血栓闭塞性脉管炎_缺氧诱导因子-1α在大鼠血栓闭塞性脉管炎模型中的表达.docx

《血栓闭塞性脉管炎_缺氧诱导因子-1α在大鼠血栓闭塞性脉管炎模型中的表达.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《血栓闭塞性脉管炎_缺氧诱导因子-1α在大鼠血栓闭塞性脉管炎模型中的表达.docx（6页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、血栓闭塞性脉管炎_缺氧诱导因子-1在大鼠血栓闭塞性脉管炎模型中的表达 摘要：目的视察缺氧诱导因子-1（HIF-1）在大鼠血栓闭塞性脉管炎模型中的表达规律，并探讨其临床意义。方法月桂酸钠注射法建立Wistar大鼠血栓闭塞性脉管炎模型，ELISA法检测造模前后血清中HIF-1水平，免疫组化法半定量检测造模后健侧与患侧肌肉组织中HIF-1的表达，结合临床病理探讨其临床意义。结果与术前相比,造模组大鼠术后血清中HIF-1水平明显上升（P1，2。本课题旨在探讨缺氧诱导因子-1（HIF-1）在大鼠血栓闭塞性脉管炎模型中的表达规律并探讨其临床意义。 1材料与方法 1.1材料与试剂Wistar大鼠35只，雄性

2、，体重400 g550 g,山西医科高校生理教研室供应；月桂酸，北京市旭东化工厂；缺氧诱导因子-1酶联免疫试剂盒，上海西塘生物科技有限公司。缺氧诱导因子-1免疫组化试剂盒，武汉博士德公司。 1.2方法 1.2.1大鼠造模及分组Wister大鼠35只，随机分为假手术组及1 d、3 d、1周、2周、3周、4周造模组，每组5只。术前均留取血清标本，参照文献方法稍加改进3,4，制作大鼠血栓闭塞性脉管炎模型。术毕赐予青霉素40104U腹腔注射，预防感染。根据造模时间分批处死，假手术组于4周时处死，处死前留取术后血清标本，并取左右后肢造模处四周肌肉组织。 1.2.2血清HIF-1检测采纳ELISA法检测术

3、前与术后血清中缺氧诱导因子-1浓度,根据试剂盒说明书进行。 1.2.3组织中HIF-1检测免疫组化SABC法检测各组造模侧肢体血管及肌肉组织中缺氧诱导因子-1的表达状况，健侧肢体作为比照，操作根据试剂盒说明书进行。HIF-1蛋白以细胞核或胞浆中有棕黄色颗粒为阳性，无反应为阴性，在400倍视野下采纳Cooled CCD采集图像，运用IPP软件测量表达平均灰度值。平均灰度值范围0255，其值越低，蛋白表达越高，其值越高，蛋白表达越低。 1.3统计学处理计量资料以均数标准差（xs）表示。采纳方差分析，两两比较采纳LSD法。SPSS 13.0处理分析。 2结果 2.1体征改变各造模组大鼠均出现左后肢缺

4、血表现，依造模时间增加而渐渐加重，1 d组、3 d组均有左后肢缺血、肿胀、足趾发黑表现。1周组缺血表现加重、坏死范围扩大至踝部。2周组出现干性坏疽、坏死范围至膝部，局部炎症反应明显，3周、4周组有坏死肢体脱落表现，严峻者有肢体干性坏疽，甚至肢体脱落。组织病理切片示：炎症反应明显，炎症细胞聚集，肌肉组织失去正常纹理结构，2周、3周、4周组股动脉内可见节段性闭塞，广泛血管内血栓形成，并伴有大量新生毛细血管。大鼠体征改变及病理切片结果证明，大鼠血栓闭塞性脉管炎模型建立胜利。 2.2血清检测结果全部造模组大鼠术后血清HIF-1表达均高于术前，造模1 d组、3 d组、1周组、2周组、3周组、4周组、术后

5、血清HIF-1表达水平分别与术前比较有统计学意义（P 图2大鼠TAO模型肌肉组织HIF-1表达平均灰度值 3探讨 TAO是一种以中小动脉节段性、非化脓性炎症和腔内血栓形成特征的疾病，是青壮年肢体缺血的主要缘由之一，其发病特点、病理改变和临床特点均有别于动脉粥样硬化和其他免疫性动脉炎，但组织的缺血缺氧是其发病机制中最重要的一环2。缺氧诱导因子-1作为目前发觉的唯一在低氧条件下发挥作用的调控亚基，可促进多种血管生成因子的表达，促进生理及病理性血管的生成5-7，组织缺血再灌注损伤中发挥重要作用。 本试验通过建立大鼠TAO模型，初步探讨HIF-1在其发病过程中的表达规律，以期为临床诊断治疗供应简便有效

6、的量化指标。TAO动物模型的复制和探讨是本探讨的关键环节与基础。TAO动物模型制作方法最早报道是Ashida3采纳向大鼠股动脉注射月桂酸钠的方法。本试验发觉，注射后严格压迫穿刺点，确认无出血之后即可缝合皮肤，无需OB胶封闭穿刺点，预试验及正式试验中均未发觉试验动物造模肢体出血及死亡现象，此为本试验的改进之处。 Tarak 等8 认为，肢体对动脉堵塞作出适应性反应中，最重要的是动脉生成中，侧支循环重建和血管内血流量增加。本探讨证明，大鼠血栓闭塞性脉管炎模型中，缺血早期HIF-1在血清和肌肉组织中均快速上升，随着病情的进展而渐渐降低，一周后表达水平与早期已有统计学意义，但仍高于正常，此时组织中可见

7、新生毛细血管生成，侧支循环建立，3周后血清中表达水平与正常水平已无差异，而肌肉组织中仍高于正常水平，但较早期已明显降低。缺血早期低氧浓度促使HIF-1高表达，促进了多种血管生成因子的表达，有利于早期小血管生成以适应缺血缺氧环境，但其中许多是病理性小血管，并伴有血栓形成，对改善组织供氧意义不大，但后期其表达持续降低，导致了VEGF等生成削减，未能生成大量有效的侧支循环，导致病情加重，最终组织大量坏死，导致干性坏疽甚至肢体脱落。本试验中3 d与一周之间的HIF-1下降关键时间点及促使其降低表达的缘由还有待进一步试验探讨。 目前对于TAO患者的术前诊断和手术效果评价，血管造影仍是“金标准”，但存在有

8、创、价格不菲、不刚好等缺点。本试验揭示的HIF-1表达水平改变与病情改变相关性可将其作为术前诊断及术后监测、疗效评判的简便易行的方法之一，同时，相比较目前探讨热点中将VEGF的血管生成因子干脆导入体内的方法，HIF-1具有易调控，副反应少等优点，可进一步探讨其表达降低的关键时间点，通过基因转染等方法使其持续高表达，以促进机体建立有效的新生血管，适应缺血缺氧环境，为临床治疗TAO供应一种新的方法。 参考文献： 1Olin JW.Thromboangiitis obliterans(Buergers disease).N Engl J Med,2000,343:864-869. 2薛莲,张培华.血

9、栓闭塞性脉管炎探讨现状.中华一般外科杂志，1997,12（5）：265-266. 3Ashida S，Ishihara M，Ogawa H，et al.Protective eeffet of tielopidine on experimentally induced peripher aerterial occlusive disease in rats.Thrombosis Researeh，1980，18:55-56. 4周青，贺菊乔，曹晖，等.脉管通胶囊对血栓闭塞性脉管炎大鼠模型影响的探讨.湖南中医学院学报，2003，23(4):4-6. 5Luo G,Gu YZ,Jain S,et

10、al.Molecular characterization of the murine HIF-1 alpha locusJ.Gene Expr,1997,6(5):287. 6Pugh CW,Ratcliffe PJ.Regulation of angiogenesis by hypoxia:Role of the HIF systemJ.Nat Med,2003,9:677. 7Kido M,Du L,Sullivan CC,et al.Hypoxia-inducible factor 1-Alpha reduces infarction and attenuates progressio

11、n of cardiac dysfunction after myocardial infarction in the mouse.J Am Coll Cardiol,2005,46(11):2116-2124. 8Tarak HP,Hideo KM,Clifford RW,et al.Constitutively active HIF-1 improves perfusion and arterial remodeling in an endovascular model of limb ischemia.Cardiovascular Research,2005,68(1):144-154. 作者简介：王立维（1984）,男，现为山西医科高校在读硕士探讨生（邮编：030001）；杨涛、曹文东、皮兴涛、续慧民、郝斌（通讯作者），工作于山西医科高校其次医院（邮编：030001）。 （收稿日期 ：2011-01-24） （本文编辑王雅洁）