽与蛋白质类药物第一张，PPT共九十六页，创作于2022年6月一、多肽和蛋白质药物的基本概念一、多肽和蛋白质药物的基本概念第一节 概述（一）、多肽类药物 多肽是多肽是-氨基酸以肽链连接在一起而形成的氨基酸以肽链连接在一起而形成的化合物化合物,它也是蛋白质水解的中间产物它也是蛋白质水解的中间产物。N N条多肽链按条多肽链按一定的空间结构缠绕纠结就构成了蛋白质。大分子蛋一定的空间结构缠绕纠结就构成了蛋白质。大分子蛋白质水解会生成多肽。白质水解会生成多肽。第二张，PPT共九十六页，创作于2022年6月1、多肽药物的功能特性 多肽是生物体内重要的生物活性成分，主要有以下生理功能特性：（1）作为生

2、理调节的活性分子，参与调节各种生理活动和特性。（2）多肽在生物体内的浓度很低多肽在生物体内的浓度很低（110110-7-7 mol/L mol/L就可发挥活性，有的甚就可发挥活性，有的甚至更低），至更低），但生理活性很强，具有多种多样的生化功能。如胆囊收缩但生理活性很强，具有多种多样的生化功能。如胆囊收缩素在千万分之一就可发挥作用。素在千万分之一就可发挥作用。（3）分子小，结构易于改造，可通过化学合成的方法生产。如由中国首先合成的牛胰岛素，就属于一种含51个氨基酸的多肽。（4）活性多肽的合成过程往往是由蛋白质精加工剪切转化而来的，许多多肽之间都具有共同的来源、相似的结构。第三张，PPT共九十六

3、页，创作于2022年6月2.多肽类药物的分类 主要有多肽激素、多肽类细胞生长调多肽激素、多肽类细胞生长调节因子、含有多肽成分的组织制剂节因子、含有多肽成分的组织制剂：1、多肽激素（1）脑垂体多肽激素；促皮质素（ACTH），促黑激素,催产素，加压素（2）下丘脑激素；促甲状腺激素释放激素，生长素抑制激素，促性腺激素释放激素主要多肽类药物主要多肽类药物主要多肽类药物主要多肽类药物（3）甲状腺激素；甲状旁腺激素，降钙素（4）胰岛激素；胰高血糖素，胰解痉多肽（5）胃肠道激素；胃泌素，胆囊收缩素，肠泌素，肠血管活性肽，抑胃肽，缓激肽，P物质（6）胸腺激素；胸腺素，胸腺肽，胸腺血清因子第四张，PPT共九十六

4、页，创作于2022年6月2 2、多肽类细胞生长调节因子、多肽类细胞生长调节因子 包括表皮生长因子包括表皮生长因子(EGF)(EGF)，转移因子，转移因子(TF)(TF)，心钠素，心钠素(ANP)(ANP)等。等。3 3、含有多肽成分的组织制剂、含有多肽成分的组织制剂 这是一类临床疗效确切，但其中所含的具体有效成分还不这是一类临床疗效确切，但其中所含的具体有效成分还不十分明了的制剂，主要包括骨宁、眼生素、血活素、氨肽素、十分明了的制剂，主要包括骨宁、眼生素、血活素、氨肽素、妇血宁、蜂毒、蛇毒、安胎素、神经营养素、胎盘提取物、花妇血宁、蜂毒、蛇毒、安胎素、神经营养素、胎盘提取物、花粉提取物、脾水解

5、物、肝水解物、心脏激素等。粉提取物、脾水解物、肝水解物、心脏激素等。第五张，PPT共九十六页，创作于2022年6月（二）蛋白质药物（二）蛋白质药物蛋白质药物可分为蛋白质类激素、血浆蛋白质、蛋白质类细胞生长调节因子、胶原蛋白等。主要蛋白质类药物有以下几种：主要蛋白质类药物有以下几种：1.1.蛋白质激素蛋白质激素（1 1）垂体蛋白激素）垂体蛋白激素-生长素，催乳素，促甲状腺素，促黄体生成激素，促卵泡激素（2 2）促性腺激素）促性腺激素-人绒毛膜促性腺激素(HCG)，绝经尿促性腺激素，血清促性腺激素（3 3）胰岛素及其它激素）胰岛素及其它激素生长素释放抑制因子生长素释放抑制因子，是一种人脑激是一种人

6、脑激素，治疗肢端肥大症，素，治疗肢端肥大症，5050万个羊脑提取万个羊脑提取5mg.5mg.工程菌工程菌：7.5L7.5L培养液可得到培养液可得到5mg.5mg.肢端肥大症肢端肥大症第六张，PPT共九十六页，创作于2022年6月4.4.粘蛋白粘蛋白:胃膜素，硫酸糖肽，血型物质胃膜素，硫酸糖肽，血型物质A A和和B B等。等。5.5.胶原蛋白胶原蛋白:明胶，阿胶明胶，阿胶6.6.碱性蛋白碱性蛋白:硫酸鱼精蛋白硫酸鱼精蛋白7.7.蛋白酶抑制剂蛋白酶抑制剂:胰蛋白酶抑制剂，大豆胰蛋白酶抑制剂胰蛋白酶抑制剂，大豆胰蛋白酶抑制剂8.8.植物凝集素植物凝集素:PHAPHA，ConAConA3.3.3.3.

7、蛋白质类细胞生长调节因子蛋白质类细胞生长调节因子蛋白质类细胞生长调节因子蛋白质类细胞生长调节因子干扰素干扰素干扰素干扰素、（IDNIDNIDNIDN）,白细胞介素（白细胞介素（116116）（）（ILIL）神经生长因子）神经生长因子等等等等2.2.血浆蛋白质血浆蛋白质白蛋白，纤维蛋白溶酶原，血纤蛋白等白蛋白，纤维蛋白溶酶原，血纤蛋白等 硫酸鱼精蛋白硫酸鱼精蛋白是一种强碱，能与强酸性肝素钠或肝素钙形成稳定的盐而使肝素失去抗凝作用。抗肝素药。抗肝素药。用于因注射肝素过量所引起的初出血.第七张，PPT共九十六页，创作于2022年6月FDGF,IL,CSF,IFN,EPO,hGHFDGF,IL,CSF

8、,IFN,EPO,hGH的中文名称的中文名称IFN：干扰素IL：白细胞介素 hGH：生长激素FDGF：成纤维细胞衍化生长因子 CSF：克隆刺激因子 EPO：红细胞生成素第八张，PPT共九十六页，创作于2022年6月二、多肽和蛋白质类药物特点二、多肽和蛋白质类药物特点 1)1)基本原料简单易得基本原料简单易得 多肽和蛋白质类药物主要以20种天然氨基酸为基本结构单元依序连接而得,代谢物氨基酸为人体生长的基本营养成分,可通过农产品发酵而制备。2)2)药效高，副作用低药效高，副作用低,不蓄积中毒不蓄积中毒 多肽和蛋白质类药物本身是人体内源性物质或针对生物体内调控因子研发而得，通过参与,介入,促进或抑制

9、人体内或细菌病毒中生理生化过程而发挥作用,副作用低,药效高,针对性强，不会蓄积于体内而引起中毒。第九张，PPT共九十六页，创作于2022年6月3)3)用途广泛，品种繁多，新型药物层出不穷用途广泛，品种繁多，新型药物层出不穷多肽和蛋白质类药物是目前医药研发领域中最活跃,进展最快的部分，是二十一世纪最有前途的产业之一。将20种基本氨基酸按不同序列相互连接,可得到品种繁多,可用于治疗各种类型疾病的多肽和蛋白质类药物。众多新型多肽和蛋白质类药物在治疗艾滋病，癌症，肝炎，糖尿病，慢性疼痛效果显著。4)4)研发过程目标明确研发过程目标明确,针对性强针对性强借助生命科学领域取得的大量研究成果,包括对各类疾病

10、发病机理的揭示,对体内各种酶,辅酶,生长代谢调节因子的深入认识,可以针对性开展多肽和蛋白质类药物的研发。第十张，PPT共九十六页，创作于2022年6月多肽和蛋白质类药物研发技术与方向多肽和蛋白质类药物研发技术与方向1)1)化学合成方法化学合成方法2)2)改造生物活性多肽及现有多肽药物改造生物活性多肽及现有多肽药物3)3)提高活性多肽及现有多肽药物档次提高活性多肽及现有多肽药物档次4)4)针对具生物活性的多肽天然产物研发针对具生物活性的多肽天然产物研发5)5)生物技术制备多肽和蛋白质药物生物技术制备多肽和蛋白质药物第十一张，PPT共九十六页，创作于2022年6月三、多肽及蛋白质类药物的生产方法三

11、、多肽及蛋白质类药物的生产方法（1 1）化学合成法）化学合成法：化学合成法只能生产少部分多肽类药物。化学合成法借助化学催化剂，按一定的氨基酸序列秩序形成肽键。蛋白质药物一般具有复杂的空间结构，而形成这些空间结构还需要一些特殊的细胞因子参与起辅助作用，这些细胞因子是化学合成过程中无法提供的，所以化学合成不能用于生产相对复杂的蛋白质类药物。19531953年，人类用化学合成法合成了年，人类用化学合成法合成了有生物活性的有生物活性的多肽多肽-催产素。催产素。（1 1）化学合成法：）化学合成法：（2 2）天然动植物及重组动植物提取法）天然动植物及重组动植物提取法（3 3）微生物及重组微生物发酵法）微生

12、物及重组微生物发酵法第十二张，PPT共九十六页，创作于2022年6月（2 2）天然动植物及重组动植物提取法）天然动植物及重组动植物提取法通过生化工程技术，从天然动植物中分离纯化。由于天然动植物中的有效成分含量过低，杂质太多含量过低，杂质太多，引起人们对重组动植物的重视。重组动植物只通过基因工程技术手段，将药物基因或能对药物基因起调节作用的基因转导入动植物细胞，以提高动植物合成药用成分的能力，再经过生化分离，制得生物制品。t-PA(tissue-plasminogen activatort-PA(tissue-plasminogen activator)译成中文为译成中文为组织纤溶酶组织纤溶酶原

13、激活原激活剂，人体内自然存在，同时也是临床上用于急性心肌梗死的一种生物剂，人体内自然存在，同时也是临床上用于急性心肌梗死的一种生物蛋白药物，蛋白药物，有有1818个半胱氨酸，个半胱氨酸，9 9对二硫键对二硫键 第十三张，PPT共九十六页，创作于2022年6月t-PA组织型纤溶酶原激活剂组织型纤溶酶原激活剂的转基因羊的转基因羊第十四张，PPT共九十六页，创作于2022年6月（3 3）微生物及重组微生物发酵法）微生物及重组微生物发酵法 通过基因工程菌发酵生产多肽和蛋白质药品，生产中期短、成本低、产品质量高。通过基因工程技术手段，把人体细胞内含有的合成某一多肽或蛋白质的基因分离出来，在结合一定的载体

14、，转入特定的微生物细胞，通过微生物细胞将该多肽或及蛋白质的基因表达出来，以生产该类药品用于临床。目前，世界上生产的多肽和蛋白质药品，绝大多数均经过此方法生产。第十五张，PPT共九十六页，创作于2022年6月第二节第二节 动植物动植物提取法提取法生产多肽和蛋白质类药物生产多肽和蛋白质类药物一、概述一、概述（一）材料的选择（一）材料的选择 蛋白质类药物的来源有动植物组织和微生物等，原则是要选择富含所需蛋白质多肽成分的，易于提取的无害生物材料。对天然蛋白质类药物，为了提高质量、产量和降低生产成本，对原料的种属，发育阶段、生物状态、来源、解剖种属，发育阶段、生物状态、来源、解剖部位、生物技术产品的宿主

15、菌或细胞部位、生物技术产品的宿主菌或细胞都有一定要求，使得纯化工作相对容易。第十六张，PPT共九十六页，创作于2022年6月(1)种属种属：牛胰含胰岛素单位比猪胰岛素多，牛为4000IU/Kg胰脏，猪为3000IU/Kg胰脏.抗原性猪比牛低。猪与人胰岛素相比，只有1个氨基酸差异，而牛有3个氨基酸差异。（2 2 2 2）发育生长阶段）发育生长阶段）发育生长阶段）发育生长阶段：幼年动物的胸腺比较发达，老龄后逐渐萎缩，因此胸腺原料必须采用幼龄动物。肝细胞生产因子是从肝细胞分化最旺盛阶段的胎儿、胎猪或胎牛肝中获得的。若用成年的动物，必须经过肝脏部分切除手术后，才能获得富含肝细胞生长因子的原料。猪胰脏牛

16、胰脏第十七张，PPT共九十六页，创作于2022年6月（3 3）生物状态）生物状态：动物饱食后宰杀，胰脏中胰岛素含量增加，对提取胰岛素有利，但胆囊收缩素的分泌是胆汁排空，对胆汁收集不利。（4 4）原料来源：）原料来源：血管舒缓素可分别从猪胰脏和猪颚下腺猪胰脏和猪颚下腺中提取，而稳定性以猪颚下腺来源为好，因其不含蛋白质水解酶。第十八张，PPT共九十六页，创作于2022年6月（6 6）对生物技术产品宿主菌或细胞的要求：）对生物技术产品宿主菌或细胞的要求：大肠杆菌的产品提取大多要求破壁，有些可能会产生毒素。枯草杆菌和酵母菌虽然可克服上述毛病，但表达的蛋白质成分有缺乏糖基化等翻译及修饰的缺陷。动物细胞较

17、好，如果用肿瘤细胞要考虑其安全性。（5 5）原料解剖学部位：）原料解剖学部位：猪胰脏中，胰脏尾部含激素较多，而胰脏头部分含消化酶较多。如果分别摘取则可提高各产品收得率。胃膜素以采取全胃粘膜为好，胃蛋白酶则以采取胃底部粘膜为好，因胃底部粘膜富含消化腺。猪胃第十九张，PPT共九十六页，创作于2022年6月(二二)蛋白质类制品的分离纯化方法蛋白质类制品的分离纯化方法(1)(1)根据分子大小轻重设计的方法根据分子大小轻重设计的方法。如离心分离法、筛膜分离法、凝。如离心分离法、筛膜分离法、凝胶过滤法等。胶过滤法等。(2)(2)根据溶解度大小分离的方法、根据溶解度大小分离的方法、如盐析法、有机溶剂沉淀法、

18、共如盐析法、有机溶剂沉淀法、共沉淀法、选择性沉淀法、等电点沉淀法等。沉淀法、选择性沉淀法、等电点沉淀法等。(3)(3)按分子所带正负电荷多少分离的方法按分子所带正负电荷多少分离的方法，如离子交换分离法、电泳分，如离子交换分离法、电泳分离法、聚焦层析法等。离法、聚焦层析法等。(4)(4)按稳定性差异建立的分离方法按稳定性差异建立的分离方法，如选择性热变性法表面变性，如选择性热变性法表面变性法等。法等。(5)(5)按亲和作用的差异按亲和作用的差异建立的分离方法，如亲和层析法等建立的分离方法，如亲和层析法等.第二十张，PPT共九十六页，创作于2022年6月二、主要多肽类药物的制备二、主要多肽类药物的

19、制备1 1、胸腺素（、胸腺素（thymocinthymocin）胸腺位于胸骨后面，紧靠心脏，呈灰赤色，扁平椭圆形，分左、右两叶，由淋巴组织构成。青春期前发充良好，青春期后逐渐退化，为脂肪组织所代替。胸腺是造血器官，分泌胸腺素，能产生淋巴细胞，并运送到淋巴结和脾脏等处。这种淋巴细胞对机体的细胞免疫具有重要作用。生长激素和甲状腺素能刺激胸腺生生长激素和甲状腺素能刺激胸腺生长，而性激素则促使胸腺退化。长，而性激素则促使胸腺退化。第二十一张，PPT共九十六页，创作于2022年6月 人体和动物都有免疫系统，包括特异性免疫和非特异性免疫，其中特异性免疫又分为体液免疫系统和细胞免疫系统。当某些外源生物（如细

20、菌）或生物大分子（如蛋白质），也叫抗原，进入动物体后，会刺激动物体本能地产生相应的抗体，引起免疫应答，从而将进入的外源生物或蛋白质分解或清除。细胞免疫细胞免疫主要指机体受到异己物质抗原的刺激后，主要指机体受到异己物质抗原的刺激后，一类小淋巴细胞一类小淋巴细胞依赖胸腺的依赖胸腺的T T细胞细胞发生增生、分化，直接攻击靶细胞或间接地释放一发生增生、分化，直接攻击靶细胞或间接地释放一些淋巴因子从而使机体达到免疫的过程。些淋巴因子从而使机体达到免疫的过程。体液免疫体液免疫则是当机体受到抗原刺激后，则是当机体受到抗原刺激后，来源与来源与骨髓的小淋巴细胞骨髓的小淋巴细胞B B细细胞胞（即（即B B型淋巴细

21、胞）型淋巴细胞）进行增生并分化为浆细胞，进而合成各类免进行增生并分化为浆细胞，进而合成各类免疫球蛋白（即抗体），然后在体液中发挥免疫作用的过程。疫球蛋白（即抗体），然后在体液中发挥免疫作用的过程。第二十二张，PPT共九十六页，创作于2022年6月 T淋巴细胞来源于骨髓的多能干细胞（胚胎期则来源于卵黄囊和肝）。在人体胚胎期和初生期，骨髓中的一部分多能干细胞或前T细胞迁移到胸腺内，在胸腺激素的诱导下分化成熟，成为具有免疫活性的T细胞。T淋巴细胞与激活的血小板 T淋巴细胞第二十三张，PPT共九十六页，创作于2022年6月嗜中性粒细胞Neutrophil嗜中性粒细胞Neutrophil嗜中性粒细胞Ne

22、utrophil嗜中性粒细胞Neutrophil嗜中性粒细胞嗜中性粒细胞NeutrophilNeutrophil嗜酸性粒细胞Eosinophil嗜酸性粒细胞Eosinophil嗜酸性粒细胞Eosinophil嗜酸性粒细胞嗜酸性粒细胞EosinophilEosinophil嗜碱性粒细胞嗜碱性粒细胞EosinophilEosinophil嗜碱性粒细胞Eosinophil嗜碱性粒细胞Eosinophil单核细胞单核细胞Monocyte嗜碱性粒细胞Eosinophil嗜碱性粒细胞Eosinophil淋巴细胞淋巴细胞Lymphocyte第二十四张，PPT共九十六页，创作于2022年6月胸腺素胸腺素（th

23、ymosin;thymin），-是由胸腺分泌的一类促细胞分裂的含2828个氨基酸残基的具个氨基酸残基的具有生理活性的有生理活性的多肽激素多肽激素。可诱导造血干细胞发育为T淋巴细胞，具有增强细胞免疫功能和调节免疫平衡等作用。-临床上常用的胸腺肽是从小牛胸腺发现并提纯的有临床上常用的胸腺肽是从小牛胸腺发现并提纯的有非特异性免疫效应的小分子多肽。非特异性免疫效应的小分子多肽。第二十五张，PPT共九十六页，创作于2022年6月（1）结构和性质）结构和性质 胸腺素组分胸腺素组分5 5是由是由8080热稳定的热稳定的40-5040-50种多肽组成的混合物种多肽组成的混合物，分，分子量在子量在1000150

24、00100015000之间，等电点在之间，等电点在3.59.53.59.5之间。之间。胸腺素组分胸腺素组分5 胸腺素组分胸腺素组分5 5这一名称来源于生产加工这一名称来源于生产加工过程，过程，即以小牛胸腺为原料，采用一定的即以小牛胸腺为原料，采用一定的工艺提取纯化得到的第工艺提取纯化得到的第5 5组分。组分。区-pI5.0以下多肽。区-pI5.07.0以下多肽区-pI7.0以上多肽（种类较少）根据等电点不同，可根据等电点不同，可以将胸腺素组分以将胸腺素组分5 5中所中所含多肽分为含多肽分为、三个区，三个区，胸腺素组分胸腺素组分5 5中，所含的多肽中并非每一种都有免疫活性，有活中，所含的多肽中并

25、非每一种都有免疫活性，有活性的称为性的称为胸腺素胸腺素，如胸腺，如胸腺11、5 5、7 7，无活性的称为，无活性的称为多肽，如多肽，如1 1 等。等。第二十六张，PPT共九十六页，创作于2022年6月胸腺素组分胸腺素组分5 5 作用与用途：作为免疫调节剂原发性和继发性免疫缺陷病，如反复上呼吸道感染等；原发性和继发性免疫缺陷病，如反复上呼吸道感染等；自身免疫病，如肝炎，肾病，红斑狼疮，类风湿关节炎、重症肌无力自身免疫病，如肝炎，肾病，红斑狼疮，类风湿关节炎、重症肌无力等；等；变态反应性疾病，如支气管哮喘等；变态反应性疾病，如支气管哮喘等；细胞免疫功能减退的中年人和老年人疾病，并可抗衰老。细胞免疫

26、功能减退的中年人和老年人疾病，并可抗衰老。肿瘤的辅助治疗。肿瘤的辅助治疗。第二十七张，PPT共九十六页，创作于2022年6月（2）生产工艺胸腺绞碎胸腺碎块生理盐水离心提取提取液（组分组分1 1）加热，去杂蛋白80，15min上清夜（组分组分2 2）丙酮沉淀10 丙酮粉（组分3）pH7.0 磷酸盐缓冲液上清夜（组分4）加硫酸铵0.5饱和度调pH4盐析物超滤pH8 TrisHCl超滤液Sephadex G25脱盐，干燥胸腺素（组分5）硫酸铵硫酸铵0.250.25饱和度饱和度第二十八张，PPT共九十六页，创作于2022年6月二、主要蛋白质类药物的制备一、人血浆白蛋白制剂的制备一、人血浆白蛋白制剂的制

27、备（preparation of human blood preparation of human blood plasma albuminplasma albumin）（1 1）结构和性质）结构和性质 （structure and characterstructure and character）人血人血是一种红色混浊的、具有一定腥味与粘滞性的液体。用适是一种红色混浊的、具有一定腥味与粘滞性的液体。用适当的抗凝剂除去其中的有形成分（如红血球）而得到淡黄色、半透明的液当的抗凝剂除去其中的有形成分（如红血球）而得到淡黄色、半透明的液体叫体叫血浆血浆。第二十九张，PPT共九十六页，创作于2022年

28、6月血浆中除含有大量的水分以外，还含有血浆蛋白血浆蛋白等溶质。白蛋白（albumin）又称清蛋白，白蛋白是血浆蛋白中含量最高（55%）、分子量最小、分子数最多的一类蛋白质。白蛋白对治疗因失血、创伤、烧伤等引起的休克，脑水肿和大脑损伤性所致的脑压增高，防止低蛋白血症，肝硬化或者由肾病引起的水肿与腹水等严重疾病具有良好疗效。白蛋白为单链分子，由584个氨基酸残基组成，N端为天门冬氨酸，C端为亮氨酸，分子量为6.6104，在离子强度为0.15时，pI为4.7，易溶于水，在60%硫酸铵饱和度以上沉淀。对酸较稳定，受热变性。第三十张，PPT共九十六页，创作于2022年6月从人体中分离的白蛋白有两种：一种

29、是从健康人血浆中分离制得的人血清白蛋白，另一种是从健康产妇胎盘中分离制得的胎盘白蛋白。二者作用相同，后者价格低于前者，且用量多于前者，但目前已停产。血血+混合抗凝剂混合抗凝剂 草酸铵草酸铵草酸钾草酸钾离离 心心上清血浆上清血浆总蛋白：总蛋白：6.2-7.9%白蛋白：白蛋白：3.8-4.8%水：水：90-92%现常用肝素、柠檬酸钠现常用肝素、柠檬酸钠 血（无抗凝剂）血（无抗凝剂）自然凝固自然凝固分离出血清（无纤维蛋白酶原、分离出血清（无纤维蛋白酶原、凝血因子等）凝血因子等）第三十一张，PPT共九十六页，创作于2022年6月（2 2）白蛋白生产白蛋白生产工艺路线工艺路线 利凡诺利凡诺,NaHCO3

30、pH8.6,离心分离离心分离络合物蒸馏水，蒸馏水，NaCl，HClpH1.281.45pH1.281.45，40解离，离心解离，离心离心液浓浓 缩缩超超 滤滤浓缩液灭活病毒灭活病毒 65，1h；60，10h热处理液除菌除菌过滤白蛋白液干燥冷冻干燥白蛋白去杂蛋白人血浆（人血浆（%）乳酸依沙吖啶上清液盐析物 浓缩液处理液人血丙种球蛋白哦1mol/LHCl调PH7.0(NH4)2SO4盐析超超 滤滤 除除盐盐26沉降除菌过滤解离后解离后pH至至5.5-6.0离心分离出上清液离心分离出上清液冻干品白色疏松物体冻干品白色疏松物体将解离混合物溶液用0.5mol/L HCl调节pH至5.5-6.0，加NaC

31、l至0.15%0.2%，充分搅拌、40过夜解离（8-10h）。25白蛋白含量占白蛋白含量占95%以上，水分以上，水分1%，水溶后，水溶后pH为为6.6-7.2，硫酸铵残量，硫酸铵残量0.01%，细菌学和热原质检测合格。，细菌学和热原质检测合格。第三十二张，PPT共九十六页，创作于2022年6月（3 3）工艺要点）工艺要点 络合络合对于络合所要求的对于络合所要求的pHpH值，可以略高些，这样，白蛋白络合值，可以略高些，这样，白蛋白络合完全，络合物形成一个相当硬的块，倾倒上清液方便，损完全，络合物形成一个相当硬的块，倾倒上清液方便，损失少。但失少。但不能太高，以防络合血浆中的其它蛋白，影响解离与不

32、能太高，以防络合血浆中的其它蛋白，影响解离与白蛋白制剂的纯度白蛋白制剂的纯度。若若pHpH值偏低，络合不完全，络合物松软，甚至成汤状，不利值偏低，络合不完全，络合物松软，甚至成汤状，不利于倾去上清液。于倾去上清液。血浆搅拌用血浆搅拌用NaHCONaHCO3 3调节调节pHpH至至8.5-8.78.5-8.7之间，缓慢加入与血浆之间，缓慢加入与血浆等体积的等体积的2.3%2.3%利凡诺溶液，边加边搅拌，充分络合后。利凡诺溶液，边加边搅拌，充分络合后。静置静置24h24h，分离上清与络合物沉淀。，分离上清与络合物沉淀。第三十三张，PPT共九十六页，创作于2022年6月解离解离生产中要严格控制溶液的

33、温度生产中要严格控制溶液的温度。2525左右室温，络合物形成一个硬块，利于去上清和解离。温度太低，左右室温，络合物形成一个硬块，利于去上清和解离。温度太低，虽然不影响络合，但络合物呈稀糊状，倾倒上清液时常会丢失部分络合虽然不影响络合，但络合物呈稀糊状，倾倒上清液时常会丢失部分络合物，而且络合物内残存较多的利凡诺的水溶液。物，而且络合物内残存较多的利凡诺的水溶液。解离温度要维持在解离温度要维持在4040左右，是解离反应的最适温度。左右，是解离反应的最适温度。解离液的解离液的pHpH值在值在1.281.451.281.45之间，解离效果良好。之间，解离效果良好。络合物中加入解离液并搅拌均匀后，将络

34、合物中加入解离液并搅拌均匀后，将解离后混合溶液解离后混合溶液pHpH值控制值控制在在6.06.0左右左右较理想。较理想。第三十四张，PPT共九十六页，创作于2022年6月p以解离后解离混合溶液以解离后解离混合溶液pHpH值决定加入解离液的体积。值决定加入解离液的体积。p解离后解离混合液的解离后解离混合液的pHpH值高于值高于6.56.5时，表明加入的解离液少了，有时，表明加入的解离液少了，有部分络合物未被解离开；部分络合物未被解离开；p低于低于5.855.85，表明加入的解离液多了，解离过度。这两种情况下，表明加入的解离液多了，解离过度。这两种情况下，解离效果均不佳。解离效果均不佳。在沉淀中加

35、约二分之一血浆体积的灭菌蒸馏水解离所得到的络合物沉淀，在沉淀中加约二分之一血浆体积的灭菌蒸馏水解离所得到的络合物沉淀，将解离混合物溶液用将解离混合物溶液用0.5mol/L HCl调节调节pH至至5.5-6.0，加，加NaCl至至0.15%0.2%，充分搅拌、，充分搅拌、40过夜解离（过夜解离（8-10h）。）。第三十五张，PPT共九十六页，创作于2022年6月去杂蛋白去杂蛋白：白蛋白具有生物活性，凡是使蛋白质变性的温度都白蛋白具有生物活性，凡是使蛋白质变性的温度都会使白蛋白变性。会使白蛋白变性。6565条件下变性条件下变性1h1h，离心分离出上清液。，离心分离出上清液。热处理热处理：在：在60

36、0.5600.5条件下处理条件下处理10h10h，灭活病毒。，灭活病毒。检验方法检验方法：冻干品白色疏松物体。白蛋白含量占冻干品白色疏松物体。白蛋白含量占95%95%以上，水分以上，水分1%1%，水溶后，水溶后pHpH为为6.6-7.26.6-7.2，硫酸铵残量，硫酸铵残量0.01%0.01%，细菌学和热原质检测，细菌学和热原质检测合格。合格。白蛋白含量占白蛋白含量占95%95%以上，水分以上，水分1%1%，水溶后，水溶后pHpH为为6.6-7.26.6-7.2，硫酸铵残量，硫酸铵残量0.01%0.01%，细菌学和热原质检测合格。，细菌学和热原质检测合格。第三十六张，PPT共九十六页，创作于2

37、022年6月二、绒膜促性激素（二、绒膜促性激素（HCGHCG）的制备）的制备（1 1）HCGHCG的性质（的性质（character of HCGcharacter of HCG）HCG(human chorionic gonadotrophin)即人绒毛膜促性腺激素人绒毛膜促性腺激素，是由由胎盘胎盘的滋养层的滋养层合体细胞合体细胞分泌的一种分泌的一种糖蛋白糖蛋白，它是由，它是由和和二聚体的二聚体的糖蛋白糖蛋白组成。组成。易溶于水，易溶于水，pIpI为为3.2-3.33.2-3.3。妇女妊娠。妇女妊娠45-7045-70天，尿中天，尿中HCGHCG含量可达含量可达30000-30000-500

38、00IU/24h50000IU/24h。治疗女性不育症，神经性皮炎。男性性功能过低症和隐睾症，子宫出血和习惯性流产。临床用途：第三十七张，PPT共九十六页，创作于2022年6月孕妇尿粗制粗制尿：苯甲酸：乙醇尿：苯甲酸：乙醇/1：0.075：5）用用HCl调调pH 4-5HCG(粗品）提取提取NaAC pH4.8提取液透析透析水，水，5以下以下透析内液吸附（吸附（CM SepharoseCI-6B）羧甲基琼脂糖凝胶羧甲基琼脂糖凝胶吸附后交换剂洗涤洗涤，峰峰NaAC,pH4.8,pH5.9洗涤后交换剂洗脱洗脱NaAC,pH8.5洗脱液冷冻干燥冷冻干燥 30HCG精品 溶解溶解蒸馏水，蒸馏水，10以

39、下以下HCGHCG溶液溶液透析透析pH6.8,5以下以下透析内液吸附吸附羟基磷灰石，羟基磷灰石，pH6.8吸附物解吸解吸0.5mmol/L,1.0mmol/L磷酸盐缓冲液（磷酸盐缓冲液（PBS),pH6.8解吸液干燥干燥30HCG纯品（2 2）HCGHCG生产工艺路线生产工艺路线搅拌搅拌1h静置静置2-3h加加10倍量的倍量的41/15 mol/LpH8.5、0.2mol/L的醋酸盐缓冲液洗的醋酸盐缓冲液洗脱，得到的第脱，得到的第3峰即为峰即为HCG。吸附物在搅拌下加入吸附物在搅拌下加入95%95%乙醇至苯甲酸全部溶解乙醇至苯甲酸全部溶解有絮状沉淀产生有絮状沉淀产生醋酸盐醋酸盐吸附粗品吸附粗品

40、苯甲酸苯甲酸乙醇饱和液乙醇饱和液第三十八张，PPT共九十六页，创作于2022年6月孕妇尿，用HCl调节PH=4-5，加入苯甲酸-乙醇饱和液（孕妇尿：苯甲酸乙醇饱和液：乙醇=1：0.075：5），搅拌1小时，静置2-3小时。上清液1+上清液2合并，在5以下，用蒸馏水进行透析。取透析内液进行离子交离子交换层析换层析。先将CM-Sepharose柱用0.01mol/L的醋酸盐缓冲液进行平衡，将样品加到层析柱上。HCG粗品中加入10倍量的4、0.067mol/L、PH=4.8的醋酸盐缓冲液，搅拌提取4小时，离心，取上清液1。离心后的沉淀物再用10倍量的4、0.067mol/L、PH=4.8的醋酸盐缓冲

41、液提取，取上清液2。过滤，弃滤液，得沉淀吸附物。搅拌下加入95%乙醇，直到苯甲酸全部溶解为止，即有絮状沉淀物产生。静置过夜，离心，沉淀物用95%的乙醇和丙酮洗涤，干燥，得HCG粗品。先用0.01mol/L、PH=4.8的醋酸盐缓冲液洗出洗脱峰-1再用0.01mol/L、PH=5.9的磷酸盐缓冲液冲出洗脱峰-2再用0.2mol/L、PH=8.5的醋酸盐缓冲液冲出洗脱峰-3从洗脱峰-3上得到的就是HCG。-30以下冷冻干燥，得HCG精品HCG精品在10以下的蒸馏水中溶解，溶解液用0.5mol/L、PH=6.8的磷酸盐缓冲液进行透析。透析内液进行羟基磷灰石柱层析。步骤：（1）安装羟基磷灰石柱层析柱。

42、（2）用0.5mol/L、PH=6.8的磷酸盐缓冲液平衡。（3）样品上柱先用0.5mol/L、PH=6.8的磷酸盐缓冲液洗脱，得峰-1再用1.0mol/L、PH=6.8的磷酸盐缓冲液洗脱，得峰-2从洗脱峰-2上得到的就是HCG纯品。-30以下冷冻干燥，得HCG产品。第三十九张，PPT共九十六页，创作于2022年6月（3 3）工艺要点）工艺要点p吸附粗品：吸附粗品：HCl调孕妇尿至调孕妇尿至pH4-5，加苯甲酸，加苯甲酸乙醇饱乙醇饱和液（孕妇尿：苯甲酸乙醇饱和液：乙醇和液（孕妇尿：苯甲酸乙醇饱和液：乙醇=1:0.075:5）搅）搅拌拌1h静置静置2-3h，过滤，弃滤液，得吸附物。在搅拌下加，过滤

43、，弃滤液，得吸附物。在搅拌下加入入95%乙醇，至苯甲酸全部溶解有絮状沉淀产生，静置过夜，乙醇，至苯甲酸全部溶解有絮状沉淀产生，静置过夜，离心，沉淀用离心，沉淀用95%乙醇和丙酮洗涤，干燥得粗制品乙醇和丙酮洗涤，干燥得粗制品。p提提取取：加加10倍倍量量的的41/15 mol/L、pH4.8醋醋酸酸盐盐缓缓冲冲液液，搅搅拌拌4h，离离心心，取取上上清清液液。沉沉淀淀再再提提取取2h。合合并并两两次次提提取取液液，弃去沉淀。弃去沉淀。第四十张，PPT共九十六页，创作于2022年6月p离离子子交交换换层层析析：CM-SepharoseCM-Sepharose柱柱（离离子子交交换换柱柱）用用0.01m

44、ol/L0.01mol/L的的醋醋酸酸盐盐缓缓冲冲液液平平衡衡后后样样品品上上柱柱。依依次次用用pH4.8pH4.8、0.01mol/L0.01mol/L的的醋醋酸酸盐盐缓缓冲冲液液和和pH5.9pH5.9、0.01mol/L0.01mol/L的的磷磷酸酸盐盐缓缓冲冲液液洗洗涤涤出出两两个个峰峰（杂杂质质）。再再用用pH8.5pH8.5、0.2mol/L0.2mol/L的的醋醋酸酸盐盐缓缓冲冲液液洗洗脱脱，得得到到的的第第3 3峰峰即即为为HCGHCG。p羟基磷灰石柱层析：柱用羟基磷灰石柱层析：柱用pH6.8pH6.8、0.5mmol/L0.5mmol/L磷酸盐缓冲液平衡。样品用磷酸盐缓冲液平

45、衡。样品用pH6.8pH6.8、0.5mmol/L0.5mmol/L的磷酸盐缓冲液进行层析上柱。洗脱先用的磷酸盐缓冲液进行层析上柱。洗脱先用pH6.8pH6.8、0.5mmol/L0.5mmol/L再用再用pH6.8 pH6.8 1.0mmol/L1.0mmol/L的磷酸盐缓冲液。得到的磷酸盐缓冲液。得到I I、IIII活性峰。然后冷冻干燥。活性峰。然后冷冻干燥。HCGHCG纯品的比活性为纯品的比活性为10,000-12,000IU/mg10,000-12,000IU/mg蛋白质。蛋白质。n羟基磷灰石：羟基磷灰石：又称羟磷灰石，Ca5(PO4)3(OH)）其中OH-基能被氟化物、氯化物和碳酸根

46、离子代替，生成氟基磷灰石或氯基磷灰石,而钙离子可以被多种金属离子通过发生离子交换反应代替，形成对应金属离子的M磷灰石（M代表取代钙离子的金属离子）。在水相溶剂中在水相溶剂中不溶，可用做蛋白质纯化的吸附剂。不溶，可用做蛋白质纯化的吸附剂。第四十一张，PPT共九十六页，创作于2022年6月n写成（Ca10(PO4)6(OH)2）的形式以突出它是由两部分组成的：羟基与磷灰石。n羟磷灰石是人体骨骼组织的主要无机组成成分。植入体内后，钙和磷会游离出材料表面被身体组织吸收，并生长出新的组织。有研究证明羟磷灰石的晶粒越细，生物活性越高。牙齿表面的珐琅质的主要成份亦是羟磷灰石。第四十二张，PPT共九十六页，创

47、作于2022年6月三、动物来源生物制品制备的实例三、动物来源生物制品制备的实例胰岛素广泛存在于人和动物的胰脏中，正常人的胰脏约含有胰岛素广泛存在于人和动物的胰脏中，正常人的胰脏约含有200200万个胰岛，胰岛由万个胰岛，胰岛由-、-和和-三种细胞组成，其中三种细胞组成，其中-细胞制造胰细胞制造胰岛素岛素，-细胞制造胰高血糖素和胰抗脂肝素，细胞制造胰高血糖素和胰抗脂肝素，-细胞制造生长激素抑制细胞制造生长激素抑制因子。因子。1 1、胰岛素（、胰岛素（insulininsulin）的制备）的制备 胰岛素在胰岛素在-细胞中开始细胞中开始时是以活性很弱的前体胰时是以活性很弱的前体胰岛素原存在的，进而分

48、解岛素原存在的，进而分解为胰岛素进入血液循环。为胰岛素进入血液循环。显微镜下的胰岛-细胞第四十三张，PPT共九十六页，创作于2022年6月促进合成代谢促进合成代谢第四十四张，PPT共九十六页，创作于2022年6月胰岛素的性质胰岛素的性质：胰岛素由由二条链、51个氨基酸组成，A A链链2121个氨基酸、个氨基酸、B B链链3030个个氨基酸氨基酸。胰岛素是所有蛋白质中研究最清楚的一个蛋白。不同种属动物的胰岛素分子结构大致相同，主要差别在A链二硫桥中间的第8、9和10位上的三个氨基酸及B链C末端人的是苏氨酸，猪的是丙氨酸,抗原性比其他来源的胰岛素要低。B链接肽链接肽 A21B30第四十五张，PPT

49、共九十六页，创作于2022年6月 牛胰岛素的分子量为5733，猪为5764，人为5784。胰岛素的等电点为5.30-5.35。胰岛素在胰岛素在pH4.5pH4.56.56.5范范围内几乎不溶于水围内几乎不溶于水，易溶，易溶于稀酸或稀碱溶液；在于稀酸或稀碱溶液；在80%80%以下乙醇或丙酮中溶解；在以下乙醇或丙酮中溶解；在90%90%以上乙醇或以上乙醇或80%80%以上丙以上丙酮中难溶；在乙醚中不溶。酮中难溶；在乙醚中不溶。在高浓度锌的溶液中，在高浓度锌的溶液中，pH6pH68 8时胰岛素溶解度急剧下时胰岛素溶解度急剧下降降 。第四十六张，PPT共九十六页，创作于2022年6月（2 2）工艺路线

50、）工艺路线猪胰脏提取提取3h86%-88%乙醇，乙醇，5%草酸，草酸，提取液碱化碱化氨水，氨水，pH8-8.4碱化液酸化酸化硫酸，硫酸，pH3.6-3.8,5 酸化液浓缩浓缩30 以下，减压以下，减压浓缩浓缩至至浓缩液去脂去脂速热速冷速热速冷去脂溶液盐析盐析NaCl,pH2-2.5盐析物蒸馏水蒸馏水、丙酮、氨水（、丙酮、氨水（pH4.24.3）去去除酸性蛋白除酸性蛋白滤液锌沉淀锌沉淀氨水，氨水，Zn（Ac）2，pH6.0沉淀除碱性蛋白除碱性蛋白，结晶，结晶Zn（Ac）2，丙酮、氨水，丙酮、氨水，pH8.0，5以下，以下，柠檬酸柠檬酸,用氨水调用氨水调pH6.0,补加丙酮，补加丙酮，结晶结晶洗涤