实验室生物安全-f.ppt

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1、实验室生物安全,昆明市疾病预防控制中心,什么是生物安全,生物安全是指避免危险生物因子造成实验室人员暴露、向实验室外扩散并导致危害的综合措施。,什么是生物安全实验室,生物安全实验室是指在研究传染性疾病或微生物时能够避免病原体意外伤害的实验室,切记：,仅有先进的设施、设备和装备还不足以保证实验室的生物安全，作为实验室活动主体的操作者必须履行良好的行为规范才能最大限度保证实验室的生物安全。良好的生物安全实验室技术规范要满足保护操作者和实验环境的要求，必要时还要考虑对操作对象的保护。,对于良好的实验室操作技术规范每个操作者都必须时刻铭记在心。对于每一个新进入实验室的工作人员都应该给予严格的训练，以使其

2、掌握正确的要领，避免养成不良的习惯，从而保证以正确的意识、操作技术和工作习惯展开工作。养成正确的生物安全意识非常重要，它可以使操作者最大限度的保护自己，避免失误和事故的发生，哪怕即使发生意外，也会进行妥善的处理。,气溶胶感染主要途径,吸球（即吸管）操作。吸球是微生物学方面最基本的器具，用吸球操作时，能导致气溶胶发生，例如由吸管中向外排液，用力过猛则会使液滴飞溅，弹离液体或固体培养基表面，释放出大量微粒；或者，当吸管末端含有物快排尽时，可能产生气泡，尤其是富于蛋白性悬液更易形成气泡，而气泡破裂就成为气溶胶。离心沉淀时，沉淀管装量太满，管盖未盖或不严，以及离心操作过操作过程中离心管破裂，都可导致气

3、溶胶散播。注射器操作时，当抽吸后或者拨出时，注射器针头由于颤动而散发出液体微粒。用接种针去粘沾液体时，液柱断裂。镜检涂片时，液丝断裂。传染性材料倾注出来。打开培养皿盖时，盖内壁往往有传染性的凝结水薄膜，因破裂而散播气溶胶。,气溶胶感染主要途径,开安瓿时，如瓿内为液体，则当锉刀锉断瓿颈后，即可能发生气溶胶；如瓿内为干燥的活菌或菌种，特别是用真空熔封的，更易产生溶胶。机械振荡和超声振荡，或者研磨、浸解，拨出研磨柱时，都可形成气溶胶。装有液体容器的破损或液体益出。用超声波清洗机清洗污染器具时，也可能发生大量气溶胶。在粗糙的培养基表面涂布菌液时。高压灭菌器在灭菌前的排气。从玻璃或离心管上拨出棉塞时。处

4、理关过受感染动物的笼子。,可能产生危险的设备和操作方法,可能产生危险的设备和操作方法,可能产生危险的设备和操作方法,可能产生危险的设备和操作方法,可能产生危险的设备和操作方法,可能产生危险的设备和操作方法,可能产生危险的设备和操作方法,可能产生危险的设备和操作方法,从事实验活动都应遵循下列基本原则：,不管是谁，从事实验活动都应遵循下列基本原则：所有操作人员必须经过培训，通过考核，获得上岗证书；在开始相关工作之前，应对所从事的病原微生物和其他危险物质以及相关操作进行危险评估，根据国家对于各种微生物操作的危险等级划分和防护要求以及危险评估的结果，制定全面、细致的标准操作规程和程序文件。 对于关键的

5、危险步骤设计出可行的防护措施并对这些细节了然于胸；,熟悉各级生物安全实验室运行的一般规则，掌握各种仪器、设备、装备的操作步骤和要点，进行正确的操作和使用，对于各种可能的危害应非常熟悉；应掌握各种感染性物质和其他危险物质操作的一般准则和技术要点。,实验室的生物安全技术规范，包括但不仅限于实验室运行的基本规范、仪器设备的使用规范、针对感染性材料、危险化学品、放射性核素等的操作规范以及个人防护用品的使用规范等。,一、日常管理规范,人员控制仪器设备搬入和移出防虫及防节肢动物措施清洁与消毒水电安全管理,一）人员控制规范,1、人员专业和安全培训、持证上岗2、禁止独自进入实验室工作3、有禁忌症的人员不得进入

6、实验室工作4、孕妇暂时离开实验岗5、实习进修人员不得独自开展实验活动6、参观、检查人员须经管理部门审批、持证进入7、后勤保障人员应经过相关培训、持证进入8、厂商维修人员须持管理部门准入证进入。9、严禁在实验室会客。,二）设备搬入和移出、摆放规范,1、实验室应为大型设备应进出留出通道（设备门）2、实验室应有足够的电力供应设施3、考虑设备的摆放空间4、实验室考虑足够的承重水平5、先前考虑设备的维修通道和位置6、移出实验室的设备应经过前面的消毒，消毒方法可采用擦洗表面和整体熏蒸的措施，消毒方法不应损害设备的安全和使用性能。9、摆放的位置应符合要求,三）防虫及防节肢动物措施规范,1、有自动闭门系统2、

7、有放昆虫和节肢动物的设施，如纱窗、 挡板等3、实验室门窗的密闭性能应符合要求4、实验室送、排风管道有安全措施，防止小型动物或昆虫从管道进入实验室；,四）清洁与消毒规范,1、实验室应保持整洁，定期进行消毒。2、实验活动结束后及时清理实验台面，清理实验器具，并进行前面消毒。3、实验室消毒方法与消毒程序应符合规定要求。4、消毒剂应采用符合国家标准、质量合格的产品，不得使用未经验证和过期的消毒剂。5、消毒时间应严格按照规定要求，不得随意缩短或改变。6、消毒剂应现配现用，并在规定的时间内使用。7、消毒和灭菌方法应根据消毒对象的具体情况进行选择。,五）水、电安全管理规范,1、实验室应加强对水、电的管理2、

8、避免常明灯、长流水等现象3、禁止超负荷用电4、设备使用后及时切断电源5、对需要连续通电的设备，要定期进行巡视，特别是节假日期间更应注意巡查。6、使用电炉、灭菌器等设备时应做到全程有人监管。7、实验室发生断电、停电、停水时应及时检查，切断电源或关闭水龙头，防止发生以外。8、生物安全实验室应有可靠的电力供应，最好有双路供电或有备用电源，保证重要设备的正常运行和实验室的安全。,二、实验室安全管理规范,一）完善管理体系文件1、制定相应的安全管理制度和规定2、制定实验设备的管理制度和操作程序3、制定实验检测规程和标准操作程序4、制定实验室人员准入和项目准入制度5、制定实验室进、出程序6、制定实验废弃物消

9、毒、处理规程7、制定实验室意外事件处置预案和处置规程,8、建立实验人员健康监测与个人健康档案制度9、个人安全防护制度10、实验室事故报告制度和报告程序11、人员培训制度12、菌毒种安全管理和运输、保存制度13、样本收样、保存制度和操作程序等,二）人员管理规范,1、专业素质和专业技能要求与培训1）具备相关专业知识（操作技术、规程等）2）具备必要专业技能（操作技能掌握）3）检测技术培训、特别是新技术、新方法的培训2、安全知识和防护技能要求1）经过系统的生物安全培训2）熟悉和掌握必要的安全防护知识和个人防护技能3）了解从事岗位工作的风险和防护要求,3、仪器设备操作与维护培训要求1）、熟悉掌握相关设备

10、的性能和操作要求2）掌握设备操作程序3）熟悉设备故障的保修和维护程序及要求,4、实验室消毒与废弃物处置培训等,1）经过培训实验人员掌握实验室消毒方法、消毒程序及消毒剂的性能和特点2）掌握各种实验废弃物的消毒灭菌要求和处理程序,五）、实验室意外事件的处置培训,1、实验操作意外事件处置1）感染物质外溢（污染台面、地面等）2）感染物质的暴露（躯体或面部暴露）2、意外损伤处置1）刺伤2）割伤3、吸入感染物质的处置,4、实验设施发生的意外事件处置1）停电2）火灾3）水灾4）地震等,三、实验操作技术规程,实验人员应熟悉掌握实验室进出程序、各种检测技术、设备操作、消毒灭菌等操作规程和要求。1、实验室出、入操

11、作规程 1）进入准备 2）个人防护用品使用及检查程序 3）实验室进入、腿退出的规定程序 4）实验室设施的开启程序,2、实验室检测项目操作规程 病原学检测 血清学检测 分子生物学检测 病毒培养 样本离心、干燥、纯化等操作程序,3、设备使用和操作规程 使用程序 维护程序 检定程序 校准程序 报废程序,4、实验室消毒灭菌规程1）实验室消毒 器具消毒 台面消毒 地面消毒 实验室空间消毒 送排风管道消毒 消毒剂的配制等,2）实验室废弃物消毒灭菌操作程序 固体废弃物消毒程序 废液消毒程序 包装材料消毒程序3）重点掌握消毒灭菌方法和时间及消毒剂种类与浓度 浸泡、高压、焚烧、煮沸消毒等 消毒剂种类、使用浓度、

12、消毒时间等,3）实验室意外事故处置预案及处置程序、事故报告程序,5、实验数据记录和传输规程1）实验检测的原始记录2）实验检测数据传输程序3）实验数据安全保密程序等,四、生物安全实验室运行的基本规范,这些规范不能代替各实验室的规章制度、程序文件和标准操作程序。各个实验室应遵照国家有关法律、法令、标准和规定，结合实际情况来制定相应的管理文件和标准操作程序，确保实验室生物安全符合国家的有关要求。,一）BSL-2实验室人员控制规范,实验室的进入实验室负责人应根据要求对进入实验室的人员加以控制。未经批准或允许，任何人不得擅自进入实验室。严禁儿童进入实验室工作区域。 不允许可能增加获得性感染的危险性或感染

13、后可能引起严重后果的人员进入实验室或感染动物房。,BSL-2实验室门上应标有国际通用的生物危害警告标志，包括通用的生物危险性标志，标明传染因子、实验室负责人或其他人员姓名、电话以及进入实验室的特殊要求。实验室的门应保持关闭状态。与实验工作无关的动物不得带入实验室。,二）工作人员的防护规范,在实验室工作时，必须穿戴合适的工作服或防护服。工作人员可能接触到血液、体液以及其他具有潜在感染性的材料或感染性动物以及其他有害物质的操作时，应戴上合适的手套。手套用完后，应先消毒再摘除，随后必须洗手。,在处理完感染性实验材料和动物以及其他有害物质后，以及在离开实验室工作区域前，都必须洗手。为了防止眼睛或面部受

14、到喷溅物的污染、碰撞或人工紫外线辐射的伤害，必须戴合适的安全眼镜、面罩或其他防护设备。,严禁穿着实验防护服离开实验室工作区域。不得在实验室内穿露脚趾的鞋。禁止在实验室工作区域进食、饮水、吸烟、化妆和处理角膜接触镜。禁止在实验室工作区域储存食品和饮料。在实验室内用过的防护服不得和日常服装放在同一柜子内。,三）有关操作的指导原则,严禁用口吸移液管，严禁将实验室材料置于口内。严禁舔标签。所有的实验操作要按尽量减少气溶胶和微小液滴形成的方式来进行。应限制使用注射针头和注射器。除了进行肠道外注射或抽取实验动物体液外，注射针头和注射器不能用于移液或用作其他用途。,实验室应制定并执行处理溢出物的标准操作程序

15、。出现溢出、事故以及明显或可能暴露于感染性物质时，必须向实验室负责人报告。实验室应如实记录有关暴露和处理的情况，保存相关记录。,污染的液体在排放到生活污水管道以前必须清除污染（采用化学或物理学方法）。根据所处理的微生物因子的危险评估结果准备专门的污水处理系统。只有保证在实验室内没有受到污染的文件纸张才能带出实验室。,四）实验室工作区的管理原则,实验室应保持清洁整齐，严禁摆放和实验无关的物品。每天工作结束后应清除工作台面的污染。若发生具有潜在危险性的材料溢出应立即清除污染。所有受到污染的材料、标本和培养物在废弃或清洁再利用之前，必须先清除污染。,感染性材料的包装和运输应遵循国家和/或国际的相关规

16、定。如果窗户可以打开，则应安装防止节肢动物进入的纱窗。,五）生物安全管理的指导原则,实验室负责人负责制订和采用生物安全管理计划以及实验室安全或/和操作手册。实验室应当能提供常规的实验室安全培训，并建立培训制度。,实验室负责人（或生物安全负责人）要将生物安全实验室的特殊危害告知实验室人员，同时要求他们阅读生物安全或/和操作手册。所有实验室人员必须经过培训，了解所从事工作的危险、掌握有关的管理规定和操作手程序，通过考核后方可从事相关实验室工作。,应当制订节肢动物和啮齿动物的控制方案。如有必要，应为所有实验室人员提供适宜的医学评估、健康监测和治疗，并建立健康档案。实验室人员应接受与所操作生物因子或实

17、验室内潜在的生物因子相关的免疫接种或检测。,五、 感染性物质的操作与防护规范,一）、实验室内检测样本的安全操作在实验室内，进行感染性物质的操作，包括其样本采集、内部运输、接收和开启的方法不正确，都会增加造成相关人员发生实验室感染的危险性。因此，进行感染性物质的操作应注意以下问题：,1、包装容器,用于装盛感染性物质的容器一般不建议使用玻璃制品，为了保证安全，最好采用塑料制品（根据实际需要而定）。样本容器应当坚固，不易破碎，带螺旋盖，盖好后不应有液体渗漏。所有的标本都应存放在容器内。容器应贴上标签以利于识别，标签上应有样品名称、采集日期、编号等必要的信息。样品的有关表格和/或说明不要绑在容器外面，

18、而应单独放在防水的袋子里，以防止发生污染而影响使用。,2、标本的接收,大规模接收标本的实验室应在一个专用的房间或区域进行。对于病原已知的按国家规定可在BSL2操作的病原微生物或未知的感染性材料，最低应在一个专用区域或房间接受，并在生物安全柜内打开外包装，操作人员应穿防水的防护服，戴生物安全专用口罩和眼罩、手套。,样本接受由收样员按照规定程序收样，并做好收样登记，与送样人员做好交接工作，最后双方签字确认。,3、实验室内运输,为防止发生意外渗漏或溢出而威胁操作者的安全，在实验室内运输感染性物质时，应使用金属的或塑料材质的第二层容器（如盒子）加以包裹，在第二层容器中应该有标本容器的支架，将标本容器固

19、定在支架上，以使其保持直立。第二层容器应耐高压或者能抵抗化学消毒剂的腐蚀，以便定期清除污染。封口处最好有一个垫圈，以防止发生渗漏。,按国家规定需要在BSL-3或以上级实验室操作的病原微生物或标本，应按国家规定的防护等级，在相应级别的实验室的安全柜内打开，并采取相应的防护措施。为保证安全，不应在普通的BSL-1实验室接受具有感染性的检测样本。,3、标本包装的打开,接收并打开样本包装的人员应受过专业防护培训（尤其是处理破裂的或渗漏容器）并应知道所操作标本的潜在的健康危害，操作时要采取合适的防护措施。所有标本应该在生物安全柜里打开包装，同时备有消毒剂以便随时处理可能出现的标本泄露。,打开包装前应仔细

20、检查每个容器的外观、标签是否完整，标签、送检报告与内容物是否相符，是否有污染以及容器是否有破损等，要登记详细的报告单并记录处置方法。接收标本应由2人进行。,5、避免感染性物质扩散的要领,为避免接种物从接种环上脱落，微生物接种环直径应为23mm 并且完全闭合，柄的长度不应超过6cm以最大限度地减少抖动。应该使用密闭的微型电加热灭菌灯消毒接种环，以免在开放式的本生灯火焰上灭菌时感染性物质溅落。最好使用一次性的、无需灭菌的接种环。,小心操作干燥的痰标本，以免产生气溶胶。要高压灭菌和/或丢弃的废弃标本及培养物应放在防渗漏的容器里，如使用耐高压的医疗废物专用袋。放入废弃物容器前，标本的顶部应标明是安全的

21、（如使用高压标签）。应对实验室进行定期的终末消毒。,6、避免吸入或接触感染性物质的规范,在微生物实验操作中释放的较大颗粒和小液滴（直径大于5m）会很快落在操作台表面以及操作者的手上，为了避免污染，操作者应戴一次性手套。实验人员做实验时要避免触摸嘴、眼和面部。,严禁在实验室里吃喝以及储存食品和饮料。实验室内不许咬笔、嚼口香糖。实验室内不许化妆和装卸角膜接触镜。在任何可能导致潜在的传染性物质溅出的操作过程中，应该保护好面部、眼睛和嘴。,7、避免传染性物质接种的规范,要尽力避免由破裂的或由缺口的玻璃器皿引起的感染性物质的意外感染。尽量以塑料器皿和吸管代替玻璃器皿和吸管。锐器，如皮下接种针（针头）、玻

22、璃吸管和碎玻璃可导致实验人员感染，因此要小心操作。,为减少注射器和针头造成的意外事故，应尽量少用注射器和针头（可以用简单的工具开启瓶塞，这样就可以用吸管代替注射器和针头）。必须使用注射器和针头时，要采用锐器保护装置。针头永远不要重新盖帽，若需对接不要直接用手对接注射器和针头，用过的一次性物品要放进专用的耐针刺的有盖容器中。,8、对玻璃和“锐器”的使用规范,尽可能以塑料器皿代替玻璃器皿，只能使用实验室级玻璃（硼硅酸盐），而且任何碎裂或有裂纹的器皿都应丢弃。皮下注射针不应用做吸管。,生物安全实验室微生物操作技术规范,生物安全柜的使用1应参考国家标准和相关文献，介绍生物安全柜的使用方法和局限性。并发

23、给工作人员书面的操作步骤、安全或操作手册。应明确注明当出现溢出、破损或不良操作时，安全柜就不再能保护操作者。2生物安全柜必须运行正常时才能使用。3生物安全柜在使用中不能打开玻璃观察挡板。4安全柜内应尽量少放置器材或样品，不能阻碍后部的气流循环。样品在放人安全柜内的工作区前需要清除表面污染。5安全柜内不能使用酒精灯，否则燃烧产生的热量会干扰气流并可能损坏过滤器。允许使用微型电加热器，但最好使用一次性无菌接种环。,生物安全柜的使用 6所有工作必须在工作台面的中后部进行，并能够通过观察挡板看到。 7尽量减少操作者身后的人员流动。 8操作者不应反复移出和伸进手臂以免干扰气流。 9实验记录、移液管以及其

24、他物品不能够阻碍前面的空气格栅，因为这将干扰气体流动，引起物品的潜在污染和操作者的暴露。 10工作完成后以及每天下班前，应使用适当的消毒剂对生物安全柜的表面进行擦拭。 11工作开始前和结束后，安全柜的风机应至少运行5分钟。,生物安全实验室微生物操作技术规范,生物安全实验室微生物操作技术规范,加热灭菌和消毒 加热是最常用的清除病原体污染的物理手段。“干”热没有腐蚀性，可用来处理实验器材中许多可耐受160C或更高温度24小时的物品。燃烧或焚化也是一种干热方式。高压灭菌的湿热法则最为有效。 煮沸并不一定能杀死所有的微生物或病原体，但如果其他方法(化学杀菌、清除污染、高压灭菌)不可行或没有条件时，也可

25、以作为一种最起码的消毒措施。 灭菌后的物品必须小心操作并保存，以保证在使用之前不再被污染。,生物安全实验室微生物操作技术规范,高压灭菌 压力饱和蒸汽灭菌(高压灭菌)是对实验材料进行灭菌时最有效和最可靠的方法。对于大多数目的，下列组合可以确保正确装载的高压灭菌器的灭菌效果：134、2、3分钟 126、10分钟 121、15分钟 115、25分钟,生物安全实验室微生物操作技术规范,高压灭菌器的装载 为了利于蒸汽的渗透和空气排出，高压灭菌物品应松散包装放置在灭菌器内。要使蒸汽能够作用到其内容物。通过高压灭菌器内的蒸汽，由下而上置换空气并经排气孔排出。当所有的空气排出后，关闭排气孔的阀门，缓慢加热使压

26、力和温度上升到安全阀预置的水平。此时记为灭菌开始时间。灭菌结束后停止加热，让温度下降到80以下再打开盖子。,生物安全实验室微生物操作技术规范,高压灭菌器使用注意事项下列规定能够减小操作压力容器时会发生的危害： 1高压灭菌器的操作和日常维护应由受过良好培训的人员负责。预防性的维护程序应包括：由有资质人员定期检查灭菌器内部、门的密封性以及所有的仪表和控制器。 2应使用饱和蒸汽，并且其中不含腐蚀性抑制剂或其他化学试剂，这些物质可能污染正在灭菌的物品。3所有要高压的物品都应放在空气能够排出并具有良好热渗透性的容器中；灭菌器内不能塞得过紧，否则蒸汽不能均匀作用于装载物。,生物安全实验室微生物操作技术规范,4当灭菌器内部加压时，互锁安全装置可以防止门被打开，而没有互锁装置的高压灭菌器，应当关闭主蒸汽阀并待温度下降到80以下时再打开门。 5即使温度下降到80以下，操作者打开门时也应当戴适当的手套和面罩来进行防护。6在进行高压灭菌效果的常规监测中，生物指示 剂或热电偶计应置于每件高压灭菌物品的中心。最好在“最大”装载时用热偶计和记录仪进行定时监测，以确定灭菌程序是否恰当。7灭菌器的过滤器(如果有)应当每天拆下清洗。8应当注意保证高压灭菌器的安全阀没有被高压灭菌物品中的纸等堵塞。,