动物细胞融合与单克隆抗体 (6)讲稿.ppt

《动物细胞融合与单克隆抗体 (6)讲稿.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《动物细胞融合与单克隆抗体 (6)讲稿.ppt（30页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、关于动物细胞融合与单克隆抗体(6)第一页，讲稿共三十页哦(1)(1)(2)(3)(4)(5)回顾：植物体细胞杂交过程示意图第二页，讲稿共三十页哦A细胞细胞B细胞细胞人工诱导人工诱导杂交细胞杂交细胞 动物细胞融合（也称细胞杂交）动物细胞融合（也称细胞杂交）：是指：是指两个或多个细胞两个或多个细胞融合形融合形成一个成一个单核细胞单核细胞的过程。的过程。一、动物细胞融合概念一、动物细胞融合概念第三页，讲稿共三十页哦细胞膜的流动性细胞膜的流动性灭活的病毒、灭活的病毒、PEGPEG、电激等、电激等融合后的细胞进行有丝分裂，形融合后的细胞进行有丝分裂，形成完整的杂交细胞成完整的杂交细胞2 2、诱导的手段？

2、、诱导的手段？3 3、融合后细胞的类型？、融合后细胞的类型？4 4、ABAB杂种细胞遗传物质杂种细胞遗传物质有什么特点？有什么特点？三种三种AAAA、ABAB、BBBB含两种生物的遗传物质含两种生物的遗传物质动物细胞融合过程动物细胞融合过程1 1、原理？、原理？第四页，讲稿共三十页哦动物动物细胞融合技术的意义和应用细胞融合技术的意义和应用第五页，讲稿共三十页哦比较动、植物细胞杂交技术比较动、植物细胞杂交技术第六页，讲稿共三十页哦【例例1】能使动物细胞融合的特有的诱导因子是能使动物细胞融合的特有的诱导因子是（）A.离心离心 B.灭活的病毒灭活的病毒 C.电刺激电刺激 D.振动振动【例例2】融合后

3、的杂交细胞的遗传物质有何特点（融合后的杂交细胞的遗传物质有何特点（）A.具有原来两个或多个细胞的遗传信息具有原来两个或多个细胞的遗传信息 B.能无限增殖能无限增殖 C.可形成新个体可形成新个体 D.培养过程会贴壁培养过程会贴壁【例例3】动物细胞融合的作用中最重要的是（动物细胞融合的作用中最重要的是（）A.克服远源杂交不亲和克服远源杂交不亲和 B.制备单克隆抗体制备单克隆抗体 C.培育新物种培育新物种 D.生产杂种细胞生产杂种细胞 BBA第七页，讲稿共三十页哦抗体：能够与抗原发生特异抗体：能够与抗原发生特异性结合的性结合的免疫球蛋白免疫球蛋白。能产生抗体的细胞是能产生抗体的细胞是浆细胞浆细胞（即

4、效应（即效应B细胞）。细胞）。二、单克隆抗体二、单克隆抗体强调：强调：强调：强调：效应效应效应效应B B淋巴细胞是能够产淋巴细胞是能够产淋巴细胞是能够产淋巴细胞是能够产生抗体的生抗体的生抗体的生抗体的B B淋巴细胞，下文将淋巴细胞，下文将淋巴细胞，下文将淋巴细胞，下文将其简称为其简称为其简称为其简称为B B淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞第八页，讲稿共三十页哦抗体的传统生产方法抗体的传统生产方法抗原抗原 反复注射动物反复注射动物从动物的从动物的血清血清中分离抗体中分离抗体该法制备抗体的缺点：该法制备抗体的缺点：产量低、纯度低，且抗体的产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。特异性差、灵敏度

5、低。单克隆抗体！单克隆抗体！第九页，讲稿共三十页哦读下面一段资料，读下面一段资料，找出单克隆抗体的概念找出单克隆抗体的概念 人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B B细胞可以产生细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B B细胞只分泌一种化学性细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个个B B细胞进行无性繁殖，即克隆。细胞进行无性繁殖，即克隆。单克隆抗体的概念单克隆抗体的概念单克隆单克隆抗体：单个抗体：单个B

6、 B细胞克隆产生的细胞克隆产生的单一、特单一、特异性强异性强的抗体的抗体问题：如何大量生产单克隆抗体？请尝试设计一个方案。问题：如何大量生产单克隆抗体？请尝试设计一个方案。问题：如何大量生产单克隆抗体？请尝试设计一个方案。问题：如何大量生产单克隆抗体？请尝试设计一个方案。第十页，讲稿共三十页哦一个一个B B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖骨髓瘤细胞能无限增殖杂交瘤细胞杂交瘤细胞动物细胞培养技术动物细胞培养技术设计方案：设计方案：动物细胞融合技术动物细胞融合技术单克隆单克隆抗体抗体 既能产生特异性抗体，既能产生特异性抗体，又又能大量增殖的细胞能大量增

7、殖的细胞19751975年英国科学家年英国科学家米尔斯坦米尔斯坦和和柯勒柯勒的实验的实验第十一页，讲稿共三十页哦BBBB 、B B瘤瘤 、瘤瘤瘤瘤 （一选）（一选）选择选择性培养基性培养基：只：只有有杂交瘤细杂交瘤细胞胞才能存活才能存活获得产生相应抗获得产生相应抗体的体的B B细胞细胞（二选）：选能（二选）：选能产生所需产生所需专一专一抗体的杂交瘤抗体的杂交瘤细胞细胞体外培养体外培养体外培养体外培养小鼠腹腔内培养小鼠腹腔内培养小鼠腹腔内培养小鼠腹腔内培养杂交瘤细胞特点：杂交瘤细胞特点：既能产生特异性既能产生特异性抗体，又能大量抗体，又能大量增殖。增殖。第十二页，讲稿共三十页哦杂交杂交杂交杂交

8、细胞细胞细胞细胞灭活的病毒等手段灭活的病毒等手段灭活的病毒等手段灭活的病毒等手段培养骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞B B淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞经免疫经免疫经免疫经免疫的小鼠的小鼠的小鼠的小鼠杂交瘤杂交瘤杂交瘤杂交瘤细胞细胞细胞细胞第一次筛选第一次筛选第一次筛选第一次筛选用特定的用特定的选选择性培养基择性培养基第二次筛选第二次筛选第二次筛选第二次筛选能产生特定抗体、培养条件能产生特定抗体、培养条件能产生特定抗体、培养条件能产生特定抗体、培养条件下能无限增殖的杂交瘤细胞下能无限增殖的杂交瘤细胞下能无限增殖的杂交瘤细胞下能无限增殖的杂交瘤细胞体外培养体外培养体外培养体

9、外培养注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔提取单克隆抗体提取单克隆抗体提取单克隆抗体提取单克隆抗体第十三页，讲稿共三十页哦单克隆抗体的应用：单克隆抗体的应用：1、诊断试剂、诊断试剂最广泛应用最广泛应用准确、高效、简易、快速准确、高效、简易、快速单克隆抗体最主要的优点：单克隆抗体最主要的优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。特异性强，灵敏度高，并能大量制备。第十四页，讲稿共三十页哦“生物导弹生物导弹”单克隆抗体药物单克隆抗体药物 单抗导向，药物为弹头单抗导向，药物为弹头2、治疗疾病和运载药物、治疗疾病和运载药物 主要用于治疗主要用于治疗癌症治疗癌症治疗，单克隆抗体作为载体，

10、运载抗癌药，单克隆抗体作为载体，运载抗癌药物，形成物，形成“生物导弹生物导弹”，准确杀伤癌变细胞。准确杀伤癌变细胞。第十五页，讲稿共三十页哦两个过程两个过程动物细胞培养过程动物细胞培养过程单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程三个三个“一一”一个诱导细胞融合的新方法一个诱导细胞融合的新方法 灭活病毒灭活病毒一个新细胞杂交瘤细胞一个新细胞杂交瘤细胞一个优势单克隆抗体特异性一个优势单克隆抗体特异性 强、灵敏度高的优势强、灵敏度高的优势第十六页，讲稿共三十页哦【例例4 4】科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单合，得到杂交细胞，经培养

11、可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（）A.A.经过免疫的经过免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞 C.C.经过免疫的经过免疫的T T淋巴淋巴细胞细胞B.B.不经过免疫的不经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞 D.D.不经过免疫的不经过免疫的B B淋淋巴细胞巴细胞【例例5 5】单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的 （）A.A.B B淋巴细胞淋巴细胞 B BT T淋巴细胞淋巴细胞 C C骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞 D D杂交瘤细胞杂交瘤细胞AD第十七页，讲稿共三十页哦【例例6】用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，

12、下列实验步骤中列实验步骤中错误错误的是（的是（）A A将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B B淋巴淋巴细胞细胞B B用纤维素酶处理用纤维素酶处理B B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞C C用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的B B淋巴淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合D D筛选杂交细胞，并从中选出能产生所需抗体的筛选杂交细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体细胞群，培养后提取单克隆抗体B第十八页，讲稿共三十页哦第十九页，讲稿共三十页哦 2002年年12月月30日，日

13、，两场筹备了两场筹备了10年的年的“太空婚太空婚礼礼”首次在神舟四号飞船上举行，首次在神舟四号飞船上举行，植物细胞植物细胞“新人新人”黄花烟草黄花烟草和和革新一号烟草革新一号烟草叶肉细胞叶肉细胞原生质体原生质体，动物细胞动物细胞“新人新人”是小鼠是小鼠B淋巴细胞淋巴细胞和和骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞，两批新人同时在两批新人同时在“产房产房”电融合仪内孕育新生命。电融合仪内孕育新生命。“太空婚礼太空婚礼”这两场这两场“太空婚礼太空婚礼”实质是哪两项细胞工程技术实质是哪两项细胞工程技术植物体细胞杂交技术植物体细胞杂交技术动物细胞融合技术动物细胞融合技术第二十页，讲稿共三十页哦阅读课本阅读课本P52P52

14、及识图及识图2-232-23第二十一页，讲稿共三十页哦(1)(1)若若A A细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则B B细胞是取自小鼠体内的细胞是取自小鼠体内的 细胞，细胞，从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射_类物质。类物质。（2）d过程过程是一个是一个_过程，该过程的进行常过程，该过程的进行常用用_或或_的诱导。的诱导。(3)(3)假设仅考虑某两个细胞的融合，则可形成假设仅考虑某两个细胞的融合，则可形成 种类型种类型的的C C细胞，因此需用细胞，因此需用_培养基筛选出培养基筛选出D D细胞用于培细胞用于培养，养，D D细胞的名称是细

15、胞的名称是 ，其特点是，其特点是_。效应效应B 抗原抗原 细胞融合细胞融合 聚乙二醇聚乙二醇 灭活的病毒灭活的病毒 选择性选择性 3既能无限增殖又能产生特异性抗体既能无限增殖又能产生特异性抗体 杂交瘤细胞杂交瘤细胞第二十二页，讲稿共三十页哦(4)(4)在培养时通过在培养时通过_分裂方式大量繁殖。分裂方式大量繁殖。D D细胞体细胞体外培养需要注意的条件是（要求答外培养需要注意的条件是（要求答5 5项）项）_。（5 5）单克隆抗体在疾病的诊断、治疗和预防方面，）单克隆抗体在疾病的诊断、治疗和预防方面，与常规抗体相比，其特点是与常规抗体相比，其特点是_。特异性强、灵敏度高特异性强、灵敏度高 有丝有丝

16、有丝有丝无菌、无毒的环境；充足的营养；适宜的温度和无菌、无毒的环境；充足的营养；适宜的温度和pHpH；适宜的气；适宜的气体环境体环境 第二十三页，讲稿共三十页哦1515、（1）单克隆抗体是指）单克隆抗体是指 。（2 2）制备单克隆抗体的步骤：）制备单克隆抗体的步骤：将将_注入小鼠体内，从小鼠脾脏中获得淋巴细胞，其中注入小鼠体内，从小鼠脾脏中获得淋巴细胞，其中至少至少1 1个淋巴细胞带有抗该抗原的抗体。个淋巴细胞带有抗该抗原的抗体。将步骤将步骤获得的获得的B B淋巴细胞与步骤淋巴细胞与步骤培养的骨髓瘤细胞在培养的骨髓瘤细胞在_的诱导下融合。的诱导下融合。将诱导后产生的多种细胞，放在将诱导后产生的

17、多种细胞，放在_培养基的多孔培养培养基的多孔培养板上培养，筛选。板上培养，筛选。这样获得的杂交瘤细胞既具有这样获得的杂交瘤细胞既具有B B淋巴细胞淋巴细胞_的能力，的能力，又具有又具有_的本领。的本领。检测和分离带有抗检测和分离带有抗X X抗体的阳性细胞，培养板中每孔放一个抗体的阳性细胞，培养板中每孔放一个细胞进行培养。细胞进行培养。将阳性细胞进行增殖，从而制备出大量抗该抗原的单克隆将阳性细胞进行增殖，从而制备出大量抗该抗原的单克隆抗体。抗体。化学性质单一，特异性强的抗体化学性质单一，特异性强的抗体 抗原抗原 聚乙二醇聚乙二醇选择性选择性 无限增殖无限增殖 产生专一抗体产生专一抗体第二十四页，

18、讲稿共三十页哦（3）大量制备单克隆抗体的方法主要有两种：）大量制备单克隆抗体的方法主要有两种：体外培养法，可获得体外培养法，可获得10 g/mL的抗体；的抗体；动物体内诱生法动物体内诱生法可获得可获得520mmg/mL的抗体。你选择的方法及原因是的抗体。你选择的方法及原因是 。（4 4）用本法制备出的单克隆抗体仍具有局限性，因为它是）用本法制备出的单克隆抗体仍具有局限性，因为它是用小鼠的用小鼠的_细胞制备的，其化学本质是细胞制备的，其化学本质是_，应用于人体，会作为，应用于人体，会作为 产生产生 ，解决这个问，解决这个问题的方法是题的方法是_。大量生产选大量生产选，小规模生产选，小规模生产选效

19、应效应B蛋白质蛋白质异物异物免疫反应免疫反应采用人的效应采用人的效应B细胞制备细胞制备第二十五页，讲稿共三十页哦15、右图为某同学根据杂交瘤技术的方、右图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。据图回答：方案。据图回答：（1）该方案能达到预期效果吗？）该方案能达到预期效果吗？。原因是。原因是_。（2）图中）图中为为 过程，常过程，常用用 作为诱导剂。该细胞继作为诱导剂。该细胞继承了承了_ ，因此不仅能分泌因此不仅能分泌_，还有，还有 本领。本领。不能不能 没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生专没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生专一抗体的一抗体的B淋巴细胞淋巴细胞 细胞融合细胞融合 灭活病毒灭活病毒 双亲细胞的遗传物质双亲细胞的遗传物质 特异性抗体特异性抗体 大量增殖大量增殖制备单克隆抗体制备单克隆抗体（3）该方案的目的是）该方案的目的是_。第二十六页，讲稿共三十页哦第二十七页，讲稿共三十页哦第二十八页，讲稿共三十页哦第二十九页，讲稿共三十页哦感感谢谢大大家家观观看看9/26/2022第三十页，讲稿共三十页哦