如何通过免疫指标检测反应病毒或胞外菌感染幻灯片.ppt

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1、如何通过免疫指标检测反应病毒或胞外菌感染第1页，共37页，编辑于2022年，星期五免疫检测是目前生物学检测方法中用免疫检测是目前生物学检测方法中用途最广泛的一种方法。途最广泛的一种方法。具有高度精确、灵敏、特异的特点。具有高度精确、灵敏、特异的特点。可用于免疫学的基础理论和应用研究，可用于免疫学的基础理论和应用研究，也可应用于生物学研究的各个领域。也可应用于生物学研究的各个领域。第2页，共37页，编辑于2022年，星期五免疫指标一、免疫球蛋白1、免疫球蛋白 G(IgG)参考值 ：8-17 g/L 2、免疫球蛋白 M(IgM)参考值 ：0.29-3.44 g/L 3、免疫球蛋白 A(IgA)参考

2、值 ：0.72-4.29 g/L 二、补体1、补体成分 C3 参考值 ：0.78-2.10 g/L 2.补体成分 C4 参考值 ：0.17-0.48 g/L 3.C 反应蛋白（CRP）参考值 ：0-8 mg/L 第3页，共37页，编辑于2022年，星期五胞外菌感染的免疫反应及免疫指标变化第4页，共37页，编辑于2022年，星期五常见胞外菌病原菌重要致病物质白喉杆菌白喉毒素破伤风杆菌破伤风痉挛毒素脑膜炎球菌内毒素，荚膜，菌毛金黄色葡萄球菌侵袭性酶，多种毒素淋球菌荚膜肺炎球菌菌毛、IgA酶链球菌侵袭性酶，多种毒素第5页，共37页，编辑于2022年，星期五免疫机制1.皮肤黏膜的屏障作用在一般情况下，

3、只有当皮肤黏膜因机械损伤或昆虫叮咬失去完整形后，致病菌才能侵入。寄居于皮肤黏膜的正常菌群产生抗生素拮抗致病菌的定居并阻止其闯过黏膜上皮。更重要的是，黏膜分泌物中含有免疫球蛋白。第6页，共37页，编辑于2022年，星期五2.吞噬细胞细菌一旦突破皮肤或粘膜屏障与侵入机体组织后，吞噬细胞就发挥作用，主要是中性粒细胞。在一般情况下，细菌可被吞噬消灭，只有毒性强，数量多的细菌才能进入血液或其他器官，需由肝、脾、血液中的吞噬细胞继续吞噬。有的致病菌具有抗吞噬作用。第7页，共37页，编辑于2022年，星期五3.补体通过两个机制杀菌：直接溶菌作用和调理作用。补体通过经典途径和旁路途径被激活。在血清中的溶菌作用

4、依赖于补体膜攻击复合物的形成。膜攻击复合物沉积于细菌外膜，嵌进外膜使其失去完整性，导致细菌溶解。补体亦可介导中性粒细胞，吞噬细胞的调理吞噬作用。第8页，共37页，编辑于2022年，星期五4.抗体虽然补体是抗胞外菌感染的重要因素，但单独补体系统不足以有效杀灭或调理吞噬病原菌。许多重要胞外菌的清除，主要靠体液免疫系统特异性抗体的作用及补体感染菌的清除，也可由抗体的协同作用而得到加强。IgA尤其是sIgA可干扰细菌的黏附。抗体的Fab段与抗原结合，Fc段与细胞的受体结合，通过搭桥而促进吞噬作用。抗体与毒素结合，可掩盖毒素的活性部分，毒素与抗毒素形成的复合物可迅速被吞噬细胞清除。第9页，共37页，编辑

5、于2022年，星期五临床上最为常用的是病原体抗原检测和宿主血清抗体检测。患者样本中若有病原体抗原检出，即可表明有该病原体的存在；病原体感染机体时可诱导产生相应的抗体，特异性抗体的检出是临床诊断的重要依据。第10页，共37页，编辑于2022年，星期五病原体抗原检测病原体抗原检测l抗原的检测：ELISA等lELISA:是一种利用酶标记的抗原或抗体，在固相载体上进行抗原或抗体测定的方法。抗原或抗体吸附到固相载体表面后，仍保持其免疫活性。抗原或抗体与酶形成结合物后，仍保持各自的免疫活性和酶活性。结合物中的酶可催化底物水解、氧化或还原，从而生成有色产物。主要方法：间接法、双抗体法和竞争法第11页，共37

6、页，编辑于2022年，星期五常用血清学常用血清学检测检测方法：方法：v凝集试验凝集试验 -直接凝集试验、间接血凝试验、乳胶凝集试验、冷凝集试验v沉淀试验沉淀试验 -琼脂扩散法、对流免疫电泳v免疫标记技术免疫标记技术 -免疫荧光试验、ELISA、免疫印迹试验第12页，共37页，编辑于2022年，星期五一、病原菌检测一、病原菌检测（一）（一）标本的采集和运送标本的采集和运送 细菌感染的检查细菌感染的检查（二）细菌分离培养与鉴定（二）细菌分离培养与鉴定 1.1.形态结构检查形态结构检查2.2.分离培养鉴定分离培养鉴定 3.3.生化试验生化试验4.4.血清学鉴定血清学鉴定5.5.动物试验动物试验6.6

7、.药物敏感试验药物敏感试验第13页，共37页，编辑于2022年，星期五细菌分离培养与鉴定细菌分离培养与鉴定的的一般程序一般程序标本（或增菌后）接种普通琼脂平板血琼脂平板选择培养基平板 培养特征：培养特征：生长条件 菌落特征 溶血环特征等染色镜检：根据形态特征初步鉴定初步鉴定生化反应：如肠道杆菌的乳糖发酵试验第14页，共37页，编辑于2022年，星期五纸片法：只可定性试管法：可定量（测MBC、MIC）E-test：可定量（只可测MIC）血清学鉴定：鉴定细菌的种、型毒力鉴定内、外毒素检测动物试验：家兔、豚鼠等药敏试验第15页，共37页，编辑于2022年，星期五（三）病原菌抗原的检测（三）病原菌抗原

8、的检测 EIA,IF,Western blotting（四）检测病原菌核酸（四）检测病原菌核酸 核酸杂交核酸杂交 PCR 基因芯片（基因芯片（gene chips）第16页，共37页，编辑于2022年，星期五致病菌的检验程序致病菌的检验程序:第17页，共37页，编辑于2022年，星期五病毒感染的免疫反应及免疫指标变化第18页，共37页，编辑于2022年，星期五病毒的致病机制直接：杀细胞性病毒感染宿主细胞后，可引起细胞生物大分子代谢紊乱，导致细胞膜结构及细胞骨架的改变，而致细胞死亡，称之为细胞病变。（cytopathic effect）间接：非杀细胞型病毒感染宿主细胞后，尽管不直接杀伤和破坏宿主

9、细胞，通常宿主细胞仍可保持增殖分化。但这类病毒常可长期持续性存在于宿主细胞内。更为严重的是，这种病毒可改变机体的免疫应答反应，通过免疫抑制及免疫损害作用，造成免疫病理改变，导致疾病发生。第19页，共37页，编辑于2022年，星期五抗病毒免疫机制1.抗体抗体不仅可以作用于病毒本身，也可作用于病毒感染的细胞。中和性抗体可与病毒结合中和病毒。非中和性抗体虽然本身不能中和病毒的感染性，但却能调理增强巨噬细胞、颗粒性细胞、淋巴细胞、NK细胞的吞噬或杀伤作用。抗体和病毒特异性结合，亦可通过经典途径激活补体，溶解感染的细胞。第20页，共37页，编辑于2022年，星期五2.补体补体可以增加中和抗体活性，调理吞

10、噬，溶解病毒感染细胞。有的补体可以直接溶解病毒。某些病毒与补体结合后能上调体液免疫应答。第21页，共37页，编辑于2022年，星期五3.干扰素干扰素的抗病毒活性，主要通过IFN诱生的有宿主细胞编码的抗病毒蛋白来实现。IFN与受体结合后，启动酪氨酸激酶，磷酸化3种不同蛋白，并形成DNA结合转录因子，与IFN可诱导基因的调控区14bp结合，启动各种抗病毒蛋白的合成。第22页，共37页，编辑于2022年，星期五4.CTL病毒特异性CTL在清除细胞内感染病毒中起关键作用。虽然详尽的机制至今尚未完全明了，但CTL杀伤时有能量的消耗，且需要镁离子的参与，被认为是主动过程。第23页，共37页，编辑于2022

11、年，星期五病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法电镜技术电镜技术血清学试验血清学试验分子生物学技术分子生物学技术病毒的分离鉴定病毒的分离鉴定标本采集与送检标本采集与送检第24页，共37页，编辑于2022年，星期五一、标本采集与送检一、标本采集与送检原则：原则：1.尽早采取：发病初期尽早采取：发病初期 2.部位适宜：由感染部位采取部位适宜：由感染部位采取 3.冷藏速送：装有冰块或干冰的容器内冷藏速送：装有冰块或干冰的容器内（一）供分离病毒、检出核酸及抗原的标本（一）供分离病毒、检出核酸及抗原的标本（二）检测特异性抗体（二）检测特异性抗体 的标本的标本 采集双份血清，采集双份血清，4-20保存保存第

12、25页，共37页，编辑于2022年，星期五病毒材料采集与检验结果的关系病毒材料采集与检验结果的关系采取标本的时期采取标本的时期检查病毒及其成分检查病毒及其成分测定抗体测定抗体潜伏期及前驱期潜伏期及前驱期刚发病或急性期刚发病或急性期恢复期及康复期恢复期及康复期较难查见较难查见最多查见最多查见很难查见很难查见未增多未增多未增多或增多未增多或增多不明显不明显明显增多明显增多（常超过（常超过4倍）倍）第26页，共37页，编辑于2022年，星期五l病毒分离是诊断病毒感染的金标准，一旦阳性，即可确诊。病毒分离是诊断病毒感染的金标准，一旦阳性，即可确诊。l不适用于快速诊断，操作复杂，实验成本高，阳性检出不适

13、用于快速诊断，操作复杂，实验成本高，阳性检出率低等率低等l有时不得不分离病毒，例如发现了一种新的病毒病，必有时不得不分离病毒，例如发现了一种新的病毒病，必须分离病毒进行研究，或者分离株的鉴定对流行病学有须分离病毒进行研究，或者分离株的鉴定对流行病学有很大作用（如流感病毒），或者需要培育疫苗，或者希很大作用（如流感病毒），或者需要培育疫苗，或者希望获得天然弱毒株等。望获得天然弱毒株等。二、常规分离与鉴定二、常规分离与鉴定第27页，共37页，编辑于2022年，星期五（一）病毒分离（一）病毒分离标本采集标本采集杀灭杂菌杀灭杂菌（青链霉素青链霉素）接种接种鉴定病毒种型鉴定病毒种型易感动物易感动物出现病

14、状出现病状鸡胚鸡胚病变或死亡病变或死亡细胞培养细胞培养细胞病变细胞病变三大方法三大方法第28页，共37页，编辑于2022年，星期五（二）病毒鉴定（二）病毒鉴定1.形态学鉴定形态学鉴定2.血吸附和血凝作用血吸附和血凝作用l感染细胞具有吸附红细胞的能力感染细胞具有吸附红细胞的能力l感染细胞的培养液中有许多游离病毒存在，具有凝集红细感染细胞的培养液中有许多游离病毒存在，具有凝集红细胞的作用胞的作用第29页，共37页，编辑于2022年，星期五红细胞吸附红细胞吸附正常细胞正常细胞（1）血吸附作用）血吸附作用吸附试验可通过特异抗血清抑制来达到鉴定具有吸附特性的病毒吸附试验可通过特异抗血清抑制来达到鉴定具有

15、吸附特性的病毒第30页，共37页，编辑于2022年，星期五（2）血凝作用）血凝作用血凝试验血凝试验血凝抑制试验血凝抑制试验第31页，共37页，编辑于2022年，星期五（3）病毒成分的直接检测）病毒成分的直接检测用免疫学或分子生物学技术直接检查感染细用免疫学或分子生物学技术直接检查感染细胞或其上清液中病毒抗原（或核酸）。胞或其上清液中病毒抗原（或核酸）。第32页，共37页，编辑于2022年，星期五三、三、电子显微镜检查电子显微镜检查 透射电子显微镜透射电子显微镜（3 3）免疫电镜技术免疫电镜技术(Immune electron microscopy，IEM)（1）免疫凝集电镜技术）免疫凝集电镜技

16、术（2）免疫电镜定位技术）免疫电镜定位技术酶标记染色酶标记染色 第33页，共37页，编辑于2022年，星期五四、四、血清学试验血清学试验 是一种常用的诊断病毒病的方法。可采用是一种常用的诊断病毒病的方法。可采用ELISA、琼脂扩散、中和试验、标记抗体技术等免、琼脂扩散、中和试验、标记抗体技术等免疫血清学方法检查病畜的抗体消长情况和发病组织疫血清学方法检查病畜的抗体消长情况和发病组织中的病毒抗原。中的病毒抗原。第34页，共37页，编辑于2022年，星期五五五、感染组织的组织学检查感染组织的组织学检查 病毒在光学显微镜下无法看到，但是在某病毒在光学显微镜下无法看到，但是在某些病毒感染细胞内出现些病

17、毒感染细胞内出现包涵体包涵体，或者细胞形，或者细胞形态发生变化，则对诊断有重要意义。如态发生变化，则对诊断有重要意义。如Negri氏包涵体是狂犬病犬脑细胞的特征。病理组织氏包涵体是狂犬病犬脑细胞的特征。病理组织或渗出液作成涂片检查包涵体时，常用苏木紫或渗出液作成涂片检查包涵体时，常用苏木紫-伊红染色法。伊红染色法。第35页，共37页，编辑于2022年，星期五狂犬病毒包涵体（狂犬病毒包涵体（Negri body）第36页，共37页，编辑于2022年，星期五谢谢观赏谢谢观赏l参考文献：l1.余传霖，叶天星，陆德源，张谷生.现代医学免疫学.上海.上海医科大学出版社.1998l2.金伯泉.医学免疫学.第五版.北京人民民卫生出版社.2006第37页，共37页，编辑于2022年，星期五