实验二显微镜的使用酵母菌的观察细菌的单染色及简单染色.ppt

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1、关于实验二显微镜的关于实验二显微镜的使用酵母菌的观察细使用酵母菌的观察细菌的单染色及简单染菌的单染色及简单染色色现在学习的是第1页，共31页一、目的要求一、目的要求了解普通光学显微镜了解普通光学显微镜(复式显微镜复式显微镜)的构造、基的构造、基本原理、维护和保养的方法本原理、维护和保养的方法学习并掌握普通光学显微镜的正确使用方法学习并掌握普通光学显微镜的正确使用方法现在学习的是第2页，共31页二、光学显微镜的基本结构二、光学显微镜的基本结构机械和支架系机械和支架系统照明系照明系统光学放大系光学放大系统现在学习的是第3页，共31页现在学习的是第4页，共31页三、油镜的工作原理三、油镜的工作原理增

2、加照明亮度增加照明亮度增加增加显微微镜的分辨率的分辨率现在学习的是第5页，共31页显微微镜的分辨率：的分辨率：显微微镜能辨能辨别两点之两点之间的最小距离的能力。的最小距离的能力。D=/2NA=/2nsin(/2)D：分辨率：分辨率NA：物：物镜的数的数值孔径孔径值：可：可见光的波光的波长（平均（平均0.550.55 m)m)n:n:物物镜和被和被检标本本间介介质的折射率的折射率：镜口角（即入射角）口角（即入射角）现在学习的是第6页，共31页四、显微镜的使用方法四、显微镜的使用方法观察前的准察前的准备显微微镜的安置的安置光源光源调节根据个人情况，根据个人情况，调节双筒双筒显微微镜的目的目镜 右眼

3、看清右眼看清调节左目左目镜的的视度度调节圈圈扳扳动镜管，管，调节至瞳孔至瞳孔间距距现在学习的是第7页，共31页显微微观察察低倍低倍镜观察察高倍高倍镜观察（察（同焦同焦现象象）油油镜观察察在待在待观察的察的样品区域滴加香柏油，从品区域滴加香柏油，从侧面注面注视，用，用粗粗调节器将器将载物台物台缓慢上升，使油慢上升，使油镜浸在浸在镜油中。油中。现在学习的是第8页，共31页显微微镜用用毕后的后的处理理下降下降载物台，取下物台，取下载玻片；玻片；用擦用擦镜纸拭去拭去镜头上的上的镜油，然后用擦油，然后用擦镜纸沾取少量沾取少量酒精乙酒精乙醚洗液擦去洗液擦去镜头上残留的油迹，最后用干上残留的油迹，最后用干净

4、的的擦擦镜纸擦去残留的洗液；擦去残留的洗液；用擦用擦镜纸清清洁物物镜及目及目镜，用，用绸布清布清洁显微微镜的金属的金属部件；部件；将将镜体各部分复原。体各部分复原。现在学习的是第9页，共31页五、思考题五、思考题用油用油镜观察察时应注意哪些注意哪些问题？在？在载玻片和玻片和镜头之之间滴加滴加香柏油有何作用？香柏油有何作用？什么是物什么是物镜的同焦的同焦现象？它在象？它在显微微镜观察中有什么意察中有什么意义？影响影响显微微镜分辨率的因素有哪些？分辨率的因素有哪些？P47五、五、2.（）（）（3）（）（4）现在学习的是第10页，共31页（二）酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别（二）酵母菌的形态观察及

5、死活细胞的鉴别目的要求目的要求观察酵母菌的形态及出芽生殖方式。观察酵母菌的形态及出芽生殖方式。学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。现在学习的是第11页，共31页基本原理基本原理 美蓝是一种无毒性染料美蓝是一种无毒性染料.氧化型呈现蓝色氧化型呈现蓝色,还还原型呈现无色原型呈现无色.用美蓝对酵母的活细胞进行染色用美蓝对酵母的活细胞进行染色,代谢活力强的细胞具有较强的还原能力代谢活力强的细胞具有较强的还原能力,能使美蓝由能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型蓝色的氧化型变为无色的还原型.因此因此,具有还原能具有还原能力的酵母活细胞为无色力的酵母活细胞为无色,死细胞或代

6、谢能力弱的衰老死细胞或代谢能力弱的衰老细胞为蓝色细胞为蓝色.现在学习的是第12页，共31页实验器材实验器材菌种菌种啤酒酵母啤酒酵母溶液或试剂溶液或试剂 0.1%0.1%吕氏碱性美蓝染色液吕氏碱性美蓝染色液仪器或其他用具仪器或其他用具显微镜，盖玻片，载玻片，滤纸，擦镜纸。显微镜，盖玻片，载玻片，滤纸，擦镜纸。现在学习的是第13页，共31页实验步骤实验步骤制片制片在载玻片中央加一滴在载玻片中央加一滴0.1%0.1%美蓝美蓝取菌少许取菌少许混匀混匀盖上盖玻片盖上盖玻片静置静置3min3min、0.5h0.5h观察观察用高倍镜观察酵母的形态和出芽生殖用高倍镜观察酵母的形态和出芽生殖根据颜色鉴别死活细胞

7、根据颜色鉴别死活细胞活细胞：无色；死细胞：蓝色活细胞：无色；死细胞：蓝色现在学习的是第14页，共31页实验结果实验结果绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征及出芽绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征及出芽生殖方式。生殖方式。记录染色时间对酵母菌死活细胞数量的影响记录染色时间对酵母菌死活细胞数量的影响P75表表-1。现在学习的是第15页，共31页思考题思考题吕氏碱性美蓝染色液作用时间的不同，对酵母吕氏碱性美蓝染色液作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响？试分析其原因。菌死细胞数量有何影响？试分析其原因。现在学习的是第16页，共31页调节手动光轮调节孔径光阑手柄聚光器的升降现在学习的是第17页，

8、共31页镜头复原、手动光轮调到最低档现在学习的是第18页，共31页细菌的单染色及革兰氏染色细菌的单染色及革兰氏染色现在学习的是第19页，共31页（一）简单染色法（一）简单染色法目的要求目的要求学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的简学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的简单染色法；单染色法；巩固显微镜（油镜）的使用方法和无菌操作技术。巩固显微镜（油镜）的使用方法和无菌操作技术。基本原理基本原理借助物理因素（如：细胞及细胞物质对染料的毛细借助物理因素（如：细胞及细胞物质对染料的毛细现象、渗透、吸附作用等）和化学因素（如：正负现象、渗透、吸附作用等）和化学因素（如：正负离子之间的相互吸引等

9、）的作用而进行的。离子之间的相互吸引等）的作用而进行的。现在学习的是第20页，共31页实实验器材验器材菌种菌种土壤样品分离纯化后得到的细菌土壤样品分离纯化后得到的细菌染色剂染色剂草酸铵结晶紫染液草酸铵结晶紫染液番红染液番红染液仪器或其他用具仪器或其他用具显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、无菌水等。显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、无菌水等。现在学习的是第21页，共31页操操作作步步骤骤涂涂 片片干干 燥燥固固 定定 染染 色色 镜镜 检检 水水 洗洗 干干 燥燥现在学习的是第22页，共31页实验结果实验结果根据观察结果，绘出细菌形态图。根据观察结果，绘出细菌形态图。思考题思考题（P76P76五、五

10、、2.2.（）（）（2 2）（）（3 3）在进行细菌涂片时应注意哪些环节？在进行细菌涂片时应注意哪些环节？细菌制片时为什么要进行加热固定？在加热固定细菌制片时为什么要进行加热固定？在加热固定时应注意什么？时应注意什么？为什么要求制片完全干燥后才能用油镜观察？为什么要求制片完全干燥后才能用油镜观察？现在学习的是第23页，共31页（二）革兰氏染色法（二）革兰氏染色法目的要求目的要求学习并初步掌握革兰氏染色法；学习并初步掌握革兰氏染色法；了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。性。实验器材实验器材菌种菌种枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌12-18h

11、12-18h营养琼脂斜面培养物营养琼脂斜面培养物大肠杆菌约大肠杆菌约24h24h营养琼脂斜面培养物营养琼脂斜面培养物土壤样品分离纯化后得到的细菌土壤样品分离纯化后得到的细菌现在学习的是第24页，共31页染色剂染色剂草酸铵结晶紫染液草酸铵结晶紫染液卢戈氏碘液卢戈氏碘液95%95%乙醇乙醇番红染色液番红染色液仪器或其他用具仪器或其他用具显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、无菌水等。显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、无菌水等。现在学习的是第25页，共31页操操作作步步骤骤采用三区涂片法制片采用三区涂片法制片大肠杆菌大肠杆菌枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌大肠杆菌与枯草芽孢杆菌大肠杆菌与枯草芽孢杆菌混合涂片混合涂片

12、现在学习的是第26页，共31页操操作作步步骤骤现在学习的是第27页，共31页大肠杆菌与枯草芽孢杆菌混合涂片油镜下形态（革兰氏染色）大肠杆菌萌发芽孢的枯草芽孢杆菌现在学习的是第28页，共31页实验结果实验结果列表说明你所观察到的细菌形状、颜色和革兰列表说明你所观察到的细菌形状、颜色和革兰氏染色反应。氏染色反应。菌菌 种种 形形 态态 颜颜 色色 结果（结果（、）现在学习的是第29页，共31页思考题思考题你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？其中最关键的环节是什么？在革兰氏染色时，为什么特别强调菌龄不能太老，用在革兰氏染色时，为什么特别强调菌龄不能太老，用老龄细菌染色会出现什么问题？老龄细菌染色会出现什么问题？你认为革兰氏染色中，哪一个步骤可以省去而不影你认为革兰氏染色中，哪一个步骤可以省去而不影响最终结果？在什么情况下可以采用？响最终结果？在什么情况下可以采用？现在学习的是第30页，共31页感谢大家观看现在学习的是第31页，共31页