第01章形态学检验技术hu精选文档.ppt

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1、第01章形态学检验技术hu本讲稿第一页，共六十四页第一章第一章 形态学检验技术形态学检验技术第一节第一节 生物样品的采集、预处理和制备生物样品的采集、预处理和制备第二节第二节 感官层次的形态检验感官层次的形态检验第三节第三节 显微形态检验技术显微形态检验技术第四节第四节 超显微形态检验技术超显微形态检验技术本讲稿第二页，共六十四页第一节第一节 生物样品的采集、预处理和制备生物样品的采集、预处理和制备1.1样品采集的一般要求样品采集的一般要求1.2采样的最一般方法采样的最一般方法1.3样品的制备样品的制备1.4生物样品的预处理生物样品的预处理本讲稿第三页，共六十四页1.1样品采集的一般要求样品采

2、集的一般要求采集的生物样品要具有采集的生物样品要具有代表性代表性典型性典型性适时性适时性 本讲稿第四页，共六十四页代表性代表性指采集的对象能够代表一定范围内的整体指采集的对象能够代表一定范围内的整体或者所有的样品。这就要求对样品的分布、或者所有的样品。这就要求对样品的分布、类型、特征、地形地貌、环境、气候等因类型、特征、地形地貌、环境、气候等因素进行综合考虑，选择合适的地段作为采素进行综合考虑，选择合适的地段作为采样区，再在采样区内划分若干小区，采用样区，再在采样区内划分若干小区，采用适宜的方法布点，确定有代表性的个体或适宜的方法布点，确定有代表性的个体或样品。例如在田地里采样，不要采集田埂、

3、样品。例如在田地里采样，不要采集田埂、地边及距田埂地边地边及距田埂地边2米以内的植株。米以内的植株。本讲稿第五页，共六十四页典型性典型性指所采集的生物个体的部位要能充分反映通指所采集的生物个体的部位要能充分反映通过检验所要了解的情况。根据要求选取健康过检验所要了解的情况。根据要求选取健康的生物个体，分别采集个体的不同部位，例的生物个体，分别采集个体的不同部位，例如动物的血液、尿液、内脏、骨髓、肿瘤等，如动物的血液、尿液、内脏、骨髓、肿瘤等，不能将各部位样品随意混合。不能将各部位样品随意混合。本讲稿第六页，共六十四页适时性适时性指需要充分注意生物的指需要充分注意生物的不同生长发育阶段不同生长发育

4、阶段。发育阶。发育阶。发育阶。发育阶段的改变，也影响着样品的性质和生理。有些生物的有段的改变，也影响着样品的性质和生理。有些生物的有段的改变，也影响着样品的性质和生理。有些生物的有段的改变，也影响着样品的性质和生理。有些生物的有效成分在一昼夜间也常有变化，其他如生长地点、光照、效成分在一昼夜间也常有变化，其他如生长地点、光照、效成分在一昼夜间也常有变化，其他如生长地点、光照、效成分在一昼夜间也常有变化，其他如生长地点、光照、土壤、其他环境条件等，对生物样品的特性均有一定影土壤、其他环境条件等，对生物样品的特性均有一定影土壤、其他环境条件等，对生物样品的特性均有一定影土壤、其他环境条件等，对生物

5、样品的特性均有一定影响。响。响。响。同时还要注意样品采取后应该同时还要注意样品采取后应该同时还要注意样品采取后应该同时还要注意样品采取后应该及时处理的时间及时处理的时间及时处理的时间及时处理的时间。例如。例如生物用药后的间隔时间；植物叶类应规定采嫩叶生物用药后的间隔时间；植物叶类应规定采嫩叶或老叶，采收的时间及层次，即生长在植株的不或老叶，采收的时间及层次，即生长在植株的不同位置，如上层、中层、下层；花类应严格规定同位置，如上层、中层、下层；花类应严格规定采收时期及部分，如蕾期、开花前期或盛花期，采收时期及部分，如蕾期、开花前期或盛花期，采收全花、花被、柱头或其他部分等。采收全花、花被、柱头或

6、其他部分等。本讲稿第七页，共六十四页植物标本的采集注意事项植物标本的采集注意事项(1)(1)采集的植物全株样品最好带有繁殖器官采集的植物全株样品最好带有繁殖器官采集的植物全株样品最好带有繁殖器官采集的植物全株样品最好带有繁殖器官(花、果或孢子囊、子实体等花、果或孢子囊、子实体等花、果或孢子囊、子实体等花、果或孢子囊、子实体等)，草本植物，草本植物，草本植物，草本植物特别应该注意带有叶的部分和地下部分，寄生植物应带寄主。特别应该注意带有叶的部分和地下部分，寄生植物应带寄主。特别应该注意带有叶的部分和地下部分，寄生植物应带寄主。特别应该注意带有叶的部分和地下部分，寄生植物应带寄主。(2)(2)如果

7、植物的基部叶与上部叶形状不同（如菊科、十字花科），叶上的附属物（毛茸、蜡被等）如果植物的基部叶与上部叶形状不同（如菊科、十字花科），叶上的附属物（毛茸、蜡被等）如果植物的基部叶与上部叶形状不同（如菊科、十字花科），叶上的附属物（毛茸、蜡被等）如果植物的基部叶与上部叶形状不同（如菊科、十字花科），叶上的附属物（毛茸、蜡被等）在新老叶上也有不同，应尽量采全。在新老叶上也有不同，应尽量采全。在新老叶上也有不同，应尽量采全。在新老叶上也有不同，应尽量采全。(3)(3)丛生的草本植物，应保留其丛生的特征，不要分得太散，失去原来的习性丛生的草本植物，应保留其丛生的特征，不要分得太散，失去原来的习性丛生的草

8、本植物，应保留其丛生的特征，不要分得太散，失去原来的习性丛生的草本植物，应保留其丛生的特征，不要分得太散，失去原来的习性(4)(4)雌雄异株的植物（麻黄科、桑科等）应注意同时采集雌株和雄株。雌雄异株的植物（麻黄科、桑科等）应注意同时采集雌株和雄株。雌雄异株的植物（麻黄科、桑科等）应注意同时采集雌株和雄株。雌雄异株的植物（麻黄科、桑科等）应注意同时采集雌株和雄株。(5)(5)对于含水分较多（如景天科、仙人掌科等）或有根状对于含水分较多（如景天科、仙人掌科等）或有根状对于含水分较多（如景天科、仙人掌科等）或有根状对于含水分较多（如景天科、仙人掌科等）或有根状 地下茎植物（如百合科），有时地下茎植物

9、（如百合科），有时地下茎植物（如百合科），有时地下茎植物（如百合科），有时需切开干燥或用开水将其烫死。需切开干燥或用开水将其烫死。需切开干燥或用开水将其烫死。需切开干燥或用开水将其烫死。(6)(6)水生藻类植物采的标本，到驻地后要重新放在水里，然后用硬台纸将其托起，压成标本。水生藻类植物采的标本，到驻地后要重新放在水里，然后用硬台纸将其托起，压成标本。水生藻类植物采的标本，到驻地后要重新放在水里，然后用硬台纸将其托起，压成标本。水生藻类植物采的标本，到驻地后要重新放在水里，然后用硬台纸将其托起，压成标本。(7)(7)木本植物的树皮在鉴别上有重要的特征，采集标本时应割取，并与标本同存。木本植物的

10、树皮在鉴别上有重要的特征，采集标本时应割取，并与标本同存。木本植物的树皮在鉴别上有重要的特征，采集标本时应割取，并与标本同存。木本植物的树皮在鉴别上有重要的特征，采集标本时应割取，并与标本同存。(8)(8)每种植物至少采集每种植物至少采集每种植物至少采集每种植物至少采集3 3份以上标本，每张标本应有野外记录。对易改变的特征如花的颜色、份以上标本，每张标本应有野外记录。对易改变的特征如花的颜色、份以上标本，每张标本应有野外记录。对易改变的特征如花的颜色、份以上标本，每张标本应有野外记录。对易改变的特征如花的颜色、气味、毛茸等应说明。每晚必须及时整理检查，补上漏记的项目。气味、毛茸等应说明。每晚必

11、须及时整理检查，补上漏记的项目。气味、毛茸等应说明。每晚必须及时整理检查，补上漏记的项目。气味、毛茸等应说明。每晚必须及时整理检查，补上漏记的项目。本讲稿第八页，共六十四页动物样品的采集动物样品的采集 动物的尿液、血液、粪便、毛发、指甲、唾液、胃液、乳液、骨骼和组织等均动物的尿液、血液、粪便、毛发、指甲、唾液、胃液、乳液、骨骼和组织等均可作为检验样品。可作为检验样品。(1)尿液：绝大部分毒物及其代谢产物主要由肾脏经膀胱、尿道随尿液排出。尿液：绝大部分毒物及其代谢产物主要由肾脏经膀胱、尿道随尿液排出。(2)血液：血液中有害物质的浓度可反映近期接触污染物质的水平，并血液：血液中有害物质的浓度可反映

12、近期接触污染物质的水平，并与其吸收量呈正相关。与其吸收量呈正相关。(3)毛发和指甲：蓄积在毛发和指甲中的污染物质残留时间较长，即使已脱离毛发和指甲：蓄积在毛发和指甲中的污染物质残留时间较长，即使已脱离接触污染物或停止摄入污染食物，血液和尿液中污染物含量已下降，而接触污染物或停止摄入污染食物，血液和尿液中污染物含量已下降，而毛发或指甲中仍容易检出。头发中的汞、砷等含量较高，样品容易采集毛发或指甲中仍容易检出。头发中的汞、砷等含量较高，样品容易采集和保存，故在医学和环境分析中应用较广泛。和保存，故在医学和环境分析中应用较广泛。(4)组织和脏器：组织和脏器的部位复杂，且柔软、易破裂混合，因此取样操组

13、织和脏器：组织和脏器的部位复杂，且柔软、易破裂混合，因此取样操作要细心。采集组织和脏器样品后，应放在组织捣碎机中捣碎、混匀，作要细心。采集组织和脏器样品后，应放在组织捣碎机中捣碎、混匀，制成浆状鲜样备用。制成浆状鲜样备用。本讲稿第九页，共六十四页1.2采样的最一般方法采样的最一般方法采样前应预先准备好采样工具，如刀具、剪刀、保存袋、手套、冰盒、标采样前应预先准备好采样工具，如刀具、剪刀、保存袋、手套、冰盒、标签、记录本、采集登记表等；签、记录本、采集登记表等；根据实际情况确定样品采样量：为了确保有足够数量的样品进根据实际情况确定样品采样量：为了确保有足够数量的样品进行检测分析，应根据检测分析项

14、目的内容要求确定样品的采集行检测分析，应根据检测分析项目的内容要求确定样品的采集量。一般要求样品经制备后，至少有量。一般要求样品经制备后，至少有2050g的干样品，最好备有的干样品，最好备有1kg的干样；的干样；整体样品需要在采样区内按梅花形五点或交叉间隔的取样方式采集整体样品需要在采样区内按梅花形五点或交叉间隔的取样方式采集5-10处的样品混合组成一个代表样品；处的样品混合组成一个代表样品；生物体上的某一部分作为样品，如果分布在一个部位，可以取此部生物体上的某一部分作为样品，如果分布在一个部位，可以取此部分的全部作为样品；如果分布在多处，则每处取少量样品再加以混分的全部作为样品；如果分布在多

15、处，则每处取少量样品再加以混合。合。将采好的样品装入保存袋中，可能还要放入冰盒中存放，贴好标签，将采好的样品装入保存袋中，可能还要放入冰盒中存放，贴好标签，并填写采样登记表。并填写采样登记表。平均样的获得：四分法、切成块的平均样的获得：四分法、切成块的1/4-1/8混合。混合。本讲稿第十页，共六十四页梅花形五点梅花形五点交叉间隔交叉间隔 本讲稿第十一页，共六十四页1.3样品的制备样品的制备(1)(1)植物鲜样的制备植物鲜样的制备植物鲜样的制备植物鲜样的制备洗涤：将样品用清水、去离子水洗净，晾干或拭干；洗涤：将样品用清水、去离子水洗净，晾干或拭干；洗涤：将样品用清水、去离子水洗净，晾干或拭干；洗

16、涤：将样品用清水、去离子水洗净，晾干或拭干；切碎：将晾干的鲜样切碎、混匀，称取一定量于电动高速组织捣切碎：将晾干的鲜样切碎、混匀，称取一定量于电动高速组织捣切碎：将晾干的鲜样切碎、混匀，称取一定量于电动高速组织捣切碎：将晾干的鲜样切碎、混匀，称取一定量于电动高速组织捣碎机的捣碎杯中，加适量蒸馏水或去离子水，开动捣碎机捣碎碎机的捣碎杯中，加适量蒸馏水或去离子水，开动捣碎机捣碎碎机的捣碎杯中，加适量蒸馏水或去离子水，开动捣碎机捣碎碎机的捣碎杯中，加适量蒸馏水或去离子水，开动捣碎机捣碎1-1-2min2min，制成匀浆。对含水量大的样品，如熟透的西红柿等，捣碎时可以，制成匀浆。对含水量大的样品，如熟

17、透的西红柿等，捣碎时可以，制成匀浆。对含水量大的样品，如熟透的西红柿等，捣碎时可以，制成匀浆。对含水量大的样品，如熟透的西红柿等，捣碎时可以不加水。不加水。不加水。不加水。研磨：对于含纤维多或较硬的样品，如禾木科植物的根、茎杆、研磨：对于含纤维多或较硬的样品，如禾木科植物的根、茎杆、研磨：对于含纤维多或较硬的样品，如禾木科植物的根、茎杆、研磨：对于含纤维多或较硬的样品，如禾木科植物的根、茎杆、叶子等，可用不锈钢刀或剪刀切（剪）成小片或小块，混匀后在叶子等，可用不锈钢刀或剪刀切（剪）成小片或小块，混匀后在叶子等，可用不锈钢刀或剪刀切（剪）成小片或小块，混匀后在叶子等，可用不锈钢刀或剪刀切（剪）成

18、小片或小块，混匀后在研钵中加石英砂研磨。研钵中加石英砂研磨。研钵中加石英砂研磨。研钵中加石英砂研磨。本讲稿第十二页，共六十四页(2)(2)植物干样的制备植物干样的制备植物干样的制备植物干样的制备风干：将洗净的植物鲜样尽快放在干燥通风处风干（茎杆样风干：将洗净的植物鲜样尽快放在干燥通风处风干（茎杆样风干：将洗净的植物鲜样尽快放在干燥通风处风干（茎杆样风干：将洗净的植物鲜样尽快放在干燥通风处风干（茎杆样品可以劈开）。如果遇到阴雨天或潮湿气候，可放在品可以劈开）。如果遇到阴雨天或潮湿气候，可放在品可以劈开）。如果遇到阴雨天或潮湿气候，可放在品可以劈开）。如果遇到阴雨天或潮湿气候，可放在40-6040

19、-60鼓风干燥箱中烘干，以免发霉腐烂，并减少化学和生物变化。鼓风干燥箱中烘干，以免发霉腐烂，并减少化学和生物变化。鼓风干燥箱中烘干，以免发霉腐烂，并减少化学和生物变化。鼓风干燥箱中烘干，以免发霉腐烂，并减少化学和生物变化。磨碎：将风干或烘干的样品去除灰尘、杂物，用剪刀剪碎磨碎：将风干或烘干的样品去除灰尘、杂物，用剪刀剪碎磨碎：将风干或烘干的样品去除灰尘、杂物，用剪刀剪碎磨碎：将风干或烘干的样品去除灰尘、杂物，用剪刀剪碎（或先剪碎再烘干），再用磨碎机磨碎。谷类作物的种子样（或先剪碎再烘干），再用磨碎机磨碎。谷类作物的种子样（或先剪碎再烘干），再用磨碎机磨碎。谷类作物的种子样（或先剪碎再烘干），再

20、用磨碎机磨碎。谷类作物的种子样品如稻谷等，应先脱壳再粉碎。品如稻谷等，应先脱壳再粉碎。品如稻谷等，应先脱壳再粉碎。品如稻谷等，应先脱壳再粉碎。过筛：将粉碎好的样品过筛。一般要求通过过筛：将粉碎好的样品过筛。一般要求通过过筛：将粉碎好的样品过筛。一般要求通过过筛：将粉碎好的样品过筛。一般要求通过1mm1mm筛孔即可，有的分筛孔即可，有的分筛孔即可，有的分筛孔即可，有的分析项目要求通过析项目要求通过析项目要求通过析项目要求通过0.25mm0.25mm的筛孔。制备好的样品贮存于磨口玻璃广的筛孔。制备好的样品贮存于磨口玻璃广的筛孔。制备好的样品贮存于磨口玻璃广的筛孔。制备好的样品贮存于磨口玻璃广口瓶或

21、聚乙烯广口瓶中备用。口瓶或聚乙烯广口瓶中备用。口瓶或聚乙烯广口瓶中备用。口瓶或聚乙烯广口瓶中备用。保存：对于测定某些金属含量的样品，应注意避免受金属器械和筛保存：对于测定某些金属含量的样品，应注意避免受金属器械和筛保存：对于测定某些金属含量的样品，应注意避免受金属器械和筛保存：对于测定某些金属含量的样品，应注意避免受金属器械和筛子等污染。因此，最好用玛瑙研钵磨碎，尼龙筛过筛，聚乙烯瓶子等污染。因此，最好用玛瑙研钵磨碎，尼龙筛过筛，聚乙烯瓶子等污染。因此，最好用玛瑙研钵磨碎，尼龙筛过筛，聚乙烯瓶子等污染。因此，最好用玛瑙研钵磨碎，尼龙筛过筛，聚乙烯瓶保存。保存。保存。保存。本讲稿第十三页，共六十

22、四页1.4生物样品的预处理生物样品的预处理(1)消化分解：使用强酸或强碱等消化分解液，消化分解：使用强酸或强碱等消化分解液，初步处理样品，使大部分蛋白等大分子物初步处理样品，使大部分蛋白等大分子物质在一定程度上降解或去除。质在一定程度上降解或去除。(2)提取、分离和浓缩提取、分离和浓缩本讲稿第十四页，共六十四页提取方法：一般将切碎的生物样品置于容器中，加入适当的提取溶剂，提取方法：一般将切碎的生物样品置于容器中，加入适当的提取溶剂，提取方法：一般将切碎的生物样品置于容器中，加入适当的提取溶剂，提取方法：一般将切碎的生物样品置于容器中，加入适当的提取溶剂，振荡、搅拌或磨碎，浸取一定时间，滤出溶剂

23、，再用新提取溶剂洗涤振荡、搅拌或磨碎，浸取一定时间，滤出溶剂，再用新提取溶剂洗涤振荡、搅拌或磨碎，浸取一定时间，滤出溶剂，再用新提取溶剂洗涤振荡、搅拌或磨碎，浸取一定时间，滤出溶剂，再用新提取溶剂洗涤样品滤残或再浸取一次，合并浸取液，供分析或进行分离、富集用。样品滤残或再浸取一次，合并浸取液，供分析或进行分离、富集用。样品滤残或再浸取一次，合并浸取液，供分析或进行分离、富集用。样品滤残或再浸取一次，合并浸取液，供分析或进行分离、富集用。主要有振荡浸取法、组织捣碎提取法、脂肪提取器提取法、匀浆法等。主要有振荡浸取法、组织捣碎提取法、脂肪提取器提取法、匀浆法等。主要有振荡浸取法、组织捣碎提取法、脂

24、肪提取器提取法、匀浆法等。主要有振荡浸取法、组织捣碎提取法、脂肪提取器提取法、匀浆法等。分离方法：将目的组分从粗提液中分离出来有多种方法，主要有萃取法、分离方法：将目的组分从粗提液中分离出来有多种方法，主要有萃取法、分离方法：将目的组分从粗提液中分离出来有多种方法，主要有萃取法、分离方法：将目的组分从粗提液中分离出来有多种方法，主要有萃取法、蒸馏法、层析法、低温冷冻法等。蒸馏法、层析法、低温冷冻法等。蒸馏法、层析法、低温冷冻法等。蒸馏法、层析法、低温冷冻法等。低温冷冻法：该方法基于不同物质在同一溶剂中的溶解度随温低温冷冻法：该方法基于不同物质在同一溶剂中的溶解度随温低温冷冻法：该方法基于不同物

25、质在同一溶剂中的溶解度随温低温冷冻法：该方法基于不同物质在同一溶剂中的溶解度随温度不同而不同的原理进行彼此分离的。度不同而不同的原理进行彼此分离的。度不同而不同的原理进行彼此分离的。度不同而不同的原理进行彼此分离的。浓缩方法：生物样品的提取液经过分离净化后，待测物质浓度可能浓缩方法：生物样品的提取液经过分离净化后，待测物质浓度可能浓缩方法：生物样品的提取液经过分离净化后，待测物质浓度可能浓缩方法：生物样品的提取液经过分离净化后，待测物质浓度可能仍达不到分析方法的要求，这就需要进行浓缩。常用的浓缩方法有：仍达不到分析方法的要求，这就需要进行浓缩。常用的浓缩方法有：仍达不到分析方法的要求，这就需要

26、进行浓缩。常用的浓缩方法有：仍达不到分析方法的要求，这就需要进行浓缩。常用的浓缩方法有：蒸馏或减压蒸馏法、蒸馏或减压蒸馏法、蒸馏或减压蒸馏法、蒸馏或减压蒸馏法、K-DK-D浓缩器浓缩法、蒸发法等。浓缩器浓缩法、蒸发法等。浓缩器浓缩法、蒸发法等。浓缩器浓缩法、蒸发法等。本讲稿第十五页，共六十四页第二节第二节 感官层次的形态检验感官层次的形态检验2.1感官法感官法2.2纸片法纸片法2.3试管法试管法本讲稿第十六页，共六十四页2.1感官法感官法“看看看看”是感官法最重要的手段。是感官法最重要的手段。是感官法最重要的手段。是感官法最重要的手段。“看看看看”就是细致的观察样品，包括样品的全貌就是细致的观

27、察样品，包括样品的全貌就是细致的观察样品，包括样品的全貌就是细致的观察样品，包括样品的全貌和样品各部位的特点，如形状、颜色、光泽、分泌物、毛、孔、表面和断面、和样品各部位的特点，如形状、颜色、光泽、分泌物、毛、孔、表面和断面、和样品各部位的特点，如形状、颜色、光泽、分泌物、毛、孔、表面和断面、和样品各部位的特点，如形状、颜色、光泽、分泌物、毛、孔、表面和断面、斑点、刺等。如色黄的植物样品多含有黄酮类等。斑点、刺等。如色黄的植物样品多含有黄酮类等。斑点、刺等。如色黄的植物样品多含有黄酮类等。斑点、刺等。如色黄的植物样品多含有黄酮类等。“摸摸摸摸”就是用手触摸、揉捻、撕扯、折切等，感觉样品的粗糙程

28、度、坚硬程度、就是用手触摸、揉捻、撕扯、折切等，感觉样品的粗糙程度、坚硬程度、就是用手触摸、揉捻、撕扯、折切等，感觉样品的粗糙程度、坚硬程度、就是用手触摸、揉捻、撕扯、折切等，感觉样品的粗糙程度、坚硬程度、断面特性等。如冬青科和卫矛科叶柄拉断有胶质丝。如将果实和种子放在滤断面特性等。如冬青科和卫矛科叶柄拉断有胶质丝。如将果实和种子放在滤断面特性等。如冬青科和卫矛科叶柄拉断有胶质丝。如将果实和种子放在滤断面特性等。如冬青科和卫矛科叶柄拉断有胶质丝。如将果实和种子放在滤纸上，用力压碎，稍干后看纸上有无油迹并估计含油的多少；检查鞣质类化纸上，用力压碎，稍干后看纸上有无油迹并估计含油的多少；检查鞣质类

29、化纸上，用力压碎，稍干后看纸上有无油迹并估计含油的多少；检查鞣质类化纸上，用力压碎，稍干后看纸上有无油迹并估计含油的多少；检查鞣质类化合物，可用一把无锈的铁刀切开样品，如含鞣质，小刀及材料断面很快会变合物，可用一把无锈的铁刀切开样品，如含鞣质，小刀及材料断面很快会变合物，可用一把无锈的铁刀切开样品，如含鞣质，小刀及材料断面很快会变合物，可用一把无锈的铁刀切开样品，如含鞣质，小刀及材料断面很快会变成兰黑色。成兰黑色。成兰黑色。成兰黑色。“嗅嗅嗅嗅”就是用鼻子闻样品挥发出的气味，如把一些样品揉碎后，嗅其有无就是用鼻子闻样品挥发出的气味，如把一些样品揉碎后，嗅其有无就是用鼻子闻样品挥发出的气味，如把

30、一些样品揉碎后，嗅其有无就是用鼻子闻样品挥发出的气味，如把一些样品揉碎后，嗅其有无芳香气味。芳香气味。芳香气味。芳香气味。“尝尝尝尝”就是用嘴舌来品尝，根据感觉来判断样品。如植物材料中，味苦的多含就是用嘴舌来品尝，根据感觉来判断样品。如植物材料中，味苦的多含就是用嘴舌来品尝，根据感觉来判断样品。如植物材料中，味苦的多含就是用嘴舌来品尝，根据感觉来判断样品。如植物材料中，味苦的多含生物碱、甙类；味涩的多含鞣质，味酸的含有机酸。生物碱、甙类；味涩的多含鞣质，味酸的含有机酸。生物碱、甙类；味涩的多含鞣质，味酸的含有机酸。生物碱、甙类；味涩的多含鞣质，味酸的含有机酸。本讲稿第十七页，共六十四页2.2纸

31、片法纸片法取样品抽提液滴在滤纸上，待展开，干后喷洒试液，可以检查多种成分。取样品抽提液滴在滤纸上，待展开，干后喷洒试液，可以检查多种成分。取样品抽提液滴在滤纸上，待展开，干后喷洒试液，可以检查多种成分。取样品抽提液滴在滤纸上，待展开，干后喷洒试液，可以检查多种成分。生物碱：喷碘化铋钾试液，若斑点颜色显著加深，为阳性反应。生物碱：喷碘化铋钾试液，若斑点颜色显著加深，为阳性反应。生物碱：喷碘化铋钾试液，若斑点颜色显著加深，为阳性反应。生物碱：喷碘化铋钾试液，若斑点颜色显著加深，为阳性反应。酚：醇浸液，喷三氯化铁试液，若斑点显兰绿（黑）色，为阳性反应。酚：醇浸液，喷三氯化铁试液，若斑点显兰绿（黑）色

32、，为阳性反应。酚：醇浸液，喷三氯化铁试液，若斑点显兰绿（黑）色，为阳性反应。酚：醇浸液，喷三氯化铁试液，若斑点显兰绿（黑）色，为阳性反应。有机酸：取水浸液，喷洒溴酚兰后，背景兰色，斑点浅黄色，为阳性反应。有机酸：取水浸液，喷洒溴酚兰后，背景兰色，斑点浅黄色，为阳性反应。有机酸：取水浸液，喷洒溴酚兰后，背景兰色，斑点浅黄色，为阳性反应。有机酸：取水浸液，喷洒溴酚兰后，背景兰色，斑点浅黄色，为阳性反应。黄酮类：醇浸液，喷三氯化铭醇试液，黄色及荧光均加深，为阳性反应。黄酮类：醇浸液，喷三氯化铭醇试液，黄色及荧光均加深，为阳性反应。黄酮类：醇浸液，喷三氯化铭醇试液，黄色及荧光均加深，为阳性反应。黄酮类

33、：醇浸液，喷三氯化铭醇试液，黄色及荧光均加深，为阳性反应。蒽醌类：醇浸液，喷氢氧化钾试液，斑点显红色或暗红色，为阳性反应。蒽醌类：醇浸液，喷氢氧化钾试液，斑点显红色或暗红色，为阳性反应。蒽醌类：醇浸液，喷氢氧化钾试液，斑点显红色或暗红色，为阳性反应。蒽醌类：醇浸液，喷氢氧化钾试液，斑点显红色或暗红色，为阳性反应。强心甙：醇浸液，加强心甙：醇浸液，加强心甙：醇浸液，加强心甙：醇浸液，加KeddeKedde试液，斑点显紫色或浅紫色，为阳性反应。试液，斑点显紫色或浅紫色，为阳性反应。试液，斑点显紫色或浅紫色，为阳性反应。试液，斑点显紫色或浅紫色，为阳性反应。内酯及香豆精类：醇浸液，加内酯及香豆精类：

34、醇浸液，加内酯及香豆精类：醇浸液，加内酯及香豆精类：醇浸液，加3 3NaNa2 2COCO3 3，烤，烤，烤，烤1515分钟，滴加安替匹林及铁氰化钾，显紫分钟，滴加安替匹林及铁氰化钾，显紫分钟，滴加安替匹林及铁氰化钾，显紫分钟，滴加安替匹林及铁氰化钾，显紫红色，为阳性反应。检查山道年（红色，为阳性反应。检查山道年（红色，为阳性反应。检查山道年（红色，为阳性反应。检查山道年（SantoninSantonin）可将原料直接加甲醇钠，显紫红色为阳）可将原料直接加甲醇钠，显紫红色为阳）可将原料直接加甲醇钠，显紫红色为阳）可将原料直接加甲醇钠，显紫红色为阳性反应。性反应。性反应。性反应。还原物质：水及醇

35、浸液，分别喷高锰酸钾试液，背景紫红色，斑点色浅或退色，为阳性反应。还原物质：水及醇浸液，分别喷高锰酸钾试液，背景紫红色，斑点色浅或退色，为阳性反应。还原物质：水及醇浸液，分别喷高锰酸钾试液，背景紫红色，斑点色浅或退色，为阳性反应。还原物质：水及醇浸液，分别喷高锰酸钾试液，背景紫红色，斑点色浅或退色，为阳性反应。本讲稿第十八页，共六十四页2.3试管法试管法类似纸片法类似纸片法类似纸片法类似纸片法皂甙：水浸液置试管中，用力振摇，有持久性泡沫，皂甙：水浸液置试管中，用力振摇，有持久性泡沫，皂甙：水浸液置试管中，用力振摇，有持久性泡沫，皂甙：水浸液置试管中，用力振摇，有持久性泡沫，为阳性反应。为阳性反

36、应。为阳性反应。为阳性反应。蛋白质：水浸液，加入蛋白质：水浸液，加入蛋白质：水浸液，加入蛋白质：水浸液，加入NaOHNaOH、CuSOCuSO4 4，显淡紫红色，显淡紫红色，显淡紫红色，显淡紫红色，为阳性反应。为阳性反应。为阳性反应。为阳性反应。甙类、糖类：样品加水用稀酸酸化，煮沸甙类、糖类：样品加水用稀酸酸化，煮沸甙类、糖类：样品加水用稀酸酸化，煮沸甙类、糖类：样品加水用稀酸酸化，煮沸1515分钟过分钟过分钟过分钟过滤，滤液浓缩后，滴在纸片上，喷邻苯二甲酸苯胺试液，滤，滤液浓缩后，滴在纸片上，喷邻苯二甲酸苯胺试液，滤，滤液浓缩后，滴在纸片上，喷邻苯二甲酸苯胺试液，滤，滤液浓缩后，滴在纸片上，

37、喷邻苯二甲酸苯胺试液，烘烤，斑点显棕红色，为阳性反应。烘烤，斑点显棕红色，为阳性反应。烘烤，斑点显棕红色，为阳性反应。烘烤，斑点显棕红色，为阳性反应。本讲稿第十九页，共六十四页第三节第三节 显微形态检验技术显微形态检验技术3.1显微镜的基本构造显微镜的基本构造3.2光学显微镜的成像原理光学显微镜的成像原理3.3显微镜的性能显微镜的性能3.4显微镜的使用操作及注意事项显微镜的使用操作及注意事项3.5显微镜的分类显微镜的分类3.5微生物涂片、染色的检验技术微生物涂片、染色的检验技术3.6显微制片技术显微制片技术本讲稿第二十页，共六十四页3.1显微镜的构造显微镜的构造机械装置包括：镜机械装置包括：镜

38、机械装置包括：镜机械装置包括：镜座、镜筒、物镜转座、镜筒、物镜转座、镜筒、物镜转座、镜筒、物镜转换器、载物台、推换器、载物台、推换器、载物台、推换器、载物台、推动器、粗动螺旋、动器、粗动螺旋、动器、粗动螺旋、动器、粗动螺旋、微动螺旋等部件。微动螺旋等部件。微动螺旋等部件。微动螺旋等部件。光学系统包括：反光光学系统包括：反光光学系统包括：反光光学系统包括：反光镜、聚光器、接物镜、镜、聚光器、接物镜、镜、聚光器、接物镜、镜、聚光器、接物镜、接目镜等组成，光学接目镜等组成，光学接目镜等组成，光学接目镜等组成，光学系统使物体形成物体系统使物体形成物体系统使物体形成物体系统使物体形成物体放大像放大像放大

39、像放大像 。本讲稿第二十一页，共六十四页普通光学显微镜常用的目镜为惠更斯目镜普通光学显微镜常用的目镜为惠更斯目镜（Huygenseyepiece），如要进行研究用时，），如要进行研究用时，一般选用性能更好的目镜，如补偿目镜一般选用性能更好的目镜，如补偿目镜（K）、平场目镜（）、平场目镜（P）、广视场目镜）、广视场目镜（WF）。照相时选用照相目镜（）。照相时选用照相目镜（NFK）。）。本讲稿第二十二页，共六十四页物镜成像的质量，对分辨力有着决定性的物镜成像的质量，对分辨力有着决定性的影响。物镜的性能取决于物镜的数值孔径影响。物镜的性能取决于物镜的数值孔径（numericalapeature简写为

40、简写为NA），每个物），每个物镜的数值孔径都标在物镜的外壳上，数值镜的数值孔径都标在物镜的外壳上，数值孔径越大，物镜的性能越好。孔径越大，物镜的性能越好。数值孔径又叫做镜口率，它是由物体与物数值孔径又叫做镜口率，它是由物体与物镜间媒质的折射率镜间媒质的折射率n与物镜孔径角的一半与物镜孔径角的一半的正弦值的乘积，其大小由下式决定：的正弦值的乘积，其大小由下式决定：NA=nsin本讲稿第二十三页，共六十四页NA=nsin空气介质空气介质空气介质空气介质油介质油介质油介质油介质盖盖盖盖 玻玻玻玻 片片片片物物物物 镜镜镜镜本讲稿第二十四页，共六十四页根据物镜前透镜与被检物体之间的介质不根据物镜前透镜

41、与被检物体之间的介质不同，可分为：同，可分为：A、干燥系物镜：以空气为介质，如常用的、干燥系物镜：以空气为介质，如常用的40以下的物镜，数值孔径均小于以下的物镜，数值孔径均小于1。B、油浸系物镜：常以香柏油为介质，此物镜、油浸系物镜：常以香柏油为介质，此物镜又叫油镜头，其放大率为又叫油镜头，其放大率为90-100，数值，数值孔值大于孔值大于1。本讲稿第二十五页，共六十四页根据物镜放大率的高低，可分为：根据物镜放大率的高低，可分为：A、低倍物镜：、低倍物镜：1-6，NA值值0.04-0.15；B、中倍物镜：、中倍物镜：6-25，NA值值0.15-0.40；C、高倍物镜：、高倍物镜：25-63，N

42、A值值0.35-0.95；D、油浸物镜：、油浸物镜：90-100，NA值值1.25-1.40。本讲稿第二十六页，共六十四页根据物镜像差校正的程度来分类可分为：根据物镜像差校正的程度来分类可分为：根据物镜像差校正的程度来分类可分为：根据物镜像差校正的程度来分类可分为：A A、消色差物镜：是最常用的物镜，外壳上标有、消色差物镜：是最常用的物镜，外壳上标有、消色差物镜：是最常用的物镜，外壳上标有、消色差物镜：是最常用的物镜，外壳上标有“Ach”Ach”字样，该物字样，该物字样，该物字样，该物镜可以除红光和青光形成的色差。镜检时通常与惠更斯目镜配合使用。镜可以除红光和青光形成的色差。镜检时通常与惠更斯

43、目镜配合使用。镜可以除红光和青光形成的色差。镜检时通常与惠更斯目镜配合使用。镜可以除红光和青光形成的色差。镜检时通常与惠更斯目镜配合使用。B B、复消色差物镜：物镜外壳上标有、复消色差物镜：物镜外壳上标有、复消色差物镜：物镜外壳上标有、复消色差物镜：物镜外壳上标有“Apo”Apo”字样，除能校正红、蓝、绿字样，除能校正红、蓝、绿字样，除能校正红、蓝、绿字样，除能校正红、蓝、绿三色光的色差外，还能校正黄色光造成的相差，通常与补偿目镜配三色光的色差外，还能校正黄色光造成的相差，通常与补偿目镜配三色光的色差外，还能校正黄色光造成的相差，通常与补偿目镜配三色光的色差外，还能校正黄色光造成的相差，通常与

44、补偿目镜配合使用。合使用。合使用。合使用。C C、特种物镜：在上述物镜基础上，为达到某些特定观察效果而制造的、特种物镜：在上述物镜基础上，为达到某些特定观察效果而制造的、特种物镜：在上述物镜基础上，为达到某些特定观察效果而制造的、特种物镜：在上述物镜基础上，为达到某些特定观察效果而制造的物镜。如带校正环物镜，带视场光阑物镜，相差物镜，荧光物镜，无物镜。如带校正环物镜，带视场光阑物镜，相差物镜，荧光物镜，无物镜。如带校正环物镜，带视场光阑物镜，相差物镜，荧光物镜，无物镜。如带校正环物镜，带视场光阑物镜，相差物镜，荧光物镜，无应变物镜，无罩物镜，长工作距离物镜等应变物镜，无罩物镜，长工作距离物镜等

45、应变物镜，无罩物镜，长工作距离物镜等应变物镜，无罩物镜，长工作距离物镜等D D、目前在研究中常用的物镜还有：半复消色差物镜（、目前在研究中常用的物镜还有：半复消色差物镜（、目前在研究中常用的物镜还有：半复消色差物镜（、目前在研究中常用的物镜还有：半复消色差物镜（FLFL），平场物），平场物），平场物），平场物镜镜镜镜(Plan)(Plan)，平场复消色差物镜（，平场复消色差物镜（，平场复消色差物镜（，平场复消色差物镜（Plan ApoPlan Apo）,超平场物镜（超平场物镜（超平场物镜（超平场物镜（SplanSplan，超，超，超，超平场复消色差物镜（平场复消色差物镜（平场复消色差物镜（平场

46、复消色差物镜（Splan ApoSplan Apo）等。）等。）等。）等。本讲稿第二十七页，共六十四页3.2光学光学显微镜显微镜的成像的成像原理原理本讲稿第二十八页，共六十四页3.3显微镜的性能显微镜的性能分辨力也叫分辨本领或解像力，光学显微镜分辨分辨力也叫分辨本领或解像力，光学显微镜分辨力定义为在力定义为在25cm明视距离处能分辨清楚尽可能靠明视距离处能分辨清楚尽可能靠近的两点的能力，辨认两点之间的距离愈小，则分近的两点的能力，辨认两点之间的距离愈小，则分辨本领愈高，人眼的分辨力约为辨本领愈高，人眼的分辨力约为100m，而显微，而显微镜的分辨力镜的分辨力R以下列公式计算：以下列公式计算：R=

47、0.61/NA本讲稿第二十九页，共六十四页目前目前NA最大可以达到最大可以达到1.4；照明波长最短为；照明波长最短为400nm；代入公式可得；代入公式可得公式计算：公式计算：R=0.610.4/1.4=0.17最大分辨率约最大分辨率约0.2微米，约等于可见光最短波微米，约等于可见光最短波长的一半。长的一半。本讲稿第三十页，共六十四页3.4显微镜的使用操作及注意事项显微镜的使用操作及注意事项(1)观察前的准备观察前的准备(2)低倍镜观察低倍镜观察(3)高倍镜观察高倍镜观察(4)油镜观察油镜观察本讲稿第三十一页，共六十四页3.5微生物涂片、染色的检验技术微生物涂片、染色的检验技术细菌的细胞小而透明

48、，在普通的光学显微细菌的细胞小而透明，在普通的光学显微镜下不易识别，必须对它们进行染色。利镜下不易识别，必须对它们进行染色。利用单一染料对细菌进行染色，使经染色后用单一染料对细菌进行染色，使经染色后的菌体与背景形成明显的色差，从而能更的菌体与背景形成明显的色差，从而能更清楚地观察到其形态和结构。此法操作简清楚地观察到其形态和结构。此法操作简便，适用于菌体一般形状和细菌排列的观便，适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。察。本讲稿第三十二页，共六十四页常用碱性染料进行简单染色，这是因为在中性、碱常用碱性染料进行简单染色，这是因为在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性或弱酸性溶液中，

49、细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷，因性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷，因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色。经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，色。经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。常用作简单染色的染料有在显微镜下更易于识别。常用作简单染色的染料有美蓝、结晶紫、碱性复红等。美蓝、结晶紫、碱性复红等。当细菌分解糖类产酸使培养基当细菌分解糖类产酸使培养基pH下降时，细菌所下降时，细菌所带正电荷增加，此时可用伊红、酸性复红或刚果带正电荷增加，此时可用伊红、酸性复红或刚果红

50、等酸性染料染色。红等酸性染料染色。本讲稿第三十三页，共六十四页染色前必须固定细菌。其目的有二：染色前必须固定细菌。其目的有二：一是杀死细菌并使菌体粘附于玻片上；一是杀死细菌并使菌体粘附于玻片上；二是增加其对染料的亲和力。二是增加其对染料的亲和力。常用的有加热和化学固定两种方法。固定时常用的有加热和化学固定两种方法。固定时尽量维持细胞原有的形态。尽量维持细胞原有的形态。本讲稿第三十四页，共六十四页操作步骤：操作步骤：涂片涂片干燥干燥固定固定染色染色水洗水洗干燥干燥镜检镜检本讲稿第三十五页，共六十四页3.6显微制片技术显微制片技术一般可分为非切片法与切片法两大类：一般可分为非切片法与切片法两大类：