WHO精液解读.ppt

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1、WHO精液分析标准解读,第5版手册提纲,一、精液分析标准程序：常规分析、抗体包被精子、非精子成分；可供选择的试验：精子多发性缺陷指数、白细胞免疫细胞化学染色、精子宫颈粘液互相作用、精浆生化、CASA；研究试验：活性氧、顶体反应、精子卵细胞互相作用、精子透明带结合、去透明带仓鼠卵穿透试验、精子染色检测等。,第5版手册提纲,二、精液处理精子制备技术（辅助生殖）精子冷冻保存三、质量保证和质量控制四附录,“精液分析”部分的修订主要涉及:精子数量的测定；精子活动力分级；精子形态学评估；精液参考值范围。,精子浓度检测,对精子数目检测中的精液稀释方法及计数池面积进行了更改，每份标本均重复稀释、取样2次，各自

2、计数至少200个精子，并强调了抽样误差的重要性和所获得的计数结果的可靠性。一次射精中的精子总数能够提供更为精确的反映睾丸功能的信息，因此新版本强调必须精确地测定精液体积。,精子浓度还是精子总数？ 年轻人 老年人 差异精子浓度（106/ml）73 64 NS精液量（ml） 3.2 1.8 P0.05精子数量（106/ejac.）206 74 P0.05,精液采集和体积测定,根据重量间计算精液体积，假定精液比重为1g/ml(实际为1.014g/ml)来计算。（首选方法）称取容器的重量，再称取装有精液的容器的重量，两者重量之差（g/ml）在收集精液的容器里直接测量精液体积,精子浓度检测,推荐使用改良

3、Neubuer血细胞计数板；制备两份分别稀释的样本；不将同一份稀释样本加热到两个计数池中；不要两次计数同一个计数池。,计数哪个精子？计数中央正方形内的所有精子。（天蓝色正方形内的区域）避免重复计数。绿圈表示要计数的精子，红圈表示不液化的精子CASA检测精子的合适浓度为250106/ml,精子密度检测：精子数目很低时,需要精确报告时减少稀释倍数、测定更大的体积；不需要精确报告时粗略估计精子密度 如果4/400 HP (或16/200 HP)，可报告“密度 2106 /ml”怀疑无精子症时 取1 ml 精液，离心3000g15 min； 弃上清，只留下50l液体，重新悬浮沉淀； 取2份10l 液体

4、加于载片，分别加盖片观察。注意： 精子数目少 = 大的计数误差； 未找到精子 没有精子存在； 0 的95%可信区间上限= 3.7。,精子活动力检测,精子前向运动的情况与受孕具有密切的关联新版手册中一个重要的修订是精子活动力的分类方法。精子活动力的分类前向运动（Progressive motility PR）非前向运动（Non-progressive motility ,NP) 不运动（Immotility,IM）,精子活动力分级按以下标准评估： WHO4 WHO5 不动 d级 IM 非向前运动 c级 NP 前向运动 PR 慢速 b级 快速 a级（25m/s,37。C） 以往将前向运动精子分为快

5、速和慢速，以37 。C时速度25m/sec作为a级。但是对于技术员来说，很难如此精确无误的判断运动的快慢。,精子活动力测定,室温或37检测，深度20m，以允许精子自由运动；根据盖片的面积不同，选择不同的液体体积，以保证20m的深度。 深度D（mm） = 体积V（l, mm3）/ 面积(mm2),精子形态学,定义 通过观察来自女性生殖道，特别是经房事后试验从宫颈粘液或从卵子透明带表面回收的精子有助于定义具有潜在受精能力的精子 通过透明带选择的精子，正常形态率仍然低，约为8-25%,精子形态学,染色方法推荐采用Papanicolaou,Shorr或Diff-Quik染色法。使用光学显微镜观察，精子

6、头部顶体区位浅蓝色、顶体后区为深蓝色，中端略呈红色，尾部为蓝色或红色。残余的胞浆小滴染成粉红色或橙红色。,精子形态学检测,光学显微镜观察，精子头部长4.05.0m，宽2.53.5m，长宽比1.501.75，顶体界限清晰，占头部的40%70%；中段细，宽度1m，长度相当于头部的1.5倍，与头部位于同一轴线上；尾部直、均匀、不卷曲，长度45m；残余胞浆小滴不超过头部面积的1/3。参考值下限：正常形态精子4%,手册中收录了大量正常和异常的精子的优质照片，并针对照片中的每一个精子，附带有文字说明其形态，有助于提高检验人员的精子形态分类能力。,只有头和尾都正常的精子才认为是正常的，所有处于临界状态的精子

7、均认为是异常。使用这一标准，对所有男性，其正常形态精子百分率范围约为0-30%。这个低数据产生低临界值仅为3-5%,精子形态学,：制片（a）未经稀释的精液标本（b）洗涤后的精子标本,WHO第四版和五版精子形态学的比较,五版的标准低于四版:如头部前者要求大体呈椭圆形，后者必须是椭圆形等。 按照各自的叙述标准，浙江精子库9名人员进行比较 五版正常形态百分率高（五版27%,四版13%），头部异常率低（五版64%,四版76%）， 尾部异常率低（五版11%,四版40%），有显著差异。,精子形态与IVF、ICSI的关系,四版WHO诊疗指南： 形态 15%，精子的体外受精能力下降IVF 490周期，ICSI

8、 261周期精子形态 周期数 受精率 卵裂率 临床妊娠率5% 59 50.6 99.3 15.35-10 171 60.1 98.6 29.810-15 177 62.1 98.7 3515 83 69.8 99.5 48.2ICSI各组无差异：临床妊娠率在30.230.8%,湖南中信朱文兵,精液参考值范围的制订,采纳了近2000份精液标本的原始数据，来自8个国家的可生育男性（解除避孕后12个月内使配偶怀孕）。在统计学方面，采用单侧参考值区间、以第5百分位数作为参考值下限。说明：这个特定的人群的精液参数可能不同于一般健康男性；怀孕所需要的时间受到多种因素、特别是女性生育能力的影响，精液参数高于

9、参考值下限并不能保证生育，低于下限也未必不育，检测结果应结合临床资料进行综合评估。精液参数可能存在地区间或实验室之间的差异，各实验室应该考虑制定自己的参考值范围，按照本手册中描述的方法。,如何结合实际使用新版手册,1、掌握标准化的程序分析和方法，是提高精液检验的准确性的关键；2、按照手册的要求，做好实验室的设备、人员、技术等方面的标准化工作是当务之急；3、强化实验室技术人员的标准化培训；4、创造条件，研究和制定国人的参考值；,(一)根据精液常规分析结果，选择适当的ART疗方案1少精予症的分类及ART治疗方案： 精子密度 治疗轻度少精子症 10，20 106/ml IUI 中度少精子症 5， 10 106/ml IUI/IVF 重度少精子症 1， 5 106/ml IVF/ICSI极度少精子症 1 106/ml ICSI,2弱精子症的分类及ART治疗方案： 精子活力（a+b） 治疗轻度弱精子症 30%，50% IUI 中度弱精子症 10%， 30 IUI/IVF 重度弱精子症 1%， 10% IVF/ICSI极度弱精子症 1% ICSI,3.畸形精子症的分类及ART治疗方案: 精子正常形态率 治疗轻度畸形精子症 10%， 15% IUI 中度畸形精子症 5%， 10 IUI/IVF 重度畸形精子症 1%， 5% IVF/ICSI极度畸形精子症 1% ICSI,