培养基及其配制学时讲稿.ppt

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1、培养基及其配制学时第一页，讲稿共六十九页哦第二页，讲稿共六十九页哦培养基及其作用：是向植物细胞提供营培养基及其作用：是向植物细胞提供营养的场所。其作用是向植物细胞提供所需的养的场所。其作用是向植物细胞提供所需的各种营养；调节渗透压、酸碱度；供给水分。各种营养；调节渗透压、酸碱度；供给水分。固体培养基还起着支撑作用。固体培养基还起着支撑作用。第三页，讲稿共六十九页哦培养基的种类培养基的种类培养基的成分及作用培养基的成分及作用常用培养基的配方及其特点常用培养基的配方及其特点培养基的选择培养基的选择培养基的配制培养基的配制 本章主要内容第四页，讲稿共六十九页哦培养基形态不同：固体培养基、液体培养基培

2、养过程不同：初代培养基、继代培养基其作用不同：诱导培养基、增殖培养基、生根培养基 营养水平不同：基本培养基、完全培养基一、培养基的种类一、培养基的种类第五页，讲稿共六十九页哦二、培养基的成分及作用二、培养基的成分及作用 植物体内至少含有几十种化学元素，其中大部分元素在植物体内起到一定的生理作用：a、组成各种化合物，参与机体的建造，成为结构结构物质；b、构成一些特殊的生理活性物质，参与活跃的新陈代谢；c、元素之间相互协调，以维持离子浓度平衡、胶体稳 定、电荷平衡等点化学方面的作用；d、发育方面，特定的元素影响植物的形态发生和组织、器官建成。第六页，讲稿共六十九页哦无机营养成分+有机营养成分=基本

3、培养基其它添加物其它添加物其它添加物其它添加物固化剂固化剂固化剂固化剂植物生长调节剂植物生长调节剂植物生长调节剂植物生长调节剂有机营养成分有机营养成分有机营养成分有机营养成分无机营养成分无机营养成分无机营养成分无机营养成分培养基组成培养基组成第七页，讲稿共六十九页哦国内外公认的高等植物所必需的营养元素有16（17）种：C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S、Fe、B、Mn、Cu、Zn、Mo、Cl、（Ni）在植物中含量差别很大，同一元素在植物不同时期、不同条件下含量也不同。第九页，讲稿共六十九页哦根据植物体内含量多少，可把这些元素分为大量营养元素：占干物质重量的0.1%以上；C C、H H、O

4、O、N N、P P、K K、CaCa、MgMg、S S 9种微量营养元素：占干物质重量的0.1%以下 有的只含0.1mg/kg FeFe、B B、MnMn、CuCu、ZnZn、MoMo、ClCl 7种按照国际植物生理协会的建议：按照国际植物生理协会的建议：所需浓度所需浓度 0.5mmol/L 0.5mmol/L的元素为大量元素的元素为大量元素 所需浓度所需浓度 0.5mmol/L 0.5mmol/L的元素为微量元素的元素为微量元素第十页，讲稿共六十九页哦1、大量元素、大量元素N N是蛋白质、酶、叶绿素、维生素、核酸、磷脂、生是蛋白质、酶、叶绿素、维生素、核酸、磷脂、生物碱等的组成成分，在植物生

5、命活动中占有重要的位物碱等的组成成分，在植物生命活动中占有重要的位置。供应的氮化物有硝酸铵、硫酸铵、硝酸钾等。有置。供应的氮化物有硝酸铵、硫酸铵、硝酸钾等。有时，也添加氨基酸来补充氮素。时，也添加氨基酸来补充氮素。P P是是生物膜、核苷酸（是是生物膜、核苷酸（如如ATPATP）、核酸的重要组成）、核酸的重要组成部分。培养基中常用部分。培养基中常用KHKH2 2POPO4 4 NaH NaH2 2POPO4 4等。等。K K对碳水化合物合成，转移，以及氮素代谢等有对碳水化合物合成，转移，以及氮素代谢等有密切关系。制备培养基时，常以密切关系。制备培养基时，常以KClKCl、KNOKNO3 3等盐类

6、等盐类提供。提供。第十一页，讲稿共六十九页哦MgMg是叶绿素的组成成分，又是激酶的活化剂，对核蛋是叶绿素的组成成分，又是激酶的活化剂，对核蛋白体结构具有稳定作用；白体结构具有稳定作用；S S是含是含S S氨基酸的蛋白质的组成成分。氨基酸的蛋白质的组成成分。它们常以它们常以MgSO47H2O提供。提供。CaCa是构成细胞壁的成分，对细胞分裂，稳定质膜是构成细胞壁的成分，对细胞分裂，稳定质膜结构有显著作用，此外，结构有显著作用，此外，CaCa及钙调素在细胞信号及钙调素在细胞信号转导中起重要作用。转导中起重要作用。常以常以CaCl22H2O提供。提供。第十二页，讲稿共六十九页哦2、微量元素、微量元素

7、 在微量元素中，在微量元素中，铁铁的作用最大的作用最大 ：一些氧化酶一些氧化酶、细胞色素氧化酶、过氧、细胞色素氧化酶、过氧化氢酶等的组成成分。化氢酶等的组成成分。叶绿素形成的必要条件叶绿素形成的必要条件 在制做培养基时常用在制做培养基时常用FeSO47H2O和和a2-EDTA结合成螯合物使用。结合成螯合物使用。乙二胺四乙乙二胺四乙酸铁（酸铁（EDTA-FeEDTA-Fe）鳌合物可防止铁的沉淀。）鳌合物可防止铁的沉淀。第十三页，讲稿共六十九页哦硼硼与蛋白质合成、糖类运输有着密切的关系与蛋白质合成、糖类运输有着密切的关系铜铜是某些氧化酶的成分，能够促进离体根的生长是某些氧化酶的成分，能够促进离体根

8、的生长锰锰参与植物的光合、呼吸代谢参与植物的光合、呼吸代谢钼钼参与氮素的代谢参与氮素的代谢氯氯是光合作用水光解的活化剂是光合作用水光解的活化剂微量元素的主要作用是作为微量元素的主要作用是作为酶的辅助因子或激活剂酶的辅助因子或激活剂参与代谢参与代谢的调节。的调节。第十四页，讲稿共六十九页哦这些整株植物生长所必需的营养元素，对于植这些整株植物生长所必需的营养元素，对于植物组织培养来说也是必需的。当某些营养元素供应不物组织培养来说也是必需的。当某些营养元素供应不足时，愈伤组织表现出一定的缺素症状。如足时，愈伤组织表现出一定的缺素症状。如缺氮，缺氮，会表现出一种花色素苷的颜色，不能形成导管；会表现出一

9、种花色素苷的颜色，不能形成导管；缺缺铁，铁，细胞停止分裂；细胞停止分裂；缺硫，缺硫，表现出非常明显的褪表现出非常明显的褪绿；绿；缺锰或钼，缺锰或钼，则影响细胞的伸长。则影响细胞的伸长。第十五页，讲稿共六十九页哦缺铁症状：叶面呈绿色网纹状失绿。随病势发展，叶片失缺铁症状：叶面呈绿色网纹状失绿。随病势发展，叶片失绿程度加重，出现整叶变为白色，叶缘枯焦，引起落叶。绿程度加重，出现整叶变为白色，叶缘枯焦，引起落叶。严重缺铁时，新梢顶端枯死。严重缺铁时，新梢顶端枯死。桃桃树树第十六页，讲稿共六十九页哦缺铜症状：缺铜症状：新梢顶端叶片的叶尖失绿变新梢顶端叶片的叶尖失绿变黄，叶片出现褐色斑点至扩大黄，叶片出

10、现褐色斑点至扩大变成深褐色，引起落叶。变成深褐色，引起落叶。枝顶端生长不良，其下部的枝顶端生长不良，其下部的芽开始生长，形成丛生的细枝。芽开始生长，形成丛生的细枝。菊花菊花第十七页，讲稿共六十九页哦3、有机化合物：、有机化合物：培养基中若只含有大量元素与微量元培养基中若只含有大量元素与微量元素，常称为基本培养基。为不同的培养目的往往要素，常称为基本培养基。为不同的培养目的往往要加入一些有机物以利于快速生长。常加入的有机成加入一些有机物以利于快速生长。常加入的有机成分主要有以下几类：分主要有以下几类：(1)碳水化合物碳水化合物：碳源物质包括糖类物质、醇类物质和有机碳源物质包括糖类物质、醇类物质和

11、有机酸，以酸，以糖类糖类物质最重要。物质最重要。最常用的碳源是蔗糖，葡萄糖和最常用的碳源是蔗糖，葡萄糖和果糖也是较好的碳源，可支持许多组织很好的生长。果糖也是较好的碳源，可支持许多组织很好的生长。糖类糖类物质特点：物质特点：具有热易变的性质具有热易变的性质利于吸收和利用利于吸收和利用 使用浓度一般在使用浓度一般在2%2%5%5%提供能源和调节渗透压提供能源和调节渗透压第二十一页，讲稿共六十九页哦（2）维生素类）维生素类 以各种以各种辅酶辅酶的形式存在的形式存在 参与多种代谢活动参与多种代谢活动 对生长，分化等有很好的促进作用对生长，分化等有很好的促进作用 主要分为主要分为脂溶性维生素脂溶性维生

12、素和和水溶性维生素水溶性维生素 常用维生素有常用维生素有V VB1B1和和V VB6B6 VB1(盐酸硫胺素盐酸硫胺素)：对愈伤组织的产生和生活力有重要作用。对愈伤组织的产生和生活力有重要作用。VB6(盐酸吡哆醇盐酸吡哆醇)：能促进根的生长。能促进根的生长。VPP(烟酸烟酸)：与植物代谢和胚的发育有一定关系。与植物代谢和胚的发育有一定关系。VC(抗坏血酸抗坏血酸)：有防止组织变褐的作用。有防止组织变褐的作用。第二十二页，讲稿共六十九页哦（3）肌醇）肌醇v又叫环己六醇，在糖类的相互转化中起重要作用。又叫环己六醇，在糖类的相互转化中起重要作用。v用于构建细胞壁。用于构建细胞壁。v参与碳水化合物、磷

13、脂代谢及离子平衡等生理活动。参与碳水化合物、磷脂代谢及离子平衡等生理活动。v促进活性物质发挥作用。促进活性物质发挥作用。v使用肌醇能促进愈伤组织的生长以及胚状体和芽使用肌醇能促进愈伤组织的生长以及胚状体和芽的形成。的形成。v对组织和细胞的繁殖、对组织和细胞的繁殖、分化有促进作用。分化有促进作用。第二十三页，讲稿共六十九页哦（4）氨基酸）氨基酸 蛋白质的组成成分蛋白质的组成成分 有机氮源有机氮源 可直接被细胞吸收利用可直接被细胞吸收利用 培养基中常用的是培养基中常用的是甘氨酸。甘氨酸。有时用水解乳有时用水解乳蛋白或水解酪蛋白，由于它们营养丰富，极易引蛋白或水解酪蛋白，由于它们营养丰富，极易引起污

14、染。如在培养中无特别需要，以不用为宜。起污染。如在培养中无特别需要，以不用为宜。第二十四页，讲稿共六十九页哦（5）天然复合物）天然复合物 促进某些愈伤组织和器官的生长促进某些愈伤组织和器官的生长 成分比较复杂成分比较复杂，大多含氨基酸、激素、酶等一些复杂化合物。大多含氨基酸、激素、酶等一些复杂化合物。天然营养混合物，天然营养混合物，对细胞和组织的增殖与分化有明显的促进作用。对细胞和组织的增殖与分化有明显的促进作用。如：水解酪蛋白、玉米胚乳、酵母提取物如：水解酪蛋白、玉米胚乳、酵母提取物椰乳：椰乳：它在愈伤组织和细胞培养中有促进作用它在愈伤组织和细胞培养中有促进作用香蕉：香蕉：主要在兰花的组织培

15、养中应用，对发育有促进作用。主要在兰花的组织培养中应用，对发育有促进作用。马铃薯：马铃薯：添加后可得到健壮的植株。添加后可得到健壮的植株。水解酪蛋白：水解酪蛋白：为蛋白质的水解物，主要成分为氨基酸。为蛋白质的水解物，主要成分为氨基酸。其它：其它：酵母提取液、麦芽提取液等。酵母提取液、麦芽提取液等。第二十五页，讲稿共六十九页哦4、培养材料的支持物培养材料的支持物（1）琼脂）琼脂 在固体培养时琼脂是最好的固化剂。固体培在固体培养时琼脂是最好的固化剂。固体培养基利于组织置于培养基表面。琼脂是一种由养基利于组织置于培养基表面。琼脂是一种由海藻中提取的高分子碳水化合物，本身并不提海藻中提取的高分子碳水化

16、合物，本身并不提供任何营养。供任何营养。是使用最普遍的凝固剂是使用最普遍的凝固剂用量一般在用量一般在6 610g/L10g/L之间之间颜色以浅、透明度高好，洁净为上品颜色以浅、透明度高好，洁净为上品 除了琼脂外，在组织培养中还可以使除了琼脂外，在组织培养中还可以使用琼脂糖、结冷胶等。用琼脂糖、结冷胶等。第二十六页，讲稿共六十九页哦（2）其它：）其它：有玻璃纤维、滤纸桥、海绵等，总的有玻璃纤维、滤纸桥、海绵等，总的要求是排出的有害物质对培养材料没有影响或影要求是排出的有害物质对培养材料没有影响或影响较小。响较小。第二十七页，讲稿共六十九页哦5、活性炭、活性炭活性炭为木炭粉碎经加工形成的粉沫结构，

17、它结构疏松，孔隙大，吸水力强，活性炭为木炭粉碎经加工形成的粉沫结构，它结构疏松，孔隙大，吸水力强，有很强的吸附作用，它的颗粒大小决定着吸附能力、粒度越小，吸附能力越有很强的吸附作用，它的颗粒大小决定着吸附能力、粒度越小，吸附能力越大。它可以吸附培养基中的有害物质，包括琼脂中所含的杂质，培养物在培大。它可以吸附培养基中的有害物质，包括琼脂中所含的杂质，培养物在培养过程中分泌的酚、醌类物质以及蔗糖在高压消毒时产生的养过程中分泌的酚、醌类物质以及蔗糖在高压消毒时产生的5羟甲基糖醛。羟甲基糖醛。吸附培养基及培养物分泌物中的抑制物质吸附培养基及培养物分泌物中的抑制物质 抑制外植体褐变抑制外植体褐变 防止

18、玻璃苗的产生防止玻璃苗的产生 促进培养物生长和分化促进培养物生长和分化 促进生根促进生根缺点：缺点：没有选择性没有选择性活性炭活性炭第二十八页，讲稿共六十九页哦v茎尖初代培养，加入适量活性炭，可以吸附外植体产生的致死茎尖初代培养，加入适量活性炭，可以吸附外植体产生的致死性褐化物，其效力优于性褐化物，其效力优于VC和半胱氨酸。和半胱氨酸。v在新梢增殖阶段，活性炭可明显促进新梢的形成和伸长。在新梢增殖阶段，活性炭可明显促进新梢的形成和伸长。v活性炭在生根时有明显的促进作用，其机理一般认为与活性活性炭在生根时有明显的促进作用，其机理一般认为与活性炭减弱光照有关。炭减弱光照有关。第二十九页，讲稿共六十

19、九页哦v在使用活性炭时，要注意其吸附有害物质和吸附生长调节物在使用活性炭时，要注意其吸附有害物质和吸附生长调节物的二重性，尤其是当较高的活性炭足以能抵消生长调节物的的二重性，尤其是当较高的活性炭足以能抵消生长调节物的作用时，应注意调整好活性炭与生长调节物等培养基成分的作用时，应注意调整好活性炭与生长调节物等培养基成分的用量，使其皆能发挥作用。在使用时要有其量的意识，使活用量，使其皆能发挥作用。在使用时要有其量的意识，使活性炭发挥其积极作用。性炭发挥其积极作用。第三十页，讲稿共六十九页哦6、抗生素、抗生素 抗生物质有青霉素、链霉素、庆大霉素等，抗生物质有青霉素、链霉素、庆大霉素等，用量在用量在5

20、20mg/l之间。添加抗生物质可防止之间。添加抗生物质可防止外外植体内生菌造成的污染。植体内生菌造成的污染。第三十一页，讲稿共六十九页哦7、植物激素：、植物激素：在培养基的各成分中，植物在培养基的各成分中，植物激素是培养基的关键物质，激素是培养基的关键物质，对植物组织培养对植物组织培养起着决定性作用。起着决定性作用。第三十二页，讲稿共六十九页哦（1）生长素类：）生长素类：促进细胞伸长和分裂促进细胞伸长和分裂 促进生根、抑制器官脱落、性别控制、延长休眠、促进生根、抑制器官脱落、性别控制、延长休眠、顶端优势、单性结实顶端优势、单性结实 诱导愈伤组织形成诱导愈伤组织形成 溶于溶于95%95%酒精或酒

21、精或0.1mol/L0.1mol/L的的NaOHNaOH中，后者的溶解中，后者的溶解效果更好效果更好 常用的生长素：常用的生长素：IAA(IAA(吲哆乙酸吲哆乙酸)NAA(NAA(奈乙酸奈乙酸 )2,4-D(2,4-D(二氯苯氧乙酸二氯苯氧乙酸)IBA(IBA(吲哆丁酸吲哆丁酸)第三十三页，讲稿共六十九页哦 IAA(吲哚乙酸吲哚乙酸)是天然存在的生长素，亦可人是天然存在的生长素，亦可人工合成，其活力较低工合成，其活力较低,是生长素中活力最弱的激素，是生长素中活力最弱的激素，对器官形成的副作用小，高温高压易被破坏，也易被对器官形成的副作用小，高温高压易被破坏，也易被细胞中的细胞中的IAA分解酶降

22、解，受光也易分解。分解酶降解，受光也易分解。第三十四页，讲稿共六十九页哦 NAA(萘乙酸萘乙酸)在组织培养中的起动能力要比在组织培养中的起动能力要比IAA高出高出34倍，且倍，且由于可大批量人工合成，由于可大批量人工合成，耐高温高压，不易被分解破坏，所以应耐高温高压，不易被分解破坏，所以应用较普遍。用较普遍。IBA(吲哚丁酸吲哚丁酸)是促进发根能力较强的生长调节物质。是促进发根能力较强的生长调节物质。2,4-D（2,4二氯苯氧乙酸）二氯苯氧乙酸）起动能力比起动能力比IAA高高10倍，特别在促进倍，特别在促进愈伤组织的形成上活力最高，愈伤组织的形成上活力最高，但它强烈抑制芽的形成，影响器官但它强

23、烈抑制芽的形成，影响器官的发育。的发育。第三十五页，讲稿共六十九页哦生长素作用强弱顺序：IAANAAIBA2,4-D强强弱弱2，4-D常用于诱导愈伤组织，IBA和NAA常用于生根第三十六页，讲稿共六十九页哦 生长素配制时可先用少量生长素配制时可先用少量95酒精助溶。酒精助溶。2,4-D可用可用0.1mol/l的的NaOH或或KOH助溶。生长素常配成助溶。生长素常配成1mg/ml的溶液的溶液贮于冰箱中备用。贮于冰箱中备用。第三十七页，讲稿共六十九页哦（2）细胞分裂素类）细胞分裂素类 这类激素是腺嘌呤的衍生物，包括这类激素是腺嘌呤的衍生物，包括6-BA(6苄基氨基嘌呤苄基氨基嘌呤)、Kt(激动素激

24、动素)、ZT(玉米素玉米素)等。其中等。其中ZT活性最强，但非常昂贵。活性最强，但非常昂贵。常用的是常用的是6-BA。在培养基中添加细胞分裂素有以下作用：在培养基中添加细胞分裂素有以下作用：诱导芽的分化促进侧芽萌发生长。诱导芽的分化促进侧芽萌发生长。诱导胚状体和不定芽的形成诱导胚状体和不定芽的形成促进细胞分裂与扩大。促进细胞分裂与扩大。抑制根的分化。抑制根的分化。用于离体成花的调控。用于离体成花的调控。延缓组织的衰老并增强蛋白质的合成。延缓组织的衰老并增强蛋白质的合成。因此，细胞分裂素多用于诱导不定芽的分化、茎、苗的增殖，因此，细胞分裂素多用于诱导不定芽的分化、茎、苗的增殖，而避免在生根培养时

25、使用。而避免在生根培养时使用。溶于溶于0.50.51.0mol/L1.0mol/L的盐酸或稀薄的的盐酸或稀薄的NaOHNaOH中。中。第三十八页，讲稿共六十九页哦（3）赤霉素类和脱落酸 A、赤霉素类 组织培养中不常使用 加速细胞的伸长生长 促进细胞的分裂 主要是GA3 B、脱落酸 抑制细胞分裂和伸长 促进脱落和衰老 促进休眠和提高抗逆能力第三十九页，讲稿共六十九页哦 赤霉素赤霉素(GA)：培养基中添加的是培养基中添加的是GA3，主要用于刺激在，主要用于刺激在培养中形成的不定胚发育成小植株，促进幼苗茎的伸长生长。培养中形成的不定胚发育成小植株，促进幼苗茎的伸长生长。一般在器官形成后，添加赤霉素可

26、促进器官或胚状体的生长。一般在器官形成后，添加赤霉素可促进器官或胚状体的生长。赤霉素溶于酒精，配制时少量可用赤霉素溶于酒精，配制时少量可用95酒精助溶。赤霉素酒精助溶。赤霉素不耐热，高压灭菌后将有不耐热，高压灭菌后将有70100失效，应当采用过滤灭菌法失效，应当采用过滤灭菌法加入。加入。第四十页，讲稿共六十九页哦8、抗氧化物：、抗氧化物：植物组织在切割时会溢泌一些酚类植物组织在切割时会溢泌一些酚类物质，接触空气中的氧气后，自动氧化或由酶类催物质，接触空气中的氧气后，自动氧化或由酶类催化氧化为相应的醌类，产生可见的茶色、褐色以致化氧化为相应的醌类，产生可见的茶色、褐色以致黑色，这就是酚污染。这些

27、物质渗出细胞外就造成黑色，这就是酚污染。这些物质渗出细胞外就造成自身中毒，使培养的材料生长停顿，失去分化能力，自身中毒，使培养的材料生长停顿，失去分化能力，最终变褐死亡。最终变褐死亡。第四十一页，讲稿共六十九页哦v抗酚类氧化常用的药剂有半胱氨酸及抗酚类氧化常用的药剂有半胱氨酸及Vc，可用，可用50200mg/l的的浓度洗涤刚切割的外植体伤口表面，或过滤灭菌后加入固体培浓度洗涤刚切割的外植体伤口表面，或过滤灭菌后加入固体培养基的表层。其它抗氧化剂有二硫苏糖醇、谷胱甘肽、硫乙醇、养基的表层。其它抗氧化剂有二硫苏糖醇、谷胱甘肽、硫乙醇、抗坏血酸及二乙基二硫氨基甲酸酯等。抗坏血酸及二乙基二硫氨基甲酸酯

28、等。第四十二页，讲稿共六十九页哦9、水作用：作用：是植物原生质体的组成成分，也是一是植物原生质体的组成成分，也是一切代谢过程的介质和溶媒。切代谢过程的介质和溶媒。注意：注意：用蒸馏水，最好是双蒸水；以保持培用蒸馏水，最好是双蒸水；以保持培养基成分的精确性。大规模生产时可用自养基成分的精确性。大规模生产时可用自来水。来水。第四十三页，讲稿共六十九页哦三、常用培养基的配方及其特点三、常用培养基的配方及其特点（一）几种常用培养基的配方（一）几种常用培养基的配方组织培养常用的基本培养基有：组织培养常用的基本培养基有：MS、MT、White、Nitsch、Blaydes、N6、B5、NT、SH、Mill

29、er、Heller等。等。第四十四页，讲稿共六十九页哦1、MS培养基培养基 无机盐浓度高无机盐浓度高高含量的氮、钾，尤其是硝酸盐高含量的氮、钾，尤其是硝酸盐含有一定数量的铵盐含有一定数量的铵盐营养丰富营养丰富不需要添加更多的有机附加物不需要添加更多的有机附加物（二）、几种常见培养基的特点（二）、几种常见培养基的特点第四十五页，讲稿共六十九页哦2、White培养基培养基19431943年由年由WhiteWhite为培养番茄根尖而设计为培养番茄根尖而设计 19631963年作了改良，提高年作了改良，提高MgSOMgSO4 4的浓度和增加硼元素的浓度和增加硼元素 无机盐浓度较低无机盐浓度较低 使用广

30、泛使用广泛 在生根培养、胚胎培养中有良好的效果在生根培养、胚胎培养中有良好的效果第四十六页，讲稿共六十九页哦3、B5培养基培养基 19681968年由年由GamborgGamborg等为培养大豆根细胞而等为培养大豆根细胞而设计设计 含有较低的铵盐含有较低的铵盐 较高的硝酸盐和盐酸硫胺素较高的硝酸盐和盐酸硫胺素第四十七页，讲稿共六十九页哦4、N6培养基培养基 1974 1974年朱至清等为水稻等禾谷类作物花药培养设年朱至清等为水稻等禾谷类作物花药培养设计计 成分较简单，成分较简单，成分较简单，成分较简单，KNOKNOKNOKNO3 3 3 3和（和（和（和（NHNHNHNH4 4 4 4）2 2

31、 2 2SOSOSOSO4 4 4 4含量高。在国内已含量高。在国内已含量高。在国内已含量高。在国内已广泛应用于小麦、水稻及其他禾谷类植物的花粉和花药广泛应用于小麦、水稻及其他禾谷类植物的花粉和花药广泛应用于小麦、水稻及其他禾谷类植物的花粉和花药广泛应用于小麦、水稻及其他禾谷类植物的花粉和花药培养。培养。培养。培养。第四十八页，讲稿共六十九页哦AgNO3:作用：抑制乙烯活性，防止玻璃化苗的出现浓度：1-10mg/L抗生素：抗生素：种类：青霉素、链霉素、庆大霉素等。作用：可防止外植体内生菌污染。浓度：520mg/L。第四十九页，讲稿共六十九页哦1、母液母液(stocksolution)的配制和保

32、存的配制和保存v所谓所谓母液母液是欲配制液的是欲配制液的浓缩液浓缩液。v意义意义:保证各物质成分的准确性保证各物质成分的准确性 配制时的快速移取配制时的快速移取 便于低温保藏。便于低温保藏。五、五、培养基的配制培养基的配制第五十七页，讲稿共六十九页哦单配法：单配法：将培养基配方中的各种成分分别配成一定浓度的将培养基配方中的各种成分分别配成一定浓度的母液。一般用母液。一般用mg/ml。混配法：混配法：将几类营养成分按配方中的用量扩大一定倍数将几类营养成分按配方中的用量扩大一定倍数称量，分别溶解后再混合成母液。称量，分别溶解后再混合成母液。母液配制时可分别配成母液配制时可分别配成大量元素、微量元素

33、、大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等，铁盐、有机物和激素类等，一般配成比所需浓一般配成比所需浓度高度高10100倍的母液。倍的母液。母液的配制方法：母液的配制方法：第五十八页，讲稿共六十九页哦v配制培养基时，为便于保存，提高效率，通常先配制母液。即配制培养基时，为便于保存，提高效率，通常先配制母液。即配成：配成：v大量元素大量元素10倍液，定容至倍液，定容至1000ml；v微量元素微量元素100倍液，定容至倍液，定容至1000ml；v铁盐铁盐100倍液，定容至倍液，定容至1000ml；v维生素维生素1mg/l，定容至，定容至100ml；v激素激素1mg/l，定容至，定容至50100ml

34、。第五十九页，讲稿共六十九页哦 配制时注意一些离子之间易发生沉淀，如配制时注意一些离子之间易发生沉淀，如a 2和和SO4 2 ，a 2、g 2和和PO4 3一起溶解后，会产生沉淀，一定要一起溶解后，会产生沉淀，一定要充分溶解再放入母液中。配制母液时要用蒸馏水或重蒸馏充分溶解再放入母液中。配制母液时要用蒸馏水或重蒸馏水。药品应选取等级较高的化学纯或分析纯。药品的称量水。药品应选取等级较高的化学纯或分析纯。药品的称量及定容都要准确。各种药品先以少量水让其充分溶解，然及定容都要准确。各种药品先以少量水让其充分溶解，然后依次混合。后依次混合。第六十页，讲稿共六十九页哦 一般配成大量元素、微量元素、铁盐

35、、维生素等母一般配成大量元素、微量元素、铁盐、维生素等母液，其中维生素、氨基酸类可以分别配制，也可以混在液，其中维生素、氨基酸类可以分别配制，也可以混在一起。母液配好后放入冰箱内低温保存，用时再按比例一起。母液配好后放入冰箱内低温保存，用时再按比例稀释。稀释。第六十一页，讲稿共六十九页哦 培养基母液的配制母液名称母液名称药品品名称名称大量元素（大量元素（MSI）NH4NO3KNO3CaCl2H2OMgSO47H2OKH2PO4微量元素（微量元素（MSII）MnSO4H2OZnSO47H2OCoCl6H2OCuSO45H2OH3BO3Na2MO42H2OKI铁盐（MSIII）FeSO47H2ON

36、a2-EDTA2H2O有机物（有机物（MSIV）烟酸烟酸(Vpp)盐酸吡哆醇酸吡哆醇盐酸硫胺素酸硫胺素甘氨酸甘氨酸肌醇（肌醇（MSV）肌醇肌醇第六十二页，讲稿共六十九页哦vMS母液配制：vMSI 大量元素 20X MSII 微量元素 200X MSIII铁 盐 200X MSIV有机 物 200X MSV肌 醇 200X 激 素 0.1mg/ml第六十三页，讲稿共六十九页哦MS(大量元素大量元素)配方用量配方用量mg/L20X（mg）称量称量1.NH4NO316503300033g2.KNO319003800038g3.CaCl22H2O44088008.8g4.MgSO47H2O370740

37、07.4g5.KH2PO417034003.4g将将1、2、4、5称好放入烧杯称好放入烧杯分别溶解混合，分别溶解混合，将将3最后混合，最后混合，再定容到再定容到1L，放入试剂瓶贴放入试剂瓶贴标签，备用标签，备用500mL甲甲1、2、4、5500mL乙乙3定容定容贴标签贴标签1L MSI IX202013.9.26HXH注：注：Ca2+和和S042-混合后易沉淀。混合后易沉淀。第六十四页，讲稿共六十九页哦MS(微量元素微量元素)配方用量配方用量mg/L200X（mg）称量称量(g)1.KI0.831660.1662.H3BO46.212401.243.MnSO44H2O22.344604.464

38、.ZnSO47H2O8.617201.725.Na2MoO42H2O0.25500.056.CuSO45H2O0.02550.0057.CoCl26H2O0.02550.005将将17称好放入烧杯分别称好放入烧杯分别溶解混合，定容到溶解混合，定容到1L，放，放入试剂瓶贴标签，备用入试剂瓶贴标签，备用1000mL17定容定容贴标签贴标签1L MSIIIIX2002013.9.26HXH第六十五页，讲稿共六十九页哦MS(铁盐铁盐)配方用量配方用量mg/L200X（mg）称量称量(g)1.FeSO47H2O27.855605.562.Na2EDTA2H2O37.374607.46将将1称好放入烧称好

39、放入烧杯甲溶解，将杯甲溶解，将2放入烧杯乙溶放入烧杯乙溶解，再混合定解，再混合定容到容到1L，放入，放入试剂瓶贴标签，试剂瓶贴标签，备用备用1L500mL甲甲1500mL乙乙2混合定容混合定容贴标签贴标签 MSI IX2002013.9.26HXH第六十六页，讲稿共六十九页哦MS(有机物有机物)配方用量配方用量mg/L200X（mg）称量称量(g)1.烟酸烟酸0.51000.12.盐酸吡哆醇盐酸吡哆醇0.51000.13.盐酸硫胺素盐酸硫胺素0.1200.024.甘氨酸甘氨酸24000.4将将1、2、3、4称称好放入烧杯分别好放入烧杯分别溶解混合，定容溶解混合，定容到到1L，放入试，放入试剂瓶

40、贴标签，剂瓶贴标签，备用备用1000mL14定容定容贴标签贴标签1L MSIVIVX2002013.9.26HXH第六十七页，讲稿共六十九页哦MS配方用量配方用量mg/L200X（mg）称量称量(g)1.肌醇肌醇1002000020将肌醇称好放入将肌醇称好放入烧杯溶解定容到烧杯溶解定容到1L，放入试剂，放入试剂瓶贴标签，备瓶贴标签，备用用1000mL1溶解定容溶解定容贴标签贴标签1L MSV VX2002013.9.26HXH第六十八页，讲稿共六十九页哦v母液配制时应注意事项：母液配制时应注意事项：母液配好后放人冰箱内母液配好后放人冰箱内低温保存低温保存（4），用时），用时再按比例稀释。再按比例稀释。其中其中III、IV、以及激素类物质应以、以及激素类物质应以棕色瓶棕色瓶盛装。盛装。母液母液使用前摇动瓶子使用前摇动瓶子，如有沉淀、絮状物、微生，如有沉淀、絮状物、微生物污染应停止使用物污染应停止使用取样时移液管要取样时移液管要对应取样，对应取样，防止交叉污染防止交叉污染第六十九页，讲稿共六十九页哦