分光光度测量方法PPT讲稿.ppt

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1、分光光度测量方法第1页，共15页，编辑于2022年，星期五一、普通分光光度法一、普通分光光度法1.1.单组分的测定单组分的测定 通常采用通常采用 A-C 标准曲线法定量测定。标准曲线法定量测定。2.2.多组分的同时测定多组分的同时测定 若各组分的吸收曲线互不重叠，则可在各自若各组分的吸收曲线互不重叠，则可在各自最大吸收波长处分别进行测定。这本质上与单组最大吸收波长处分别进行测定。这本质上与单组分测定没有区别。分测定没有区别。若各组分的吸收曲线互有重叠，则可根若各组分的吸收曲线互有重叠，则可根据吸光度的加合性求解联立方程组得出各组据吸光度的加合性求解联立方程组得出各组分的含量。分的含量。A1=a

2、1bca b1bcb A2=a2bca b2bcb 第2页，共15页，编辑于2022年，星期五二、示差分光光度法（示差法）二、示差分光光度法（示差法）普通分光光度法一般只适于测定微量组分，当待测组分含量较高时，普通分光光度法一般只适于测定微量组分，当待测组分含量较高时，将产生较大的误差。需采用示差法。即提高入射光强度，并采用浓度稍将产生较大的误差。需采用示差法。即提高入射光强度，并采用浓度稍低于待测溶液浓度的标准溶液作参比溶液。低于待测溶液浓度的标准溶液作参比溶液。设：待测溶液浓度为设：待测溶液浓度为c cx x，标准溶液浓度为，标准溶液浓度为c cs s(c cs s c cx x)。则：。

3、则：Ax=b cx As=b cs x s=b(cx cs）=bc 测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准溶液的吸光度之差测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准溶液的吸光度之差。第3页，共15页，编辑于2022年，星期五示差分光光度法（示差法）示差分光光度法（示差法）AAx As=b(cx cs）=bc 测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准溶液的吸光测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准溶液的吸光度之差度之差A。示差法测得的吸光度与示差法测得的吸光度与c呈直线关系。由标准曲线上查得相呈直线关系。由标准曲线上查得相应的应的c值，则待测溶液浓度值，则待测溶液浓度cx：cx=cs+c 第4

4、页，共15页，编辑于2022年，星期五示差法标尺扩展原理：示差法标尺扩展原理：普通法：普通法：cs的的T=10%；cx的的T=5%示差法：示差法：cs 做参比，调做参比，调T=100%则：则：cx的的T=50%；标尺扩展；标尺扩展10倍倍第5页，共15页，编辑于2022年，星期五三、双波长分光光度法三、双波长分光光度法 不需空白溶液作参比；但需要两个单色器获得两束单色光不需空白溶液作参比；但需要两个单色器获得两束单色光(1 1和和2 2)；以参比波长；以参比波长1 1处的吸光度处的吸光度A A11作为参比，来消除干扰。作为参比，来消除干扰。在分析浑浊或背景吸收较大的复杂试样时显示出很大的优越性

5、。灵在分析浑浊或背景吸收较大的复杂试样时显示出很大的优越性。灵敏度、选择性、测量精密度等方面都比单波长法有所提高。敏度、选择性、测量精密度等方面都比单波长法有所提高。A A A22 A A11 (22 11)b cb c 两波长处测得的吸光度差值两波长处测得的吸光度差值A与待测组分浓度成正比。与待测组分浓度成正比。11和和22分别表示待测组分在分别表示待测组分在1 1和和2 2处的摩尔吸光系数。处的摩尔吸光系数。第6页，共15页，编辑于2022年，星期五关键问题关键问题:测量波长测量波长2 2和参比波长和参比波长1 1的选择与组合的选择与组合 以两组分以两组分x x和和y y的双波长法测定为例

6、：的双波长法测定为例：设：设：x x为待测组分，为待测组分，y y为干扰组分，二者的吸光度差分别为为干扰组分，二者的吸光度差分别为:Ax和和Ay，则该体系的总吸光度差，则该体系的总吸光度差Ax+y为：为：Ax+y=A x+A y 如何选择波长如何选择波长1、2有一定的要求。有一定的要求。第7页，共15页，编辑于2022年，星期五选择波长组合选择波长组合1 1 、2 2的基本要求是：的基本要求是：选定的波长选定的波长1 1和和2 2处干扰组分应具有相同吸光度，处干扰组分应具有相同吸光度，即：即：Ay y=A y y22 A y y11=0=0故：故：Ax+y=x+y=A x=(x=(x x22x

7、 x11)bcbcx x此时：测得的吸光度差此时：测得的吸光度差A只与待测组分只与待测组分x x的浓度呈线性关系，而的浓度呈线性关系，而与干扰组分与干扰组分y y无关。若无关。若x x为干扰组分，则也可用同样的方法测定为干扰组分，则也可用同样的方法测定y y组组分。分。可采用作图法选择符合可采用作图法选择符合上述两个条件的波长组合。上述两个条件的波长组合。在选定的两个波长在选定的两个波长1 1和和2 2处待测组分的吸光度应具有足够大处待测组分的吸光度应具有足够大的差值。的差值。第8页，共15页，编辑于2022年，星期五四、导数分光光度法四、导数分光光度法 导数分光光度法在多组分同时测定、浑浊样

8、品分析、消除导数分光光度法在多组分同时测定、浑浊样品分析、消除背景干扰、加强光谱的精细结构以及复杂光谱的辨析等方面，背景干扰、加强光谱的精细结构以及复杂光谱的辨析等方面，显示了很大的优越性。显示了很大的优越性。利用吸光度利用吸光度(或透光度或透光度)对波长的导数曲线来进行分析：对波长的导数曲线来进行分析：0 0 e e-bcbc假定入射光强度假定入射光强度0 0 在整个波长范围内保持恒定：在整个波长范围内保持恒定：d dI I 0 0/d/d0 0则则：d dI I/d/d0 0 bcbc e e-bc-bc d d/d/d 0 0 bcbc d d/d/d 第9页，共15页，编辑于2022年

9、，星期五导数分光光度法导数分光光度法 d dI I/d/d 0 0 bcbc d d/d/d 一阶导数信号与试样浓度呈线一阶导数信号与试样浓度呈线性关系；性关系；测定灵敏度依赖于摩尔吸光系数测定灵敏度依赖于摩尔吸光系数对波长的变化率对波长的变化率d d/d/d。吸收曲线的。吸收曲线的拐点处拐点处d d/d/d最大，故其灵敏度最最大，故其灵敏度最高高(见图）。见图）。同理可以导出其二阶和三阶导数光同理可以导出其二阶和三阶导数光谱（略）谱（略）第10页，共15页，编辑于2022年，星期五请选择内容：请选择内容：第一节第一节 基本原理基本原理第二节第二节 紫外紫外-可见分光光度计可见分光光度计第三节

10、第三节 显色与测量条件的选择显色与测量条件的选择第四节第四节 分光光度测定方法分光光度测定方法第五节第五节 有机合物紫外光谱解析有机合物紫外光谱解析结束结束第11页，共15页，编辑于2022年，星期五紫外可见分光光度法的特点：紫外可见分光光度法的特点：仪器设备和操作条件比较简单，费用较少分析速度较快。灵敏度较高最低检出浓度可达10-6g.mL-1。有较好的选择性一般可在多组分共存的体系中，对某一种物质进行测定。精密度和准确度较高。现在新型仪器测定，相对误差可达1%2%之内。用途广泛。医药、化工、冶金、环保等。第12页，共15页，编辑于2022年，星期五紫外可见分光光度法的原理：紫外可见分光光度

11、法的原理：定性分析主要用：吸收光谱，定性分析主要用：吸收光谱，maxmax和和 maxmax。定量用：定量用：Lambert-Beers PrincipleLambert-Beers Principle。对象：含有双键的化合物。对象：含有双键的化合物。主要是主要是-跃迁和跃迁和n-n-跃迁。跃迁。第13页，共15页，编辑于2022年，星期五主要由：光源、单色器、比色池、检测器四部分组成。在实验前要进行波长校正及比色皿选择（T=98%101%）紫外可见分光光度计的主要结构组成：紫外可见分光光度计的主要结构组成：第14页，共15页，编辑于2022年，星期五紫外可见分光光度法的主要用途：紫外可见分光光度法的主要用途：主要对含有双键或三键的有机物主要对含有双键或三键的有机物进行定性和定量分析。进行定性和定量分析。也可利用显色剂对金属离子进行测定也可利用显色剂对金属离子进行测定分析，或对有色无机物分析分析，或对有色无机物分析。以定量分析为主。以定量分析为主。第15页，共15页，编辑于2022年，星期五