免疫组化结果分析和判断课件.ppt
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1、关于免疫组化结果分析和判关于免疫组化结果分析和判断断现在学习的是第1页，共44页第一节第一节 免疫组化结果的判断原则免疫组化结果的判断原则 免疫组化结果的判断原则概括起来有以下几免疫组化结果的判断原则概括起来有以下几点：点：现在学习的是第2页，共44页 必必须须同同时时设设对对照照染染色色。没没有有对对照照染染色色的的免疫组化染色结果是不可信的。免疫组化染色结果是不可信的。抗抗原原表表达达必必须须在在特特定定部部位位。如如LCALCA应应定定位在细胞膜上；位在细胞膜上；CKCK应定位在细胞浆内；应定位在细胞浆内；PCNAPCNA及及p53p53蛋蛋白白应应定定位位在在细细胞胞核核内内；EMAE
2、MA应应定定位位在在细细胞胞膜膜上上，等等等等。不不在在抗抗原原所所在在部部位位的的阳阳性性着色，一概不能视为阳性。着色，一概不能视为阳性。现在学习的是第3页，共44页 阴阴性性结结果果不不能能视视为为抗抗原原不不表表达达。由由于于检检测测方方法法灵灵敏敏度度有有高高低低之之分分，有有时时可可因因染染色色方方法法灵灵敏敏度度不不够够，而而导导致致阴阴性性反反应应，判判断断时时应应注意。注意。现在学习的是第4页，共44页 尽尽量量避避开开出出血血、坏坏死死及及切切片片刀刀痕痕和和界界面面边边缘缘细细胞胞的的阳阳性性表表达达，特特别别是是酶酶免免疫疫标标记记。因因为为这这类类阳阳性性着着色色多多系
3、系内内源源干干扰扰，或系人为因素所致。或系人为因素所致。现在学习的是第5页，共44页 对对免免疫疫组组化化标标记记结结果果的的意意义义不不能能绝绝对对化化，应应结结合合临临床床资资料料、X X线线等等影影像像学学及及实实验结果综合分析。验结果综合分析。现在学习的是第6页，共44页 第二节第二节 对照染色设计对照染色设计 现在学习的是第7页，共44页(一）对照染色的目的一）对照染色的目的 设设对对照照的的目目的的是是为为了了排排除除假假阴阴性性和和假假阳阳性性。假假阴阴性性的的原原因因主主要要有有三三：组组织织处处理理不不当当，抗抗原原丢丢失失过过多多或或被被遮遮蔽蔽；抗抗体体失失活活、效效价价
4、过过低低或或稀稀释释度度不不合合适适（主主要要指指一一抗抗，即即特特异异性性抗抗体体）；染染色色步步骤骤遗遗漏漏及及差差错错，或或显显色色剂剂的的选选择、缓冲液的择、缓冲液的pHpH和离子强度不当等。和离子强度不当等。现在学习的是第8页，共44页 假阳性均系由多种因素造成的非特异着假阳性均系由多种因素造成的非特异着色所致，原因主要有：色所致，原因主要有：自发荧光或内源酶等自发荧光或内源酶等干扰；干扰；抗体试剂不纯抗体试剂不纯(特别是一抗）；特别是一抗）；操作操作失误，如污染、切片干枯或显色剂操作不当等；失误，如污染、切片干枯或显色剂操作不当等；Fc受体的干扰，等等。受体的干扰，等等。现在学习的
5、是第9页，共44页（二）对照的种类及其选用目的（二）对照的种类及其选用目的 对对照照染染色色大大致致可可分分为为阳阳性性组组织织对对照照、阴性组织及阴性试剂对照和自身对照四大类：阴性组织及阴性试剂对照和自身对照四大类：现在学习的是第10页，共44页阳阳性性组组织织对对照照 指指用用已已证证实实含含有有靶靶抗抗原原的的同同源源及及不不同同源源组组织织切切片片或或细细胞胞涂涂片片与与待待检检实实验验切切片片同同时时作作同同样样处处理理和和免免疫疫染染色色的的组组织织对对照照。正正确确的的结结果果应应呈呈现现阳阳性性，目目的的是是为为了了证证实实所所用用免免疫组化染色流程的有效性，排除假阴性的可能。
6、疫组化染色流程的有效性，排除假阴性的可能。现在学习的是第11页，共44页阴阴性性组组织织对对照照 指指用用已已证证实实不不含含靶靶抗抗原原的的同同步步处处理理和和免免疫疫标标记记染染色色的的组组织织对对照照。正正确确的的结结果果应应为为阴阴性性，目目的的是是除除外假阳性。外假阳性。现在学习的是第12页，共44页阴阴性性试试剂剂对对照照 是是指指用用于于证证实实在在免免疫疫组组化化染染色色中中所所用用试试剂剂，尤尤其其是是特特异异性性抗抗体体试试剂剂的的有有效效性性和和可可靠靠性性而而所所设设立立的的同同步步免免疫疫染染色色对对照照，包包括括有有：空空白白对对照照；替替代代对对照照；吸吸收收试试
7、验验和和抑抑制制试试验验，等等。目目的的在在于于除除外外假假阳阳性性和和证证实实所所用用免免疫疫组组化化试试剂剂及及其其技技术术方方法法的的有有效效性性和和待待检检实实验验切切片片免免疫疫标标记记阳阳性性结结果果的的可可靠性。靠性。现在学习的是第13页，共44页空空白白对对照照 指指以以缓缓冲冲液液（PBS、TBS等等）取取代代第第一一抗抗体体（主主要要的的，必必要要时时还还可可做做第第二二抗抗体体及及桥桥联联抗抗体体的的空空白白取取代代），其其他他各各步不变的试剂对照染色，结果应为阴性。步不变的试剂对照染色，结果应为阴性。现在学习的是第14页，共44页取取代代对对照照 指指以以所所用用方方法
8、法第第一一抗抗体体同同源源动动物物的的正正常常血血清清，或或与与本本实实验验无无关关的的抗抗体体(靶靶生生物物缺缺如如的的)取取代代第第一一抗抗体体，其其他他步步骤骤不不变变的的试试剂剂对对照照染染色，结果应为阴性。色，结果应为阴性。吸吸收收试试验验 是是指指用用事事先先经经过过量量抗抗原原吸吸收收的的第第一一抗抗体体上上清清液液取取代代第第一一抗抗体体，其其他他步步骤骤不不变变的的免免疫疫染染色色试试剂剂对对照照。结结果果应应是是阴阴性性或或阳阳性性着色明显减弱（吸收不全时）。着色明显减弱（吸收不全时）。现在学习的是第15页，共44页抑抑制制试试验验 是是指指用用标标记记抗抗体体和和未未标标
9、记记抗抗体体（可可以以是是一一抗抗，也也可可以以是是二二抗抗或或桥桥抗抗体体）两两者者的的混混合合物物作作试试剂剂，其其他他步步骤骤不不变变的的免免疫疫组组化化染染色色试试剂剂对对照照，结结果果其其阳阳性性着着色色应应成成比比例例的的减减弱弱（等等量量或或1：9）。此此试试剂剂对对照照多多用用于直接法。于直接法。现在学习的是第16页，共44页 这这类类阴阴性性试试剂剂对对照照的的选选用用原原则则是是：空空白白对对照照不不能能省省，其其他他对对照照在在预预实实验验中中应应尽尽量量多多做做，尤尤其其是是应应用用新新抗抗体体试试剂剂；对对照照必必需需与与实实验验片片同同步步进进行行染染色色；对对照照
10、的的结结果果应应附合要求。附合要求。现在学习的是第17页，共44页自自身身对对照照 是是指指在在同同一一标标记记切切片片上上的的自自身身组组织织成成分分的的阴阴性性背背景景对对照照。即即与与靶靶抗抗原原阳阳性性反反应应细细胞胞或或成成分分相相邻邻的的阴阴性性背背景景结结构构的的显显色色，结结果果应应为为阴阴性性或或着着色色较较浅浅，需需与与阳阳性性着着色色成成分分呈呈鲜鲜明明对对比比。目目的的在在于于排排除除内内源源性性干干扰扰产产生生的的假假阳阳性性和和因因抗抗原原弥弥散散移移位造成的错误结果。位造成的错误结果。现在学习的是第18页，共44页 第三节第三节 非特异染色非特异染色 现在学习的是
11、第19页，共44页 非特异染色是指免疫组化染色过程中产非特异染色是指免疫组化染色过程中产生的非靶抗原的呈色结果，属假阳性，又生的非靶抗原的呈色结果，属假阳性，又称背景着色，能严重干扰免疫组化染色结称背景着色，能严重干扰免疫组化染色结果的正确判断，应竭力避免或减轻。其原果的正确判断，应竭力避免或减轻。其原因涉及免疫组化染色流程的各个环节，可因涉及免疫组化染色流程的各个环节，可来自：来自：现在学习的是第20页，共44页内内源源性性干干扰扰(自自发发荧荧光光、内内源源酶酶、内内源源性性生生物物素素等等)；试试剂剂污污染染(质质量量差差，交交叉叉反反应应，Fc受受体体干干扰扰等等)；组组织织处处理理不
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