第十一章色谱法基本概念及经典液相色谱法精选文档.ppt

《第十一章色谱法基本概念及经典液相色谱法精选文档.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《第十一章色谱法基本概念及经典液相色谱法精选文档.ppt（63页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、第十一章色谱法基本概念及经典液相色谱法本讲稿第一页，共六十三页2学习目的学习目的u通过学习色谱法基本概念、基本类型、分离机制以及各种经典液相色谱法的固定相、流动相及其选择等相关知识，了解色谱法的特点及其应用，会利用吸附色谱、分配色谱等经典柱色谱法和薄层色谱法对试样进行分离分析。为气相色谱法和高效液相色谱法的学习奠定基础，同时也为学习药物分析、天然药物化学、药物分离检测技术等专业课程奠定基础。本讲稿第二页，共六十三页3知识要求知识要求1掌握色谱法的基本概念，吸附色谱法和分配色谱法的分离机制，薄层色谱法的基本原理及其应用。2熟悉色谱法的分类，离子交换色谱法和空间排阻色谱法的分离机制，各种经典的柱色

2、谱法和纸色谱法基本原理及其应用。3了解色谱法的由来，高效薄层色谱法及薄层扫描法的基本原理及应用。本讲稿第三页，共六十三页4能力要求能力要求u熟熟练练掌掌握握薄薄层层色色谱谱法法、柱柱色色谱谱法法及及纸纸色色谱谱法法的的操操作作技技术术，学学会会应应用用薄薄层层色色谱谱法法、纸纸色色谱谱法法等等对对物物质质进进行行分分离和鉴定。离和鉴定。本讲稿第四页，共六十三页5第一节概 述 第一节第一节 概概 述述 u色谱法（色谱法（chromatography）是一种根据物质的物理或物理）是一种根据物质的物理或物理化学性质不同而进行分离分析的方法。化学性质不同而进行分离分析的方法。本讲稿第五页，共六十三页6

3、第一节概 述一、一、色谱法的发展概况色谱法的发展概况 u色谱法的创始人是俄国植物学家色谱法的创始人是俄国植物学家Tsweet。u20世纪世纪30与与40年代相继出现了薄层色谱和纸色谱，与柱色谱年代相继出现了薄层色谱和纸色谱，与柱色谱一起统称为经典的液相色谱法，使色谱法成为一门分离技术。一起统称为经典的液相色谱法，使色谱法成为一门分离技术。u20世纪世纪 50年代气相色谱的兴起，使色谱法在理论、仪器年代气相色谱的兴起，使色谱法在理论、仪器以及分离与以及分离与“在线在线”分析等方面得到长足发展，奠定了分析等方面得到长足发展，奠定了现代色谱法的基础。现代色谱法的基础。本讲稿第六页，共六十三页7第一节

4、概 述u20世纪世纪 70年代高效液相色谱的崛起，弥补了气相色谱不能直接用年代高效液相色谱的崛起，弥补了气相色谱不能直接用于分析难挥发、对热不稳定及高分子试样等方面的不足，拓宽了于分析难挥发、对热不稳定及高分子试样等方面的不足，拓宽了色谱法的应用范围，成为色谱发展史上又一个里程碑色谱法的应用范围，成为色谱发展史上又一个里程碑。u20世纪世纪 80年代是色谱迅猛发展的重要时期，相继出现了液年代是色谱迅猛发展的重要时期，相继出现了液相色谱的各种联用技术相色谱的各种联用技术。u经过一个多世纪的发展，色谱法已成为重要的分离分析方法。经过一个多世纪的发展，色谱法已成为重要的分离分析方法。本讲稿第七页，共

5、六十三页8第一节概 述二、色谱法的分类二、色谱法的分类（一）按两相的分子聚集状态分类（一）按两相的分子聚集状态分类 u液相色谱法（液相色谱法（LC）：流动相为液体的色谱法。）：流动相为液体的色谱法。u气相色谱法（气相色谱法（GC）：流动相为气体的色谱法。）：流动相为气体的色谱法。u超临界流体色谱法（超临界流体色谱法（SFC）：是以超临界流体作为流动相的）：是以超临界流体作为流动相的一种色谱法。一种色谱法。本讲稿第八页，共六十三页9第一节概 述（二）按操作形式分类 u柱色谱法（CC）:将固定相装于柱管内构成色谱柱，色谱过程在色谱柱内进行的色谱法，称为柱色谱。u平面色谱法:色谱过程在固定相构成的平

6、面层内进行的色谱法，称为平面色谱。本讲稿第九页，共六十三页10第一节概 述（三）按色谱过程的分离机制分类 u吸附色谱法（adsorption chromatography，AC）u分配色谱法（distribution chromatography，DC）u离子交换色谱法（ion exchange chromatography，IEC）u空间排阻色谱法（steric exclusion chromatography，SEC）本讲稿第十页，共六十三页11课堂互动课堂互动请您阐述色谱法的分类方法？第一节概 述本讲稿第十一页，共六十三页12第一节概 述三、色谱过程三、色谱过程 u色谱法具有相对运动的两

7、相，其一色谱法具有相对运动的两相，其一是固定不动的，称为固定相是固定不动的，称为固定相（stationary phase）；而另一相则）；而另一相则是携带试样向前移动的，称为流动相是携带试样向前移动的，称为流动相（mobile phase）。）。u色谱过程是物质在相对运动的固定相色谱过程是物质在相对运动的固定相和流动相之间达到分配平衡的过程。和流动相之间达到分配平衡的过程。例：顺式与反式偶氮苯的色谱过程。例：顺式与反式偶氮苯的色谱过程。顺式与反式偶氮苯的顺式与反式偶氮苯的色谱过程示意图色谱过程示意图a.加样加样 b.洗脱洗脱 c.继续洗脱继续洗脱1.顺式偶氮苯顺式偶氮苯 2.反式偶氮苯反式偶氮

8、苯本讲稿第十二页，共六十三页13第二节第二节 色谱法的基本概念色谱法的基本概念 一、色谱图一、色谱图 u色谱流出曲线色谱流出曲线（一）基线（一）基线：是在操作条件下，仅有流动相通过检测系统时所产生：是在操作条件下，仅有流动相通过检测系统时所产生的信号曲线。的信号曲线。（二）色谱峰（二）色谱峰：色谱流出曲线上的突起部分。分为对称峰与不对：色谱流出曲线上的突起部分。分为对称峰与不对称峰，后者又分为前延峰和拖尾峰。称峰，后者又分为前延峰和拖尾峰。第二节色谱法的基本概念 本讲稿第十三页，共六十三页14第二节色谱法的基本概念 色谱流出曲线和色谱峰区域宽度色谱流出曲线和色谱峰区域宽度 本讲稿第十四页，共六

9、十三页15第二节色谱法的基本概念ufs处处于于0.951.05之之间间为为对对称称峰峰；小小于于0.95者者为为前前延延峰峰；大大于于1.05者为拖尾峰。者为拖尾峰。u色色谱谱流流出出曲曲线线上上，一一个个组组分分的的色色谱谱峰峰可可用用峰峰位位、峰峰高高或或峰峰面面积积及及色色谱谱峰峰的的区区域域宽宽度度等等三三项项参参数数描描述述，分分别别作作为为定定性性、定量及衡量柱效的依据。定量及衡量柱效的依据。峰高（峰高（h）：色谱峰顶至基线的垂直距离。）：色谱峰顶至基线的垂直距离。峰面积（峰面积（A）：色谱峰与基线所包围的面积。）：色谱峰与基线所包围的面积。本讲稿第十五页，共六十三页16第二节色谱

10、法的基本概念 标准差（标准差（）：正态分布曲线上两拐点间距离的一半。）：正态分布曲线上两拐点间距离的一半。半峰宽（半峰宽（W1/2）：峰高一半处的峰宽称为半峰宽。）：峰高一半处的峰宽称为半峰宽。W1/2=2.355 峰宽（峰宽（W）：通过色谱峰两侧拐点作切线，在基线上）：通过色谱峰两侧拐点作切线，在基线上 所截得的距离称为峰宽。所截得的距离称为峰宽。W =4 或或W=1.699 W1/2 色谱峰的区域宽度色谱峰的区域宽度 色谱峰的区域宽度用于衡量色谱柱的柱效，区域宽度越小，色色谱峰的区域宽度用于衡量色谱柱的柱效，区域宽度越小，色谱柱的柱效越高。谱柱的柱效越高。本讲稿第十六页，共六十三页17第二

11、节色谱法的基本概念u对对称称峰峰与与不不对对称称峰峰可可用用对对称称因因子子（fs）或或拖拖尾尾因因子子（T）来来衡量。衡量。对称因子计算示意图对称因子计算示意图 本讲稿第十七页，共六十三页18第二节色谱法的基本概念二、保留值二、保留值u保留时间（保留时间（tR）：进样开始到某组分色谱峰顶点的时间间）：进样开始到某组分色谱峰顶点的时间间隔。隔。u死时间（死时间（tM或或t0）：分配系数为零的组分（即不被固定相吸附）：分配系数为零的组分（即不被固定相吸附或溶解的组分）的保留时间或溶解的组分）的保留时间。u调整保留时间（调整保留时间（t R）：组分的保留时间与死时间之差。亦可）：组分的保留时间与死

12、时间之差。亦可认为是组分在固定相中的滞留时间。认为是组分在固定相中的滞留时间。t R =tR-tM 本讲稿第十八页，共六十三页19第二节色谱法的基本概念u保留体积（保留体积（VR）：某组分在保留时间内流动相流经色谱：某组分在保留时间内流动相流经色谱柱的体积柱的体积。VR=tRFc u死体积（死体积（VM或或V0）：由进样器至检测器的流路中未被固定相占）：由进样器至检测器的流路中未被固定相占据的空间称为死体积。据的空间称为死体积。VM=tMFc 死体积大，色谱峰扩展，色谱柱的柱效降低死体积大，色谱峰扩展，色谱柱的柱效降低。本讲稿第十九页，共六十三页20第二节色谱法的基本概念u调整保留体积（调整保

13、留体积（V R）：）：保留体积与死体积之差。保留体积与死体积之差。V R=VR-VM=t R Fc 问题问题您能说出色谱法定性、定量以您能说出色谱法定性、定量以及衡量柱效的依据吗？及衡量柱效的依据吗？本讲稿第二十页，共六十三页21第二节色谱法的基本概念三、分配系数和容量因子三、分配系数和容量因子 u分配系数（分配系数（distribution coefficient，K）容量因子（容量因子（capacity factor，k）本讲稿第二十一页，共六十三页22第二节色谱法的基本概念分配系数与容量因子的关系分配系数与容量因子的关系u分配系数比（分配系数比（）本讲稿第二十二页，共六十三页23第二节色

14、谱法的基本概念分配系数、容量因子与保留值的关系分配系数、容量因子与保留值的关系 分分配配系系数数（或或容容量量因因子子）越越小小，组组分分的的迁迁移移速速度度越越快快，保保留留时间越短，即先流出色谱柱；反之亦然。时间越短，即先流出色谱柱；反之亦然。分配系数（或容量因子）不等是组分分离的前提。分配系数（或容量因子）不等是组分分离的前提。问题问题为什么说为什么说“分配系数不等是组分分离的前提分配系数不等是组分分离的前提”？本讲稿第二十三页，共六十三页24第二节色谱法的基本概念四、分离参数四、分离参数u分离度（分离度（resolution，R）中国药典中国药典2005年版规定：作定量分析时，为了获得

15、较好年版规定：作定量分析时，为了获得较好的精密度和准确度，应使的精密度和准确度，应使R1.5。问题问题两相邻色谱峰完全分离的判断依据是什么？两相邻色谱峰完全分离的判断依据是什么？本讲稿第二十四页，共六十三页25第三节基本色谱法的分离机制 第三节第三节 基本色谱法的分离机制基本色谱法的分离机制 一、吸附色谱法分离机制一、吸附色谱法分离机制u吸附色谱法是以吸附剂为固定相，液体（或气体）为流动相，利吸附色谱法是以吸附剂为固定相，液体（或气体）为流动相，利用吸附剂对不同组分的吸附能力差异进行分离的色谱法。用吸附剂对不同组分的吸附能力差异进行分离的色谱法。u吸附是指溶质在液吸附是指溶质在液-固（或气固（

16、或气-固）两相的交界面上集中浓缩固）两相的交界面上集中浓缩的现象。的现象。本讲稿第二十五页，共六十三页26第三节基本色谱法的分离机制u吸附色谱过程就是组分不断被吸附、解吸附，再吸附、再吸附色谱过程就是组分不断被吸附、解吸附，再吸附、再解吸附，解吸附，如此反复多次的过程。，如此反复多次的过程。u吸附平衡常数吸附平衡常数组分的吸附平衡常数越大，组分越容易被吸附，保留时间越长，组分的吸附平衡常数越大，组分越容易被吸附，保留时间越长，迁移速度就越慢，即后流出色谱柱。迁移速度就越慢，即后流出色谱柱。本讲稿第二十六页，共六十三页27第三节基本色谱法的分离机制 二、分配色谱法分离机制二、分配色谱法分离机制

17、u分配色谱法是利用混合物中的不同组分在固定相和流动相中的分配色谱法是利用混合物中的不同组分在固定相和流动相中的溶解度不同，即在两相中的分配系数不同而实现分离的。溶解度不同，即在两相中的分配系数不同而实现分离的。u分离机制：流动相携带样品流经固定相时，各组分在两相间不分离机制：流动相携带样品流经固定相时，各组分在两相间不断地进行溶解、萃取，再溶解、再萃取，断地进行溶解、萃取，再溶解、再萃取，如此多次后，如此多次后，使分配系数稍有差异的组分得以分离。使分配系数稍有差异的组分得以分离。本讲稿第二十七页，共六十三页28第三节基本色谱法的分离机制三、离子交换色谱法分离机制三、离子交换色谱法分离机制u离子

18、交换色谱法是利用被分离组分离子交换能力的差别而离子交换色谱法是利用被分离组分离子交换能力的差别而实现分离的。实现分离的。u分离机制：被分离的离子随流动相流经离子交换树脂时，与离分离机制：被分离的离子随流动相流经离子交换树脂时，与离子交换树脂上可被交换的离子连续进行竞争交换，因不同离子子交换树脂上可被交换的离子连续进行竞争交换，因不同离子与交换树脂的竞争交换能力不同，其迁移的速度亦不同，交换与交换树脂的竞争交换能力不同，其迁移的速度亦不同，交换能力弱的离子，迁移速度快，保留时间短，先流出色谱柱。能力弱的离子，迁移速度快，保留时间短，先流出色谱柱。本讲稿第二十八页，共六十三页29第三节基本色谱法的

19、分离机制u离子交换反应：离子交换反应：R-B+A+R-A+B+离子交换反应的选择性系数（离子交换反应的选择性系数（KA/B）用于衡量离子对树脂的亲和）用于衡量离子对树脂的亲和能力，能力，KA/B越大，说明越大，说明A的交换能力大，保留时间长，则的交换能力大，保留时间长，则A比比B后流出色谱柱；若后流出色谱柱；若KA/B较小（较小（KA/B1），说明），说明B离子离子的交换能力大，保留时间长，则的交换能力大，保留时间长，则A比比B先流出色谱柱。先流出色谱柱。本讲稿第二十九页，共六十三页30第三节基本色谱法的分离机制四、空间排阻色谱法分离机制四、空间排阻色谱法分离机制空空间间排排阻阻色色谱谱法法是

20、是利利用用被被分分离离组组分分分分子子的的大大小小或或渗渗透透系系数数的的大大小小而而进进行行分分离离分分析析的的色谱法。色谱法。分分离离机机制制：类类似似于于反反分分子子筛筛的作用（见右图）。的作用（见右图）。凝胶色谱分离机制示意图凝胶色谱分离机制示意图O：凝胶颗粒：凝胶颗粒o：大分子组分：大分子组分：小分子组分：小分子组分本讲稿第三十页，共六十三页31第三节基本色谱法的分离机制 u各组分在流经凝胶表面时，由于小分子能完全渗透进入凝各组分在流经凝胶表面时，由于小分子能完全渗透进入凝胶内部孔穴而被滞留，中等分子可以部分进入较大的一些胶内部孔穴而被滞留，中等分子可以部分进入较大的一些孔穴，大分子

21、则完全不能进入孔穴而只能沿凝胶颗粒之间孔穴，大分子则完全不能进入孔穴而只能沿凝胶颗粒之间的空隙随流动相流动。于是样品中各组分按大分子、中等的空隙随流动相流动。于是样品中各组分按大分子、中等大小的分子、小分子的先后顺序流出色谱柱，从而得以分大小的分子、小分子的先后顺序流出色谱柱，从而得以分离。离。本讲稿第三十一页，共六十三页32第四节经典液相色谱法 第四节第四节 经典液相色谱法经典液相色谱法 一、柱色谱法一、柱色谱法（一）吸附柱色谱法（一）吸附柱色谱法 u固定相固定相：吸附剂：吸附剂 硅胶硅胶硅硅胶胶的的吸吸附附活活性性与与含含水水量量有有关关。含含水水量量越越大大，活活性性级级数数越越大，吸附

22、活性越低，吸附能力越弱。大，吸附活性越低，吸附能力越弱。本讲稿第三十二页，共六十三页33第四节经典液相色谱法 硅硅胶胶呈呈微微酸酸性性，主主要要用用于于分分离离酸酸性性和和中中性性物物质质，如如有有机机酸酸、氨氨基酸、甾体、萜类等。基酸、甾体、萜类等。氧化铝氧化铝 吸附活性与其含水量密切相关，水分的增加能降低其吸附能力。吸附活性与其含水量密切相关，水分的增加能降低其吸附能力。中中性性氧氧化化铝铝用用于于分分离离酸酸性性、中中性性和和碱碱性性化化合合物物，如如生生物物碱碱、挥挥发油、甾体、萜类及在酸碱中不稳定的酯类、苷类等。发油、甾体、萜类及在酸碱中不稳定的酯类、苷类等。本讲稿第三十三页，共六十

23、三页34第四节经典液相色谱法 聚酰胺聚酰胺 主主要要通通过过分分子子中中的的酰酰氨氨基基与与化化合合物物质质子子给给予予体体形形成成氢氢键键而而对对该该物物质质产产生生吸吸附附，因因形形成成氢氢键键的的能能力力不不同同，吸吸附附能能力也不同，从而使各化合物得以分离。力也不同，从而使各化合物得以分离。主主要要用用于于酚酚类类（含含黄黄酮酮类类、蒽蒽醌醌类类、鞣鞣质质类类等等）、酸酸类类、硝基类等物质的分离。硝基类等物质的分离。本讲稿第三十四页，共六十三页35第四节经典液相色谱法 大孔吸附树脂：大孔吸附树脂：主主要要通通过过范范德德华华引引力力或或产产生生氢氢键键而而吸吸附附被被分分离离物物质质，

24、选选择择性则由其多孔性网状结构所决定。性则由其多孔性网状结构所决定。主主要要用用于于水水溶溶性性化化合合物物的的分分离离及及纯纯化化，如如皂皂苷苷、其其它它苷苷类物质等。类物质等。本讲稿第三十五页，共六十三页36第四节经典液相色谱法 u流动相流动相 吸吸附附色色谱谱中中，流流动动相相的的洗洗脱脱作作用用实实质质上上是是流流动动相相分分子子与与被被分分离离组组分分分分子子竞竞争争占占据据吸吸附附剂剂表表面面活活性性中中心心的的过过程程，极极性性强强的的流流动动相相分分子子占占据据吸吸附附活活性性中中心心的的能能力力强强，具具有有强强的的洗洗脱脱作作用用；而而极极性性弱弱的的流流动动相相分分子子竞

25、竞争争占占据据吸吸附附活活性性中中心心的的能力弱，洗脱作用就弱。能力弱，洗脱作用就弱。本讲稿第三十六页，共六十三页37第四节经典液相色谱法 流动相的选择流动相的选择必必须须同同时时兼兼顾顾被被测测物物的的性性质质、吸吸附附剂剂的的活活性性和和流流动动相相的的极极性等三方面性等三方面。一一般般原原则则是是：若若被被分分离离组组分分极极性性较较小小，宜宜选选用用吸吸附附活活性性较较大大的的吸吸附附剂剂和和极极性性较较小小的的洗洗脱脱液液；反反之之，则则应应选选择择吸吸附附活活性小的吸附剂和极性较强的洗脱液。性小的吸附剂和极性较强的洗脱液。本讲稿第三十七页，共六十三页38第四节经典液相色谱法 被测物

26、质的极性、吸附剂活性和流动相极性之间的关系示意图被测物质的极性、吸附剂活性和流动相极性之间的关系示意图 本讲稿第三十八页，共六十三页39第四节经典液相色谱法（二）分配柱色谱法（二）分配柱色谱法 u固定相固定相 由载体及涂渍或键合在载体表面的固定液组成。由载体及涂渍或键合在载体表面的固定液组成。载体载体是一种惰性物质，主要起负载或支撑固定液的作用。是一种惰性物质，主要起负载或支撑固定液的作用。固定液固定液正相色谱：强极性溶剂，如水、甲醇等。正相色谱：强极性溶剂，如水、甲醇等。反相色谱：非极性或弱极性溶剂，如液体石蜡等。反相色谱：非极性或弱极性溶剂，如液体石蜡等。本讲稿第三十九页，共六十三页40第

27、四节经典液相色谱法 u流动相流动相 正相色谱：极性小于固定相的醇类、酮类、酯类、卤代烷、正相色谱：极性小于固定相的醇类、酮类、酯类、卤代烷、苯或其混合物。苯或其混合物。反相色谱：水、稀醇等极性溶剂。反相色谱：水、稀醇等极性溶剂。u应用应用 各类化合物的分离，特别是亲水性物质，如极性较大的酚类、各类化合物的分离，特别是亲水性物质，如极性较大的酚类、糖类、氨基酸衍生物等。糖类、氨基酸衍生物等。本讲稿第四十页，共六十三页41第四节经典液相色谱法（三）离子交换柱色谱法（三）离子交换柱色谱法 u固定相离子交换树脂固定相离子交换树脂 交联度：离子交换树脂中所含交联剂的量。交联度：离子交换树脂中所含交联剂的

28、量。用用于于衡衡量量离离子子交交换换树树脂脂的的选选择择性性，交交联联度度大大，树树脂脂的的网网状状结结构构紧密，网眼小，选择性好。紧密，网眼小，选择性好。交交换换容容量量：实实验验条条件件下下，每每克克干干树树脂脂真真正正参参加加交交换换的的活活性性基基团数。团数。用用于于衡衡量量离离子子交交换换树树脂脂的的交交换换能能力力，交交换换容容量量大大，树树脂脂的的交交换换能力强。能力强。本讲稿第四十一页，共六十三页42第四节经典液相色谱法 u流动相流动相 水为溶剂的缓冲溶液。水为溶剂的缓冲溶液。u应用应用 去离子水的制备，天然药物化学成分的分离，各种有机酸、去离子水的制备，天然药物化学成分的分离

29、，各种有机酸、氨基酸的分离制备，抗生素的纯制、去除干扰离子、测定氨基酸的分离制备，抗生素的纯制、去除干扰离子、测定某些盐类的含量等。某些盐类的含量等。本讲稿第四十二页，共六十三页43第四节经典液相色谱法（四）空间排阻柱色谱法（四）空间排阻柱色谱法 u固定相固定相多孔性凝胶，常用葡聚糖凝胶。多孔性凝胶，常用葡聚糖凝胶。选选择择凝凝胶胶时时应应使使试试样样的的相相对对分分子子量量落落入入凝凝胶胶的的相相对对分分子子质质量量范围内。范围内。流动相流动相 一般水溶性试样选择水溶液为流动相，而非水溶性试样则一般水溶性试样选择水溶液为流动相，而非水溶性试样则选择四氢呋喃、氯仿、甲苯等有机溶剂为流动相。选择

30、四氢呋喃、氯仿、甲苯等有机溶剂为流动相。本讲稿第四十三页，共六十三页44第四节经典液相色谱法 u应用应用 天然药物化学和生物化学的研究，水溶性高分子化合物如蛋白制天然药物化学和生物化学的研究，水溶性高分子化合物如蛋白制剂等的分析。剂等的分析。本讲稿第四十四页，共六十三页45第四节经典液相色谱法 二、平面色谱法二、平面色谱法（一）薄层色谱法（一）薄层色谱法 u薄层色谱法是将固定相（如：吸附剂）均匀地涂铺在光洁的玻薄层色谱法是将固定相（如：吸附剂）均匀地涂铺在光洁的玻璃板、塑料板或金属板上形成薄层，在薄层板上进行分离分析璃板、塑料板或金属板上形成薄层，在薄层板上进行分离分析的方法。的方法。u分离机

31、制分离机制与吸附柱色谱的分离机制相似。与吸附柱色谱的分离机制相似。本讲稿第四十五页，共六十三页46第四节经典液相色谱法 u比移值与相对比移值比移值与相对比移值 比移值（比移值（retardation factor，Rf）：）：L0原点原点溶剂前沿溶剂前沿ABL1L2Rf的测量示意图的测量示意图本讲稿第四十六页，共六十三页47第四节经典液相色谱法 Rf可用范围是可用范围是0.20.8，最佳范围是，最佳范围是0.30.5。相对比移值（相对比移值（relative retardation factor，Rr）Rr可以大于可以大于1，也可以小于，也可以小于1。本讲稿第四十七页，共六十三页48第四节经典

32、液相色谱法例题例题已知被测物质已知被测物质A和参考物和参考物B在同一薄层板上进行色谱在同一薄层板上进行色谱分析，展开后，溶剂前沿到原点的距离为分析，展开后，溶剂前沿到原点的距离为18cm，A、B两物质斑点中心到原点的距离分别为两物质斑点中心到原点的距离分别为12cm和和9cm，请计算：请计算：（1）A物质的比移值。物质的比移值。（2）A、B两物质的相对比移值。两物质的相对比移值。本讲稿第四十八页，共六十三页49第四节经典液相色谱法 u吸附剂与展开剂吸附剂与展开剂 吸附剂（固定相）吸附剂（固定相）与与吸吸附附柱柱色色谱谱法法所所用用的的吸吸附附剂剂相相似似，其其主主要要区区别别在在于于薄薄层层色

33、色谱法所用的吸附剂颗粒更细小。谱法所用的吸附剂颗粒更细小。展开剂（流动相）展开剂（流动相）选选择择：遵遵循循“相相似似相相溶溶”原原则则，极极性性大大的的组组分分选选择择极极性性大大的展开剂，反之亦然。的展开剂，反之亦然。本讲稿第四十九页，共六十三页50第四节经典液相色谱法混合展开剂：一般在混合溶剂中占比例较大的溶剂起着溶解混合展开剂：一般在混合溶剂中占比例较大的溶剂起着溶解物质和分离的作用；而占比例小的溶剂则起着调整溶剂极性、物质和分离的作用；而占比例小的溶剂则起着调整溶剂极性、改善改善Rf 的作用。的作用。问题问题在苯在苯-乙醇（乙醇（91）展开剂中，您知）展开剂中，您知道苯、乙醇的作用吗

34、？道苯、乙醇的作用吗？本讲稿第五十页，共六十三页51第四节经典液相色谱法 u操作方法操作方法 操作程序可分为制板、点样、展开、斑点定位等。操作程序可分为制板、点样、展开、斑点定位等。u定性和定量分析定性和定量分析 定性分析：定性分析：利用利用Rf或或Rr进行定性。进行定性。定量分析定量分析 常用的定量方法有目视比色法、洗脱法和薄层扫描法。常用的定量方法有目视比色法、洗脱法和薄层扫描法。本讲稿第五十一页，共六十三页52第四节经典液相色谱法 目视比色法：一种半定量分析方法目视比色法：一种半定量分析方法。洗洗脱脱法法：将将组组分分斑斑点点全全部部取取下下，用用适适当当的的溶溶剂剂进进行行洗洗脱脱，再

35、再选选用用适适当当的的方方法法（如如：紫紫外外分分光光光光度度法法、荧荧光光分分光光光光度度法等）进行定量测定。法等）进行定量测定。薄薄层层扫扫描描法法：用用薄薄层层扫扫描描仪仪对对组组分分斑斑点点进进行行扫扫描描，直直接接测测定定斑点的含量。斑点的含量。注注意意事事项项：色色斑斑集集中中、无无拖拖尾尾；选选用用对对被被测测组组分分有有较较大大溶溶解解度度的的溶溶剂剂浸浸泡泡并并多多次次洗洗脱脱；对对不不易易洗洗脱脱的的组组分分，可可采采用用离心分离或滤过等方法进行定量洗脱。离心分离或滤过等方法进行定量洗脱。本讲稿第五十二页，共六十三页53第四节经典液相色谱法 u应用应用适用于有机化合物的分离

36、与鉴定，也可用于小量物质的提纯与适用于有机化合物的分离与鉴定，也可用于小量物质的提纯与精制。在药学领域中，可用于测定药品纯度和检查降解产物；精制。在药学领域中，可用于测定药品纯度和检查降解产物；判断药品合成反应进行的程度、监控反应历程；分离和测定天判断药品合成反应进行的程度、监控反应历程；分离和测定天然药物的有效成分。然药物的有效成分。本讲稿第五十三页，共六十三页54第四节经典液相色谱法（二）高效薄层色谱法与薄层扫描法简介（二）高效薄层色谱法与薄层扫描法简介 u高效薄层色谱法高效薄层色谱法 高效薄层板一般为商品预制板，由颗粒直径比经典薄层板更细小、高效薄层板一般为商品预制板，由颗粒直径比经典薄

37、层板更细小、更均匀的化学键合相、硅胶、氧化铝、纤维素等固定相，采用喷更均匀的化学键合相、硅胶、氧化铝、纤维素等固定相，采用喷雾技术制成。雾技术制成。u薄层扫描法简介薄层扫描法简介 基本原理基本原理 CS-910双波长双光束薄层扫描仪的基本光路图双波长双光束薄层扫描仪的基本光路图 本讲稿第五十四页，共六十三页55第四节经典液相色谱法CS-910双波长双光束薄层扫描仪的基本光路示意图双波长双光束薄层扫描仪的基本光路示意图 本讲稿第五十五页，共六十三页56第四节经典的液相色谱法扫描方式扫描方式可分为线形扫描及曲折形扫描。可分为线形扫描及曲折形扫描。本讲稿第五十六页，共六十三页57第四节经典液相色谱法

38、测定方式：测定方式：透射法透射法反射法反射法 荧光测定法荧光测定法 本讲稿第五十七页，共六十三页58第四节经典液相色谱法（三）纸色谱法（三）纸色谱法u纸色谱法是以纸为载体的平面色谱法。纸色谱法是以纸为载体的平面色谱法。u分离机制分离机制 属于分配色谱的范畴属于分配色谱的范畴，根据溶质在两相间分配系数差异而，根据溶质在两相间分配系数差异而分离。分离。一般为正相色谱，化合物的极性越大或亲水性越大，则分配系数一般为正相色谱，化合物的极性越大或亲水性越大，则分配系数越大，越大，Rf越小；化合物的极性越小或亲脂性越强，则分配系越小；化合物的极性越小或亲脂性越强，则分配系数越小，数越小，Rf越大。越大。本

39、讲稿第五十八页，共六十三页59第四节经典液相色谱法 化合物一定时，展开剂的极性越大，化合物的分配系数越化合物一定时，展开剂的极性越大，化合物的分配系数越小，小，Rf越大；展开剂的极性越小，化合物的分配系数越大，越大；展开剂的极性越小，化合物的分配系数越大，Rf越小。越小。u固定相与展开剂固定相与展开剂 固定相固定相 一般为纸纤维及其吸着的水。一般为纸纤维及其吸着的水。展开剂（流动相）展开剂（流动相）常为一些含水的有机溶剂。常为一些含水的有机溶剂。本讲稿第五十九页，共六十三页60第四节经典液相色谱法 u实验方法实验方法 色谱滤纸的选择色谱滤纸的选择 应满足：应满足：纯净，无明显荧光斑点。纯净，无

40、明显荧光斑点。均匀无痕，有一定的机械强度。均匀无痕，有一定的机械强度。纸纤维松紧适宜。纸纤维松紧适宜。应针对分离组分及分离分析目的选择合适的滤纸型号。应针对分离组分及分离分析目的选择合适的滤纸型号。本讲稿第六十页，共六十三页61第四节经典液相色谱法 点样点样 与薄层色谱法相似。与薄层色谱法相似。展开展开 展展开开剂剂的的选选择择主主要要考考虑虑欲欲分分离离物物质质在在两两相相中中的的溶溶解解度度和和展展开开剂剂的极性。的极性。常用上行展开方式展开。常用上行展开方式展开。本讲稿第六十一页，共六十三页62第四节经典液相色谱法 斑点的定位斑点的定位 与薄层色谱法相似，应注意：纸色谱不能使用具有腐蚀性的与薄层色谱法相似，应注意：纸色谱不能使用具有腐蚀性的显色剂，以免腐蚀滤纸；也不能在高温下显色。显色剂，以免腐蚀滤纸；也不能在高温下显色。定性和定量分析定性和定量分析 定性方法同薄层色谱法。定性方法同薄层色谱法。定定量量方方法法则则采采用用剪剪洗洗法法，亦亦可可采采用用目目视视比比色色法法作作半半定定量量分分析。析。本讲稿第六十二页，共六十三页63本章结束!谢谢!本讲稿第六十三页，共六十三页