大鼠心肌缺血再灌注模型.docx

《大鼠心肌缺血再灌注模型.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《大鼠心肌缺血再灌注模型.docx（7页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、 大鼠心肌缺血再灌注模型 贺运输河古继红陈光贤邱晓敏曾旭灿 摘要：目的探讨益气活血法制定的益气活血方对心肌缺血再灌注损伤的爱护作用。方法清洁级健康SD大鼠30只，雌雄各半，体重(300+30)g，随机分为益气活血方组、缺血再灌注组、假手术组，每组10只。结扎冠状动脉左前降支后30min，再松开结扎线120 min，以制备急性心肌梗死(AMI)缺血再灌注损伤模型。试验结束后，快速取出心脏，生理盐水冲洗后，10甲醛固定24h。常规石蜡包埋，于心肌梗死区中部沿左室轴线每隔1mm连续切取数张4m厚的切片，分别作苏木精一伊红染色，进行心肌组织病理形态学检查。结果益气活血方能减轻缺血再灌注时心肌组织织细胞

2、超微结构的形态学损伤。益气活血方组细胞核结构似假手术组，核周间隙仍有轻度肿胀，线粒体超微结构与假手术相互仿。结论益气活血方对心肌缺血再灌注损伤具有爱护作用。 关键词：心肌缺血：再灌注损伤；益气活血方；心肌梗死 中图分类号：R542.2 R285.5文献标识码：A文章编号：1671349(2007)08070702 近年来，急性心肌梗死(AMI)治疗学的重要进展之一是再灌注治疗。现已证明，再灌注治疗可使梗死相关冠状动脉再通，从而挽救濒危心肌，缩小梗死面积，从而降低病死率并改善生还者的心功能。但缺血肯定时间的心肌在重新复原血液供应后，心肌不肯定都会复原其正常功能和结构，反而出现心肌细胞损伤加重的表

3、现，如心律失常、出血性坏死、梗死面积扩大、心功能低下等现象，即所谓心肌缺血再灌注损伤。这也是目前临床冠状动脉旁路移植、经皮冠状动脉腔内成形术(PTCA)及溶栓术等心脏介入性治疗常见的严峻并发症。因此，认为探讨心肌缺血再灌注损伤的发朝气制及如何减轻心肌缺血再灌注损伤从而取得更好的“净效应”，已成为防治缺血性心脏病和临床心脏介入性治疗的一个重要课题。 中医理论认为心主血脉，心气虚弱则无力鼓动心血之运行，致使血涩不通而成真伤心。因此，气虚血瘀是心肌梗死的主要病机，益气活血为其主要治法。据此制定了益气活血方(由人参、黄芪、水蛭、川芎、丹参、地龙等组成)用于临床，取得了明显的疗效。基于此，现对益气活血方

4、进行了试验探讨，为其临床疗效供应理论依据。 1材料与方法 11 益气活血方煎剂浓缩液的制备益气活血方由人参20g，黄芪30g，地龙10g，川芎10g，水蛭10g，丹参20g等组成。饮片由广州中医药高校供应。购回后置煎煮容器内加相当于药材量5倍的自来水浸泡2h，煮沸后再以微火煎煮30min，过滤取汁得头煎。药渣再加3倍水煎煮20min，过滤取汁得二煎，两煎混合，于水浴上浓缩至100浓度(每毫升药液相当于生药1g)，装在若干只100mL瓶内，加盖密封，高温消毒后，置4冰箱中保存备用。 12 仪器SC3型电动人工呼吸机，JEM1200EX型透射电镜，OVION多功能探讨显微镜，LKB型超薄切片机等。

5、 13 试验方法 131 动物分组清洁级健康SD大鼠30只，雌雄各半，体重(300+30)g，由广州中医药高校试验动物中心供应。随机分为假手术组、缺血再灌注组、益气活血方组，每组10只。 132 造模方法用10的水合氯醛腹腔注射(0.3mL100g0.4 mL100 g体重)麻醉后，气管插管连接SC3型电动人工呼吸机，室内空气人工呼吸，呼吸频率40min，潮气量20mLkg，颈总动脉插管监测血压。四肢皮下置针型电极，记录心电图改变。胸部去毛，沿左锁骨中线纵行切开皮肤约2cm，于胸骨左缘(34)肋间钝性分别肌层，打开胸腔，剪快乐包，轻压右侧胸廓，挤出心脏。在左冠状动脉前降支距左心耳下缘2mm处穿

6、以0号丝线备用，稳定15min，行如下操作：假手术组丝线穿过冠状动脉左前降支后，但不结扎。缺血再灌注组结扎冠状动脉左前降支后30min后再松开结扎线，心电图相关导联(I，aVL)抬高的ST段下降在12以上为缺血再灌注胜利，再灌注120min。益 气活血方组试验过程同缺血再灌注组。 133给药方法各组动物每天09：0010：00，16：0017：00用灌胃方式给药或蒸馏水各1次。假手术组及缺血再灌注组每天09：0010：00，16：0017：00用蒸馏水4mLkg灌胃。益气活血方组用量相当于临床成人等效剂量的4倍8mg(kgd)，药物溶于等量的蒸馏水中灌胃，连续5d，末次灌胃1h后进行心肌缺血再

7、灌注试验。 134 取材方法试验结束后，快速取出心脏，生理盐水冲洗，10甲醛固定24h。常规石蜡包埋，于心肌梗死区中部沿左室轴线每隔l mm连续切取数张4m厚的切片，分别作苏木精一伊红染色，进行心肌组织病理形态学检查。 14 视察指标 141 HE染色病理形态学视察试验结束后，在无菌条件下剪取心脏左心室，生理盐水冲洗干净。其中每组取6只大鼠左心室前壁组织用4甲醛固定，石蜡切片，HE染色。光镜下视察心肌组织病理形态学变更。 142 超微结构视察试验结束后，每组取2只大鼠左心室前壁组织，修成1mm1mmxlturn小块，快速用2.5戊二醛固定24h以上，2锇酸后固定1h，50，70，90，100丙

8、酮梯度脱水，每级10min，环氧树脂环合液与纯丙酮(1：1)常温浸泡24h,Epon8l2，MIXIA,DDSAS,DMP-30混合包埋剂60包埋24h，修块，甲苯胺蓝半薄切片，定位，Lkb型超薄切片机切片，厚约500埃700埃，电子染色，JEM1200型透射电镜视察左心室前壁组织的超微结构变更并照片。 2结果 21 HE染色病理形态学视察假手术组：心肌细胞大小、形态基本一样，细胞核清楚，细胞着色匀称，横纹清楚、排列整齐，胞膜完整。缺血再灌注组：心肌组织呈较大面积的局灶性空泡变性，细胞着色不匀称，横纹不清，排列紊乱，并可见到心肌细胞坏死，细胞核消逝。益气活血方组：心肌组织局灶性空泡变性的面积较

9、小，心肌细胞着色相对匀称，横纹尚清楚，排列基本整齐。 22 超微结构视察假手术组：心肌组织由众多长条状的心肌细胞组成，常有分枝，胞核长圆形，位于胞体中心部位，核内以常染色质为主，少量异染色质分布于核膜下或分散存在核质中，常可见核仁，两层核膜间的核周间隙清楚易辨；细胞纵切面可见细胞质中充溢大量纵向平行排列的肌原纤维，I带、A带、H带与z线、M线均分布明显，形成明暗相间的肌节结构；细胞质中还有丰富的线粒体，位于核旁与肌丝间，线粒体呈圆形或卵圆形，边界清晰，其嵴密集、平行排列，充溢整个线粒体。细胞核膜完整光滑，结构正常，肌丝完整，排列整齐，明暗带清晰。缺血再灌注组：心肌细胞核呈不规则形，核周间隙明显

10、肿胀，核内染色质有轻度凝合病变；肌原纤维排列紊乱，肌节长短不一，各线带无法辨清，肌丝有局部断裂溶解病变，边界不清，外膜不完整，嵴排列无序；细胞质中还可见脂滴与溶酶体。益气活血方组：细胞核结构似假手术组，核周间隙仍有轻度肿胀，线粒体超微结构与假手术组相仿，肌节分布尚清晰，肌原纤维仍有少许溶解断裂的病变，细胞质内可见少许溶酶体。 3探讨 祖国医学无AMI这一病名，从临床表现当属于“真伤心”“伤心”等病的范畴。究其发病机制正如素问痹论所述：“心痹者，脉不通”“痹在于脉则血凝而不流”。由于心主血脉，心气虚弱则无力鼓动心血之运行，致使血涩不通而成真伤心。因此，补益心气以复原心血的运行为其主要治法。方中借

11、人参、黄芪力专、性走，周行全身，令气旺则血行，血行则瘀除，以治其本为益气活血方的君药。水蛭成苦入血分，破血逐瘀；川芎活血行气，为血中之气药；并伍用活血化瘀之要药丹参共为臣药。地龙通行经络，为佐药。诸味协作，共奏益气活血之效。 本探讨中病理形态学视察到：缺血再灌注组的心肌组织呈较大面积的局灶性空泡变性，细胞着色不匀称，横纹不清，排列紊乱，并可见到心肌细胞坏死，细胞核消逝。而益气活血方组的心肌组织局灶性空泡变性的面积较小，心肌细胞着色相对匀称，横纹尚清楚，排列基本整齐。进一步视察其超微结构的变更，发觉缺血再灌注组之心肌细胞的细胞核呈不规则形，核周间隙明显肿胀，核内染色质有轻度凝合病变；肌原纤维排列紊乱，肌节长短不一，各线带无法辨清，肌丝有局部断裂溶解病变，边界不清，外膜不完整，嵴排列无序；细胞质中还可见脂滴与溶酶体。但益气活血方组的心肌细胞之细胞核结构似假手术组核周间隙肿胀明显减轻；而且线粒体超微结构与假手术组相仿，肌节分布亦清晰，肌原纤维溶解断裂的病变明显减轻，细胞质内溶酶体明显削减。这表明益气活血方对缺血再灌注时心肌组织及细胞超微结构的形态学损伤具有爱护作用，其作用机制值得进一步探讨。 (本文编辑郭怀印)