乳品检验员培训包 技师.docx

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1、天津市“职业培训包”乳品检验员培训包标准包一技师（2018年1月第1版）开发单位：天津职业大学主管单位：天津市人力资源和社会保障局1-12 (1)食品中 铅的测定 第 一法石墨炉原 子吸收光谱法 (扩展模块)1-12-1掌握试样预处理技能1-12-1 了解GB 5009.12-2010食品平安国家标准:食品中铅的测定全 部内容1-12-2掌握试样消解技能1-12-2理解食品中铅的测定第一法石墨炉原子吸收光谱法的基本原理1-12-3掌握试样的测定技能1-12-3掌握原子吸收光谱仪、马弗炉、天平、干燥恒温箱、瓷用烟、压 力消解器、压力消解罐或压力溶弹、可调式电热板、可调式电炉等设备 的结构、工作原

2、理及使用和保养方法1-12-4掌握结果与分析技能1-12-4掌握结果与分析中所用到的统计学方法1-12 (2)食品中 铅的测定 第 二法火焰原子 吸收光谱法(扩 展模块)1-12-1掌握试样处理技能1-12-1 了解GB 5009.12-2010食品平安国家标准:食品中铅的测定全 部内容1-12-2掌握萃取别离技能1-12-2理解食品中铅的测定第二法 火焰原子吸收光谱法的基本原理1-12-3掌握试样的测定技能1-12-3掌握原子吸收光谱仪火焰原子化器、天平等设备的结构、工作原 理及使用和保养方法1/24掌握结果与分析技能1-12-4掌握结果与分析中所用到的统计学方法1-13 (1)食品中 总碑

3、及无机碑的 测定 第一法 氢化物原子荧光 光度法(扩展模 块)1133掌握试样消解技能1-13-1 了解GB5009.11-2014食品平安国家标准食品中总碑及无机碑 的测定全部内容1-13-2掌握标准系列制备技能1-13-2理解食品中总碑及无机碑的测定第一法氢化物原子荧光光度法 的基本原理1-13-3掌握试样的测定技能1-13-3掌握原子荧光光度计等设备的结构、工作原理及使用和保养方法1-131掌握结果与分析技能1-13-4掌握结果与分析中所用到的统计学方法1-13 (2)食品中 总碑及无机碑的 测定 第二法 银盐法(扩展模 块)1-13-1掌握试样处理技能1-13-1 了解GB5009.1

4、L2014食品平安国家标准食品中总碑及无机碑 的测定全部内容1-13-2掌握标准曲线的绘制技能1132理解食品中总碑及无机碑的测定第二法银盐法的基本原理1-13-3掌握试样的测定技能1-13-3掌握分光光度计、测碑装置等设备的结构、工作原理及使用和保 养方法1-13-4掌握结果与分析技能1-13-4掌握结果与分析中所用到的统计学方法1-14 （1）食品中 总汞及有机汞的 测定 气相色 谱法（酸提取琉 基棉法）（基础模 块）1-14-1掌握选择气相色谱参考条件技能1-14-1 了解GB/T 5009.17-2003食品中总汞及有机汞的测定全部内 容1-14-2掌握试样的测定技能1-14-2理解食

5、品中总汞及有机汞的测定第二法气相色谱法的基本原 理1-14-3掌握结果与分析技能1-14-3掌握气相色谱仪、酸度计、离心机、琉基棉管、玻璃仪器等设备 的结构、工作原理及使用和保养方法1-14-4掌握结果与分析中所用到的统计学方法2微生 物指标 检验2-1单核细胞增 生李斯特氏菌检 验（基础模块）2-1-1掌握增菌技能2-1-1 了解GB 4789.30-2016食品平安国家标准 食品微生物学检验 单 核细胞增生李斯特氏菌检验全部内容；2-1-2掌握别离与初筛技能2-1-2理解单核细胞增生李斯特氏菌检验的基本原理2-1-3掌握鉴定技能2-1-3掌握微生物培养设备等设备的结构、工作原理及使用和保养

6、方法2-1-4掌握结果与分析技能2-1-4掌握结果与分析中所用到的统计学方法基本要求职业道 德1-1职业道德基本知识1-1-1道德是调整人与人之间及个人与团体之间关系的行为规范。1-1-2社会主义职业道德基本内容：热爱本职工作，坚定为社会作贡献的信念、刻苦钻研专业知识，增强技能，提高自身素质，遵守国家法律 法规等。1-1-3职业道德的社会作用：调节职业交往中从业人员内部以及从业人员与服务对象间的关系；有助于维护和提高本行业的信誉；促进本行业 的开展；有助于提高全社会道德水平。1-1-4我国职业道德基本规范：爱岗敬业、忠于职守；遵纪守法、老实守信；和睦相处、团结协作；服务群众、奉献社会；勇于竞争

7、、不断创 新。1-2乳品检验工职业守那么：科学求实、公正公平、严守秘密；秉公执法、工作认真、程序规范；遵章守纪、忠于职守、爱岗敬业。1-3相关法律知识（1）食品卫生法；（2）产品质量法；（3）计量法；（4）标准化法。2-1实验室平安知识基础知 识基础知 识（1）实验室平安操作知识；（2）电工基础知识；（3）实验室用电常识；2-2计量基础知识（1） 法定计量单位的要领和常用量的法定计量单位；（2）测量误差和数据处理2-3乳品检验员技师基本知识（详见上表）2技师职业资格培训包培训标准 2.1乳品检验员技师资格单元要素和实作指标适用范围汇总表乳品检验员（TJB6260108）技师资格（2） . I培

8、训包培训标准能力单元要素和实作指标适用范围汇总表职业功能 （模块）工作内容 （能力单元）适用范围实作对象工作标准工具材料场所环境1理化工程 检验1-1婴幼儿食品和乳品中维生素A、D、E 的测定（基础模块）婴幼儿食品 和乳品GB 541392010食品平安国家标准 婴幼儿食品和乳品中维生素A、D、E 的测定高效液相色谱仪、旋转蒸发 器、恒温磁力搅拌器、氮吹 仪、离心机、培养箱、天平普通乳品分 析实验室1-2婴幼儿食品和乳品中维生素K1的 测定（扩展模块）婴幼儿食品 和乳品GB 5413.102010食品平安国家标准 婴幼儿食品和乳品中维生素K1的测定高效液相色谱仪、天平、分 液漏斗、旋转蒸发器、

9、恒温 空气浴振荡器、离心机、氮 吹仪普通乳品分 析实验室1-3婴幼儿食品和乳品中维生素Bl的 测定（基础模块）婴幼儿食品 和乳品GB 5413.11-2010食品平安国家标准婴幼儿食品和乳品中维生素B1的测定高效液相色谱仪、高压灭菌 锅、离心机、pH计、组织 捣碎机、天平普通乳品分 析实验室1-4婴幼儿食品和乳品中维生素B2的 测定（基础模块）婴幼儿食品 和乳品GB 5413.122010食品平安国家标准 婴幼儿食品和乳品中维生素B2的测定高效液相色谱仪、高压灭菌 锅、pH计、组织捣碎机、 天平普通乳品分 析实验室1-5婴幼儿食品和乳品中维生素B6的 测定（扩展模块）婴幼儿食品 和乳品GB 5

10、413.13-2010食品平安国家标准 婴幼儿食品和乳品中维生素B6的测定超声波振荡器、高效液相色 谱仪、天平、pH计、培养 箱普通乳品分 析实验室1-6婴幼儿食品和乳品中维生素B12的 测定（基础模块）婴幼儿食品 和乳品GB 5413.14-2010食品平安国家标准 婴幼儿食品和乳品中维生素B12的测定微生物实验室常规灭菌及 培养设备、天平、pH计、 分光光度计、涡旋混合器、 离心机、恒温培养箱、冰箱、 无菌吸管、瓶口分液器、锥 形瓶、容量瓶、单刻度移液 管、漏斗、定量滤纸、试管普通乳品分 析实验室1-7婴幼儿食品和乳品中烟酸和烟酰胺 的测定婴幼儿食品 和乳品GB 5413.15-2010食

11、品平安国家标准 婴幼儿食品和乳品中烟酸和烟酰胺的 测定高效液相色谱仪、pH计、 超声波振荡器、天平、培养 箱普通乳品分 析实验室1-8婴幼儿食品和乳品中叶酸（叶酸盐活 性）的测定（基础模块）婴幼儿食品 和乳品GB 5413.16-2010食品平安国家标准 婴幼儿食品和乳品中叶酸（叶酸盐活 性）的测定pH计、离心机、分光光度 仪、天平、生化培养箱、滴 定管、涡旋振荡器普通乳品分 析实验室1-9婴幼儿食品和乳品中泛酸的测定（行 业模块）婴幼儿食品 和乳品GB 5413.17-2010食品平安国家标准 婴幼儿食品和乳品中泛酸的测定天平、高效液相色谱仪、超 声波、pH计、培养箱普通乳品分 析实验室1-

12、10婴幼儿食品和乳品中维生素C的测 定（基础模块）婴幼儿食品 和乳品GB 5413.18-2010食品平安国家标准 婴幼儿食品和乳品中维生素C的测定荧光分光光度计、天平、烘 箱、培养箱普通乳品分 析实验室1-11婴幼儿食品和乳品中游离生物素的 测定（行业模块）婴幼儿食品 和乳品GB 5413.19-2010食品平安国家标准 婴幼儿食品和乳品中游离生物素的测 定微生物实验室常规灭菌及 培养设备、天平、pH计、 分光光度计、涡旋混合器、 离心机、恒温培养箱、冰箱、 无菌吸管、瓶口分液器、锥 形瓶、容量瓶、单刻度移液 管、漏斗、定量滤纸、试管普通乳品分 析实验室1-12 （1）食品中铅的测定 第一法

13、 石 墨炉原子吸收光谱法（扩展模块）食品GB 5009.12-2010食品平安国家标准： 食品中铅的测定原子吸收光谱仪、马弗炉、 天平、干燥恒温箱、瓷片烟、 压力消解器、压力消解罐或 压力溶弹、可调式电热板、 可调式电炉普通乳品分 析实验室1-12 （2）食品中铅的测定第二法火 焰原子吸收光谱法（扩展模块）食品GB 5009.12-2010食品平安国家标准: 食品中铅的测定原子吸收光谱仪火焰原子 化器、天平普通乳品分 析实验室1-13 （1）食品中总碑及无机碑的测定第一法氢化物原子荧光光度法（扩 展模块）食品GB5009.11-2014食品平安国家标准 食品中总碑及无机种的测定原子荧光光度计普

14、通乳品分 析实验室1-13 （2）食品中总碑及无机碑的测定 第二法银盐法（扩展模块）食品GB5009.11-2014食品平安国家标准 食品中总碑及无机碑的测定分光光度计、测碑装置普通乳品分 析实验室1-14 （1）食品中总汞及有机汞的测定 气相色谱法（酸提取琉基棉法）（基础模块）食品GB/T 5009.17-2003食品中总汞及有 机汞的测定气相色谱仪、酸度计、离心 机、琉基棉管、玻璃仪器普通乳品分 析实验室2微生物指 标检验2-1单核细胞增生李斯特氏菌检验（基 础模块）乳制品GB 4789.30-2016食品平安国家标准 食品微生物学检验单核细胞增生李斯 特氏菌检验微生物培养设备微生物实验

15、室2. 2乳品检验员技师资格能力单元要素和实作指标细目乳品检验员（TJB6260108）技师资格（2） - I培训标准乳品检验员能力单元要素和实作指标细目职业功能 （模块）工作内容 （能力单元）能力单元要素（阐述能力单元基本学习 目标包括职业知识、职业 技能、职业道德）实作指标（确定能力要素的技术水平）1理化工程检验1-1婴幼儿食品和 乳品中维生素A、D、 E的测定（基础模 块）1-1-1试样的处理1-1-1-I含淀粉的试样：称取混合均匀的固体试样约5 g或液体试样约50 g （精确到0.1 mg） 于250 mL三角瓶中,加入1g a-淀粉酶（4.1）,固体试样需用约50 mL45 50 的

16、水 使其溶解，混合均匀后充氮，盖上瓶塞，置于6（） C2 培养箱（5.6）内培养30 min。1-1-1-2不含淀粉的试样：称取混合均匀的固体试样约10 g或液体试样约50 g （精确至0.1 mg）于250mL三角瓶中，固体试样需用约50 mL 45 c50 水使其溶解，混合均匀。1-1-2待测液的制备1-1-2-1皂化：于上述处理的试样溶液中加入约100 mL维生素C的乙醇溶液（4.10）,充 分混匀后加25 mL氢氧化钾水溶液（4.5）混匀，放入磁力搅拌棒，充氮排出空气，盖上 胶塞。1000 mL的烧杯中加入约300 mL的水，将烧杯放在恒温磁力搅拌器（5.3）上，当 水温控制在53 2

17、 时，将三角瓶放入烧杯中，磁力搅拌皂化约45 min后，取出立刻 冷却到室温。1-1-2-2提取：用少量的水将皂化液全部转入500 mL分液漏斗中，加入100 mL石油酸 （4.6）,轻轻摇动，排气后盖好瓶塞，室温下振荡约10 min后静置分层，将水相转入另一 500 mL分液漏斗中，按上述方法进行第二次萃取。合并酸液，用水洗至近中性。酸液通 过无水硫酸钠过滤脱水，滤液收入500 mL圆底烧瓶中，于旋转蒸发器上在40 2 充 氮条件下蒸至近千（绝不允许蒸干）。残渣用石油酸转移至10 mL容量瓶中，定容。1-1-2-3从上述容量瓶中准确移取2.0 mL石油酸溶液放入试管A中，再准确移取7.0 m

18、L石油酸溶液放入另一试管B中，将试管置于40 2 的氮吹仪（5.4）中，将试管A和B 中的石油酸吹干。向试管A中力口 5.0 mL甲醇（4.7）,振荡溶解残渣。向试管B中力口 2.0 mL 正己烷（4.8）,振荡溶解残渣。再将试管A和试管B以不低于5000转/分钟的速度离心 10 min,取出静置至室温后待测。A管用来测定维生素A、E, B管用来测定维生素D。1-1-3试样的测定1-1-3-1维生素A、E标准曲线的绘制：分别准确吸取维生素A标准储藏液（4.11.1） 0.50 mL、1.00 mL、1.50 mL、2.00 mL、2.50 mL于50 mL棕色容量瓶中，用乙醇定容至刻度 混匀。

19、此标准系列工作液浓度分别为LOO |ig/mL、2.00 gg/mLx 3.00 |ig/mL、4.00 |ig/mL、 5.00 |g/mLo1-1-3-2 分别准确吸取维生素 E 标准储藏液（4.11.2） 1.00 mL、2.00 mL、3.00 mL、4.00 mL、 5.00 mL于50 mL棕色容量瓶中，用乙醇定容至刻度混匀。此标准系列工作液浓度分别为 10.0 jig/mL、20.0 pg/mL 30.0 pg/mL 40.0 pg/mL 50.0 jig/mLo 分别将维生素 A、E 标 准工作液注入液相色谱仪中，得到峰高（或峰面积）。1-1-3-3以峰高（或峰面积）为纵坐标，

20、以维生素A、E标准工作液浓度为横坐标分别绘制维 生素A、E标准曲线。1-1-3-4维生素A、E试样的测定：将试液注入液相色谱仪中，得到峰高（或峰面积），根据 各自标准曲线得到待测溶液中维生素A、E的浓度。1-1-3-5维生素D待测液的净化：取约0.5 mL维生素D标准储藏液于10 mL具塞试管中， 在4（） 2 的氮吹仪上吹干。1-1-3-6标准曲线的绘制：分别准确吸取维生素D2 （或D3）标准储藏液、4.11.4） 0.20 mL、0.40 mL、0.60 mL、0.80 mL、1.00 mL于100棕色容量瓶中，用乙醇定容至刻 度混匀。此标准系列工作液浓度分别为0.200 pg/mL、0.

21、400 卜唱/mL、0.600 pg/mL、0.800 |xg/mL、1.000 pg/mLo1-1-3-7分别将维生素D2 （或D3）标准工作液注入液相色谱仪中，得到峰高（或峰面积）， 参见附录Bo以峰高（或峰面积）为纵坐标，以维生素D2 （或D3）标准工作液浓度为横坐 标分别绘制标准曲线。1-1-3-8维生素D试样的测定吸取维生素D测定液100 pL注入液相色谱仪中，得到峰高（或峰面积），根据标准曲线得到维生素D测定液中维生素D2 （或D3）的浓度。维生素D回 收率测定结果记为回收率校正因子f,代入测定结果计算公式（2）,对维生素D含量测定 结果进行校正。1-1-4结果与分析M-4-1在重

22、复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过1.0/1-2婴幼儿食品和 乳品中维生素K1 的测定（扩展模块）1-2-1试样的处理I-2-1-1含淀粉的试样：称取混合均匀的固体试样约2.5 g或液体试样约10 g （精确到0.1 mg）于三角瓶中，加入0.5 g淀粉酶（4.12）,用30 mL温水溶解。不含淀粉的试样：称取混合均匀的固体试样约2.5 g或液体试样约10g （精确到0.1 mg）于三角瓶中，用30 mL温水溶解。1-2-2待测液的制备1-2-1-1向上述处理过的试样溶液中加入1 g脂肪筋（4.13）,于37 5 恒温空气浴振 荡器中振荡过夜，使其充分酶解。取出酶解好的试样，加

23、入2 mL氢氧化钠溶液（4.1）, 用50 mL乙醇（4.2）将溶液转入25（） mL的分液漏斗中，充分混匀（必要时加少量饱和氯 化钠溶液（4.3）。1-2-1-2力口入5（） mL正己烷（4.4）。充分振摇2 min,静置分层。放出下层水相于另一个250 mL分液漏斗中，留下有机相。1-2-1-3向水相中再次加入50 mL正己烷再次萃取。合并有机相。用适量蒸储水洗有机相 两次。将有机相通过无水硫酸钠（4.5）脱水过滤到一个500 mL的烧瓶中，在旋转蒸发器 上于40 2 下蒸发至近千。1-2-1-4用正己烷（4.4）转移残留物到一个10 mL试管中，置氮吹仪上于40 2 下 吹干，准确加入1

24、 mL正己烷（4.4）,充分振荡溶解残留物。将试管放入冰箱中在（）C以 下冷冻1 h备用。1-2-3试样的测定123-1色谱参考条件：色谱柱：C18色谱柱，15（）mmx4.6mm, 5 pm,或具同等性能的 色谱柱；锌还原柱：4.6 mm x50 mm （参见附录B）；检测波长：激发波长为243 nm，发 射波长为430nm；流动相：甲醇（4.6） 900 mL,二氯甲烷（4.7） 100mL,冰醋酸（4.8） 0.3 mL,氯化锌（4.9） 1.5 g,无水乙酸钠（4.10） 0.5 g,溶解后用0.45 pim滤膜过滤；流 速：1 mL/min；进样量：10 pLo123-2维生素K1标

25、准曲线绘制:分别准确吸取标准中间液（4.15.2） 0.0 mL, 0.5 mL, i.O mL, 1.5 mL, 2.0 mL, 2.5 mL加正己烷定容至25 mL,此标准系列工作液维生素KI 浓度分别为 0.00 jig/mL, 0.40 jig/mL, 0.80 jig/mL, 1.20 pg/mL, 1.60 |ig/mL, 2.00 pg/mLo 将系列标准维生素KI工作液分别注入高效液相色谱仪中，测定相应的峰面积或峰高，以 峰面积或峰高为纵坐标，以标准测定液浓度为横坐标绘制标准曲线。1-2-3-3测定液的测定将制备好的测定液（6.2）在暗处放至室温,于离心机中在3000转/ 分钟

26、下离心5 min,吸取上清液注入高效液相色谱仪中，测定相应的峰面积或峰高（标准 色谱图参见附录C）。1-2-3-4从标准曲线上查得试样溶液中维生素K1的浓度或通过回归方程计算出试样溶液 中维生素K1的浓度（pg/mL）。l2d结果与分析1-2-4-1在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过1.0 T1-3婴幼儿食品和 乳品中维生素Bl 的测定（基础模块）1-3-1试样的处理1-3-1-1试液提取：称取5g10g （精确至（）.（）1 g）试样（如有必要，将试样放入捣碎机中 捣碎；试样中含维生素B1 5 pg以上）于100 mL三角瓶中，加60 mLO.1 mol/L盐酸（4.12

27、）, 充分摇匀，用棉花塞和牛皮纸封口，放入高压灭菌锅内，在121c下保持30 min,待冷却 至40 以下后取出，轻摇数次；用2.0mol/L乙酸钠溶液（4.15）调pH值至4.0左右， 加入2.0 mL （可根据酶活力不同适当调整用量）混合酶液（4.16）,摇匀后，置于37 C的 培养箱中过夜；将酶解液转移至100 mL容量瓶中，用水定容至刻度，滤纸过滤，取滤液 备用。1-3-1-2试液衍生化：取上述滤液10.00 mL于25 mL具塞比色管中，加入5 mL碱性铁 氟化钾（4.11）,充分混匀后，加10.00 mL正丁醇（或异丁醇）（4.1）,强烈振荡后静置约 10 min,充分分层，吸取正

28、丁醇（或异丁醇）相（上层）于4000转/分钟6000转/分钟 离心5 min,取上清液经有机微孔滤膜过滤（5.6）,供进样用。另取10.00 mL标准工作液 （4.17.3）,与试液同步进行衍生化。1-3-2试样的测定1-3-2-1色谱参考条件：色谱柱：C18反相色谱柱(粒径5 pm, 250 mm x4.6 mm)或相当 者。流动相：0.05 mol/L 乙酸钠溶液(4.14)一甲醇(4.7) =65+35。流速:1.00 mL/mino 检测波长：激发波长375 nm,发射波长435 nm。进样量：20卜1。1-3-2-2标准曲线绘制：将维生素B1标准系列工作液(4.17.3)衍生物依次按

29、上述推荐色 谱条件上机测定，记录色谱峰面积，色谱图参见附录A。以峰面积为纵坐标，浓度为横坐 标，绘制标准曲线。1-3-2-3试液测定：将试液衍生物按上述推荐色谱条件进样测定，从标准曲线中查得试液相 应的浓度。133结果与分析1-3-3-1在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过1.0 T1-4婴幼儿食品和 乳品中维生素B2 的测定(基础模块)1-4-1试样的处理1-4-1-1称取5 g10g (精确至0.01g)试样(如有必要，将试样放入捣碎机中捣碎；试样 中含维生素B2 5 11g以上)于l()()mL三角瓶中，加60 mL().1 mol/L盐酸(4.7),充分摇匀， 用棉花

30、塞和牛皮纸封口，放入高压灭菌锅内，在121 下保持3() min,待冷却至4() 以 下后取出，轻摇数次；用2.0 mol/L乙酸钠溶液(4.10)调pH值至4.0左右，加入2.0 mL 混合酶溶液(4.11),摇匀后，置于37培养箱中过夜。1-4-L2将酶解液转移至100 mL容量瓶中，用水定容至刻度，用定量滤纸过滤，取流液再 经0.45四 滤膜(5.5)过滤，取滤液备用。1-4-2试样的测定1-4-2-1参考色谱条件：色谱柱：C18反相色谱柱(粒径5 pm, 250 mm x4.6 mm)或同等 性能的色谱柱。流动相：0.05 mol/L乙酸钠溶液(4.9)一甲醇(4.4)=65 + 35

31、。流速：1.0 mL/mino检测波长：激发波长462 nm,发射波长522 nm。进样量：20 pLo1-4-2-2标准曲线绘制：将维生素B2标准系列工作液(4.12.3)依次进行色谱测定(其标 准样品色谱图参见附录A中图A.1),记录色谱峰面积。以峰面积为纵坐标，浓度为横坐 标，绘制标准曲线。1-4-2-3试液测定：将试液进行色谱测定，从标准曲线中查得试液相应的浓度。除不加试样外，按上述操作步骤进行。天津市“职业培训包”乳品检验员培训包标准包一技师（2018年1月第1版）开发单位：天津市职业大学合作开发单位：天津香飘飘食品工业 主管单位：天津市人力资源和社会保障局1_43结果与分析1-4-

32、3-1在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过1.0 T1-5婴幼儿食品和 乳品中维生素B6 的测定(扩展模块)1-5-1试样预处理1-5-1-1含淀粉的试样：称取混合均匀固体试样约5.() g (精确至().()()01 g),加入约25 mL 45 C50 的水，或称取混合均匀液体试样约20.0 g (精确至0.0001 g)于150 mL锥形 瓶中。加入约0.5 g淀粉酶(4.1),混匀后向锥形瓶中充氮，盖上瓶塞，置50 C60 c 培养箱内约30 min。取出冷却至室温。1-5-1-2不含淀粉的试样:称取混合均匀固体试样约5.0 g (精确至0.0001 g),加入约25

33、 mL 45 C50 的水，或称取混合均匀液体试样约20.0 g (精确至0.0001 g)于150 mL锥形 瓶中。混匀并充分溶解，静置5 min10 min,冷却至室温。1-5-2待测液的制备1-5-2-1用盐酸溶液(4.6)调节试样溶液的pH值至1.7 ().1,放置约1 min。再用氢氧化 钠溶液(4.7)调节试样溶液的pH值至4.50.1。1-5.2-2将试样溶液转移至50 mL容量瓶中，用水冲洗锥形瓶。洗液合并于50 mL容量瓶 中，用水定容至50 mL。1-5-2-3把上述容量瓶放入超声波振荡器中，超声振荡约10 mine1-5-2-4另取50 mL三角瓶，上面放入三角漏斗和滤纸

34、，把超声波振荡的试样溶液倒入其 中，自然过滤。滤液再经0.45 pm微孔滤膜加压过滤，用试管收集，即为试样待测液。1-5-3选择色谱条件1-5-3-1色谱柱：C18柱(粒径5 pm, 15() mm x4.6 mm)或同等性能的色谱柱。1S3-2流动相:甲醇(4.4) 50 mL,辛烷磺酸钠(4.2) 2.0 g,三乙胺(4.5) 2.5 mL,用 水溶解并定容到1000 mL后，用冰乙酸(4.3)调pH至3.0 0.1,再经0.45国力微孔滤膜 加压过滤。1-5-3-3 流速：1.0 mL/min。1-5-3-4检测波长：激发波长293 nm,发射波长395 nm。1-5-3-5进样量：10

35、吐。1-5-4定量分析1-5-4-1标准曲线绘制：将维生素B6混合标准系列测定液(4.8.3)依次进行色谱测定(其 标准样品色谱图参见附录A中图A.1)。记录各组分的色谱峰面积或峰高，以峰面积或峰 高为纵坐标，以标准测定液的浓度为横坐标，绘制标准曲线。1-542试样测定：将试样待测液（6.2.4）进行色谱测定。记录各组分色谱峰面积或峰高， 根据标准曲线计算出试样待测液中维生素B6各组分的浓度。1-5-5结果与分析1-5-5-1在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过1.0 T1-6婴幼儿食品和 乳品中维生素B12 的测定（基础模块）1-6-1测试菌液的制备1-6-1-1将莱士曼氏

36、乳酸杆菌（ATCC7830）的冻干菌株（4.1）活化后，接种到乳酸杆菌琼 脂培养基（4.3.1）上，36 1 培养24h。再转种2代3代来增强活力。置2 5 冰箱保存备用。每15 d转种一次。1-6-1-2将活化后的菌株接种到乳酸杆菌肉汤培养基（4.3.2）中，36 1 C培养18h 24 h,以2000转/分钟离心2 min-3 min,弃去上清液，加入10 mL生理盐水（4.4）,混 匀，再离心201由3111皿，弃去上清液，再加入10mL生理盐水（4.4）,混匀。如前离心 操作，弃去上清液。再加10mL生理盐水（4.4）,混匀。吸适量该菌悬液于10mL生理盐 水（4.4）中，混匀制成测试

37、菌液。161-3用分光光度计（5.3）,以生理盐水（4.4）做空白，于550 nm波长下测测试菌液（6.1.2） 的透光率，使其透光率在60 %80 %之间。1-6-2试样的处理162-1称取无水磷酸氢二钠（4.6） 1.3 g,无水偏重亚硫酸钠（4.7） 1.（） g,柠檬酸（含一 个结晶水）（4.8） 1.2 g,用100 mL水溶解。1-622称一定量的样品（精确到0.0001 g）,含维生素B12约50ng100ng,用10mL的 上述溶液（6.2.1）混合后，再加150 mL水，于121 水解10 min,冷却后调pH至4.5 土 0.2,再用水定容至250 mL,过滤。移取滤液5

38、mL,加入水20 mL30 mL,调pH至6.8 0.2,用水定容至100 mLo最终溶液中维生素B12的质量浓度约在0.01 ng/mL0.02 ng/mL,偏重亚硫酸钠的质量浓度小于0.03 mg/mLo1-6-2-3标准曲线的制作：按表1顺序加入水、标准曲线工作液（4.9.4）和维生素B12测 定用培养基（4.3.3）于培养管中，一式三份。1-6-2-4待测液的制作：按表2顺序加水、样品溶液（6.2.2）和维生素B12测定用培养基（4.3.3）于培养管内，一式三份1-6-2-5灭菌：将6.3和6.4中所有的试管盖上试管帽，121 灭菌5 min （商品培养基按 标签说明进行灭菌）。1-6

39、-2-6接种:将上述试管迅速冷却至30 以下。用滴管或移液器向上述试管中各滴加1滴 （约50rL）测试菌液（6.1.2）（其中标准曲线管中空白S1除外）。16-27培养：将试管放入恒温培养箱内，36 c 土 1 C培养19h20h。1-6-3试样的测定1-6-3-1以接种空白管做对照，测定最高浓度标准曲线试管的透光率，2h后重新测定。两 次结果透光率差值假设小于2 %,那么取出全部检验管测其透光率。1-6-3-2用未接种空白试管（S1）作空白，将分光光度计透光率调到100 % （或吸光度为0）, 读出接种空白试管（S2）的读数。再以接种空白试管（S2）为空白，调节透光率为100% （或吸光度为

40、0）,依次读出其他每支试管的透光率（或吸光度）。1-6-3-3用涡旋混合济（5.4）充分混合每一支试管（也可以加一滴消泡剂）后，立即将培 养液移入比色皿内进行测定，波长为55（） nm,待读数稳定30 s后，读出透光率，每支试 管稳定时间要相同。以维生素B12标准品的含量为横坐标，透光率为纵坐标作标准曲线。 1-6-3-4根据待测液的透光率，从标准曲线中查得该待测液中维生素B12的浓度，再根据 稀释因子和称样量计算出试样中维生素B12的含量。透光率超出标准曲线管S3S 10范 围的试样管要舍去。1-6-3-5对每个编号的待测液的试管，用每支试管的透光率计算每亳升该编号待测液维生素 B12的浓度

41、，并计算该编号待测液的维生素B12浓度平均值，每支试管测得的该浓度不 得超过该平均值的15 %,超过者要舍去。如果符合该要求的管数少于所有的四个编号的 待测液的总管数的2/3,用于计算试样含量的数据是不充分的，需要重新检验。如果符合要 求的管数超过原来管数的2/3,重新计算每一编号的有效试样管中每毫升测定液中维生素 B12含量的平均值，以此平均值计算全部编号试样管的总平均值为Cxo用于计算试样中 的维生素B12含量。1-6-4结果与分析1-6-4-1在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过1.0 T1-7婴幼儿食品和 乳品中烟酸和烟酰 胺的测定1-7-1试样的预处理1-7-1-1

42、含淀粉的试样:称取混合均匀固体试样约5.0 g （精确到0.0001 g）加入约25 mL 45 50 的水,或称取混合均匀液体试样约20.0 g （精确到0.0001 g）于150 mL锥形 瓶中，再加入约（）.5 g淀粉酶（4.1）,摇匀后向锥形瓶中充氮，盖上瓶塞，置于5（） C6（） C 的培养箱内培养约30 min,取出冷却至室温。1-7-1-2不含淀粉的试样：称取混合均匀固体试样约5.0 g （精确到0.0001 g）加入约25 mL 45 C50 的水，或称取混合均匀液体试样约20.0 g （精确到0.0001 g）于150 mL锥形 瓶中，振摇，静置5 min10 min,充分溶

43、解，并冷却至室温。1-7-1-3提取：将上述锥形瓶置于超声波振荡器中振荡约10 mino1-7-1-4沉淀及定容：待试样溶液降至室温后，用盐酸（4.4）调节试样溶液的pH值至1.7 0.1,放置约2 min后，再用氢氧化钠溶液（4.5）调节试样溶液的pH值至4.5 0.1 o将 试样溶液转至50 mL容量瓶中，用水反复冲洗锥形瓶，洗液合并于50 mL容量瓶中，用 水定容至刻度，混匀后经滤纸过滤，滤液再经0.45 pm微孔滤膜加压过滤，用试管收集， 即为试样待测液。1-7-2选择色谱条件1-7-2-1参考色谱条件：色谱柱：C18柱（粒径5 pm, 150 mm x4.6 mm）或具有同等性能 的

44、色谱柱。流动相：甲醇（4.7） 70 mL,异丙醇（4.8） 20 mL,庚烷磺酸钠（4.9） 1g,用 910 mL水溶解并混匀后，用高氯酸（4.6）调pH至2.1 土 0.1,经0.45 |im膜过滤。流速： 1.0 mL/min0检测波长：261nm。柱温：25进样量：10吐。1-7-3定量分析1-7-3-1标准曲线绘制：将烟酸及烟酰胺混合标准系列测定液（4.10.3）依次进行色谱测定 （其标准样品色谱图参见附录A中图A.1.1）。记录各组分的色谱峰面积或峰高，以峰面积 或峰高为纵坐标，以标准测定液的浓度为横坐标，绘制标准曲线。1-13-2试样测定：将试样待测液（6.1.4）进行色谱测定

45、。记录各组分色谱峰面积或峰高， 根据标准曲线计算出试样待测液中烟酸及烟酰胺各组分的浓度。1.7-4结果与分析1-7-4-1在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过1.0 T1-8婴幼儿食品和乳品中叶酸（叶酸1-8婴幼儿食品和乳品中叶酸（叶酸1-8-1测试菌液的制备1-8-1-1干酪乳杆菌（L4actobacillus casei） ATCC 7469冻干菌粉转入乳酸杆菌肉汤培养基 （4.9.2）中，36c土1 培养24 h后，转接至乳酸杆菌琼脂培养基（4.9.1）试管中，再盐活性)的测定(基 础模块)36 1 C培养24 ho培养好的乳酸杆菌琼脂培养基(4.9.1)试管的培养物作

46、为贮备菌 种。1-8-1-2从贮备菌种培养基上分别转接到三个乳酸杆菌琼脂培养基(4.9.1)试管中，放入培 养箱中36 1培养24h。每月转接一次，作为月接种管贮于冰箱中。每月定期从月接 种管中重新接种3个转接管保存新菌株。1-8-1-3从月接种的培养管中的一支再接种一支乳酸杆菌琼脂培养基(4.9.1)试管，36 C 士1 C培养24h,作为日接种管每日测定用。1-8-1-4从日接种管中接种一管乳酸杆菌肉汤培养基(4.9.2), 36 c土1 C培养24 h。在无 菌条件下离心该培养液10 min (2000转/分钟)，弃去上清液。用10 mL生理盐水(4.2) 振荡洗涤菌体,离心1() mi

47、n (20(X)转/分钟)，弃去上清液,用10 mL生理盐水(4.2)振 荡清洗。如前离心操作，弃去上清液。再加10 mL生理盐水(4.2),混匀。吸1 mL该菌 悬液于10 mL生理盐水(4.2)中，混匀制成测试菌液。1-8-1-5以生理盐水(4.2)做对照，用分光光度计,于550 nm波长下,测测试菌液(6.1.4) 的光密度值，此值应在60 %80 %之间。1-8-2试样的制备1-8-2-1乳制品：称取2g (精确至0.0001 g)试样(约含叶酸5陷)于100 mL烧杯中，用 25 mL30 mL水复原样品，转入100 mL容量瓶中，用水定容至刻度，溶液中叶酸的质 量浓度大约为0.05 |ig/mLo吸取1 mL该样液和1 mL鸡胰腺(4.1)于一个180 mmx 15 mm 的带螺旋盖的试管中，充分混合。加18 mL含抗坏血酸的