应用免疫组织化学方法评价组织芯片的可靠性.pdf
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1、第26卷第4期2 0 0 5年8月西 安 交 通 大 学 学 报(医 学 版)Journal of Xian Jiaotong University(Medical Sciences)Vol.26No.4Aug.2005应用免疫组织化学方法评价组织芯片的可靠性杨 军1,苏宝山1,王康敏1,赵世平1,强 磊1,王一理2,司履生2(西安交通大学:1.第二医院病理科,陕西西安 710004;2.生命科学与技术学院癌症研究所,陕西西安 710061)摘要:目的 探讨组织芯片技术在免疫组化试验中的可靠性和提高组织芯片可信性的方法。方法 选择82例人乳腺癌标本石蜡蜡块,利用传统制片技术和自行研制的专用器具
2、分别制作常规石蜡切片和组织芯片,采用免疫组化技术检测雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)的表达。结果 采用自行研制的专用器具制备组织芯片,所得样本的可分析率均在92.9%以上,且随着对同一标本取材数量的增加,其可分析标本率也明显上升。采用传统方法检测的82例乳腺癌标本中ER和PR的阳性率分别为61%和58.5%;采用组织芯片技术,一式一份取材,其阳性率分别为51.9%和50.0%,一式两份方式取材,其阳性率分别为53.8%和53.8%,采用一式三份方式取材,其阳性率分别为57.1%和60.7%,且三种不同取材方式的检测结果与传统制片法之间并无统计学差异(P 0.75)。结论 在采用统一制备标
3、准并保证组织芯片质量的前提下,挖取直径1.5mm的组织样本制备组织芯片,尽管组织芯片技术与传统方法检测的结果的一致率仍随着对同一标本取材次数的增加而提高,但是三种不同取材方式的检测结果之间并无统计学差异。因此,一式一份取材制备组织芯片完全可替代传统制片技术用于免疫组织化学乃至原位杂交、荧光原位杂交技术的研究,且可保证组织芯片的可信性和高通量特征。关键词:组织芯片;乳腺癌;雌激素受体;孕激素受体;免疫组化中图分类号:R73 文献标识码:A 文章编号:167128259(2005)0420399204Evaluation of the reliability of tissue chip with
4、 immunohistochemistryby detecting ERand PR expression in human breast cancerYang Jun,Su Baoshan,Wang Kangmin,Zhao Shiping,Qiang Lei,Wang Yili,Si Lsheng(1.Department of Pathology,Second Hospital of Xian Jiaotong University,Xian 710004;2.Institute ofTumor Research,College of Life Science and Technolog
5、y,Xian Jiaotong University,Xian 710061,China)ABSTRACT:ObjectiveTo explore the reliability of tissue chip(tissue microarray)and the methods to improvethe reliability.MethodsA total of82formalin2fixed,paraffin2embedded tissue blocks of breast cancer specimenswere retrieved,along with their correspondi
6、ng hematoxylin and eosin(H&E)2stained slide,from the archives of theDepartment of Pathology,Second Hospital of Xian Jiaotong University.Patent tissue micoarrayer was used toprepare tissue chip.Immunohistochemistry was performed to analyze the expression of estrogen receptor(ER)andprogesterone recept
7、or(PR)on the tissue chip.ResultsMore than92.9%tissue samples on the tissue chip wereanalyzed.The more core samples were punched from each original block,the more specimens could be analyzed.The positive rate of the expression of ER and PR on conventional tissue section were61%and58.5%respectively.Wh
8、en one core sample was punched from each original block,the positive rate of the expression of ER and PR onthe tissue chip were51.9%and50.0%respectively.When two core samples were punched from each original block,the positive rate were53.8%and53.8%respectively.When three core samples were punched fr
9、om each originalblock,the positive rate were57.1%and60.7%respectively.However,there was no statistic difference betweenthe values using the above three methods(P 0.75).ConclusionWith the same preparation standard and qualityof tissue chips,when1.5mm core tissue samples were punched from the original
10、 blocks to prepare tissue chips,therewere no statistic difference among the positive rate by using the three methods in punching core samples,althoughthe positive coincidence rate between the expression of ER and PR on conventional tissue section and tissue chip wason the rise with the increase of t
11、he number of core tissues punched from one original block.It could be concluded收稿日期:2004210228 修回日期:2005203210基金项目:陕西省科技攻关项目(No.2001K102G2)、西安市科技研究发展计划资助项目(No.YG200120)作者简介:杨军(19722),男(汉族),主治医师.研究方向:肿瘤生物学.西 安 交 通 大 学 学 报(医 学 版)第26卷that tissue chip technique could substitute for conventional tissue s
12、ection technique in immunohistochemistry,in situhybridization(ISH)and fluorescence in situ hybridization(FISH),and one core tissue punched from each originalblock could ensure the reliability and high2throughput characters of tissue microarray technique.KEY WORDS:tissue chip(tissue microarray);breas
13、t carcinoma;ER;PR;immunohistochemistry 自1998年K ononen1报道组织微阵列(tissue mi2croarray)技术,也称为组织芯片(tissue chip)技术以来,作为一项重要的组织学研究手段,组织芯片技术已经被广泛应用于包括肿瘤生物学在内的各个领域,并将会与其他技术一起在后基因组时代的功能基因组学研究领域发挥巨大作用。但是,对于组织芯片技术的可靠性的顾虑严重制约了组织芯片技术的发展,依旧使众多学者感到疑惑。本研究我们将通过同时采用传统制片技术和组织芯片技术对82例乳腺癌标本中雌激素受体(es2trogen receptor,ER)、孕激素
14、受体(progesterone recep2tor,PR)的检测,评价组织芯片技术的可靠性,并为提高组织芯片可信性,探索可行的技术方法。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 标本来源 本研究所采用的82例乳腺癌标本和2例正常乳腺组织均来自西安交通大学第二医院病理科活检标本,均经10%(体积分数)甲醛固定,石蜡包埋,HE切片并确诊。1.1.2 主要设备 本研究室自行研制并由辽宁朝阳恒泰科技发展有限责任公司生产的HT21组织芯片制备系统(已获得国家专利,ZL 00262393.5、ZL00207528.8、ZL02139474.1)和传统病理制片的所有设备(如病理取材器械、组织处理仪、包埋框、石蜡
15、切片机、染色机等等)。1.1.3 试剂 本实验所用ER抗体、PR抗体(鼠抗人单克隆抗体)和S2P试剂盒均购自北京中山生物技术公司。1.2 方法1.2.1 组织芯片的制备 将入选的82例标本随机分为3组:第1组28例标本,一式一份取材,每例标本挖取1例样本,共28份样本;第2组26例标本,一式两份取材,每例标本挖取2例样本,共52份样本;第3组28例标本,一式三份取材,每例标本挖取3例样本,共84份样本。因此,从82例标本中共挖取164份样本;此外,从2例正常乳腺组织标本石蜡蜡块中挖取4份样本作为正常对照(质控点)。同时,用传统制片方法制备上述82例乳腺癌标本和2例正常乳腺组织的常规石蜡切片,并
16、将其列为第4组(对照组)。按照本研究室研制的HT21组织芯片制备仪和制备方法制备67规格(行 列)的组织芯片(1点为质控点,为正常乳腺组织,实际容量为41份组织样本/张)。其制备方法如下:利用毛胚制备器制备带有阵列孔的石蜡蜡块毛胚;在光学显微镜下对82例乳腺癌标本石蜡蜡块的HE切片进行观察,选择合适区域,并保证肿瘤实质成份至少占取得组织样本面积的50%以上;利用专用组织挖取针挖取蜡块内组织,挖取出的组织呈圆柱形,直径1.5 mm,长23 mm;将其每41例样本为一组依次包埋于制备好的同一蜡块毛胚中,并编号;利用专用包埋器进行包埋。对制备好的多组织蜡块进行石蜡切片,厚5m,裱于涂有1 g/L多聚
17、赖氨酸的载玻片上,烤干,制备组织芯片一式两份,共8张。1.2.2 免疫组化染色 同时应用SP法对上述传统石蜡切片和组织芯片进行免疫组化染色:切片经脱蜡、水化,加3%(体积分数)H2O2处理10 min,微波抗原修复(0.01 mol/L、p H 6.0柠檬酸盐缓冲液),5%(体积分数)正常山羊血清室温封闭10 min,加一抗,371 h,加生物素标记的第二抗体,3710 h,加辣根过氧化物酶复合物3710 h,DAB显色,苏木素复染,酒精脱水、二甲苯透明、树胶封片.以TBS替代一抗作为阴性对照,正常乳腺组织作为阳性对照。1.2.3 结果判断 显微镜下观察,细胞核内出现深浅不一的棕黄色颗粒为阳性
18、,阳性细胞 10%记为ER、PR阳性。对于组织芯片上的组织样本,如果为坏死出血组织或无肿瘤实质,或脱片者,则计为不可分析样本。第1组一式一份取材制备的组织芯片按照上述方法观察;第2组一式两份取材和第3组一式三份取材制备的组织芯片中只要一份样本出现阳性即判该标本为阳性。1.2.4 统计学处理 计数各组的阳性标本数和其与对照组标本检测结果一致的标本数,分别计算其阳性率和一致率,并采用精确概率法和2检验进行统计学处理,P0.75)。表2 组织芯片法与传统制片法比较ER在乳腺癌标本中的表达Table 2Comparison of positive rate of ER in mammary cance
19、r with traditional method and tissue chipGroupingSample numberPositive numberNegative numberTotal numberPositive rate(%)Coincidence rate(%)114132751.988.9(24/27)214122653.892.3(24/26)316122857.196.4(27/28)450328261.0100.0(82/82)Total946916357.796.3(157/163)2=0.900 35,0.900 P 0.750表3 组织芯片法与传统制片法比较PR在
20、乳腺癌标本中的表达Table 3Comparison of positive rate of PR in mammary cancer with traditional method and tissue chipGroupingSample numberPositive numberNegative numberTotal numberPositive rate(%)Coincidence rate(%)113132650.092.3(24/26)214122653.896.2(25/26)317112860.7100.0(28/28)448348258.5100.0(82/82)Total
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- 应用 免疫 组织化学 方法 评价 组织 芯片 可靠性
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