免疫学检测技术 (2)讲稿.ppt
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1、关于免疫学检测技术(2)第一页,讲稿共四十四页哦 利用免疫学原理建立的检测利用免疫学原理建立的检测 技术,主要应用技术,主要应用于对多种免疫性疾病(感染性疾病、免疫缺陷病、于对多种免疫性疾病(感染性疾病、免疫缺陷病、超敏反应、自身免疫病、免疫增殖病、移植排斥反超敏反应、自身免疫病、免疫增殖病、移植排斥反应和肿瘤等)的诊断、疗效评估、发病机制探讨、应和肿瘤等)的诊断、疗效评估、发病机制探讨、以及对抗原性物质或免疫细胞的定性、定量,对细以及对抗原性物质或免疫细胞的定性、定量,对细胞因子、粘附分子及细胞受体的检测等。胞因子、粘附分子及细胞受体的检测等。第二页,讲稿共四十四页哦第一节第一节 抗原或抗体
2、的检测抗原或抗体的检测 抗原抗原-抗体直接反应包括沉淀反应、凝集反应、抗体直接反应包括沉淀反应、凝集反应、溶解反应、补体结合反应和中和反应等。溶解反应、补体结合反应和中和反应等。抗原抗原-抗体反抗体反应可应可 用已知的特异性抗体检测未知的抗原;也可用已用已知的特异性抗体检测未知的抗原;也可用已知的抗原检测未知的抗体。知的抗原检测未知的抗体。免疫荧光技术、免疫酶技术、同位素标记技免疫荧光技术、免疫酶技术、同位素标记技术、发光免疫分析等免疫标记技术提高了抗原抗体术、发光免疫分析等免疫标记技术提高了抗原抗体反应的敏感性。反应的敏感性。第三页,讲稿共四十四页哦抗原抗原-抗体反应的特点抗体反应的特点1.
3、抗原抗原-抗体的结合是特异性结合抗体的结合是特异性结合2.抗原抗体结合是分子表面的非共价键结合抗原抗体结合是分子表面的非共价键结合3.抗原抗体反应可分为两个阶段抗原抗体反应可分为两个阶段 特异性结合阶段特异性结合阶段 可见的反应阶段可见的反应阶段4.抗原和抗体结合是否呈现可见的反应现抗原和抗体结合是否呈现可见的反应现 象,于两者的分子比例密切相关象,于两者的分子比例密切相关第四页,讲稿共四十四页哦抗原抗体比例对反应现象的影响抗原抗体比例对反应现象的影响第五页,讲稿共四十四页哦抗原抗原-抗体反应受多种因素影响抗体反应受多种因素影响1 1 1 1 电解质电解质电解质电解质:抗原:抗原:抗原:抗原-
4、抗体反应通常应用抗体反应通常应用抗体反应通常应用抗体反应通常应用0.85%0.85%0.85%0.85%的氯化钠的氯化钠的氯化钠的氯化钠作为作为作为作为 稀稀稀稀 释液释液释液释液 ,以供给适应浓度的电解质。,以供给适应浓度的电解质。,以供给适应浓度的电解质。,以供给适应浓度的电解质。2 2 2 2 温度温度温度温度:一般常使用反应在:一般常使用反应在:一般常使用反应在:一般常使用反应在37373737度水浴度水浴度水浴度水浴 或孵育箱中进或孵育箱中进或孵育箱中进或孵育箱中进 行。行。行。行。3 3 3 3.酸碱度酸碱度酸碱度酸碱度:抗原:抗原:抗原:抗原-抗体反应适应的酸碱度抗体反应适应的酸
5、碱度抗体反应适应的酸碱度抗体反应适应的酸碱度 为为为为PH68PH68PH68PH68。第六页,讲稿共四十四页哦抗原抗体的检测方法抗原抗体的检测方法凝集反应凝集反应沉淀反应沉淀反应补体溶血反应补体溶血反应 和补体结合反应和补体结合反应中和反应中和反应用标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应用标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应第七页,讲稿共四十四页哦凝集反应凝集反应(Agglutination)Agglutination)细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后形成凝集细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后形成凝集细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后形成凝集细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后
6、形成凝集 现象,称为凝聚反应。现象,称为凝聚反应。现象,称为凝聚反应。现象,称为凝聚反应。1 1 1 1、直接凝集:将细菌或红细胞与相应的抗体直接、直接凝集:将细菌或红细胞与相应的抗体直接、直接凝集:将细菌或红细胞与相应的抗体直接、直接凝集:将细菌或红细胞与相应的抗体直接反应,出现细菌凝集或红细胞凝集现象。又分为玻片法反应,出现细菌凝集或红细胞凝集现象。又分为玻片法反应,出现细菌凝集或红细胞凝集现象。又分为玻片法反应,出现细菌凝集或红细胞凝集现象。又分为玻片法和试管法。和试管法。和试管法。和试管法。2 2 2 2、间接凝集:将可溶性抗原包被在红细胞或乳胶、间接凝集:将可溶性抗原包被在红细胞或乳
7、胶、间接凝集:将可溶性抗原包被在红细胞或乳胶、间接凝集:将可溶性抗原包被在红细胞或乳胶颗粒表面,与相应抗体反应出现颗粒凝集现象。颗粒表面,与相应抗体反应出现颗粒凝集现象。颗粒表面,与相应抗体反应出现颗粒凝集现象。颗粒表面,与相应抗体反应出现颗粒凝集现象。第八页,讲稿共四十四页哦血血 球球 凝凝 集集第九页,讲稿共四十四页哦沉淀反应沉淀反应(Precipitation)血清蛋白质、细胞裂解液或组织浸液等可溶性抗原与相应血清蛋白质、细胞裂解液或组织浸液等可溶性抗原与相应血清蛋白质、细胞裂解液或组织浸液等可溶性抗原与相应血清蛋白质、细胞裂解液或组织浸液等可溶性抗原与相应抗体结合后出现沉淀物,这一类反
8、应称为沉淀反应。沉淀反应可抗体结合后出现沉淀物,这一类反应称为沉淀反应。沉淀反应可抗体结合后出现沉淀物,这一类反应称为沉淀反应。沉淀反应可抗体结合后出现沉淀物,这一类反应称为沉淀反应。沉淀反应可在液体中进行,如絮状沉淀。大多沉淀反应是用半固体琼脂凝胶在液体中进行,如絮状沉淀。大多沉淀反应是用半固体琼脂凝胶在液体中进行,如絮状沉淀。大多沉淀反应是用半固体琼脂凝胶在液体中进行,如絮状沉淀。大多沉淀反应是用半固体琼脂凝胶为介质,进行琼脂扩散故也称免疫扩散。为介质,进行琼脂扩散故也称免疫扩散。为介质,进行琼脂扩散故也称免疫扩散。为介质,进行琼脂扩散故也称免疫扩散。第十页,讲稿共四十四页哦单向免疫扩散单
9、向免疫扩散(Single Immunodiffusion)Single Immunodiffusion)是将一定量已知抗体混于琼是将一定量已知抗体混于琼是将一定量已知抗体混于琼是将一定量已知抗体混于琼脂凝胶中制琼脂板,在适当脂凝胶中制琼脂板,在适当脂凝胶中制琼脂板,在适当脂凝胶中制琼脂板,在适当位置打孔后将抗原加入孔中位置打孔后将抗原加入孔中位置打孔后将抗原加入孔中位置打孔后将抗原加入孔中扩散。抗原在扩散过程中与扩散。抗原在扩散过程中与扩散。抗原在扩散过程中与扩散。抗原在扩散过程中与凝胶中的抗体相遇,形成以凝胶中的抗体相遇,形成以凝胶中的抗体相遇,形成以凝胶中的抗体相遇,形成以抗原孔为中心的沉
10、淀环,环抗原孔为中心的沉淀环,环抗原孔为中心的沉淀环,环抗原孔为中心的沉淀环,环的直径与抗原含量成正比相的直径与抗原含量成正比相的直径与抗原含量成正比相的直径与抗原含量成正比相关。本法常用于测定血清关。本法常用于测定血清关。本法常用于测定血清关。本法常用于测定血清IgGIgG、IgMIgM、IgA IgA 和和和和 C C 3 3等的含量。等的含量。等的含量。等的含量。含抗体的凝胶含抗体的凝胶沉淀环沉淀环第十一页,讲稿共四十四页哦双向免疫扩散双向免疫扩散 (Double Immunodiffusion)Double Immunodiffusion)是将抗原与抗体分别加入琼脂是将抗原与抗体分别加
11、入琼脂是将抗原与抗体分别加入琼脂是将抗原与抗体分别加入琼脂凝胶的小孔中,二者自由向周凝胶的小孔中,二者自由向周凝胶的小孔中,二者自由向周凝胶的小孔中,二者自由向周围扩散并相遇,在比例合适处围扩散并相遇,在比例合适处围扩散并相遇,在比例合适处围扩散并相遇,在比例合适处形成沉淀线。如果反应体系中形成沉淀线。如果反应体系中形成沉淀线。如果反应体系中形成沉淀线。如果反应体系中含两种以上的抗原抗体系统,含两种以上的抗原抗体系统,含两种以上的抗原抗体系统,含两种以上的抗原抗体系统,则小孔间可出现两条以上的沉则小孔间可出现两条以上的沉则小孔间可出现两条以上的沉则小孔间可出现两条以上的沉淀线。本法常用于抗原或
12、抗体淀线。本法常用于抗原或抗体淀线。本法常用于抗原或抗体淀线。本法常用于抗原或抗体的定性的定性的定性的定性 、组成和两种抗原相关、组成和两种抗原相关、组成和两种抗原相关、组成和两种抗原相关性分析的检测。性分析的检测。性分析的检测。性分析的检测。第十二页,讲稿共四十四页哦免疫电泳免疫电泳(Immunoelectrophoresis)Immunoelectrophoresis)是先将待侧血清标本作琼脂凝胶电是先将待侧血清标本作琼脂凝胶电是先将待侧血清标本作琼脂凝胶电是先将待侧血清标本作琼脂凝胶电泳,血清中各蛋白组分被分成不同泳,血清中各蛋白组分被分成不同泳,血清中各蛋白组分被分成不同泳,血清中各蛋
13、白组分被分成不同的区带,然后与电泳方向平行挖一的区带,然后与电泳方向平行挖一的区带,然后与电泳方向平行挖一的区带,然后与电泳方向平行挖一小槽,加入相应的抗血清,把分成小槽,加入相应的抗血清,把分成小槽,加入相应的抗血清,把分成小槽,加入相应的抗血清,把分成区带的蛋白抗原成分作双向免疫扩区带的蛋白抗原成分作双向免疫扩区带的蛋白抗原成分作双向免疫扩区带的蛋白抗原成分作双向免疫扩散,在各区带相应的位置形成沉淀散,在各区带相应的位置形成沉淀散,在各区带相应的位置形成沉淀散,在各区带相应的位置形成沉淀弧。该法常用于血清蛋白种类分析,弧。该法常用于血清蛋白种类分析,弧。该法常用于血清蛋白种类分析,弧。该法
14、常用于血清蛋白种类分析,以观察以观察以观察以观察Ig Ig的异常增多或缺失。的异常增多或缺失。的异常增多或缺失。的异常增多或缺失。第十三页,讲稿共四十四页哦火箭电泳火箭电泳(Rocket Electrophoresis)火箭电泳,是把单向免疫扩散同电泳结合在火箭电泳,是把单向免疫扩散同电泳结合在一起的方法。抗原在含有定量抗体的琼脂中泳动,一起的方法。抗原在含有定量抗体的琼脂中泳动,两者比例适宜时,在较短时间内生成锥形的沉淀峰两者比例适宜时,在较短时间内生成锥形的沉淀峰。在一定浓度范围内,沉淀峰的高度与抗原含量成。在一定浓度范围内,沉淀峰的高度与抗原含量成正比。正比。此法的特点是需时较短,故可用
15、于快速沉淀标此法的特点是需时较短,故可用于快速沉淀标本中抗原的含量。本中抗原的含量。第十四页,讲稿共四十四页哦火箭电泳示意图火箭电泳示意图第十五页,讲稿共四十四页哦补体结合反应补体结合反应(Complement Fixation,CFT)敏感性和特异性均较高,但该试验影响因素较敏感性和特异性均较高,但该试验影响因素较多,现在已有被其它新方法取代的趋势。多,现在已有被其它新方法取代的趋势。第十六页,讲稿共四十四页哦免疫标记技术免疫标记技术 用荧光素、同位素或酶等示踪物质用荧光素、同位素或酶等示踪物质用荧光素、同位素或酶等示踪物质用荧光素、同位素或酶等示踪物质 标记抗体标记抗体标记抗体标记抗体(或
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