正交试验设计优选咽清颗粒的提取工艺_4因素3水平正交试验表.docx

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1、正交试验设计优选咽清颗粒的提取工艺_4因素3水平正交试验表 摘要：目的通过正交试验设计考察咽清颗粒的提取工艺。方法以总浸膏量和有效成分绿原酸含量为指标，以溶剂量、提取时间和提取次数为考察因素，每因素设计3个水平，用L9（34）正交表支配试验。结果咽清颗粒的最佳提取工艺为1/3处方量的药材以200 mL水回流提取3次，每次0.5 h。结论确定的咽清颗粒提取工艺重复性好，操作简洁，具有较高的应用价值。 关键词：咽清颗粒；正交试验；绿原酸；高效液相色谱法 中图分类号：R282.71文献标识码：A文章编号：1672-979X(2008)11-0029-03 Optimization of Extrac

2、tion Technology of Yanqing Granule by Orthogonal Test CUI Jing1, ZHAO Yu2, BIAN Yi-qun2, ZHOU Wen1 (1. Department of Pharmacy, Qilu Hospital Affiliated to Shandong University, Jinan 250012, China; 2. School of Pharmaceutical Sciences, Shandong University, Jinan 250012, China) Abstract：Objective To o

3、ptimize the extraction technology of Yanqing Granule by orthogonal test. MethodsUsing the contents of chlorogenic acid and total extraction as indexes, choosing solvent volume, extracting duration and extracting times as influential factors, the optimal extraction condition was studied by L9(34) ort

4、hogonal test. Results The optimal extraction condition of Yanqing Granule was: 200 mL water for 1/3 amount of drugs, refluxing extraction for 3 times and 0.5 h each time. Conclusion The optimal extraction technology obtained in this study is simple and reproducible, and it has a higher application v

5、alue in the production of Yanqing Granule. Keywords：Yanqing Granules; orthogonal design; chlorogenic acid; high performance liquid chromatography 慢性咽炎是由慢性感染引起的充满性咽部病变，多发于成年人，其发病率高，患病人数多，易被忽视，影响了人们的身体健康及正常的工作、生活1。 咽炎一号是齐鲁医院的中医验方，由金银花等9味中药组成，开水冲泡代茶饮。长期临床用于治疗慢性咽炎，效果准确。但由于代茶饮用，剂量较大，且因个体饮水量差异导致药物摄入量不同，剂量

6、难以精确限制。我们采纳现代制剂技术，将该方制成携带便利，易溶解、易汲取，生物利用度较高，剂量可控、质量稳定的中药颗粒剂，提高了疗效，便于服用2。 咽炎一号的主药是金银花，为忍冬科植物忍冬的花蕾，其主要活性成分为绿原酸，具有抗菌解毒、消炎利胆等作用，通常作为含金银花中成药的主要定性定量指标3。我们用正交试验设计优选了其提取工艺，现报道如下。 1仪器、材料与试剂 1.1仪器 LC-10ATvp高效液相色谱仪、SPD-10Avp紫外检测器（岛津）；浙大智达N2000色谱工作站；AE240型电子天平；SK8200HP型超声仪；调温电热套（北京佳祥科利仪器公司）。 1.2材料 金银花等9味中药材，购自齐

7、鲁医院草药房，经山东高校药学院生药探讨所霍德兰高级试验师鉴定均为正品。 1.3试剂 绿原酸比照品（中国药品生物制品检验所），甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂为国产分析纯。 2方法 2.1正交试验设计4 咽炎一号的主要有效成分为水溶性物质，故以水为溶剂提取。预试验表明，影响提取物体积和提取效率的最主要因素为提取溶剂的体积、提取时间和提取速度。因此，本试验以溶剂量、提取时间和提取次数为考察因素，每个因素设计3个水平，采纳L9（34）正交表支配试验，以浸膏总量和浸膏中绿原酸量为考察指标，正交设计见表1。对测定数值进行方差分析，确定优化的提取条件。 2.2提取方法 取金银花等9味中药（相当咽炎一号一付处方

8、量的1/3），混匀，按表1设计的方案，置于圆底烧瓶中加热回流，合并浸出液，滤过。 2.3总浸膏量的考察 将2.2项的提取液置于烘箱烘干至恒重后称重，记录各试验组的质量。 2.4绿原酸含量测定 用HPLC法测定提取物中绿原酸含量5，确定绿原酸的提取效率。 2.4.1色谱条件与系统适用性试验色谱柱为phenomenex Luna C18（250 mm4.60 mm，5 m），以乙腈-0.4 %磷酸溶液（1288）为流淌相，流速1 mLmin-1，检测波长327 nm，柱温为室温。以绿原酸峰计算理论塔板数为8 000。 2.4.2供试品溶液的配制取所得的干浸膏置研钵中研细，置入100 mL棕色量瓶中

9、，加50 %甲醇约80 mL，超声30 min后放冷，加50 %甲醇至刻度，滤过。取续滤液稀释适当倍数，经0.45m微孔滤膜过滤，进样10L。 2.4.3比照品溶液的配制精密称取绿原酸比照品10 mg，置入250 mL量瓶中，以50 %甲醇定容，制成40 gmin-1的标准溶液，进样10L。 3结果与探讨 3.1方法可行性的考察 绿原酸比照品HPLC图见图1，浸膏中绿原酸HPLC图见图2。 由图1和图2可见，比照品溶液中绿原酸保留时间为13.682 min，供试品溶液中主峰保留时间为13.698 min，供试品主峰保留时间与比照品一样，主峰前后无其它共存组分干扰。 3.2标准曲线 精密配制10

10、60 gmL-1的一系列绿原酸标准溶液，分别进样10 L测定，得绿原酸线性回来方程为：A9 932C121.82，r0.999 9（n5），表明此方法在1060 gmL-1浓度范围内线性关系良好。 3.3提取工艺的优化6 各试验组所得干浸膏质量、绿原酸含量及正交试验结果见表2，方差分析结果见表3。 由表2可见，各因素对总浸膏量的影响程度依次为B C A；对绿原酸含量的影响也是B C A。由表3可见，提取次数（B）对总浸膏量有显著影响（P3B3C3；以绿原酸为考察指标，最佳提取条件为A2B3C2。由于提取时间（A）对总浸膏量和绿原酸含量的影响均不显著，为简化操作及防止绿原酸分解，采纳0.5 h。

11、因此，综合3种因素对总浸膏量和绿原酸含量的影响，确定A1B3C2为最佳提取条件，即以200 mL 水回流提取3次，每次0.5 h。 3.4验证明验 根据正交试验优选的提取工艺，取一付处方量的1/3，加入200 mL水回流提取3次，每次0.5 h，按2.3方法处理提取液后称定干浸膏质量，按2.4方法测定干浸膏中绿原酸含量，结果见表4。 由验证明验结果可见，按优化的提取条件重复操作3次，得总浸膏量9.98 g，RSD1.90 ；绿原酸含量为35.84gmL-1，RSD1.98 。表明此提取方法重现性好。 4小结 通过正交试验，初步确定了最佳的提取工艺。确定的提取工艺操作简洁，重复性好，提取效率高，

12、在制备咽清颗粒的过程中有较高的应用价值。 参考文献 1万玉琼，田理. 慢性咽炎的中西医结合治疗进展J. 现代中西医结合杂志，2007，16（8）：1155. 2陈小兵. 咽炎颗粒的制备及临床应用J. 中国好用医药， 2007，2（33）：16. 3王天志，李永梅. 金银花的探讨进展J. 华西药学杂志， 2000，15（4）：292-298. 4周怀梧，倪永兴. 医药应用概率统计M. 上海：百家出版社，1990：433. 5国家药典委员. 山银花S. 中国药典2005版第一部. 北京：化学工业出版社 2005：21-22. 6王洁贞，李颖琰，陈冠民. 医学统计学M. 郑州：郑州高校出版社，2002：137-144.