脂欣康胶囊对载脂蛋白Ｅ基因敲除小鼠ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β干预作用 载脂蛋白E.docx

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1、脂欣康胶囊对载脂蛋白基因敲除小鼠、干预作用 载脂蛋白E 摘要：目的视察脂欣康胶囊对载脂蛋白E(ApoE)基因敲除小鼠血清肿瘤坏死因子(TNF)和白细胞介素1(IL1p)的影响。方法将6周龄ApoE基因敲除小鼠随机分为模型组与脂欣康组，相同遗传背景的同龄正常C57BL/6J小鼠为正常比照组。脂欣康组灌服脂欣康胶囊内之药粉，模型组、正常比照组均灌服生理盐水。连续灌胃2周后(8周龄)，各组随机取出半数小鼠，雌雄各半，麻醉后由腹腔静脉抽血。另一部分接着灌胃4周后(12周龄)由腹腔静脉抽血。离心分别血清，ELISA法检测TNF和IL1。结果灌服2周后，脂欣康组小鼠血清TNF和IL1显著低于模型组(P0.

2、05)，模型组显著高于正常比照组(P0.05)；接着用药4周后，TNF和IL1无明显增高，脂欣康组显著低于模型组(P0.05)，模型组显著高于正常比照组(P0.05)。结论脂欣康胶囊具有显著抑制ApoE基因敲除小鼠血清TNF与II1增高的作用。 关键词：脂欣康胶囊；载脂蛋白E；基因敲除小鼠；肿瘤坏死因子；白细胞介素1 中图分类号：R543.5 R285.5 文献标识码：A 文章编号：16721349(2007)040312一02 美国科学家1992年利用基因打靶与胚胎干细胞体外培育基础上的基因敲除(gene knockout)技术培育胜利的载脂蛋白E(AImE)基因敲除小鼠，在正常饮食下即可形

3、成明显的高脂血症及动脉粥样硬化(AS)病灶，成为探讨AS发病机制和干预措施的较志向的动物模型13。脂欣康胶囊对高脂血症和不稳定型心绞痛有显著疗效，并具有爱护血管内皮和抗AS等作用4。本探讨应用ApoE基因敲除小鼠这种转基因动物模型，探讨中药复方脂欣康胶囊对肿瘤坏死因子(TNF)和白细胞介素1(IL1)的作用，为该制剂用于临床防治AS及相关疾病的机制供应科学依据。 1材料与方法 1.1 材料脂欣康胶囊由济南孟氏生物科技探讨全部限公司生产，批准文号：卫食健字(2001)第0010号，批号：20051006。6周龄ApoE基因敲除小鼠20只，雌雄各半，体重(202)g，由北京高校医学部动物科技部从美

4、国Jackson试验室引进繁育。相同遗传背景的6周龄C57BL/6J小鼠20只，雌雄各半，体重(202)g，北京协和医科高校动物中心供应。TNF和IL1的ELISA检测试剂盒购自Biosource公司。 1.2 动物分组及给药方法将40只6周龄ApoE基因敲除小鼠随机分为两组：模型组与脂欣康组各20只。相同遗传背景的6周龄正常C57BL/6J小鼠20只为正常比照组。各组动物均喂饲SPF级一般饲料。模型组及正常比照组均灌服生理盐水0.4mL，脂欣康组灌服脂欣康胶囊内的药粉每日每只0.008 g。连续灌胃2周后(8周龄)，各组随机取出半数小鼠，雌雄各半，麻醉后由腹腔静脉取血。另外半数小鼠接着灌胃4

5、周后(12周龄)由腹腔静脉取血。离心分别血清，放入20冰箱保存。TNF和IL1检测根据ELISA试剂盒说明书严格执行。 1.3统计学处理检测数据采纳SPSS 10.0软件处理。各组均数采纳q检验。 2结果 模型组小鼠血清TNF、IL1含量较正常比照组显著增高(P0.05)；脂欣康组小鼠血清TNF、IL1较模型组显著降低(PO.05)。脂欣康组给药2周和6周比较无统计学意义(P0.05)。详见表1。 3讨论 动脉粥样硬化曾被认为是一个缓慢的脂质积聚过程。自从Ross等5提出动脉粥样硬化的损伤反应学说后，越来越多的证据提示动脉粥样硬化过程是一个血管受损伤后的炎症反应过程。炎症反应贯穿了动脉粥样硬化

6、发生、发展的过程。TNF主要是巨噬细胞分泌的一种细胞因子，其他类型的细胞如淋巴细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞等在慢性炎症刺激下也具有产生和释放TNF的实力5。由于TNF可引起细胞坏死、血栓形成和新生血管形成，因而认为它是冠状动脉内皮细胞功能紊乱、内膜增厚的始动因素。IL1是由单核一巨噬细胞分泌的一种多肽，其免疫活性包括促进细胞活化，发挥免疫调整作用，参加炎症反应等。IL1对细胞膜作用相像，它通过诱导单层重建和黏附蛋白的表达，破坏血凝一抗血凝平衡，形成血管内凝血，使血流减慢、内膜增厚。IL1还诱导表达内皮黏附分子、细胞间黏附分子等，可促进白细胞黏附于表面。白细胞黏附、聚集使血管内膜增厚，促进AS的

7、形成6。IL1可明显变更内皮细胞的抗凝血功能；通过诱导前凝血过程，促进血栓形成；增加内皮细胞内乙酰转移酶的活性，提高血小板活化因子(PAF)的水平。PAF是一种强大的血小板和白细胞的激活物以及血管收缩因子，血管收缩及血小板被激活都将触发凝血系统，促进血栓形成。IL一1还促进平滑肌细胞汲取低密度脂蛋白，使平滑肌细胞转化为泡沫细胞7。 ApoE是清除乳糜微粒和极低密度脂蛋白的受体的配体，缺乏ApoE则会导致血液循环中富含胆固醇的物质积累而更加简单引起AS病灶形成。ApoE基因敲出小鼠无论正常或高脂饮食均可形成严峻的高脂血症及充满纤维增殖性AS损伤病灶13。其所致的AS模型是缘于遗传因素损伤，其病变

8、更接近于人类AS，与进食高脂饲料发生AS的动物有根本区分，具有自然发生、渐进发展、病理形态典型等特点，成为探讨AS发病机理和干预措施较志向的动物模型，也是筛选抗AS药物及机理探讨的良好试验平台。 脂欣康胶囊由人参、银杏叶、三七、绿茶提取物和牛磺酸组成，功能益气养心健脾，活血通络，化痰降浊，为补通结合，标本兼顾之剂。现代药理探讨表明有降脂、抗AS、抗心肌缺血、抗氧化和爱护血管内皮等作用，合理配伍，可发挥多途径、多部位、多靶点的综合效应。临床探讨表明4，脂欣康胶囊具有降脂、降低AS指数、抗心肌缺血、爱护血管内皮、抑制血小板活化、抗脂质过氧化等作用。前期试验探讨表明，脂欣康胶囊有对抗ApoE基因敲除

9、小鼠AS斑块形成和稳定斑块的作用3，8，对该小鼠主动脉内膜超微结构有良好的修复和爱护作用，但有关机理尚待阐明。本试验显示，ApoE基因敲除小鼠血清TNF与ILl显著高于相同遗传背景的正常C57BL6J小鼠，脂欣康胶囊具有显著抑制ApoE基因敲除小鼠血清TNF和IL1增高的作用，为阐明脂欣康抗AS、防治冠心病不稳定型心绞痛的机制供应了部分科学依据。 参考文献： 1Plump AS，Jonathan DS，Tony H，et alSevere hypercholes-terolemia and atherosclerosis in apolipoprotein Edeficient mice cr

10、e-ated by homologousRecombination in ES Cells Cell，1992，71(10)：343353 2 Sunny HZ，Reddick RL，Piedrahita JA，et alSpontaneous hypercholesterolemia and arterial lesions in mice lacking apolipoprotein EJScience，1992，258(10)：468471 3张文高，郑广娟，刘龙涛中西药物对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化的干预作用J中西医结合心脑血管病杂志，2003，1(8)：480482 4 Zh

11、ang w，Yan T，Gao F，et alStudy()n effect of Zhixinkang cap-sule(脂欣康胶囊)in treating unstable effort angina and hyperlipidemiaand its function in vascular endothelium protectionJChinese Jour-nal of Integrative Medicine，2003，9(1)：2530 5 Ross R，Glomset F，Kariya B，et alAplateletdependent serumfactor that st

12、imulates the proliferation of arterial smooth muscle cellsin vitroJProc Natl Acad Sci USA，1974，71：12071210 6Love S，Barber RExpression of pselection and intercellular adhe-slon molecule1 in human brain after focal in farction or cardiac arrlestJNeuropathol Appl Neurobiol，2001，27(6)：465 7 Ruan Xz，Moor

13、head JF,Tao JL，et alMechanisms of dysregulationof low density lipoprotein receptor expression in vascular smoothmuscle cells by inflammatory cytokinesJArterioscler Thmmb VascBiol，2006，26(5)：11501155 8张文高，郑广娟脂欣康胶囊抗载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化形成作用J生物医学工程探讨，2003，22(3)：5456 作者简介：姜浩(1969)，男，毕业于广西中医学院，现为于山东中医药高校2005级博士探讨生(邮编：250014)；张文高、郑广娟、朱莹，现工作于山东中医药高校。 (本文编辑郭怀印) 注：“本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文”