细胞培养基本技术PPT课件.ppt

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1、关于细胞培养的基本技术第一张，PPT共五十五页，创作于2022年6月教学目的教学目的1、掌握细胞培养操作基本要领和要求、掌握细胞培养操作基本要领和要求2、了解细胞培养常用的基本方法和操作要领、了解细胞培养常用的基本方法和操作要领第二张，PPT共五十五页，创作于2022年6月一、基本操作技术和要求第三张，PPT共五十五页，创作于2022年6月一、培养室内的无菌操作一、培养室内的无菌操作第一节第一节 细胞培养操作基本要领和要求细胞培养操作基本要领和要求(一一)培养前的准备培养前的准备有条不紊和安全可靠有条不紊和安全可靠1.1.培养用物品的灭菌消毒培养用物品的灭菌消毒(写出物品的清单写出物品的清单)

2、2.2.操作台的消毒操作台的消毒(各种物品布局合理进行紫各种物品布局合理进行紫外线消毒外线消毒3030分钟分钟;3.3.洗手和着装洗手和着装(原则上与外科手术相同原则上与外科手术相同)4.4.火焰消毒火焰消毒(酒精灯使用、金属器械、吸过培酒精灯使用、金属器械、吸过培养液的吸管养液的吸管).).第四张，PPT共五十五页，创作于2022年6月（一）无菌操作一）无菌操作培养前准备：准备好所需物品清点无误培养前准备：准备好所需物品清点无误放置操作场所。放置操作场所。培养室和超净台消毒：培养室和超净台消毒：0.20.2新洁尔灭拖新洁尔灭拖地地紫外线照射紫外线照射30-50min/d30-50min/d7

3、5%alcohol75%alcohol擦洗台面擦洗台面紫外线消毒紫外线消毒 勿照射培养细胞和培养液勿照射培养细胞和培养液每天每天操作前操作前第五张，PPT共五十五页，创作于2022年6月v洗手和着装：洗手和着装：严格按照外科手术要求消毒严格按照外科手术要求消毒着装，操作前着装，操作前7575alcoholalcohol消毒消毒v无菌培养操作：无菌培养操作：整个实验过程保持无菌操作。整个实验过程保持无菌操作。点燃酒精灯，一切操作在火焰附近烧灼进行。点燃酒精灯，一切操作在火焰附近烧灼进行。v烧灼时间勿过长防止退火。烧灼时间勿过长防止退火。v洗过培养液的吸管不能再烧灼。洗过培养液的吸管不能再烧灼。v

4、橡胶物品不能烧灼时间过长。橡胶物品不能烧灼时间过长。v吸管不能混用。吸管不能混用。第六张，PPT共五十五页，创作于2022年6月（二）（二）培养细胞的取材培养细胞的取材1.1.基本要求：基本要求：v “快快”，少于，少于24h24hv “无菌无菌”v 用锋利的器械切取组织减少损伤用锋利的器械切取组织减少损伤v 血液，脂肪，神经组织等要弃去血液，脂肪，神经组织等要弃去v 培养液营养要丰富，胎牛血清培养液营养要丰富，胎牛血清10-2010-20v 成功率：胚胎组织成功率：胚胎组织 成熟个体成熟个体 肿瘤组织肿瘤组织 正常组织正常组织第七张，PPT共五十五页，创作于2022年6月2.2.基本器材和用

5、品基本器材和用品v眼科组织剪刀眼科组织剪刀 v弯镊弯镊 v手术刀（消毒）手术刀（消毒）v装有无血清培养基装有无血清培养基 或或HanksHanks液的小瓶液的小瓶v小烧杯小烧杯v培养皿培养皿第八张，PPT共五十五页，创作于2022年6月3.3.取材取材v皮肤粘膜取材：上皮细胞培养来源皮肤粘膜取材：上皮细胞培养来源v内脏和实体瘤：体内所发生肿瘤及各脏内脏和实体瘤：体内所发生肿瘤及各脏器是常用材料器是常用材料v血细胞：静脉，耳垂或手指取血，肝素抗血细胞：静脉，耳垂或手指取血，肝素抗凝凝v骨髓，羊水，胸骨髓，羊水，胸水，腹水：离心后立即培水，腹水：离心后立即培养。养。第九张，PPT共五十五页，创作于

6、2022年6月v 鼠胚组织：引颈法处死鼠胚组织：引颈法处死 整个浸入整个浸入7575alcohol5min alcohol5min 固定于木板取材固定于木板取材v 鸡胚组织：将蛋以气室向上置烧杯中消毒鸡胚组织：将蛋以气室向上置烧杯中消毒 剪刀环行剪开蛋壳剪刀环行剪开蛋壳 玻璃棒挑出鸡玻璃棒挑出鸡胚胚 第十张，PPT共五十五页，创作于2022年6月（三）组织材料分离（三）组织材料分离v 细胞悬液：细胞悬液：500-1000rpm500-1000rpm低转速离心低转速离心 5-10min5-10minv 组织块：组织块：机械分散法机械分散法:剪刀剪取后反复吹打剪刀剪取后反复吹打 剪切分离法：剪或切

7、成剪切分离法：剪或切成1mm1mm3 3培养培养 消化分离法：消化分离法：第十一张，PPT共五十五页，创作于2022年6月 胰蛋白酶法胰蛋白酶法 使用最广泛。使用最广泛。适宜消化间质少适宜消化间质少的软组织如肝肾的软组织如肝肾等，对硬癌组织等，对硬癌组织效果差。所需时效果差。所需时间较短，主要缺间较短，主要缺点是破损细胞点是破损细胞。第十二张，PPT共五十五页，创作于2022年6月胶原酶解离细胞法：胶原酶解离细胞法：对解离胚胎性、正常和恶性组织是很有效的。对解离胚胎性、正常和恶性组织是很有效的。胶原酶最终浓度胶原酶最终浓度200u/ml200u/ml，36.536.5温育，一般温温育，一般温育

8、育4-48h4-48h。胶原酶和透明质酸酶协同作用有助于。胶原酶和透明质酸酶协同作用有助于分离大鼠或兔的肝脏组织。分离大鼠或兔的肝脏组织。价格较高，大量使用增加成本。价格较高，大量使用增加成本。EDTAEDTA法法：较胰蛋白酶作用缓和，适宜消化分离传代细胞。较胰蛋白酶作用缓和，适宜消化分离传代细胞。第十三张，PPT共五十五页，创作于2022年6月二、原代培养 取自体内新鲜组织并置于体外条件下生长取自体内新鲜组织并置于体外条件下生长细胞在传代之前称为原代培养。细胞在传代之前称为原代培养。1.1.组织块培养法：组织块培养法：常用，简单，成功率高。常用，简单，成功率高。第十四张，PPT共五十五页，创

9、作于2022年6月第十五张，PPT共五十五页，创作于2022年6月第十六张，PPT共五十五页，创作于2022年6月第十七张，PPT共五十五页，创作于2022年6月第十八张，PPT共五十五页，创作于2022年6月1000ml100ml第十九张，PPT共五十五页，创作于2022年6月第二十张，PPT共五十五页，创作于2022年6月2.2.消化培养法：消化培养法：v 快速得到大量活细胞，适宜培养快速得到大量活细胞，适宜培养大量组织，原代细胞产量高。大量组织，原代细胞产量高。v 步骤繁琐，易污染，一些消化步骤繁琐，易污染，一些消化酶成本高，价格昂贵。酶成本高，价格昂贵。第二十一张，PPT共五十五页，创

10、作于2022年6月3.3.器官培养：器官培养：从供体获得器官或器官组织块后，不进行从供体获得器官或器官组织块后，不进行组织分离而直接在体外进行培养。组织分离而直接在体外进行培养。要求：要求：特殊培养条件特殊培养条件 r1mmr1mm 足够氧气渗入足够氧气渗入第二十二张，PPT共五十五页，创作于2022年6月三、传代培养和细胞系的维持1.1.原代细胞的首次传代原代细胞的首次传代 传代：细胞由原培养瓶内分离稀释后传到传代：细胞由原培养瓶内分离稀释后传到新的培养瓶的过程。是建立细胞系关键的新的培养瓶的过程。是建立细胞系关键的时期。时期。细胞没有生长到足以覆盖瓶底壁大部分表细胞没有生长到足以覆盖瓶底壁

11、大部分表面以前不要传代。面以前不要传代。根据细胞不同消化时间具体处理。根据细胞不同消化时间具体处理。首次传代细胞数量要多。首次传代细胞数量要多。第二十三张，PPT共五十五页，创作于2022年6月2.2.细胞传代方法细胞传代方法v贴壁生长：采用酶消化法传代。常用的贴壁生长：采用酶消化法传代。常用的消化液有消化液有0.250.25的胰蛋白酶液。的胰蛋白酶液。v悬浮生长悬浮生长 离心法传代离心法传代 直接传代法直接传代法vv半悬浮生长细胞传代（半悬浮生长细胞传代（HelaHela细胞）细胞）部分呈现贴壁生长现象，但贴壁不牢，可部分呈现贴壁生长现象，但贴壁不牢，可用直接吹打法使细胞从瓶壁脱落下来，进行

12、传用直接吹打法使细胞从瓶壁脱落下来，进行传代。代。第二十四张，PPT共五十五页，创作于2022年6月3.3.细胞系的维持细胞系的维持“换液换液”传代传代”“”“再换液再换液”“”“再传代再传代”“”“细胞冻存细胞冻存”4.4.培养细胞的纯化培养细胞的纯化自然纯化：自然纯化：利用某种细胞增殖优势排利用某种细胞增殖优势排挤其它细胞。无法人为选择，时间长，挤其它细胞。无法人为选择，时间长，适于恶性肿瘤。适于恶性肿瘤。第二十五张，PPT共五十五页，创作于2022年6月人工纯化：人工纯化：v酶消化法：利用上皮细胞和成纤维细胞对酶消化法：利用上皮细胞和成纤维细胞对胰蛋白酶耐受性不同。胰蛋白酶耐受性不同。v

13、机械划除法：用橡皮刮子或弯头滴管直接从机械划除法：用橡皮刮子或弯头滴管直接从瓶壁刮除。瓶壁刮除。第二十六张，PPT共五十五页，创作于2022年6月v反复贴壁法：反复贴壁法：利用上皮细胞和成利用上皮细胞和成纤维细胞贴壁时间和稳定性不同。纤维细胞贴壁时间和稳定性不同。v培养基限定法培养基限定法：某些细胞在生长：某些细胞在生长过程中必须存在或去处某种物质。过程中必须存在或去处某种物质。v流式细胞仪分离法：流式细胞仪分离法：利用细胞核利用细胞核酸含量，某些物质含量或细胞结酸含量，某些物质含量或细胞结构大小等参数分离。构大小等参数分离。第二十七张，PPT共五十五页，创作于2022年6月5.5.原代培养细

14、原代培养细胞的生命归宿胞的生命归宿vv原代培养期原代培养期v传代期传代期vv衰退期衰退期第二十八张，PPT共五十五页，创作于2022年6月五、细胞冻存、复苏和运输第二十九张，PPT共五十五页，创作于2022年6月细胞的冻存、复苏和运输细胞的冻存、复苏和运输教学目的教学目的1掌握培养物的冷冻保存与复苏原理掌握培养物的冷冻保存与复苏原理2掌握冷冻保存的常用方法掌握冷冻保存的常用方法3掌握冻存细胞的常用复苏方法掌握冻存细胞的常用复苏方法4掌握细胞运送的几种方法掌握细胞运送的几种方法第三十张，PPT共五十五页，创作于2022年6月1776年年Spallanzani最早发表了最早发表了“冷冷”处理对处理

15、对马精子生命活动的影响的报道，用雪冷冻玻璃马精子生命活动的影响的报道，用雪冷冻玻璃瓶中的马精子瓶中的马精子10多分钟之后，再将玻璃瓶放回多分钟之后，再将玻璃瓶放回室温下，精子又室温下，精子又“复活复活”.1900年前后，基本肯定生物成分能够在零下年前后，基本肯定生物成分能够在零下温度贮存的事实。温度贮存的事实。1949年至年至1960年称年称“甘油时期甘油时期”。1959年：二甲亚砜（年：二甲亚砜（DMSO）第三十一张，PPT共五十五页，创作于2022年6月一、培养物的的冷冻保存与复苏一、培养物的的冷冻保存与复苏1概念概念）冷冻保存）冷冻保存(cryopreservation)：是将：是将体外

16、培养物悬浮在加有或不加体外培养物悬浮在加有或不加冷冻保护冷冻保护剂剂的溶液中，以一定的冷冻速率降至零下某的溶液中，以一定的冷冻速率降至零下某一温度，并在此温度下对其长期保存的过程。一温度，并在此温度下对其长期保存的过程。第三十二张，PPT共五十五页，创作于2022年6月2）复苏）复苏(thawing)：是以一定的复温速率将冻存：是以一定的复温速率将冻存的培养物恢复到常温的过程的培养物恢复到常温的过程3）因细胞内部结冰而致的细胞损伤被称为细）因细胞内部结冰而致的细胞损伤被称为细胞内冰晶的损伤胞内冰晶的损伤(intracellular icedamage)。4）保存溶液溶质浓度增高而致的细胞损伤被

17、）保存溶液溶质浓度增高而致的细胞损伤被称为溶质损伤或称溶液损伤称为溶质损伤或称溶液损伤(solution damage)第三十三张，PPT共五十五页，创作于2022年6月原则：慢冻快融原则：慢冻快融细胞的低温冷冻储存：细胞的低温冷冻储存：是细胞培养室的常规工作和通用技术。细胞是细胞培养室的常规工作和通用技术。细胞冻存与细胞传代保存相比可以减少人力、经费，冻存与细胞传代保存相比可以减少人力、经费，减少污染，减少细胞生物学特性变化。减少污染，减少细胞生物学特性变化。原理：原理：在低于在低于70的超低温条件下，细胞的超低温条件下，细胞内部的生化反应极其缓慢，甚至终止。内部的生化反应极其缓慢，甚至终止

18、。第三十四张，PPT共五十五页，创作于2022年6月 原则：缓慢冷冻原则：缓慢冷冻 当细胞冷到零度以下：细胞器脱水，细胞当细胞冷到零度以下：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反冰晶就大，大冰晶不致产生大的冰晶；相反冰晶就大，大冰晶会造成细胞膜、细胞器的损伤和破裂。复苏过会造成细胞膜、细胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶。冰晶的重结晶。第三十五张，PPT共

19、五十五页，创作于2022年6月细胞冻存所用用品细胞冻存所用用品第三十六张，PPT共五十五页，创作于2022年6月慢冻程序慢冻程序标准程序标准程序：当温度在当温度在-25-25 以上时，以上时，1 12/min2/min 当温度达当温度达-25-25 以下时，以下时，5 510/min10/min 当温度达当温度达-100-100时，可迅速放入液氮中细胞时，可迅速放入液氮中细胞冻存器冻存器简易程序：简易程序：将将冷冷冻冻管管（管管口口要要朝朝上上）放放入入纱纱布布袋袋内内，纱纱布布袋袋系系以以线线绳绳，通通过过线线绳绳将将纱纱布布袋袋固固定定于于液液氮氮罐罐罐罐口口，按按每每分分钟钟温温度度下下

20、降降1 12 2 的的速速度度，在在4040分分钟钟内内降降至至液液氮氮表表面面，停停3030分分钟钟后后，直直接接投投人液氮中。人液氮中。第三十七张，PPT共五十五页，创作于2022年6月液氮罐液氮罐第三十八张，PPT共五十五页，创作于2022年6月低温保护剂的应用低温保护剂的应用 渗透性渗透性：具有渗透性的冷冻保护剂可以渗透具有渗透性的冷冻保护剂可以渗透到细胞内，一般是一些小分子的物质，主要有甘到细胞内，一般是一些小分子的物质，主要有甘油、油、DMSODMSO、乙二醇、丙二醇、甲醇等。常用、乙二醇、丙二醇、甲醇等。常用的是的是DMSODMSO，可迅速透入细胞，提高胞膜对水，可迅速透入细胞，

21、提高胞膜对水的通透性，降低冰点，延缓冻结过程，能使的通透性，降低冰点，延缓冻结过程，能使细胞内水分在冻结前透出细胞外，在胞外形细胞内水分在冻结前透出细胞外，在胞外形成冰晶，减少胞内冰晶，从而减少冰晶对细成冰晶，减少胞内冰晶，从而减少冰晶对细胞的损伤。胞的损伤。第三十九张，PPT共五十五页，创作于2022年6月 非渗透性：非渗透性：非渗透性冷冻保护非渗透性冷冻保护剂不能渗透到细胞内，一般是些大剂不能渗透到细胞内，一般是些大分子物质，主要有聚乙烯吡咯烷酮分子物质，主要有聚乙烯吡咯烷酮（PVPPVP）、蔗糖、聚乙二醇、羟乙基）、蔗糖、聚乙二醇、羟乙基淀粉等。淀粉等。第四十张，PPT共五十五页，创作于

22、2022年6月 冷冻保存温度冷冻保存温度 冷冻保存温度是指能长久保存细胞的一个冷冻保存温度是指能长久保存细胞的一个深低温度。在这样的温度下，细胞生化反应深低温度。在这样的温度下，细胞生化反应极其缓慢或停止，但经长期保存和复苏后仍极其缓慢或停止，但经长期保存和复苏后仍能保持正常的结构和功能。从实际和效益的能保持正常的结构和功能。从实际和效益的观点出发，液氮温度（观点出发，液氮温度（196）是目前最）是目前最佳冷冻保存温度。佳冷冻保存温度。第四十一张，PPT共五十五页，创作于2022年6月（1）应控制冻存细胞的质量。）应控制冻存细胞的质量。（2）不宜将冻存的细胞放置在）不宜将冻存的细胞放置在060

23、过过长时间长时间。低温损伤主要发生在这一温度范围内；。低温损伤主要发生在这一温度范围内；（3）冻存小管宜采用塑料冻存管，不宜用）冻存小管宜采用塑料冻存管，不宜用玻璃安瓿。玻璃安瓿。第四十二张，PPT共五十五页，创作于2022年6月细胞复苏方法细胞复苏方法 原则：原则：快速复苏快速复苏（l l）操操作作人人员员应应戴戴防防护护面面罩罩及及手手套套，防防止止冷冷冻冻管管可可能能爆爆裂裂之之伤伤害害。从从液液氮氮中中取取出出冷冷冻冻管管，迅迅速速投投入入373738 38 水水浴浴中中，使使其其融融化化（1 1分分钟钟左左右右）。回回温温后后喷喷以以70%70%酒酒精精并并擦擦拭拭之之，移移入入无无

24、菌菌操作台内。操作台内。（2 2）5 5分钟内用培养液稀释至原体积的分钟内用培养液稀释至原体积的1010倍以上。倍以上。（3 3）低速离心）低速离心1010分钟。分钟。（4 4）去上清，加新鲜培养液培养复苏的细胞）去上清，加新鲜培养液培养复苏的细胞第四十三张，PPT共五十五页，创作于2022年6月3.3.培养细胞的运输培养细胞的运输v 冷冻储存运输：冷冻储存运输：利用特殊容器盛液氮或干冰利用特殊容器盛液氮或干冰保存。效果好但麻烦。保存。效果好但麻烦。v 充液法：充液法：选生长状态好的细胞，生长选生长状态好的细胞，生长1/31/31/21/2瓶瓶底壁，弃掉旧培养液，补充新培养液至瓶颈底壁，弃掉旧

25、培养液，补充新培养液至瓶颈留微量空气，封口膜封口。贴身携带，达目留微量空气，封口膜封口。贴身携带，达目的地后倒掉多余培养液，次日换液。的地后倒掉多余培养液，次日换液。第四十四张，PPT共五十五页，创作于2022年6月四、细胞系及其鉴定四、细胞系及其鉴定 原代培养的培养物中所含的细胞类型多而原代培养的培养物中所含的细胞类型多而复杂。因此在培养初期，存活和生长的细胞复杂。因此在培养初期，存活和生长的细胞类型也是多种多样的。所以再培养不仅仅是类型也是多种多样的。所以再培养不仅仅是为了维持细胞不断地生长，而且是使培养物为了维持细胞不断地生长，而且是使培养物逐步成为具有增殖能力、特征专一、类型均逐步成为

26、具有增殖能力、特征专一、类型均匀的培养细胞，即细胞系匀的培养细胞，即细胞系(Cell line)(Cell line)。各种各种已被命名和经过细胞生物学鉴定的细胞系已被命名和经过细胞生物学鉴定的细胞系或细胞株，都是一些形态比较均一、生长或细胞株，都是一些形态比较均一、生长增殖比较稳定的和生物性状清楚的细胞群。增殖比较稳定的和生物性状清楚的细胞群。第四十五张，PPT共五十五页，创作于2022年6月1.1.细胞系鉴定细胞系鉴定 当当细细胞胞系系建建立立后后，应应对对细细胞胞系系进进行行一一系系列列鉴鉴定定后后，才才能能应应用用于于细细胞胞生生物物学学、免免疫疫学、细胞遗传学等方面的研究。学、细胞遗

27、传学等方面的研究。细胞系的细胞来源细胞系的细胞来源鉴鉴定定细细胞胞系系的的纯纯度度，即即除除了了主主类类细细胞胞外外，还杂有哪类细胞还杂有哪类细胞第四十六张，PPT共五十五页，创作于2022年6月v 细胞系的稳定性，即在细胞连续培细胞系的稳定性，即在细胞连续培养过程中主要指标应无明显变化养过程中主要指标应无明显变化vv 累积细胞系的形态及其表达特征累积细胞系的形态及其表达特征的基本数据，以及其与来源细胞的差的基本数据，以及其与来源细胞的差异等异等第四十七张，PPT共五十五页，创作于2022年6月2.2.细胞系鉴定指标细胞系鉴定指标染色体：染色体：染染色色体体是是一一种种鉴鉴定定细细胞胞系系的的

28、种种属属、性性别别来来源源较较为为确确切切的的指指标标；也也是是检检查查细细胞胞系系是是否否趋趋于于稳稳定定，在在离离体体培培养养条条件件下下细细胞胞有有否否发发生生转转化化的的可可靠靠指指标标；是是区区别别正正常常细细胞胞与与恶恶性性细细胞胞的指标。的指标。采采用用染染色色体体数数目目、核核型型分分析析以以及及染染色色体体分分带技术检测。带技术检测。第四十八张，PPT共五十五页，创作于2022年6月同工酶谱：同工酶谱：通常采用通常采用G6PD(G6PD(葡萄糖葡萄糖-6-6-磷酸脱氢酶磷酸脱氢酶)、LDH(LDH(乳酸脱氢酶乳酸脱氢酶)、核苷磷酸化酶三种方法，、核苷磷酸化酶三种方法，根据条件

29、选择。根据条件选择。细胞细胞DNADNA遗传特征遗传特征:第四十九张，PPT共五十五页，创作于2022年6月3.3.细胞株建立要求及管理细胞株建立要求及管理记录要求：记录要求：组织来源、细胞生物学检测、培养条组织来源、细胞生物学检测、培养条件和方法件和方法第五十张，PPT共五十五页，创作于2022年6月鉴定、管理和使用鉴定、管理和使用vv 按国际惯例，在杂志或刊物上报道，详按国际惯例，在杂志或刊物上报道，详细介绍上述各项目即可。细介绍上述各项目即可。v 各国管理中心、细胞库各国管理中心、细胞库v 美国标准细胞库美国标准细胞库ATCC(American Type ATCC(American Ty

30、pe Culture Collection)Culture Collection)、人遗传突变细胞库、人遗传突变细胞库HGMRHGMR、细胞衰老细胞库、细胞衰老细胞库CARCAR 第五十一张，PPT共五十五页，创作于2022年6月ATCCATCC入库细胞要求检测项目（基本要求）入库细胞要求检测项目（基本要求）：v 培养简历：培养简历：组织来源日期、物种、供体情组织来源日期、物种、供体情况、细胞传代情况等况、细胞传代情况等v 冻存液：冻存液：培养基和防冻液名称培养基和防冻液名称v 细胞活力：细胞活力：融解前后细胞接种存活率和生长融解前后细胞接种存活率和生长特性特性v 培养液：培养液：培养基种类和

31、名称、血清来源和含培养基种类和名称、血清来源和含量量v 细胞形态：细胞形态：类型类型第五十二张，PPT共五十五页，创作于2022年6月v 核型：核型：二倍体或多倍体，标记染色体的二倍体或多倍体，标记染色体的 有无有无v 无误染测验：无误染测验：包括细菌、真菌、支原体、原包括细菌、真菌、支原体、原虫和病毒等虫和病毒等v 物种鉴定：物种鉴定：检测同工酶，主要为检测同工酶，主要为G6PDG6PD和和LDHLDH，以证明细胞有否交叉污染，以证明细胞有否交叉污染v 免疫检测：免疫检测：一两种血清学检测一两种血清学检测v 细胞建立者：细胞建立者：建立者姓名；检测者姓名建立者姓名；检测者姓名第五十三张，PPT共五十五页，创作于2022年6月睡醒了吗？-谢谢各位!第五十四张，PPT共五十五页，创作于2022年6月感感谢谢大大家家观观看看第五十五张，PPT共五十五页，创作于2022年6月