动物细胞融合与单克隆抗体 (4)精选PPT.ppt

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1、关于动物细胞融合与单克隆抗体(4)第1页，讲稿共29张，创作于星期日2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体2.2 2.2 动物细胞工程动物细胞工程第2页，讲稿共29张，创作于星期日一、动物细胞融合（细胞杂交）1、概念：指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。2、结果：形成单核的杂交细胞3、原理：细胞膜的流动性4、诱导方法物理法：离心、振动、电激化学法：聚乙二醇（PEG)生物法：灭活的病毒第3页，讲稿共29张，创作于星期日思考讨论：思考讨论：为什么细胞融合过程中使用的病毒需要为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗？灭活？不灭活行吗？因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂因为灭活的

2、病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。第4页，讲稿共29张，创作于星期日动物细胞融合过程动物细胞融合过程第5页，讲稿共29张，创作于星期日5、过程：动物细胞A动物细胞B诱导，融合2个完整的杂交细胞AB有丝分裂（膜融合、质融合）（核融合）注意：动物细胞的融合也需要把多个两种细胞放在一起，让它们随机融合后，再从中筛选杂交细胞第6页，讲稿共29张，创作于星期日6、意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为

3、可能。7、应用：成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段 特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体第7页，讲稿共29张，创作于星期日动物细胞与植物细胞的差别：无细胞壁全能性受限制，不能发育成杂种动物动物细胞杂交与植物细胞杂交的不同：不需去除细胞壁不能发育成新的动物个体第8页，讲稿共29张，创作于星期日植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较比较项目比较项目植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合细胞融合原理细胞融合原理细胞融合的方法细胞融合的方法诱导方法诱导方法用途用途获得获得杂种植株杂种植株细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜

4、的流动性细胞的全能性细胞的全能性去除细胞壁去除细胞壁后诱导原生后诱导原生质体融合质体融合使细胞分散后诱导细使细胞分散后诱导细胞融合胞融合物理（离心、振荡、物理（离心、振荡、电刺激）电刺激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）物理、化学方法（同左）物理、化学方法（同左）灭活的病毒灭活的病毒主要用于制备主要用于制备单克隆抗体单克隆抗体第9页，讲稿共29张，创作于星期日1 1、抗体、抗体 1 1 .概念：概念：抗体是机体受抗原抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋的具有免疫功能的球蛋白白 。2 2.来源：来源：B B淋巴细胞。

5、淋巴细胞。第10页，讲稿共29张，创作于星期日 B B淋巴细胞与抗体的关系：淋巴细胞与抗体的关系：B B淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体。淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体。动物体内的动物体内的B B淋巴细胞可以产生百万种以淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。性免疫作用。每一个淋巴细胞只能产生一种抗体。每一个淋巴细胞只能产生一种抗体。自主阅读自主阅读P52：传统的抗体的生产方法及传统的抗体的生产方法及缺陷是什么？怎样解决这个问题？缺陷是什么？怎样解决这个问题？第11页，讲稿共29张，创作于星期日1、单克隆、单克隆 由

6、一个细胞经过无性繁殖由一个细胞经过无性繁殖(多次有丝分裂多次有丝分裂)形成形成的一个细胞群，叫一个克隆，即单克隆。的一个细胞群，叫一个克隆，即单克隆。2、单克隆抗体的概念2、单克隆抗体、单克隆抗体 由一个效应由一个效应B淋巴细胞经过无性繁殖形成的一个淋巴细胞经过无性繁殖形成的一个细胞群产生的化学性质单一，特异性强的抗体，即细胞群产生的化学性质单一，特异性强的抗体，即单克隆抗体。单克隆抗体。要想获得大量的单一抗体，必须克隆单一的要想获得大量的单一抗体，必须克隆单一的B淋巴细淋巴细胞，形成细胞群。胞，形成细胞群。3、原理：杂交瘤细胞具有两个亲本的特性，即能迅速大量增殖，又能足够数量的单一抗体。第1

7、2页，讲稿共29张，创作于星期日单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程 注射抗原注射抗原B淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞细胞融合、细胞融合、筛选筛选杂交瘤细胞杂交瘤细胞细胞培养细胞培养筛选筛选，继续培养，继续培养足够数量的、能产生特足够数量的、能产生特定抗体的细胞群定抗体的细胞群体外培养体外培养注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔单克隆抗体单克隆抗体（选择性培养基）（选择性培养基）单克隆抗体单克隆抗体诱导其融合的诱导其融合的方法有哪些？方法有哪些？第13页，讲稿共29张，创作于星期日4、过程B淋巴细胞骨髓瘤细胞诱导融合B-B细胞B-瘤细胞瘤-瘤细胞选择培养杂交瘤细胞（B-瘤细胞）克隆化培养抗体检测

8、杂交瘤细胞体外培养小鼠腹腔内增殖单克隆抗体第14页，讲稿共29张，创作于星期日6.单克隆抗体的应用：单克隆抗体的应用：特异性强、灵敏度高、产量大特异性强、灵敏度高、产量大 作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与特作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与特异性结合异性结合 优点：优点：准确、高效、简易、快速准确、高效、简易、快速用于用于运载药物：制成运载药物：制成“生物导弹生物导弹”治疗疾病：主要用于癌症治疗治疗疾病：主要用于癌症治疗5、单克隆抗体的特点：单克隆抗体的特点：第15页，讲稿共29张，创作于星期日思考问题：思考问题：1 1、本过程利用了哪些原理？、本过程利用了哪些原理？免疫原理，细

9、胞融合原理和动物细胞培养原理免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有的遗传物质，不仅具有B B细胞分泌抗体的能细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体得大量单克隆抗体2 2、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B B细胞融合？细胞融合？第16页，讲稿共29张，创作于星期日课堂小结课堂小结动物细胞融合过程动物细胞融合过程单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程两个过程两个过程三个三个“一一”一个诱导细胞融合的新方法一个诱

10、导细胞融合的新方法灭活病毒灭活病毒一个新细胞一个新细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞一个优势一个优势单克隆抗体特异性单克隆抗体特异性 强、灵敏度高的优势强、灵敏度高的优势第17页，讲稿共29张，创作于星期日1、动物细胞融合的目的中最重要的是、动物细胞融合的目的中最重要的是（）A.克服远源杂交不亲和克服远源杂交不亲和 B.制备单克隆抗体制备单克隆抗体 C.培育新物种培育新物种 D.生产杂种细胞生产杂种细胞2、动物细胞融合过程中所用的诱导剂动物细胞融合过程中所用的诱导剂灭活灭活的病毒，抗原性和感染力的有无是的病毒，抗原性和感染力的有无是（）A.失去抗原性，具有感染力失去抗原性，具有感染力 B.具有抗原性，也

11、具有感染力具有抗原性，也具有感染力 C.失去抗原性，也失去感染力失去抗原性，也失去感染力 D.具有抗原性，失去感染力具有抗原性，失去感染力B课堂练习课堂练习D 第18页，讲稿共29张，创作于星期日3、单克隆抗体是指（、单克隆抗体是指（）A.单个骨髓瘤细胞增殖产生的抗体单个骨髓瘤细胞增殖产生的抗体 B.单个单个B淋巴细胞增殖产生的抗体淋巴细胞增殖产生的抗体 C.单个杂交瘤细胞增殖产生的高度单一的抗体单个杂交瘤细胞增殖产生的高度单一的抗体 D.单个抗体通过克隆化，产生大量抗体单个抗体通过克隆化，产生大量抗体4、生产单克隆抗体时，在培养液中加入某种试剂能、生产单克隆抗体时，在培养液中加入某种试剂能筛

12、选出杂交瘤细胞，因为该试剂（筛选出杂交瘤细胞，因为该试剂（）A.能抑制淋巴细胞和杂交瘤细胞的能抑制淋巴细胞和杂交瘤细胞的DNA复制复制 B.能阻止淋巴细胞的原癌基因被激活能阻止淋巴细胞的原癌基因被激活 C.选择性抑制骨髓瘤细胞的选择性抑制骨髓瘤细胞的DNA复制复制 D.能阻止杂交瘤细胞核糖体上所有蛋白质的合成能阻止杂交瘤细胞核糖体上所有蛋白质的合成CC第19页，讲稿共29张，创作于星期日5 5、“生物导弹生物导弹”是指是指 （）A.A.单克隆抗体单克隆抗体 B.B.杂交瘤细胞杂交瘤细胞 C.C.产生特定抗体的产生特定抗体的B B淋巴细胞淋巴细胞 D.D.在单克隆抗体上连接抗癌药物在单克隆抗体上

13、连接抗癌药物 D6、科学家们用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得、科学家们用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交瘤细胞，经培养可产生大量克隆抗体，与骨到杂交瘤细胞，经培养可产生大量克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是髓瘤细胞融合的是（）A.经过免疫的经过免疫的T淋巴细胞淋巴细胞 B.未经过免疫的未经过免疫的T淋巴细胞淋巴细胞 C.经过免疫的经过免疫的B淋巴细胞淋巴细胞 D.未经过免疫的未经过免疫的B淋巴细胞淋巴细胞 C第20页，讲稿共29张，创作于星期日教学反馈1.动物细胞融合技术最重要的用途是（）A.克服远源杂交不亲和B.制备单克隆抗体C.培育新物种 D.生产杂种细胞B2.单克隆抗体是由下列哪种细

14、胞产生的（）A.B淋巴细胞 B.T淋巴细胞 C.骨髓瘤细胞 D.杂交瘤细胞 D3.（多选）1975年米尔斯坦和柯勒成功地获得了单克隆抗体。下列细胞中与单克隆抗体的制备有关的是（）A.效应B细胞 BT淋巴细胞C.骨髓瘤细胞 D杂交瘤细胞 A B C D第21页，讲稿共29张，创作于星期日B B体外培养体外培养骨髓瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群足够数量的细胞群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔A AC C 4.下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案制备单克隆抗体不能，没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生单一抗体的B淋巴细胞。(1).该实验方案的目的是：_(2).该方案能达到预

15、期效果吗？为什么？(3).A是从小鼠的脾脏中取得_ 该细胞能够产生_。(4).图中B为_过程，常用_作为诱导剂，该细胞继承_的遗传特性，既能_,又能_。(5).C过程指细胞培养，该过程包括_培养和_培养两个阶段，其中_代以内的的细胞属于细胞株。B淋巴细胞抗体细胞融合灭活的病毒双亲细胞分泌抗体无限增殖原代传代50第22页，讲稿共29张，创作于星期日课后习题课后习题1.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（）淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞A.B.C.D.C一

16、.选择题第23页，讲稿共29张，创作于星期日课后习题课后习题2.动物细胞融合和植物原生质融合决定于 ()A.细胞膜的流动性 B细胞膜的选择透过性C.细胞质的流动性D细胞质酶的活性 A一.选择题第24页，讲稿共29张，创作于星期日3.“生物导弹”是指 （）A.单克隆抗体 B.杂交瘤细胞C.产生特定抗体的B淋巴细胞 D.在单克隆抗体上连接抗癌药物 D4.只能使动物细胞融合的常用诱导方法是（）APEG B灭活的病毒 C电刺激 D离心A二.简答题1.淋巴细胞是由动物体-中的-细胞分化发育而来的。2.杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是-骨髓造血干主动运输第25页，讲稿共29张，创作于星期

17、日三.思考与探究1.植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术有什么不同？2.制备单克隆抗体时，为什么要选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞？提示：植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术基本相同，不同的是植物体细胞融合前需去掉细胞壁，然后再融合；动物细胞融合是两个体细胞直接融合。提示：哺乳动物感染抗原后，其体内会形成相应的B淋巴细胞，B淋巴细胞 能分泌相应的抗体凝聚或杀死这些抗原。动物在免疫反应的过程中，每一种B淋巴细胞能分泌一种特异性抗体，要想获得大量的特异性抗体，必须使能分泌该单一抗体的B淋巴细胞大量增殖。B淋巴细胞具有产生单一抗体的能力，但不能在体外增殖；骨髓瘤细胞是一种癌细胞，它能在体

18、外培养条件下无限增殖，但不能产生抗体。因此，把一种B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合，产生杂交瘤细胞，它会兼有两个亲本细胞的特性在体外培养条件下能不断增殖，同时能产生出某种特异性的抗体。第26页，讲稿共29张，创作于星期日教学参考教学参考1.已成功的动物细胞融合实例还有哪些？生物种类 细胞来源 成功年代 酵母菌鸡 原生质体血红细胞 1975年人胡萝卜 腹水癌细胞原生质体 1976年人小鼠 纤维肉瘤细胞畸胎瘤细胞 1978年要知道更多的实例，需经常查阅更多科研报道。第27页，讲稿共29张，创作于星期日2.为什么不用两个而要用多个细胞进行动物细胞间的为什么不用两个而要用多个细胞进行动物细胞间的融合

19、？融合？就目前常用的细胞融合方法来看，不管是用物理的、化学的方法，还是生物的方法，其融合率都不可能是100%。仅用两个细胞融合，其效率太低，不一定能得到融合细胞。更重要的是，即使两个细胞已发生融合，但并不一定是研究者期望得到的细胞类型。目前动物细胞融合技术最有价值的应用就是单克隆抗体的制备。我们以制备单克隆抗体为例来说明这一问题。我们知道，体内产生的特异性抗体种类可多达百万种以上，但是每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体，如果仅取一个脾细胞（含B淋巴细胞）和一个瘤细胞杂交，我们不能确定该脾细胞分泌的抗体是否正是我们所需要的；若用大量的脾细胞和瘤细胞进行融合，就可以从融合细胞中筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。第28页，讲稿共29张，创作于星期日感感谢谢大大家家观观看看9/26/2022第29页，讲稿共29张，创作于星期日