课题微生物的实验室培养精选文档.ppt

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1、课题微生物的实验室培养课题微生物的实验室培养本讲稿第一页，共五十一页微生物包括哪五类：微生物包括哪五类：病毒病毒细菌细菌放线菌放线菌真菌真菌原生动物原生动物特点：特点：结构都相当简单结构都相当简单,个体多数十分微小个体多数十分微小.通常要通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构有细胞结构.且体内一般不含有叶绿素且体内一般不含有叶绿素.不能进行光不能进行光合作用合作用.原核生物界原核生物界 原生生物界原生生物界真菌界真菌界病毒界病毒界微生物基础知识微生物基础知识本讲稿第二页，共五十一页 了解有关培养基的基础知识，进行无菌了解有关培养

2、基的基础知识，进行无菌技术的操作，进行微生物的培养。技术的操作，进行微生物的培养。一、课题目标：一、课题目标：掌握掌握培养基的制备培养基的制备、高压蒸气灭菌高压蒸气灭菌和和平板平板划线法划线法等基本操作技术，熟练、规范地进行等基本操作技术，熟练、规范地进行无菌操作，成功地培养微生物。无菌操作，成功地培养微生物。无菌技术的操作。无菌技术的操作。二、课题重点和难点：二、课题重点和难点：三、技能目标：三、技能目标：本讲稿第三页，共五十一页一、基础知识：一、基础知识：（一）培养基（一）培养基 培养基（培养液）是由人工方法配制而成培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液

3、。的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。（1 1）按物理状态来分：培养基可分为）按物理状态来分：培养基可分为固体培养基固体培养基、液体培养基液体培养基和和半固体培养基半固体培养基。其中固体培养基用于。其中固体培养基用于菌种分离、鉴定等。菌种分离、鉴定等。（2 2）按功能来分，可分为）按功能来分，可分为选择培养基选择培养基和和鉴别培养鉴别培养基基。（3 3）按成分来分，可分为）按成分来分，可分为天然培养基天然培养基和和合成培养合成培养基基。1.1.培养基的类型和用途培养基的类型和用途本讲稿第四页，共五十一页培养基的种类培养基的种类液体培养基液体培养基半固体培养基半固体培养基固体培养基固体培养基

4、据物理性质分据物理性质分天然培养基天然培养基合成培养基合成培养基据化学成分分据化学成分分选择培养基选择培养基鉴别培养基鉴别培养基据用途分据用途分常用于工业生产常用于观察微生物的运动、鉴定菌种用于微生物的分离、计数常用于工业生产常用于分类、鉴定在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长。例如，在培养基中加入青霉素，以抑制细菌、放线菌的生长，从而分离到酵母菌和霉菌。又如，在培养基中加入高浓度的食盐可以抑制多种细菌的生长，但不影响金黄色葡萄球菌的生长。根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成，用以鉴别不同种类的微生物。例如，在培养基中加入

5、伊红和美蓝，可以用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌：如果有大肠杆菌，其代谢产物就与伊红和美蓝结合，使菌落呈深紫色，并带有金属光泽。本讲稿第五页，共五十一页选择培养基选择培养基加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基加入高浓度食盐的培养基:分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基:分离固氮菌分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基:分离自养型微生物分离自养型微生物加入青霉素等抗生素的培养基加入青霉素等抗生素的培养基:分离导入了目的基因的受体细胞分离导入了目的基因的

6、受体细胞加入氨基喋呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培养基加入氨基喋呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培养基:分离杂交瘤细胞分离杂交瘤细胞本讲稿第六页，共五十一页 根据细胞生存所需物质的种类和数量，根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。用人工方法模拟合成的。合成培养基主要成分是氨基酸、维生合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。物质。优点：优点：标准化生产，组分和含量相对标准化生产，组分和含量相对固定固定;成本低成本低 缺点：缺点：缺少某些成分，不能完全满缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。足体外细胞生长需要。

7、合成培养基合成培养基:本讲稿第七页，共五十一页 天然培养基有血清、血浆、和组织提天然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。取液（如鸡胚和牛胚浸液）。优点：优点：营养成分丰富，培养效果好营养成分丰富，培养效果好缺点：缺点：来源受限来源受限;成分复杂，影响对某些成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析实验产物的提取和实验结果的分析;易发易发生支原体污染生支原体污染;天然培养基：天然培养基：本讲稿第八页，共五十一页固体培养基：菌落固体培养基：菌落本讲稿第九页，共五十一页液体培养基：液体培养基：表面生长表面生长均匀混浊生长均匀混浊生长沉淀生长沉淀生长本讲稿第十页，共五十一页半

8、固体培养基：半固体培养基：无动力无动力 有动力有动力(弥散弥散)(是否运动是否运动)本讲稿第十一页，共五十一页2、培养基配制原则、培养基配制原则：（1）目的要明确目的要明确：根据微生物的种类、培养目：根据微生物的种类、培养目的等确定配制培养基的种类，因为不同的微生物的等确定配制培养基的种类，因为不同的微生物对培养物质的需求不同。对培养物质的需求不同。（2）营养要协调营养要协调：注意各种营养物质的浓度和：注意各种营养物质的浓度和比例。比例。（3）pH要适宜要适宜：各种微生物适宜生长的：各种微生物适宜生长的pH范围不范围不同。同。细菌细菌pH为：为：6.5-7.5；放线菌放线菌pH为：为：7.5-

9、8.5；真菌真菌pH为：为：5.0-6.0。本讲稿第十二页，共五十一页微生物需要的五大类营养要素物质是：微生物需要的五大类营养要素物质是：.微生物需要的营养物质及功能微生物需要的营养物质及功能1.1.碳源碳源 2.2.氮源氮源 3.3.生长因子生长因子 4.4.无机盐无机盐 5.5.水水：凡是能为微生物提供所需：凡是能为微生物提供所需碳元素碳元素的营的营养物质。养物质。无机碳源：无机碳源：COCO2 2；NaHCONaHCO3 3等等有机碳源：有机碳源：糖类糖类、脂肪酸、花生粉饼、脂肪酸、花生粉饼、石油等石油等构成细胞物质和一些代谢产物构成细胞物质和一些代谢产物异养微生物的能源异养微生物的能源

10、.概念概念.来源：来源：.作用：作用：1.1.微生物的碳源微生物的碳源本讲稿第十三页，共五十一页无机氮源：无机氮源：无机氮源：无机氮源：N N N N2 2 2 2、NHNHNHNH4 4 4 4+、NONONONO3 3 3 3-、NHNHNHNH3 3 3 3等。等。等。等。有机氮源：有机氮源：有机氮源：有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等等等等凡是能够为微生物提供凡是能够为微生物提供凡是能够为微生物提供凡是能够为微生物提供N N N N元素元素元素元素的营养物质。的营养物质。的营养物质。的营养物质。主

11、要用于合成蛋白质、核酸及含主要用于合成蛋白质、核酸及含主要用于合成蛋白质、核酸及含主要用于合成蛋白质、核酸及含N N N N的代谢产的代谢产的代谢产的代谢产物。物。物。物。2.2.微生物的氮源微生物的氮源.概念：概念：概念：概念：.来源：来源：来源：来源：.作用：作用：作用：作用：3.3.生长因子生长因子.常见的生长因子：常见的生长因子：常见的生长因子：常见的生长因子：.概念：概念：概念：概念：.作用：作用：作用：作用：微生物生长不可缺少的微量有机物。微生物生长不可缺少的微量有机物。微生物生长不可缺少的微量有机物。微生物生长不可缺少的微量有机物。酶和核酸的组成成分。酶和核酸的组成成分。酶和核酸

12、的组成成分。酶和核酸的组成成分。维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。本讲稿第十四页，共五十一页 构成微生物细胞的组成成分构成微生物细胞的组成成分 调解微生物细胞的渗透压，调解微生物细胞的渗透压，PH值和氧值和氧化还原电化还原电 位位 有些无机盐如有些无机盐如S、Fe还可做为自养微生还可做为自养微生物的能源物的能源 构成酶活性基的组成成分，维持酶活性。构成酶活性基的组成成分，维持酶活性。Mg、Ca、K是多种酶的激活剂是多种酶的激活剂 3.3.无机盐（无机盐（mineral saltsmineral salts）无

13、机盐功能无机盐功能本讲稿第十五页，共五十一页 构构成成微微生生物物细细胞胞以以C、H、O、N、P、S六六种种元元素素为主，约占细胞干重的为主，约占细胞干重的95以上；以上；Ca、K、Mg、Fe为为大大量量元元素素，以以无无机机盐盐阳阳离离子子形式被吸收，配培养基要加磷酸盐、硫酸盐。形式被吸收，配培养基要加磷酸盐、硫酸盐。Zn、Ca、Mn、Co、Mo等等微微量量元元素素，在在微微生生物物培培养养中中有有0.1PPM就就可可以以了了，自自来来水水原原料料中中已已够够用用，不不需另加。需另加。无机盐种类无机盐种类Cncnc-micro本讲稿第十六页，共五十一页4.4.水水Cncnc-micron 是

14、细胞中生化反应的良好介质；营养是细胞中生化反应的良好介质；营养物质和代谢产物都必须溶解在水里，才物质和代谢产物都必须溶解在水里，才能被吸收或排出体（细胞）外。能被吸收或排出体（细胞）外。n 水的比热高，能有效的吸收代谢过程水的比热高，能有效的吸收代谢过程中放出的热量，不致使细胞的温度骤然中放出的热量，不致使细胞的温度骤然上升。上升。n 维持细胞的膨压（控制细胞形态）。维持细胞的膨压（控制细胞形态）。本讲稿第十七页，共五十一页5.碳源、氮源、生长因子的比较碳源、氮源、生长因子的比较来来 源源常用原料常用原料功功 能能碳源碳源CO2、NaHCO3、糖、糖类、脂肪酸、类、脂肪酸、花生粉花生粉饼、石油

15、等饼、石油等糖类糖类构成细胞物质构成细胞物质和一些代谢产和一些代谢产物，有些还是物，有些还是异养做生物的异养做生物的主要能源物质主要能源物质氮源氮源N2、NH3、铵盐、硝、铵盐、硝酸盐、尿素、酸盐、尿素、牛肉膏牛肉膏和蛋白胨等和蛋白胨等铵盐、硝酸铵盐、硝酸盐等盐等合成蛋白质、合成蛋白质、核酸以及含氮核酸以及含氮的代谢产物的代谢产物生长生长因子因子维生素、氨基酸、碱维生素、氨基酸、碱基基酶、核酸等的酶、核酸等的组成成分组成成分本讲稿第十八页，共五十一页（二）无菌技术（二）无菌技术1.1.无菌技术的概念无菌技术的概念 无菌操作泛指无菌操作泛指在培养微生物的操作中，在培养微生物的操作中，所有防止杂菌

16、污染的方法。所有防止杂菌污染的方法。无论是随后将无论是随后将要学到的要学到的倒平板倒平板、平板划线平板划线操作，还是操作，还是平平板稀释涂布法板稀释涂布法，其操作中的每一步都需要做，其操作中的每一步都需要做到到“无菌无菌”，即，即防止杂菌污染。防止杂菌污染。只有熟练、只有熟练、规范地进行无菌操作，才可能成功地培养微规范地进行无菌操作，才可能成功地培养微生物。生物。本讲稿第十九页，共五十一页（）（）消毒定义：消毒定义：利用化学或物理方法，杀死大部份致病微生物的过程。利用化学或物理方法，杀死大部份致病微生物的过程。2.2.消毒与灭菌的概念及两者的区别消毒与灭菌的概念及两者的区别（2 2）灭菌的定义

17、：）灭菌的定义：是指使用强烈的理化因素杀死物体内外是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的所有的微生微生物，包括所有细菌的孢子、芽孢、霉菌及病毒，而达物，包括所有细菌的孢子、芽孢、霉菌及病毒，而达到到完全无菌完全无菌之过程。之过程。灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。是最重要的技术。本讲稿第二十页，共五十一页比比较较项项理化因素的理化因素的作用强度作用强度消灭微生物消灭微生物的数量的数量芽孢和孢子芽孢和孢子能否被消灭能否被消灭消消毒毒较为温和较为温和部分生活状部分生活状态的微生物态的微生物不能不能灭灭菌菌强烈强烈全部微生物全部微生物能

18、能消毒与灭菌的比较消毒与灭菌的比较本讲稿第二十一页，共五十一页1 1、煮沸消毒法煮沸消毒法:100100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2、巴氏消毒法巴氏消毒法：70-75 70-75 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮15min15min3 3、化学药剂消毒法化学药剂消毒法:用用75%75%酒精、新洁尔酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源氯气消毒水源4 4、紫外线消毒紫外线消毒(1)消毒的方法：消毒的方法：3.3.常用的消毒与灭菌的方法常用的消毒与灭菌的方法本讲稿第二十二页，共五十一页1 1、灼烧灭菌、灼烧灭菌接种环、接种针、接种环、接种针、试管

19、口试管口2 2、干热灭菌：干热灭菌：160-160-170 170 下加热下加热1-2h1-2h。3 3、高压蒸气灭菌：高压蒸气灭菌：100kPa100kPa、121 121 下下维持维持15-30min.15-30min.(2)灭菌的方法：灭菌的方法：本讲稿第二十三页，共五十一页 最常用的灭菌方法是最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌，它可以杀灭，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。有些玻璃器皿也可采用有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌高温干热

20、灭菌。为了防止。为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。空气中的其他微生物不能通过。培养微生物的培养皿是由培养微生物的培养皿是由正反两平面板互扣而成正反两平面板互扣而成，这种器具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。这种器具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。本讲稿第二十四页，共五十一页1.1.无菌技术除了用来防止实验室的培

21、养物被无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？其他外来微生物污染外，还有什么目的？2.2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。如果需要，请选择合适的方法。（1 1）培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培养基与培养皿（2 2）玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管（3 3）实验操作者的双手实验操作者的双手 答：无菌技术还能有效避免操作者自身答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。被微生物感染。答：（答：（1）、（）、（2）需要灭菌；（）需要灭菌；（3）需要消毒）需要消毒。本

22、讲稿第二十五页，共五十一页3.微生物实验室培养的基本操作程序微生物实验室培养的基本操作程序1 1、器具的灭菌、器具的灭菌2 2、培养基的配制、培养基的配制3 3、培养基的灭菌、培养基的灭菌4 4、倒平板、倒平板5 5、微生物接种、微生物接种6 6、恒温箱中培养、恒温箱中培养7 7、菌种的保存、菌种的保存本讲稿第二十六页，共五十一页三、实验操作三、实验操作（一一.）制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）本讲稿第二十七页，共五十一页1 1计算、称量计算、称量2 2溶化溶化3 3调调pHpH：pH764 4过滤：过滤：这一步可以省去。5 5分装：分装：分装过程中

23、注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。6 6加塞加塞7 7包扎包扎操作步骤操作步骤本讲稿第二十八页，共五十一页 8 8灭菌灭菌:将将5050mlml培养基培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100100kPakPa、温度为温度为121121，灭菌，灭菌15153030minmin。将将培培养皿养皿用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160160170 170 下灭菌下灭菌

24、2 2h h。9 9倒平板倒平板:待培养基冷却到待培养基冷却到50 50 左右时，在酒精灯附近倒左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）平板。（倒平板操作见课本）2 2d d后观察平板，无杂菌后观察平板，无杂菌污染才可用来接种污染才可用来接种.10 10无菌检查：无菌检查：将灭菌的培养基放入将灭菌的培养基放入3737的温室中培养的温室中培养24482448小时，以检查灭菌是否彻底。小时，以检查灭菌是否彻底。本讲稿第二十九页，共五十一页倒平板技术倒平板技术倒平板技术倒平板技术本讲稿第三十页，共五十一页 1.1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 50 左右时，才左右时，

25、才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？答：答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。可以进行倒平板了。2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。污染培养基。本讲稿第三十一页，共五十一页3.3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿在倒

26、平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？物吗？为什么？答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生培

27、养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。物。本讲稿第三十二页，共五十一页（二）、纯化大肠杆菌（二）、纯化大肠杆菌接种方法有：接种方法有：平板划线法平板划线法和和稀释涂布平板法稀释涂布平板法 平板划线法平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养基表面通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操作连续画线的操作,将聚集的菌钟逐步稀释分散到培将聚集的菌钟逐步稀释分散到培养基的表面养基的表面.在数次画线后在数次画线后,可以分离到可以分离到由一个细胞繁殖而由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体来的肉眼可见的子细胞群体,这就是这就是菌落菌落.微生物的接种技术微生物的接种技术本讲稿第三十三页，共五十一页菌落

28、：菌落：n单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落形态结构的子细胞群体，叫做菌落。n菌落是鉴定菌种的重要依据。菌落是鉴定菌种的重要依据。本讲稿第三十四页，共五十一页菌落细菌的菌落特征因细菌的菌落特征因种而异种而异 本讲稿第三十五页，共五十一页霉菌的霉菌的菌落特菌落特征因种征因种而异而异菌落本讲稿第三十六页，共五十一页本讲稿第三十七页，共五十一页 1.1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，

29、仍然需要灼烧接种灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？环吗？为什么？答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。使每次划线时菌种的数目逐渐减

30、少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。本讲稿第三十八页，共五十一页 2.2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3.3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线么总是从上一次划线的末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始答：划线后，线条末端细菌的数目

31、比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。到由单个细菌繁殖而来的菌落。本讲稿第三十九页，共五十一页本讲稿第四十页，共五十一页本讲稿第四十一页，共五十一页 涂布平板的所有操作都应在火焰附近涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第作要求，想一想，第2 2步应如何进行无菌操步应如何进行无菌操作？作？应从操作的各个细节保证应从操作的各个细节保证“无菌无

32、菌”。例。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。焰周围等等。本讲稿第四十二页，共五十一页微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养本讲稿第四十三页，共五十一页微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养本讲稿第四十四页，共五十一页四、课题成果评价四、课题成果评价 （一）培养基的制作是否合格（一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温如果未接种的培养

33、基在恒温箱中保温1 12 d2 d后无菌落后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。（二）接种操作是否符合无菌要求（二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。达到要求，需要分析原因，再次练

34、习。（三）是否进行了及时细致的观察与记录（三）是否进行了及时细致的观察与记录 培养培养12 h12 h与与24 h24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。科学态度与习惯。本讲稿第四十五页，共五十一页菌种的保存菌种的保存菌种的保存菌种的保存 1 1、临时保藏：接、临时保藏：接种到固体斜面培养基，种到固体斜面培养基，菌落长成后置于菌落长成后置于44冰箱保存。

35、冰箱保存。2 2、长期保存：甘、长期保存：甘油冷冻管藏法油冷冻管藏法本讲稿第四十六页，共五十一页本课题知识小结本课题知识小结:本讲稿第四十七页，共五十一页【典例解析典例解析】例例1 1关微生物营养物质的叙述中，正确的是关微生物营养物质的叙述中，正确的是A.A.是碳源的物质不可能同时是氮源是碳源的物质不可能同时是氮源 B.B.凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量C.C.除水以外的无机物只提供无机盐除水以外的无机物只提供无机盐 D.D.无机氮源也能提供能量无机氮源也能提供能量 解析：解析：不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生物的具体情况分析。对于

36、微生物的具体情况分析。对于A A、B B选项，它的表达是不完整的。选项，它的表达是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如NHNH4 4HCOHCO3 3；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。对于源，也是能源，如蛋白胨。对于C C选项，除水以外的无机物种类繁多，选项，除水以外的无机物种类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳源；功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳源；NaHCONaHCO3 3，可作为自养型微

37、生物的碳源和无机盐；而可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而NaClNaCl则只能提供无机则只能提供无机盐。对于盐。对于DD选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如NHNH3 3可为硝化细菌提供能量和氮源。可为硝化细菌提供能量和氮源。答案：答案：D本讲稿第四十八页，共五十一页例例2 2下面对发酵工程中灭菌的理解下面对发酵工程中灭菌的理解不正确不正确不正确不正确的是的是A.A.防止杂菌污染防止杂菌污染 B.B.消灭杂菌消灭杂菌C.C.培养基和发酵设备都必须灭菌培养基和发酵设备都必须灭菌 D.D.灭菌必须在接种前灭菌必须在接种前答案：答案：B 解析：灭菌是

38、微生物发酵过程的一个重要环节。解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。A A说说的是灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，的是灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是整个发酵过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是A A正确正确的；的；B B是错误的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际是错误的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。C C是正确是正确的，因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的，因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌；

39、发酵所用的微生物是灭菌后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接的微生物是灭菌后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。本讲稿第四十九页，共五十一页编号编号成分成分含量含量粉状硫粉状硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gHH2 2OO100m100ml l例例3 3右表是某微生物培右表是某微生物培养基成分，请据此回答：养基成分，请据此回答：（1 1

40、）右表培养基可培养）右表培养基可培养的微生物类型的微生物类型是是 。（2 2）若不慎将过量）若不慎将过量NaClNaCl加入培养基中。加入培养基中。如不想浪费此培养基，可如不想浪费此培养基，可再加入再加入 .自养型微生物自养型微生物 含碳有机物含碳有机物 本讲稿第五十页，共五十一页（3 3）若除去成分）若除去成分，加入（，加入（CHCH2 2OO），该培养基），该培养基可用于培养可用于培养 。（4 4）表中营养成分共有）表中营养成分共有 类。类。（5 5）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行的是装前，要进行的是 。（6 6）右表中各成分重量确定的原则是）右表中各成分重量确定的原则是 。（7 7）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的成分是成分是 。固氮微生物固氮微生物 3 调整调整pHpH 依微生物的生长需要确定依微生物的生长需要确定 琼脂（或凝固剂）琼脂（或凝固剂）本讲稿第五十一页，共五十一页