多种肿瘤标志物蛋白芯片在肺癌中的检测.pdf

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1、多种肿瘤标志物蛋白芯片在肺癌中的检测 及其应用价值 王 伟 汪安兰，文晓萍(湖南省肿瘤医院，湖南 长沙 4 1 0 0 0 6)摘 要：目的 探讨多种肿瘤标志物蛋 F 1 片检测 系统(C 1 2)在鉴别肺癌的I 临床分期、病理类 型和预后评估中的价值。方法应用该芯片检测系统测定 1 4 3例肺癌病人血清中 1 2种肿瘤 标 志 物(C A1 9 9，N S E，C E A，C A2 4 2，F e，H C G，AF P，F r e e l o S A，P S A，C A1 2 5，H GH，C A1 5 3)的 水平。结果 不同病理类型的肺癌之间各项肿瘤标志物的阳性率、血清水平和 C 1 2

2、总阳性率 均无显著性差异：不同分期的肺癌之间 C 一 1 2总阳性率无显著性差异，但 C A1 9 9阳性率及血 清水平存在显著性差异(P O 0 5)，而其他各项肿瘤标志物的阳性率及血清水平均无显著性差 异。结论 肺癌组织能够产生 C A1 9 9，C Al 9 9与肺癌的I临床分期有一定的相关性。该检测系 统在鉴别肺癌的I瞄床分期、病理类型和预后评估方面价值有限，尚需作某些肿瘤标志物的增 减以便更有效地指导I晦床。主题词：肺肿瘤；肿瘤标记，生物学；蛋门芯片 中图分 类号：R 7 3 0 4：R7 3 4 2 文献标 识 码：A 文章编 号：1 6 7 1 1 7 0 X(2 0 0 5)0

3、 1 0 0 0 9 0 4 Mu l t i p l e Tu mo r Ma r k e r s Pr o t e i n Bi o c h i p i n De t e c t i o n o f Lu n g Ca n c e r a n d i t s Ap p l i c a t i o n Va l u e W ANG W e i，W ANG An-l a n，W EN Xi a o-p i n g (Hu n a n T u mo r Ho s p i t a l，C h a n g s h a 4 1 0 0 0 6，C h i n a)Ab s t r a c t：l P

4、u r p o s e lT o e v a l u a t e t h e v a l u e o f d e t e c t i v e s y s t e m(C 一 1 2)o f mu l t i p l e t u mo r m a r k e r s p r o t e i n b i o c h i p f o r c l i n i c a l s t a g i n g，p a t h o l o g i c c l a s s i fi c a t i o n a n d p r o g n o s t i c e v a l u a t i o n i n l u n

5、g c a n c e r Me t h o d s 1 P r o t e i n C h i p A r r a y t e c h n o h)g y w a s u s e d t o d e t e c t t h e s e r u m l e v e l s o f 1 2 t u m o r ma r k e r s，i n c l u d i n g C Al 9 9，NS E，CEA，CA2 4 2，F e，HCG，AF P，F r e e P S A CA1 2 5，HGH a n d C A1 5 3 i n 1 4 3 c a s e s w i t h l u n

6、g c a n c e r R e s u l t s 1 T h e r e w a s n o s i g n i fi c a n t l y d i f f e r e n c e i n t o t a l p o s i t i v e r a t e a n d s e ru m l e v e l s o f C一 1 2 a mo n g d i f f e r e n t p a t h o l o g i c t y p e s a n d s t a g e s o f l u n g c a n c e r Th e r e w a s s i g n i fi c

7、a n t l y d i f f e r e n c e i n t h e p o s i t i v e r a t e a n d s e rum l e v e l o f CA 1 9 9 a mo n g v a rio u s c l i n i c a l s t a g e s(尸l 0 0 5)，a n d t h e t o t a l p o s i t i v e r a t e o f C 一 1 2 a n d t h e p o s i t i v e r a t e a n d s e rum l e v e l s o f o t h e r t u mo

8、 r ma r k e r s w e r e s i mi l a r i n d i f f e r e n t s t a g e s o f l u n g c a n c e r C o n c l u s i o n 1 C A 1 9 9 c a n b e c r e a t e d b y h u ma n l u n g c a n c e r t i s s u e s a n d i t s s e rum l e v e l c o r r e l a t e s wi t h c l i n i c a l s t a g e s o f l u n g c a n

9、 c e r T h e d e t e c t i v e s y s t e m o f mu l t i p l e t u mo r ma r k e rs p r o t e i n b i o c h i p h a s l i mi t e d a p p l i c a t i o n for c l i n i c a l s t a g i n g，p a t h o l o g i c c l a s s i fic a t i o n a n d p r o g n o s t i c e v a l u a t i o n i n p a t i e n t s wi

10、 t h l u n g c a n c e r S u b j e c t w o r d s：l u n g n e o p l a s ms；t u mo r ma r k e r b i o l o g i c a l；p r o t e i n b i o c h i p 多种肿瘤标志物 蛋 白芯片检测 系统现 已经开始 广泛应用 于临床，但该检 测系统 在鉴S fJ H*癌 的临床 分期、病理类型和预后评估中究竟有多少价值，目前 收稿 日期：2 0 0 4 1 1 2 9 相关报道较 为少见。本 实验利用 蛋 白芯 片技 术 同时 检测 1 4 3例 肺 癌患 者 血 清 中糖 链

11、 抗 原 1 9 9(c a r b o h y d r a t e a n t i g e n 1 9-9，C A1 9-9)、神经元特 异性烯 醇化 酶n e u r o n-s p e c i fi c e n o l a s e，N S E)、癌 胚 抗 原(c a r c i n o e mb r y o n i c a n t i g e n，C E A)、糖 链抗 原 2 4 2(c a r b o h y 9 维普资讯 http:/ J o u r n a l o f On c o l o g y d r a t e a n t i g e n 2 4 2 C A 2 4 2)

12、、铁蛋 白(f e r r i t i n，F e)、人绒 毛 膜 促 性 腺 激 素(h u ma n c h o r i o n i c g o n a g o t r o p i n，HC G)、甲胎 蛋 白(a l p h a f e t o p r o t e i n，A F P)、游 离 型前 列腺特异性 抗原(f r e e p r o s t a t e s p e c i fi c a n t i g e n，F P S A)、前 列 腺 特 异 性 抗 原(p r o s t a t e s p e c i fi c a n t i g e n，P s A)、癌抗原 1 2

13、 5(c a n c e r a n t i g e n 1 2 5，C A1 2 5)、生长 激 素(h u m a n g r o w t h h o r mo n e，HG H)、癌 抗 原 1 5 3 (c a n c e r a n t i g e n 1 5 3 C A1 5 3)1 2种肿 瘤 标 志物 水 平 并分析其 与疾病 病理类 型及分期 的关 系，旨在探 讨该检 测系统在鉴别肺 癌 的临床 分期、病理 类型 和 预后评估 中的价值。1 资料与方法 1 1 检 测对象 收集 自 2 0 0 3年 3月至 2 0 0 4年 8月我院初诊 患 者，均 经 细胞学 或 组织 学

14、证 实 为肺 癌，其 中男性 8 4 例 女性 5 9例 共计 1 4 3例，平均年龄 5 4岁，其病理 类 型及 T NM分 期见表 1。为保证研 究 的一致 性，所 有小细胞肺 癌均沿用 T N M 分期。表 1 1 4 3例 肺癌 病 理类 型和 T NM分 期 状况 不抗凝空腹血 2 m 1 分离血清，将各待测血清及不同 浓 度的标准 品混 合液各 1 0 0 IX l 滴 加到不 同 的芯 片分 格 内：将蛋 白芯 片 在 3 7 0 C温育振 荡 3 0 mi n，倾倒 弃 去孔 内液体：吸取 2 0 0 IX l 洗 涤液加 入芯 片格 内，振荡 洗 涤后弃去洗 涤液：重复洗涤

15、2次：每个 芯 片分格 内 各 加入 1 0 0 IX l 反 应液，再次将 蛋 白芯片在 3 7 0 C温 育 振荡 3 0 mi n，然后倾 倒弃 去孔 内液体。按 上述 方法 重复洗涤 2次，剥 离蛋 白芯 片集成块 的上部 在每个 芯片的膜表面加入 2 0 IX l 已等体积混合 1 5 m i n的检 测液 A和 B混合液，静置 2 mi n，重复洗 涤 2次，用 专 用芯 片阅读仪 对蛋 白芯片读取数 据。1 4 检测 项 目的正 常参考值范 围 由该 试 剂 盒 提 供 具 体 如 下：C A1 2 5 3 5 U m1 CA 1 9 9 3 5 U ml，CA 1 5 3 3

16、5 U ml，CA2 4 2 2 0 U m1 CE A 5 IXg L，AF P 2 0IXg L，NS E1 3 IXg L，P S A 5 Ixg L，F P S A 1 g L，H GH 7 5 ix g I ，F e 2 1 9 ix g L(女)，3 2 2 ix g L(男)，HC G 3 ix g L。1 5 统 计学方法 使用 S P S S 1 0 0统 计软 件进行 分析。计 数资 料 以 率 表示，采 用 x 检 验(P 0 0 5)：计量 资料 以 表 示，采用方差 分析(P 0 0 5)1 2仪器和试 剂盒 试 剂 盒 为 上 海 数 康 生 物 科 技 有 限 公

17、 司 生 产 的 C 1 2型 肿 瘤 诊 断 用 蛋 白芯 片试 剂 盒(以下 简称 C 一 1 2)，并 采用 其 提 供 的 专 用 芯 片 阅读 仪 读 取光 信 号，对 肿 瘤 标 志 物 进 行 定 量 检 测。1 3 蛋 白芯 片 检 测 方法 各 病 例 均 采 集 1 0 2 结 果 2 1 C一 1 2阳性率 和肿瘤 标 志物血清 水 平 与 临床分 期的关 系 不 同分期 的肺 癌之 间 C 一 1 2总 阳性率 无显著性差异(x =0 3 1，P=0 9 6)，各组之 表 2不 同 T N M 分 期肺 癌肿 瘤 标 志物 阳性率 比较()分期 c A1 9 9 Ns

18、E c E A c A2 4 2 F e Hc G A F P F P S A P S A C A1 2 5 HG H C A1 5 3 (U m 1)(g，L)(t L)(U m 1)(t s t L)(m)(t L)(t L)(g，L)(U L)(g，L)(U m 1)穗 志 2 0 0 5 年 第 1 卷 第 期 i i 冀 鹫 菩 t 女 g 餐 麓 赣 葫 目 维普资讯 http:/ 表 4不 同病 理类 型肺癌 肿 瘤标 志物 阳性 率 比较(l 问 仅 C A1 9 9阳性 率 及 血 清 水 平 存 在 显 著 性 差 异(x =8 2 4，P O 0 5；F=2 7 6，P

19、O 0 5)，其 他 各项 肿 瘤 标 志物均无显著性 差异(见表 2、3)。2 2 C 1 2阳性率和肿瘤标 志物血清水 平与病理 类型 的关 系 不 同病 理类 型 的肺癌 之 间 C 1 2总 阳性 率无 显 著性差异(x =4 8 9，P=O 4 3)，各组 之 间各项肿瘤标 志 物 的 阳 性 率 和 血 清 水 平 均 无 显 著 性 差 异(见 表 4、5)3 讨 论 肿瘤 标志物是指 肿瘤细胞分 泌或脱落到 体液或 组织 中的物质，或是 宿主对体 内寄生物反应 而产生 并进 人到体液或组织 中的物质。目前临床上 常用 的 肿瘤标 志物大多是 肿瘤 相关抗 原 其检测在 肺癌 的

20、 诊断 中具有一定价 值，但单一标 志物检测存 在着特 异性 不强和 阳性率较 低 的缺点，六】此 临床 上多采用 多种 标志 物联合 检测 的手段 。C 1 2是基于 蛋 白芯 片技 术的多种肿瘤标 志物定量检 测系统 现 已开 始 广泛 应用于临床。该 系统 在鉴别肺癌 的临床分期、病 理类 型和预后评 估方 面到底有 多大价值 目前相 关 报道较 为少见 一种好 的肺癌病 情判断指标 应 该 与肺癌 的侵 袭 性、远处转移 和临床分期 密切相关 并且能 够鉴别 病 理类 型。有文献报 道包括 NS E、C E A、C A1 2 5在 内的 某些 标 志物与肺 癌 的分期 和类 型有一 定

21、 的关 系2 4 J 参 i 肿癯学杂态l嬲年第1 1卷第 1 期 但 根据 我 们 的观 察 结 果 不 同分 期 的肺 癌 之 间 仅 C A1 9 9阳性 率及血清 水平存在 区别，其 他各项肿瘤 标志 物以及 C 1 2总 阳性率均无 显著性 差异。而不 同 病 理类 型 的肺 癌 之 间无论 是 C 1 2总 阳性 率 还是 各 项 肿 瘤标 志 物 的 阳性 率 和 血 清水 平 均 无 显 著性 差 异。本研究所采 用检测方法 系试剂盒所 提供 的成熟 方 法，其最终 结果均经 检验科反 复核实，该检测 项 目 已经开始在全 国多家 医院开展 此 不存在 试验室 检 测方法方面

22、的偏差 问题。之所 以 出现上 述结果 推 测可能与以下因素有关：至今仍然没有任何一种 标 志物是对肿瘤 完全特 异的 一些 良性病变 可 以出 现不 同程度 的阳性反 应，即便是肿 瘤本身也 常可 由 于在发生发展 过程 中的各 种因素 而呈一过性 或 阶段 性阴性反应。本研究 未能就不 同类 型和分期 的病 人 进行 C 1 2动态跟 踪观察，而一 次 C 1 2测 定可能 并 不能反 映其标 志物 的真实产生情况。【大 J 此我 们认 为 只有 进行 C 1 2的动态 观察 并 紧 密结 合临 床表 现 及 影像学检查 才能更有成效地指导临床 单独运用 C 1 2对于鉴别肺癌类型及分期的

23、价值不大。肿瘤 标志物 的产生可能存 在一个平 台期 在肿 瘤 的早 期 阶段，肿瘤标志 物的产生随着 肿瘤的增生 而快速 增 长，当肿瘤增 生到一定程 度，肿 瘤标志物 在血清 中的 浓度处 于一个相对稳 定的水平 不再随肿瘤 的增 生 而增 长，因此在不 同分期 的肺癌 病人 中没有显 著性 差异。既往研 究认为 C 1 2尤其适 合于 无明显症状 的 门诊患 者和肺癌高 危人群 的筛查 町能也 是 由于在 肿瘤早期阶段肿瘤标 志物产生比较活跃的缘故。当 维普资讯 http:/ J o u r n a l o f On c o lo g y 然 肿瘤标 志物 是否 的确存 在所谓平 台期

24、有待 于进 一步研究。c 一 1 2是为多种肿瘤设立的一种蛋 白芯 片 一些对 肺癌有 较高特异性 的指 标如 HD GF、F G F、M2 一 P K、C Y F R A2 1 1等均 未包 括在 C 1 2芯 片 内 5-7 ，因此该检 测系统如果需 应用于肺癌 的病情 鉴别 和预 后监测 尚需增 加上述标 志物，剔 除某些非肺 癌 的标 志物 以提高其 检测 的特异性 和准确度。C A1 9 9系胰 腺癌 和结 直肠癌 的标 志物 在肺癌 中的血清水平并不一定增高【8 l，但在 本研究 中出现与 肺 癌 分期 相 关性 升 高 说 明肺 癌组 织 也 能 够 产生 C A1 9 9 提

25、示 C A1 9 9在肺癌 分期 的鉴别 中可 能有 一定 价值。肿瘤 标志物大 多无器官特异性，属 于一种 广谱标 志物，基本上不可 以进 行器官定位，因此临床 上 运用 C 一 1 2时不 能机械 地用 单一 肿瘤 标 志物 来 与 肿 瘤对 照，应整体、系统 地分 析，并结 合其 他 临床 资 料 作综合 分析，不要 因 为 C A1 9 9等单项 指标 的升 高 而局限于考虑 消化 系统肿瘤。最 终延误病 人 的诊 断和治疗 总之，C 一 1 2在不 同病理类 型 的肺癌 中无 明显 区 别，其 中个 别指标 在 不 同 T N M 分期 的肺 癌 中有差 异，提示肺癌组织也能够产生

26、C A 1 9 9，C A1 9 9与肺 癌 的临床分期有 一定 的相关性。但该检测 系统在肺 癌 的病情监测 和预后 评估方 面价值有 限，尚需作某 些肿 瘤标志物 的增 减以便更有效 地指导 临床。参考文献：1 We i n b e r g e r S R，D a l m a s s o E A，F u n g E T C u r r e n t a c h i e v e m e n t s u s i n g P r o t e i n C h i p A rr a y t e c h n o l o g y J C u rr O p i n Ch e m Bi o l，2 0 0 2

27、，6：8 6 9 1 1 2 2 S a w a b a t a N，Ma e d a H，Y o k o t a S，e t a 1 P o s t o p e r a t i v e s e r u m c a r c i n o e mb r y o n i c a n t i g e n l e v e l s i n p a t i e n t s wi t h p a t ho l o g i c s t a g e I A n o n s m a l l c e l l l u n g c a r c i n o ma：s u b n o r ma l l e v e l s a

28、 s a n i n d i c a t o r o f f a v o r a h l e p r o g n o s i s J J C a n c e r，2 0 0 4。1 01：8 03 8 0 9 3 An d o S，S u z u k i M，Y a ma m o t o N，e t a 1 T h e p r o g n o s t i c v a l u e o f b o t h n e u r o n s p e c i fi c e n o l a s e(N S E)a n d C y f r a 2 1 1 i n s m a l l c e l l l u n

29、g c a n c e r J An t i c a n c e r R e s，2 0 0 4，2 4：l 9 4l l 9 4 6 4 Mu l e y T，D i e n e m a n n H，E b e r t W C YF R A 2 1 1 a n d C E A a r e i n d e p e n d e n t p r o g n o s t i c f a c t o r s i n 1 5 3 o p e r a t e d s t a g e I N S C L C p a t i e n t s J A n t i c a n c e r R e s，2 0 0

30、4，2 4：1 9 5 3 一 l 95 6 5 S c h n e i d e r J，P e h r i G，B i t t e r l i c h N，e t a 1 F u z z y l o g i c b a s e d t u mo r ma r k e r p r o fil e s i n c l u d i n g a n e w ma r k e r t u no r M2 一 P K i mp r o v e d s e n s i t i v i t y t o t h e d e t e c t i o n o f p r o g r e s s i o n i n

31、 l u n g c a n c e r p a t i e n t s J A n t i c a n c e r Re s，2 0 0 3，2 3：8 9 9 9 0 6 6 R e n H，T a n g X，L e e J J，e t a 1 E x p r e s s i o n o f h e p a t o ma d e riv e d g r o w t h f a c t o r i s a s t r o n g p r o g n o s t i c p r e d i c t o r f o r p a t i e n t s wi t h e a r l y s t

32、a g e n o n s ma l l c e l l l u n g c a n c e r J J Cl i n On c o l，2 0 04，2 2：3 2 3 0 3 2 3 7 7 Ya ma y o s h i T，N a g a y a s u T，Ma t s u mo t o K。e t a 1 E x p r e s s i o n o f k e r a t i n o c y t e g r o wt h f a c t o r fi b r o h l a s t g r o wt h f a c t o r 一 7 a n d i t s r e c e p t

33、 o r i n h u ma n l u n g c a n c e r：c o rre l a t i o n wi t h t umo u r p r o l i f e r a t i v e a c t i v i t y a n d p a t i e n t p r o g n o s i s J P a t h o l，2 0 0 4，2 0 4：1 1 0 1 1 8 8 A n d o S，K i mu r a H，1 w a i N，e t a 1 O p t i ma l c o mb i n a t i o n o f s e v e n t u mo ur ma r k e r s i n p r e d i c t i o n o f a d v a n c e d s t a g e a t fi r s t e x a mi n a t i o n o f p a t i e n t s wi t h n o n-s ma l l c e l l l u n g c a n-c e r J A n t i c a n c e r R e s，2 0 0 1，2 1：3 0 8 5 3 0 9 2 篱 9 2 1 潆 z 0 晒 年 I I _卷 第 期 0 l 维普资讯 http:/