医学免疫学实验一抗原抗体反应.ppt

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1、医学免疫学实验一抗原抗体反应现在学习的是第1页，共39页什么是抗原抗体反应？抗原与相应抗体的特异性结合反应称为抗原抗体反应。抗原抗体反应既可在体内作为体液免疫应答的效应机制自然发生，也可在体外作为免疫学实验的结果出现。在体内，可表现为溶菌、杀菌、促进吞噬或中和毒素等作用，有时亦可引起免疫病理损伤，在体外，依相应抗原物理性状(颗粒状或可溶性)以及反应的条件(电解质、补体等)不同，可出现凝集、沉淀、细胞溶解和补体结合等反应。现在学习的是第2页，共39页现在学习的是第3页，共39页抗原抗体反应的特点1.特异性 Ab 1Ab2Ab3现在学习的是第4页，共39页抗原抗体反应的特点2.比例 性抗体过剩抗体

2、过剩抗原过剩抗原过剩抗原抗体比例合适抗原抗体比例合适现在学习的是第5页，共39页抗原抗体反应的特点 3.可逆性 现在学习的是第6页，共39页体外抗原抗体反应的影响因素电电 解解 质质 温温 度度 酸酸 碱碱 度度 作用时间作用时间现在学习的是第7页，共39页抗原抗体反应类型可溶性抗原与相应抗体结合所产生的沉淀反应颗粒性抗原与相应抗体结合所发生的凝集反应抗原抗体结合后激活补体所致的细胞溶解反应细菌外毒素或病毒与相应抗体结合所致的中和反应免疫标记的抗原抗体反应。现在学习的是第8页，共39页凝集反应-ABO-ABO血型的鉴定血型的鉴定现在学习的是第9页，共39页实 验 目 的1.熟悉凝集反熟悉凝集反

3、应应的定的定义义及血型及血型鉴鉴定定实验实验的原理。的原理。2.掌握血型掌握血型鉴鉴定定实验实验的操作及的操作及结结果的正确果的正确观观察察与判断。与判断。3.了解血型了解血型鉴鉴定定实验实验的用途。的用途。现在学习的是第10页，共39页凝集反应定义：在一定浓度的电解质环境中，颗粒性抗原（红细胞、细菌、乳胶颗粒等）和相应抗体反应能够产生肉眼可见的凝集块直接凝集间接凝集间接凝集抑制试验 抗球蛋白试验现在学习的是第11页，共39页现在学习的是第12页，共39页间接凝集反应间接凝集反应现在学习的是第13页，共39页间接凝集抑制间接凝集抑制现在学习的是第14页，共39页抗球蛋白法检测IgG抗体的原理抗

4、球蛋白抗球蛋白可以和可以和IgG反应反应反应反应通过搭桥通过搭桥作用使红作用使红细胞凝集细胞凝集现在学习的是第15页，共39页概 述 血型系统 B Bl lo oo od d g gr ro ou up p s sy ys st te emm 现在学习的是第16页，共39页 1901年发现的人类第一个血型系统-ABO血型系统发现者-奥地利科学家 Karl LandsteinerABOABO血型系统的发现血型系统的发现现在学习的是第17页，共39页【实验原理】血型是指红细胞的血型，是根据红细胞膜外表面存在的特异性抗原（镶嵌于红细胞膜上的糖蛋白和糖脂）来确定的，这种抗原或凝集原是由遗传决定的+现在

5、学习的是第18页，共39页实验器材1：载玻片、采血针、牙签等2 2：A A型和型和B B型标准血清、酒精棉球型标准血清、酒精棉球现在学习的是第19页，共39页操作步骤1.取载玻片，酒精消毒正面，在背面标记A和B两区2.酒精消毒指端皮肤和采血针后，用采血针刺破皮肤，挤出少量血液，涂在玻片A、B两区，并立即用无菌干棉球压迫止血3.在两区分别滴加一滴抗A定型试剂和抗B定型试剂，立即用牙签混匀4.静置3分钟，观察凝聚现象，判定实验结果现在学习的是第20页，共39页实验结果实验结果现在学习的是第21页，共39页 ABO血型检查临床意义 1.输血：输血前必须检查血型，选择血型相同的供血者，进行交叉配血完全

6、相合才能输血。2.母婴ABO血型不合引起的新生儿溶血病，主要是依靠血型血清学检查来诊断。3.器官移植时受者与供者也必须ABO血型相符合才能移植，血型不符极易引起急性排异反应、导致移植失败。4.ABO血型与疾病之间的联系也有一些报道，某些看来造血系统无关的疾病实际上可能与红细胞血型抗原有关。现在学习的是第22页，共39页沉淀反应-对流免疫电泳对流免疫电泳现在学习的是第23页，共39页沉淀反应可溶性抗原在有适量电解质存在的条件下与相应的抗体结合，形成肉眼可见的沉淀物，称为沉淀反应类型：沉沉淀淀反反应应环状沉淀反应环状沉淀反应絮状反应絮状反应琼脂扩散琼脂扩散单向扩散单向扩散双向扩散双向扩散 电泳电泳

7、火箭电泳火箭电泳对流免疫电泳对流免疫电泳现在学习的是第24页，共39页单向扩散Ag ConcentrationDiameter2AgAgAgAgAb in gel现在学习的是第25页，共39页单向扩散现在学习的是第26页，共39页双向扩散即将抗原和抗体分别加入琼脂对应的孔中，二者会向四周扩散，在形成白色沉淀线。二者比例合适处二者比例合适处现在学习的是第27页，共39页双向扩散现在学习的是第28页，共39页现在学习的是第29页，共39页电 泳 定义：即带电颗粒在电场的作用下向着相反的电极移动，称为电泳。原理：蛋白质分子在溶液中由于其末端氨基、末端羧基及侧链的游离基团而成为带电颗粒，并可在电场内移

8、动，其移动方向取决于蛋白质分子所带静电荷。不同蛋白质分子根据其氨基酸组成及所在溶液的pH值，携带的静电荷不尽相同，致使它们在电场中的迁移率各异，从而达到分理的目的。现在学习的是第30页，共39页火箭免疫电泳现在学习的是第31页，共39页火箭免疫电泳现在学习的是第32页，共39页对流免疫电泳对流免疫电泳实质上是由电泳定向加速的双向扩散抗原在电泳时从负极向正极移动抗体由正极向负极移动现在学习的是第33页，共39页实验器材1：载玻片、打孔器、三角烧瓶、移液管、洗耳球、10%的琼脂、记号笔2 2：酒精灯、火柴、电炉、电泳仪、电泳槽：酒精灯、火柴、电炉、电泳仪、电泳槽3 3：微量加样器、抗原及抗体样品：微量加样器、抗原及抗体样品现在学习的是第34页，共39页操作步骤制板制板打孔打孔封底封底加样加样电泳电泳34ml琼脂琼脂孔间距孔间距3mm约约7ul切割火焰切割火焰23次次总电流总电流4mA/cm x 2.5cm(板宽板宽)x N(板数）板数）30分钟分钟 抗原抗原 抗体抗体现在学习的是第35页，共39页对流免疫电泳实验结果现在学习的是第36页，共39页对流免疫电泳现在学习的是第37页，共39页思 考 题1、对流免疫电泳试验中如果抗原、抗体的正极和负极放反了是否会出现沉淀线？为什么？2、抗原抗体反应检测的临床意义有哪些？现在学习的是第38页，共39页实验操作录像现在学习的是第39页，共39页