北科大微生物培养基的配制及灭菌讲稿.ppt
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1、北科大微生物培养基的配制及灭菌第一页,讲稿共二十二页哦肉肉膏膏蛋蛋白白胨胨培培养养基基是是一一种种广广泛泛用用于于培培养养细细菌菌的的培培养养基基,属属 于于 天天 然然 培培 养养 基基(complex media,undefined media)。其其主主要要成成分分是是牛牛肉肉膏膏、蛋蛋白白胨胨和和NaCl。它它们们分分别别提提供供微微生生物物生生长长繁繁殖殖所所需需要要的的碳碳源源、氮氮源源、能源、生长因子和无机盐等。能源、生长因子和无机盐等。配配天天然然培培养养基基时时可可以以用用自自来来水水,但但自自来来水水中中常常含含Ca2,Mg2离子,可与其他成分形成沉淀离子,可与其他成分形成
2、沉淀。肉膏蛋白胨培养基肉膏蛋白胨培养基第二页,讲稿共二十二页哦高高氏氏合合成成一一号号培培养养基基是是一一种种用用于于培培养养放放线线菌菌的的合合成成培培养养基基(defined media)。培培养养基基中中的的可可溶溶性性淀淀粉粉作作为为碳碳源源和和能能源源,KNO3作作为为氮氮源源,K2HPO4、MgSO4和和FeSO4作作为为无无机机盐盐(高高价价阳阳离离子子盐盐需需单单独独灭灭菌菌后后临临用用前前与与含含磷磷酸酸盐盐的的培培养养基混匀基混匀)。)。合成培养基必须用蒸馏水合成培养基必须用蒸馏水高氏合成一号培养基高氏合成一号培养基第三页,讲稿共二十二页哦豆豆芽芽汁汁葡葡萄萄糖糖培培养养基
3、基是是培培养养酵酵母母菌菌及及霉霉菌菌的的一一种种优优良良培培养养基基,为为半半合合成成培培养养基基(semi-defined media)。培培养养基基配配方方出出现现的的自自然然pH系系指指培培养养基基不不经经酸酸、碱碱调调节节而而自自然然呈呈现现的的pH。豆芽汁葡萄糖培养基豆芽汁葡萄糖培养基第四页,讲稿共二十二页哦马马丁丁培培养养基基是是选选择择培培养养基基,属属于于半半合合成成培培养养基基,常常用用于于从从自自然然环环境境中中分分离离真真菌菌,其其中中的的孟孟加加拉拉红红能能抑抑制细菌和放线菌的生长,而对于真菌的生长则没有影响,制细菌和放线菌的生长,而对于真菌的生长则没有影响,另另外外
4、,在在使使用用前前,向向培培养养基基中中加加入入去去氧氧胆胆酸酸钠钠和和链链霉霉素素(30u/ml)。去去氧氧胆胆酸酸钠钠为为表表面面活活性性剂剂,防防止止霉霉菌菌菌菌丝丝蔓蔓延延,还还可可抑抑制制G+细细菌菌生生长长;链链霉霉素素对对多多数数G 细菌具抑制生长作用。从而达到分离真菌的目的。细菌具抑制生长作用。从而达到分离真菌的目的。马丁培养基马丁培养基第五页,讲稿共二十二页哦产葡萄糖氧化酶菌株的筛选培养基产葡萄糖氧化酶菌株的筛选培养基葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶(Glucose Oxidase,E.C.1.1.3.4,简称,简称GOD)O2+C6H12O6+H2O C6H12O7+H2O2 GO
5、D葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶在葡萄糖氧化酶在生化检测(葡萄生化检测(葡萄糖)、面粉处理糖)、面粉处理(过氧化氢对半(过氧化氢对半胱氨酸的作用形胱氨酸的作用形成二硫键)、食成二硫键)、食品保鲜(去除氧品保鲜(去除氧气)等领域具有气)等领域具有广泛应用广泛应用。第六页,讲稿共二十二页哦培养基培养基葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶平板筛选培养基平板筛选培养基(gL-1):葡葡萄萄糖糖80,蛋蛋白白胨胨3,(NH4)2HPO4 0.39,KH2PO4 0.19,MgSO47H2O 0.16,CaCO3 3.5,可可溶溶性性淀淀粉粉10,KI 1.7,脱脱氧氧胆胆酸酸钠钠0.2,琼琼脂脂20,硫硫酸酸
6、链链霉霉素素25000U。葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶第七页,讲稿共二十二页哦产葡萄糖氧化酶的微生物大多为霉菌。产葡萄糖氧化酶的微生物大多为霉菌。加入脱氧胆酸钠是为了抑制菌丝的形成加入脱氧胆酸钠是为了抑制菌丝的形成以获得不互相粘连的霉菌菌落。加入硫以获得不互相粘连的霉菌菌落。加入硫酸链霉素是为了抑制细菌的生长。葡萄酸链霉素是为了抑制细菌的生长。葡萄糖氧化酶催化葡萄糖会生成葡萄糖酸,糖氧化酶催化葡萄糖会生成葡萄糖酸,pH下降,可以通过下降,可以通过CaCO3控制培养基的控制培养基的pH,并形成透明圈。葡萄糖氧化酶催化,并形成透明圈。葡萄糖氧化酶催化葡萄糖会生成过氧化氢,可以氧化葡萄糖会生成过氧化氢,
7、可以氧化KI生成生成I,使淀粉变色,从菌落周围是否出现特异的,使淀粉变色,从菌落周围是否出现特异的淀粉蓝色圈可以判断出该菌是否产酶。淀粉蓝色圈可以判断出该菌是否产酶。第八页,讲稿共二十二页哦培养方法培养方法葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶土土壤壤霉霉菌菌分分离离:取取土土壤壤样样品品5g,加加入入95mL的的无无菌菌水水中中,200rmin-1摇床振荡摇床振荡 1h。平平板板筛筛选选培培养养:采采用用Fiedure.K.J显显色色法法。将将富富集集培培养养后后的的土土壤壤悬悬液液,按按不不同同稀稀释释度度(10-2、10-3、10-4)接接种种于于平平板板筛筛选选培培养基,养基,28培养培养3d。斜斜
8、面面培培养养:挑挑取取平平板板培培养养基基中中蓝蓝色色圈圈较较大大的的菌菌株株接接种种至至斜斜面面培培养基,养基,28恒温,培养恒温,培养4d后置于后置于4冰箱保存备用。冰箱保存备用。摇摇床床培培养养:接接种种斜斜面面保保存存的的菌菌种种于于发发酵酵培培养养基基,250mL摇摇瓶瓶50mL装装液液量,量,28恒温,恒温,200rmin-1旋转摇床,培养旋转摇床,培养2d。葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶第九页,讲稿共二十二页哦实验材料实验材料药药品品:牛牛肉肉膏膏、蛋蛋白白胨胨、NaCl、马马铃铃薯薯、蔗蔗糖糖、KNO3、K2HPO4、MgSO47H2O、FeSO47H2O、可可溶溶性性淀淀粉粉、葡葡
9、萄萄糖糖,(NH4)2HPO4、KH2PO4、CaCO3、KI、脱脱氧氧胆胆酸酸钠钠、硫硫酸酸链链霉霉素素、(NH4)2SO4、K2HPO4、KCl、琼琼脂脂等等各各种种培培养养基基的的组组成成成成分分、0.1孟孟加加拉拉红红溶液,溶液,l mol/L HCl、l mol/L NaOH。高高压压蒸蒸汽汽灭灭菌菌器器、电电热热恒恒温温干干燥燥箱箱、紫紫外外线线杀杀菌菌灯灯、电电炉炉、天平天平 其其它它:酒酒精精灯灯、试试管管、称称量量纸纸、牛牛角角匙匙、烧烧杯杯、量量筒筒、玻玻棒棒、pH试试纸纸、玻玻璃璃珠珠、三三角角瓶瓶、封封口口膜膜、无无棉棉塞塞的的空空试试管管、培培养养皿皿、各种包装纸、防
10、水纸、绳索、棉花、记号笔、标签等。各种包装纸、防水纸、绳索、棉花、记号笔、标签等。准准备备无无菌菌水水,去去离离子子水水装装于于250ml三三角角瓶瓶中中,每每瓶瓶95ml,放放置置3-5颗玻璃珠,颗玻璃珠,121灭菌灭菌30min。第十页,讲稿共二十二页哦实验内容实验内容(玻璃器皿的洗涤和包装)(玻璃器皿的洗涤和包装)1玻璃器皿的洗涤玻璃器皿的洗涤2灭菌前玻璃器皿的包装灭菌前玻璃器皿的包装(1)培养皿的包装培养皿的包装(2)三角瓶的包装三角瓶的包装第十一页,讲稿共二十二页哦过滤除菌过滤除菌抗生素等不耐热物质需要进行过滤除菌。抗生素等不耐热物质需要进行过滤除菌。滤器和容器等一般需要进行高温灭菌
11、。滤器和容器等一般需要进行高温灭菌。第十二页,讲稿共二十二页哦实验内容实验内容(液体及固体培养基的配制过程)(液体及固体培养基的配制过程)1.称称量量:按按照照配配方方正正确确称称取取各各种种原原料料(除除琼琼脂脂外外)放放于于有有刻刻度度的的烧杯中。烧杯中。2.溶化:在烧杯中加入所需水量,玻棒搅拌,加热溶解。溶化:在烧杯中加入所需水量,玻棒搅拌,加热溶解。3.定容:定容:倒入一量筒中,补水至所需体积倒入一量筒中,补水至所需体积。4.调调pH值值:滴滴加加1mol/L NaOH或或1mol/L HCl调调至至所所需需pH,用用pH试纸对照试纸对照。液体培养基配制完成!液体培养基配制完成!5.加
12、加琼琼脂脂混混匀匀:趁趁热热加加入入1.5的的琼琼脂脂搅搅匀匀。固固体体培培养养基基配配制制完成!完成!第十三页,讲稿共二十二页哦如果培养基中某种药品用量太少,可以如果培养基中某种药品用量太少,可以将其配制成较浓的溶液,然后按比例吸将其配制成较浓的溶液,然后按比例吸取一定体积溶液,加入至培养基中。取一定体积溶液,加入至培养基中。固体培养基的配制:可以在配制好的液固体培养基的配制:可以在配制好的液体培养基中加入适量的琼脂粉,灭菌。体培养基中加入适量的琼脂粉,灭菌。未冷却前取出,摇匀。未冷却前取出,摇匀。第十四页,讲稿共二十二页哦肉膏蛋白胨培养基的配制肉膏蛋白胨培养基的配制1培养基成分:培养基成分
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