课题3血红蛋白的提取和分离.doc

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1、课课 时时 教教 学学 设设 计计 首首 页页授课时间授课时间年年月月日日课题课题课题课题 3 3 血红蛋白的提取和分离血红蛋白的提取和分离课型课型第第课时课时课时教学目标（三维）课时教学目标（三维）（一）知识与技能（一）知识与技能1、尝试从血液中提取和分离血红蛋白2、了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理（二）过程与方法（二）过程与方法体验血红蛋白提取和分离的实验的严格要求，注意按照操作提示进行相关步骤（三）情感、态度与价值观（三）情感、态度与价值观初步形成科学的思维方式，发展科学素养和人文精神教学重点与教学重点与难点难点课题重点课题重点:凝胶色谱法的原理和方法课题难点课题难点:样品的

2、预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填教学方法与教学方法与手段手段启发式教学,多媒体课件使使用用教教材材的的构构想想课题背景通过当今生物科学在蛋白质研究领域的进展，说明提取、分离高纯度的蛋白质的重要性和必要性，进而明确地提出课题目的：以血红蛋白为实验材料，学习蛋白质提取和分离的一些基本技术。教师可以发挥学生的主动性，让学生介绍当前有关蛋白质研究的新进展，激发学生的学习兴趣，然后指出本课题的学习意义，让学生初步体会分离纯化蛋白质的过程和方法。第第1 1 页页娄烦中学娄烦中学课课 时时 教教 学学 设设 计计 尾尾 页页板板书书设设计计作作 业业 设设 计计1、你能描述血红蛋白分离的完整过程吗？2

3、、与其他真核细胞相比较，红细胞有什么特点？这对你进行蛋白质的分离和提取有什么意义？教教学学后后记记本课题重在让学生了解生物科学在蛋白质领域的进展，说明提取、分离高纯度的蛋白质的重要性和必要性，并学习一些蛋白质分离和提取的基本技术。教师可以发挥学生的主动性，让学生介绍当前有关蛋白质研究的新进展，激发学生的学习兴趣，然后指出本课题的学习意义，让薛生初步体会分离纯化蛋白质的过程和方法娄烦中学娄烦中学血红蛋白的取和分离凝胶色谱法原理分离过程凝胶电泳法缓冲溶液组成作用蛋白质的提取分离样品处理粗分离纯化纯度鉴定血红蛋白的提取和离蛋白质分子的差异性蛋白质分子的差异性凝胶色谱法原理分离过程凝胶电泳法凝胶色谱法

4、原理分离过程凝胶电泳法缓冲溶液组成作用缓冲溶液组成作用蛋白质的提取分离样品处理粗分离纯化纯度鉴定蛋白质的提取分离样品处理粗分离纯化纯度鉴定课课时时知知识识清清单单要点要点 1 1如何分离不同种类的蛋白质如何分离不同种类的蛋白质根据蛋白质各种特性的差异分离蛋白质。如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等等。要点要点 2 2凝胶色谱柱凝胶色谱柱（1）定义凝胶色谱法也称作分配色谱法，是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。（2）凝胶所用的凝胶实际上是一些微小的多孔球体，这些小球体大多数是由多糖类化合物构成的，如葡聚糖或琼脂糖。（3）分离原理在小球体内部有

5、许多贯穿的通道，当相对分于质量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢；而相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快。相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。要点要点 3 3缓冲溶液缓冲溶液（1）缓冲溶液的缓冲作用在一定范围内，缓冲溶液能够抵制外界的酸和碱对溶液 pH 的影响，维持 pH 基本不变。调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同 pH 范围内使用的缓冲液。（2）缓冲溶液的意义生物体内进行的各种生物化学反应都是在一定的 pH 下进行的，为了能够在实验室条件下准确模拟生物体内的过程，就必须

6、保持体外的 pH 与体内的基本一致。要点要点 4 4电泳电泳（1）定义电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程。（2）电泳原理许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的 pH 下，这些基团会带上正电或负电。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。电泳利用了待分离样品中各种分于带电性质的差异以及分子本身的大小、形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。（3）电泳过程中影响粒子运动快慢的因素粒子带电荷的多少。粒子带电荷越多在电场中运动越快。粒子的质量。粒子质量越小在电场中运动越快。粒子的形状。呈球形或近球形的粒子比链状粒

7、子运动快。（4）荷质比粒子在电泳时运动的快慢主要取决于电荷与质量比，简称荷质比。荷质比值越大的粒子电泳时运动越快。要点要点 5 5实验操作实验操作蛋白质的提取和分离一般分为四步：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。娄烦中学娄烦中学预预 习习 检检 测测 题题凝胶色谱法（分配色谱法凝胶色谱法（分配色谱法）：1、概念：根据被分离蛋白质的，利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，来分离蛋白质的有效方法。2、原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，相对的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程，移动速度，而的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在移动，路程，移动速度，相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。3、具体过程：A.

8、的蛋白质由于作用进入凝胶颗粒内部而被滞留；的蛋白质被排阻在凝胶颗粒外面，在了里之间迅速通过。B.（1）混合物上柱；（2）洗 脱 开 始，的 蛋 白 质 扩 散 进 入 凝 胶 颗 粒 内；的蛋白质被排阻于凝胶颗粒之外；（3）的蛋白质被滞留；的蛋白质被向下移动。（4）不同的蛋白质分子完全分开；（5）的蛋白质行程较短，已从中洗脱出来，的蛋白质还在行进中。缓冲溶液：缓冲溶液：1、概念：在一定的范围内，能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液 PH 发生明显变化的作用叫做缓冲作用，具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。2、作用：能够抵制的对溶液的的影响，维持PH 基本不变。3、缓冲溶液的配制通常由种缓冲

9、剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的就可以制得使用的缓冲液。思考：说出人体血液中缓冲对？思考：在血红蛋白整个实验室中用的缓冲液是什么？它的目的是什么？使用的是磷酸缓冲液，目的是利用缓冲液模拟细胞内的 PH 环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察（红色）和材料的科学研究（活性）电泳：电泳：1、概念：指发生迁移的过程。2、原 理：许 多 重 要 的 生 物 大 分 子，如等 都 具 有在下，这些基团会带上。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其移动。电泳利用了待分离样品中各种分子以及分子本身、的不同使带电分子产生不同的，从而实现样品中各种分子的分离。娄烦中学娄烦中学当当 堂堂 检检 测测 题题

10、1.凝胶色谱法分离蛋白质的依据是（）A.对其他分子的亲和力B.溶解度C.所带电荷多少D.相对分子质量的大小2.凝胶色谱法中所用的凝胶化学本质大多是（）A.糖类化合物B.脂质C.蛋白质D.核酸3.选用红细胞作为分离蛋白质的实验材料，有何好处（）A.血红蛋白是有色蛋白B.红细胞无细胞核C.红细胞蛋白质含量高D.红细胞 DNA 含量高4.将搅拌好的混合液离心来分离血红蛋白溶液时，第二层是（）A.甲苯B.血红蛋白水溶液C.脂溶性物质的沉淀层D.其他杂质的沉淀5.血红蛋白因含有（）而呈红色A.O2B.COC.CO2D.血红素6.下列操作正确的是（）A.分离红细胞时采用低速长时间离心B.红细胞释放出血红蛋白只需要加入蒸馏水就可C.分离血红蛋白溶液是低速短时间离心D.透析时要用 20mmol/l 的磷酸缓冲液，透析 12h7.样品的加入和洗脱的叙述正确的是（）A.先加入 1ml 透析后的样品B.加样前要使缓冲液缓慢下降全部流出C.如果红色带均匀一致的移动，说明色谱柱制作成功D.洗脱时可以用缓冲液也可以用清水娄烦中学娄烦中学