产前诊断中心PPT讲稿.ppt

《产前诊断中心PPT讲稿.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《产前诊断中心PPT讲稿.ppt（46页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、产前诊断中心第1页，共46页，编辑于2022年，星期四产前诊断指征n n夫妇任一方有染色体异常；n n曾生育过染色体病患者；n n夫妇任一方为单基因病患者；n n曾生育过单基因病患者；n n有不明原因的自然流产史、畸胎史、死产或新生儿死亡史；第2页，共46页，编辑于2022年，星期四产前诊断指征n n羊水过多的孕妇；n n夫妇任一方曾接触致畸因素；n n孕妇年龄大于35岁；n n有遗传病家族史的近亲婚配的夫妇。n n产前筛查高风险的孕妇n n超声胎儿结构筛查胎儿有结构异常的孕妇第3页，共46页，编辑于2022年，星期四产前诊断的方法n n羊膜腔穿刺取样（amniocentesis）n n绒毛穿

2、刺取样（chorion villus sampling,cvs）n n脐带血取样（periumbilical cord blood sampling,PUBS）n n植入前诊断（preimplantaton genetic diagnosis,PGD）第4页，共46页，编辑于2022年，星期四产前诊断的方法n n胎儿组织取样（皮肤、肝脏）n n胎儿镜（fetoscope）n n胚胎镜（embryoscope）n n胎儿超声波图象（fetal ultrasound imaging）n n母体外周血胎儿细胞检测（cell-storing）第5页，共46页，编辑于2022年，星期四绒毛穿刺取样历史n

3、 n1975年 我国鞍山钢铁公司铁东医院首次问世（经宫颈盲吸法，准确率95%，自然流产率9.3%，出生婴儿未发现异常）n n莫斯科产科研究所（超声引导下经宫颈吸样）n n1983您 Ward 和 Brambati 分别于英国和意大利发表文章介绍绒毛取样及核型分析第6页，共46页，编辑于2022年，星期四绒毛穿刺取样时间n妊娠911周第7页，共46页，编辑于2022年，星期四绒毛穿刺取样抽取量n20mg左右（染色体核型分析约需10mg，DNA分析约需5mg，生化测定约需5-10mg）第8页，共46页，编辑于2022年，星期四绒毛穿刺取样并发症n胎儿丢失n胎儿肢体发育缺陷（LRD）第9页，共46页

4、，编辑于2022年，星期四CVS并发症胎儿丢失n nCVS的流产率不比amniocentesis高n n经宫颈和经腹取样安全性相同（Jackson,1992）n n多胎取样高于单胎取样（Pergament,1992）第10页，共46页，编辑于2022年，星期四CVS并发症LRDn n1999年WHO发布CVS综合性资料认为CVS与LRD无关（216，381例CVS中115例出现LRD发生率1：1881，总的人群发生率1：1642）n n世界各地相关资料综合，9周以下CVS出现LRD的机会高，但原因尚不清楚n nCVS不应在小于孕10周的条件下进行第11页，共46页，编辑于2022年，星期四绒毛

5、穿刺取样方法n经宫颈（transcervical）n经腹（transabdorminal）第12页，共46页，编辑于2022年，星期四CVS方法经宫颈取样n nB超采用高分辨的扇扫式或凸阵式实时超超采用高分辨的扇扫式或凸阵式实时超声诊断仪，经腹探头频率声诊断仪，经腹探头频率3.5MHz,经阴经阴道探头频率道探头频率5-7MHz5-7MHz。n n采用特制较细的滋养层活检导管（多聚乙烯导管），其塑料导管外径1.4 1.4 1.6 mm,1.6 mm,长长20cm,带有导管芯，导管前端稍弯，外形似宫腔探子。n n导管另一端连接10-20ml含有含有2-4ml2-4ml生理生理盐水的注射器盐水的注射

6、器第13页，共46页，编辑于2022年，星期四CVS方法经腹取样n n双针活检系统由双针活检系统由1 1根长根长15cm15cm、外径、外径1.2mm1.2mm的的1818号引导套针，及号引导套针，及1 1根长根长20cm20cm、外径、外径0.8mm0.8mm的的2222号活检针组成。号活检针组成。n n在超声引导下，先将引导套针经腹壁及子宫穿刺入在超声引导下，先将引导套针经腹壁及子宫穿刺入胎盘绒毛边缘部分，拔出针芯，然后将活检针经引胎盘绒毛边缘部分，拔出针芯，然后将活检针经引导套针内送入胎盘绒毛组织导套针内送入胎盘绒毛组织,连接含连接含2-4ml2-4ml生理盐生理盐水的水的20ml20m

7、l注射器，以注射器，以5ml5ml的负压上下移动活检针吸的负压上下移动活检针吸取绒毛组织取绒毛组织第14页，共46页，编辑于2022年，星期四CVS注意事项n n动作要轻柔n n穿刺部位在胎盘绒毛叶n n抽吸次数不宜过多第15页，共46页，编辑于2022年，星期四羊膜腔穿刺历史n n1956年 Fucks进行羊膜腔穿刺行胎儿性别鉴定及胎儿Rh溶血诊断n n1966年 Mark steele和Roy Breg从羊水中分离出羊水细胞培养成功并行胎儿核型分析第16页，共46页，编辑于2022年，星期四羊膜腔穿刺时间n1620周第17页，共46页，编辑于2022年，星期四羊膜腔穿刺抽取量n2030ml

8、第18页，共46页，编辑于2022年，星期四抽取的羊水用途n n核型分析诊断染色体病n nDNA分析诊断单基因病n n生化测定诊断NTD、代谢性疾病第19页，共46页，编辑于2022年，星期四羊水穿刺n n穿刺前孕妇俯卧位摇动腹部穿刺前孕妇俯卧位摇动腹部n n超声波定位引 导n n采用2222号或2121号带芯长腰穿刺针头号带芯长腰穿刺针头n n垂直、快速进针垂直、快速进针n n抽取羊水2ml弃置，换空针抽取羊水弃置，换空针抽取羊水第20页，共46页，编辑于2022年，星期四羊膜腔穿刺并发症n n胎儿丢失n n羊膜腔感染n n羊水渗漏n n穿刺部位的出血、血肿第21页，共46页，编辑于2022

9、年，星期四羊穿并发症-胎儿丢失n n1976年，Nihd Registry 报道流产率3.5%n n1986年，Tabor et al 报道流产率1.7%n n1995年，Bombard et al 报道流产率1.3%n n2000年,Antsaklis 报道流产率2.1%第22页，共46页，编辑于2022年，星期四脐带血穿刺历史n n1972年，Valenti用儿科膀胱镜在中期妊娠孕妇行子宫切开术插入羊膜腔，获取脐血标本。n n1979年，Rodeck和Campell应用胎儿镜行脐带血管穿刺，但由于并发症高，应用受到限制。n n1983年，Ternand Daffos超声引导下经皮脐血管穿刺

10、取血（Cordocentesis）第23页，共46页，编辑于2022年，星期四脐带血穿刺时间n16周分娩（最佳2428周）第24页，共46页，编辑于2022年，星期四脐带血穿刺取血量n n35mln n20周后抽取68ml对胎儿循环无不良影响第25页，共46页，编辑于2022年，星期四脐带血穿刺适应症n n胎儿核型分析或基因检测（胎儿畸形、严重的胎儿核型分析或基因检测（胎儿畸形、严重的FGRFGR、羊水或绒毛细胞培养失败、羊水或绒毛培养结果为嵌合体、非免疫性胎儿水肿、脆性X综合症等）n n胎儿血液疾病分析（血型、血小板计数等）胎儿血液疾病分析（血型、血小板计数等）n n胎儿感染（弓形虫、病毒感

11、染等）n n胎儿情况评估（酸碱平衡、甲功等）n n遗传性疾病（单基因病、凝血障碍、血红蛋白病、代谢性遗传性疾病（单基因病、凝血障碍、血红蛋白病、代谢性疾病等）疾病等）n n胎儿治疗（宫内输血、宫内药物治疗等）胎儿治疗（宫内输血、宫内药物治疗等）第26页，共46页，编辑于2022年，星期四脐带血穿刺并发症n n穿刺部位的出血n n脐带血肿n n短暂性胎心减慢n n宫内感染n n胎儿丢失（流产、早产）n n大多数并发症为短暂性和非致命性第27页，共46页，编辑于2022年，星期四脐带血穿刺并发症胎儿丢失n nMaxwell 1991年报道胎儿超声结构筛查示正常超声者脐穿的流产率为1%（1/76）；

12、异常超声者流产率为7%（5/76）；胎儿结构明显异常者流产率为25%（9/36）n nAntsaklis 1998年报道胎儿超声结构筛查示正常超声者脐穿的流产率1%（2/191）；异常超声者流产率为13%（11/84）第28页，共46页，编辑于2022年，星期四脐带穿刺部位第29页，共46页，编辑于2022年，星期四脐血穿刺确定胎儿血样n n血红蛋白电泳n nKleihauer-Betke试验：胎儿红细胞在酸中稳定n nAPT试验：NaOH中胎儿血为粉红色n n有核红细胞的出现第30页，共46页，编辑于2022年，星期四脐血穿刺排除脐血中母血污染n nX染色体DMD基因内部5对CA重复序列的连

13、锁分析第31页，共46页，编辑于2022年，星期四绒毛组织、羊水细胞、脐血细胞培养第32页，共46页，编辑于2022年，星期四绒毛组织的培养n n直接法n n培养法（悬浮培养、贴壁培养）第33页，共46页，编辑于2022年，星期四绒毛组织的染色体检查直接法n n孕早期Langhans细胞有较高的有丝分裂活性，能提供足以分析的良好有丝分裂相，较绒毛培养简易可靠、操作简单快速第34页，共46页，编辑于2022年，星期四绒毛组织的染色体检查直接法n n绒毛组织的分离洗脱绒毛组织的分离洗脱n n加秋水仙素（终浓度加秋水仙素（终浓度2ug/ml2ug/ml，可一次加，也可分次少量，可一次加，也可分次少量

14、加）加）n n3737OC 5%COC 5%CO2培养箱培养培养箱培养45分钟分钟n n低渗（1%枸橼酸钠低渗10分钟或1%枸橼酸钠和枸橼酸钠和0.075mol/l 10.075mol/l 1：1 1低渗4040分钟）分钟）n n预固定（甲醇：冰醋酸 3：1）1010分钟n n固定（甲醇：冰醋酸 3 3：1）10-2010-20分钟分钟n n冰醋酸解离绒毛细胞（轻吹打）n n制片第35页，共46页，编辑于2022年，星期四绒毛组织的染色体检查悬浮培养法n n绒毛挑选洗脱n n绒毛组织剪成小块入培养瓶（25ml培养瓶每瓶10mg）n n加特定培养液3mln n培养3-6天n n收获（加秋素、低渗

15、、固定、制片）第36页，共46页，编辑于2022年，星期四绒毛组织的染色体检查贴壁培养法n n绒毛组织挑选洗脱n n绒毛组织剪成小块n n加0.25%+0.02%EDTA 5ml 37OC 摇床中20分钟n n加培养基终止消化，离心后弃上清加培养基接种培养5-10天n n收获第37页，共46页，编辑于2022年，星期四羊水细胞培养细胞类型n n成纤维样细胞（F细胞）n n上皮样细胞（密集型上皮样细胞-E细胞、镰刀样上皮细胞、圆形上皮细胞）n n羊水样细胞（AF细胞）第38页，共46页，编辑于2022年，星期四羊水细胞培养收获方法n n原位法n n消化法n n刮取法第39页，共46页，编辑于20

16、22年，星期四羊水细胞培养中存在的问题 污染n n细菌n n真菌n n支原体n n病毒n n其他细胞第40页，共46页，编辑于2022年，星期四羊水细胞培养中存在的问题 母体细胞污染n n若胎儿为男性，由于母体细胞污染误将胎儿诊断为嵌合体n n母体细胞在培养中占优势第41页，共46页，编辑于2022年，星期四羊水细胞培养中存在的问题 母体细胞污染的预防n n羊水穿刺时，把最先抽得的1-2ml羊水弃掉n n染色体多态现象的测试n n羊水细胞、母体细胞 的HLA组织定型鉴别第42页，共46页，编辑于2022年，星期四羊水细胞培养中存在的问题 细胞不生长、不贴壁n n最常见的原因是支原体污染n n培

17、养基PH不适当，偏酸（6.4或偏碱7.4均不利n n最合适的穿刺时间16-20周第43页，共46页，编辑于2022年，星期四羊水细胞培养中存在的问题 细胞及染色体收获少n n每天观察细胞生长（梭形细胞背景上有透明透亮的圆形细胞）n n滚圆的细胞与有丝分裂的圆形细胞鉴别n n操作应轻柔，胰酶消化法要掌握好胰酶消化的时间n n羊水中胎脂多时3-5天可轻轻动一动，减少胎脂贴壁占据空间n n低渗时间短于外周血（一般3-5分钟）第44页，共46页，编辑于2022年，星期四脐带血细胞培养n n量少于外周血（一般5ml注射器小于14滴）n n其他同外周血第45页，共46页，编辑于2022年，星期四Thanks!第46页，共46页，编辑于2022年，星期四