《微生物学检验》案例解析.docx

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1、微生物学检验案例解析1.某实验室工作人员在使用生物安全柜时，将玻璃视窗升至约40cm高，为了取物方便，该工作人员将物品集中摆放柜内的前面，且挡住了空气格栅。操作过程中，有多次从外取物现象。操作完毕后，将物品从柜内取出，降下玻璃视窗，随即关闭电源。请你分析一下，该工作人员是否正确使用生物安全柜？如认为他操作不正确，请指出问题所在。分析提示：该工作人员未正确使用生物安全柜。应从以下几方面改正：（1）玻璃视窗开口高度不应高于20cm。（2）生物安全柜内放置的物品应按照从清洁区到污染区的方向进行，而且要尽量放置在工作台后部的位置，注意柜内摆放的物品不要阻挡柜内的空气格栅。（3）操作前应将工作所需物品放

2、入柜中，避免双臂在操作中频繁横向穿过气慕而破坏气流。（4）在工作完成后应至少让生物安全柜继续工作5分钟来完成“净化”的过程。2. 李同学在使用油镜观察枯草杆菌的形态时，眼睛一直注视目镜，并通过转动粗螺旋使油镜头从载物台上方约1cm处下降至香柏油面，再调节细螺旋直至物像清晰呈现。观察结束后，他取下玻片，将镜头转成“八”字形，套上镜罩，将显微镜置于镜箱内存放。（1）请你对李同学油镜操作正确性进行判断，并说明理由。 （2）油镜使用时为什么需加香柏油？分析提示：（1）操作不规范。应从侧面观察油镜，并慢慢旋动粗螺旋使油镜下降，直至油镜镜头刚好浸于香柏油中；油镜使用完后，应用乙醚擦拭油镜头。（2） 略。3

3、. 小王在对大肠埃希菌进行革兰染色后，置于油镜下观察，视野中菌体致密、分布不均，还有很多菌体重叠在一起，无法很清楚的观察到菌体的形态，且大多数菌体呈红色，有少部分呈紫色。试分析导致该实验结果出现的原因。分析提示：（1）制片太厚，涂布不均，导致细菌紧密，分布不均匀；（2）染色过程中，未摇匀脱色剂，是脱色剂相对集中某部位作用，脱色时间也没有控制好。4.小李同学在实验课上进行了细菌标本的划线接种，经培养后发现平板中划线上及划线之外都有菌落生长。（1）划线外生长的菌落是目的菌吗？（2）请分析出现此现象的原因。分析提示：（1）划线之外生长的菌落通常是污染菌落；（2）出现该污染菌落的原因主要有：无菌操作不

4、规范、培养基灭菌不彻底等。 5. 患者刘某，男，33岁，入院后经气管插管手术48h后出现发热、咳嗽、咯痰，X线检查显示有较新炎症病灶，初步判断为肺部感染。取病人痰液标本送检验科微生物室检验。结合已掌握的细菌检验知识，你认为可从哪些方面进行标本的细菌学检查？分析提示：可进行标本涂片染色镜检，分离培养病原菌并通过生化试验等方法进行鉴定。6. 将A菌接种于KIA培养基，35恒温培养18小时后，培养基底层出现裂隙，变黄色，并有少许黑色沉淀；斜面层变红色。试分析KIA培养基中包括了哪些生化反应？根据A菌在培养基中的现象，分析其生化反应结果。分析提示：该菌在KIA培养基中的反应显示其不分解乳糖、分解葡萄糖

5、产酸产气、可产H2S，结果报告为KA。7.某细菌室工作人员在做药物敏感试验的纸片扩散法时，发现自己配制的MH平板厚度明显超过4mm。请分析，用这样药敏平板做试验，对结果会产生什么影响？用什么方法可以进行质量控制？分析提示：MH平板厚度明显超过4mm，细菌长势过旺，使药敏纸片周围抑菌圈缩小，导致药敏结果误差，如原本应该是敏感(S)的结果可能变成中介（I）或耐药（R），原本是中介（I）的结果变成耐药（R）。要控制这些影响，要以质控菌株进行质量控制，观察质控菌株药物周围的抑菌圈直径是否在规定范围之中。8.将一脓汁标本接种于血琼脂平板，经35培养1824小时，平板上出现中等大小、表面光滑、凸起，边缘整

6、齐、湿润不透明的菌落，在菌落周围有宽而大透亮的溶血环。取菌落少许进行革兰染色，镜下观察为球菌、紫色、呈葡萄串状排列。将新鲜配制的3%H2O2滴加在血琼脂平板的菌落上，进行触酶试验，即刻出现大量的气泡。从菌落特征及镜检初步可报告什么细菌？并判断上述操作过程是否存在问题，并分析原因。如要进一步鉴定，还需进行什么试验？分析提示：根据血琼脂平板上菌落特征和革兰染色镜检结果，初步报告：疑为葡萄球菌感染。上述操作过程中触酶试验存在问题，主要是触酶试验不能在血琼脂平板上进行，因血琼脂平板含有血液，可导致假阳性。进一步鉴定：应重做触酶试验（玻片法），还要进行下列试验中的一种：血浆凝固酶试验、DNA酶试验和金黄

7、色葡萄球菌胶乳凝集试验。9.20岁，女性，入院前2周间歇性发热并有寒战，夜间体温3940，发热期间左腹股沟有疼痛、肿胀。伴纳差，恶心、呕吐，时有咳嗽。体检左腹股沟有35cm肿块，肝、脾略肿大，腹部见玫瑰疹。血白细胞1.5109/L，中性粒细胞70，淋巴细胞26，单核细胞4。肝功正常，腹股沟穿刺获坏死性物质，伴巨噬细胞，血培养阴性，肥达试验结果：TO 1:320，TH 1:320，PA 1:40，PB 1:40。该患者很可能感染什么细菌，如何进一步确诊？分析提示：该患者可能有伤寒沙门菌感染；应采集标本进行伤寒沙门菌的分离及鉴定。 10.患者，男，50岁。12天前因劳累后突起畏寒、发热39.7，伴

8、有咳嗽咯痰，食欲减退，伴乏力。20小时前突然咳出大量黄绿色脓痰，伴咯血，立即转院。体格检查：体温38.7，发热面容。右下肺扣诊浊音，可闻及罗音。胸片示右中下肺野有一5cm4cm空洞，空洞四周为浓密的炎症浸润阴影。（1）请问该患者可能患何种疾病？可能是什么细菌感染？（2）如何进行微生物检验辅助诊断病情？分析提示：（1）可能为结核分枝杆菌引起的肺结核；（2）微生物检验辅助诊断：采集患者痰标本（晨痰、即时痰、夜间痰、24小时痰）、痰标本处理（消化、均质、沉淀）后进行涂片检查、检查结果向临床报告（检出或未检出；检出者注意半定量报告，用“+”表示数量多少）。在检验过程中注意无菌操作、加强自我防护及实验室

9、安全意识。11.某医院外科手术病人，术后一天伤口发生感染，经查，手术室空气菌落总数测定为50cfu/m3，试分析是否是导致感染发生的原因？如何处置？怎样监测？分析提示：按照我国医院空气、物体和医护人员手的卫生标准，层流洁净手术室空气平均菌落数应小于10cfu/m3，且不得检出金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、溶血性链球菌。根据手术室空气检测结果，该手术室空气质量未达到标准，可能与术后感染发生有关。处置方法：暂停使用手术室，对手术室空气、物体表面进行全面消毒处理；消毒处理后重新对手术室进行菌落总数测定，以确定达到规定标准。12.男性，52岁，因头痛伴发热1月余入院，既往有养鸽史，入院后行腰椎穿刺术，

10、脑脊液检查结果：细胞总数42106单个核细胞，墨汁染色发现带有宽厚荚膜的圆形菌体，结核抗体阴性。（1）该患者可能的诊断是什么？病原菌是什么？（2）怎样进行该病原菌的微生物学检验？ 分析提示：（1）该患可能的诊断是隐球菌性脑膜炎，病原体是新型隐球菌。（2）详见新型隐球菌的微生物学检验。13. 患者张某，男，45岁，从事活鸡销售与宰杀工作。2013年2月18日无明显诱因下出现咳嗽、咳痰伴发热，自服扑热息痛、头孢等药物。2月20日病情无好转，并出现痰中带血，呼吸困难。3月1日入院治疗。采集病人的咽拭子送检验科微生物室进行检验。问：患者可能为哪种病原体感染，如何进行鉴定？分析提示：患者可能为禽流感病毒

11、感染，应按流感病毒分离培养及鉴定程序进行诊断鉴定。14.患者，男，25岁。一周来食欲不振，检查：ALT 1300U/L（赖氏法），血清总胆红素30mol/L，甲型肝炎IgG抗体（+），HBsAg（+），HBeAg（+），抗HBcIgM抗体（+），本例可能性最大的临床诊断是什么?试分析乙型肝炎病毒微生物检查的方法和临床分析。分析提示：可能为乙型肝炎。参看乙型肝炎病毒两对半及DNA检测和临床分析。15.患者李某，女，37岁，发热（38以上）3天入院，伴尿痛、尿急。临床初步判断为泌尿系统感染。临床医生申请进行尿液标本细菌培养。请问如何正确采集标本？如何进行微生物学检验？分析提示：怀疑为痢疾志贺菌感染

12、。细菌鉴定：（1）标本采集：采集黏液脓血部分。（2）分离培养和增菌培养：取标本分别接种于SS琼脂平板、麦康凯琼脂平板进行分离培养。为提高检出率，亦取标本接种GN肉汤中，经增菌培养后再接种SS琼脂平板、麦康凯琼脂平板。（3）观察挑选菌落：观察SS琼脂平板和麦康凯琼脂平板菌落特征，挑取无色观察菌落作进一步鉴定。（4）鉴定及药敏试验：进行生化反应鉴定试验、血清学鉴定及药敏试验。（5）发出报告：根据检查结果发出报告。 16. 患者赵某，女，16岁，某日餐后6小时出现发热，温度达39，伴头痛、恶心、腹痛、腹泻。粪便始呈稀泥糊状，后为黏液脓血便，量不多，每日排便十次至数十次不等。你认为最有可能是何菌感染？

13、如何进行细菌学鉴定？ 分析提示：怀疑为金黄色葡萄球菌感染。细菌鉴定及药物敏感试验：（1）标本采集：采集脓痰带血部分。（2）涂片检查：挑选痰液中脓性或带血部分，涂成均匀薄片，革兰染色，镜检。如见到葡萄状排列的革兰阳性球菌，可报告“找到革兰阳性球菌”。（3）细菌培养：经涂片确定标本适合细菌培养后，将痰洗净，并将痰均质化。分区划线接种血平板于35培养1824h。（4）观察菌落和涂片染色镜检。（5）进一步鉴定和药物敏感试验：如与金黄色葡萄球菌符合，则取单个菌落按金黄色葡萄球菌鉴定标准进一步鉴定，并取单个菌落，配制浓度相当于0.5麦氏单位菌液，进行药物敏感试验。（6）结果报告：根据鉴定结果发出细菌最终报

14、告和药物敏感试验结果。17. 某医院检验科微生物实验室培养基均为自己配制。近期因天气转凉，患者数量增加，血平板告急，实验室赶制一批血平板后即投入使用。但使用新配制血平板的第二天发现所接的临床标本，血平板上均有革兰阳性杆菌生长。（1）血平板上生长的革兰阳性杆菌你认为是致病菌还是污染菌，为什么？（2）该实验室在培养基使用中是否违背微生物检验质量控制的要求，为什么？（3）培养基质量控制属于检验前、中、后质量保证环节中的哪一个环节？ （4）请简述培养基质量控制的主要内容。 分析提示：（1）污染菌，因为多个标本均生长革兰阳性杆菌；（2）违背了质控要求。新批号培养基在投入使用前应该进行质量控制和性能验证；

15、（3）检验中质量保证环节；（4）外观良好（表面平滑、水分适宜、无污染、适当的颜色和厚度，试管培养基湿度适宜）、标识明确：生产日期（批号）、保质期、配方（适用时）、质量控制、贮存条件等；自制培养基，每批号产品应进行无菌试验和性能验证，如生长试验或与旧批号产品平行试验、生长抑制试验（适用时）、生化反应（适用时）等；购买培养基应检查并记录每个批号和（或）每次购买产品的破损、污染状况，以及外观、冷冻或受热等信息。若生产者遵循一定的质量保证标准，实验室可免除质量控制，但需保存生产者所遵循的质量保证标准，以及每批号产品完成无菌试验、质量控制性能合格证明等文件；若生产者不能提供所遵循的质量保证标准，实验室应进行质量控制。