维生素类药物的分析 (4)讲稿.ppt

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1、关于维生素类药物的分析(4)第一页，讲稿共九十六页哦维生素：维生素：是维持人体正常代谢机能所是维持人体正常代谢机能所必需的必需的 微量营养物质。微量营养物质。人体不能合成维生素。人体不能合成维生素。第二页，讲稿共九十六页哦 VitA、D2、D3、E、K1 等等 脂溶性脂溶性水溶性水溶性 VitB族族(B1、B2、B6、B12)VitC、叶酸、烟酸、烟酰胺、叶酸、烟酸、烟酰胺VitMVitPP第三页，讲稿共九十六页哦-H 维生素维生素A醇醇-COCH3 维生素维生素A醋酸酯醋酸酯-COC15H31 维生素维生素A棕榈酸酯棕榈酸酯R:第一节第一节 维生素维生素 A A的分析的分析第四页，讲稿共九十

2、六页哦为一个具有共轭多烯侧链的为一个具有共轭多烯侧链的 环己烯环己烯（一）（一）结构与性质结构与性质一、一、v 具有具有UVUV吸收吸收v 存在多种立体异构化合物存在多种立体异构化合物第五页，讲稿共九十六页哦维生素维生素A 325.5 100%新维生素新维生素Aa 328 75%新维生素新维生素Ab 320.5 24%新维生素新维生素Ac 310.5 15%异维生素异维生素Aa 323 21%异维生素异维生素Ab 324 24%相对生物效价相对生物效价第六页，讲稿共九十六页哦VitA2VitA3v 易发生脱氢、脱水、聚合反应易发生脱氢、脱水、聚合反应第七页，讲稿共九十六页哦聚合反应聚合反应 鲸

3、醇鲸醇第八页，讲稿共九十六页哦（二）（二）性质性质 1 溶解性溶解性不溶于水不溶于水易溶于有机溶剂和植物油等易溶于有机溶剂和植物油等第九页，讲稿共九十六页哦2 2 不稳定性不稳定性共轭多烯侧链易被氧化共轭多烯侧链易被氧化v 或有金属离子存在时氧化或有金属离子存在时氧化第十页，讲稿共九十六页哦环氧化物环氧化物VitAVitA醛醛VitAVitA酸酸第十一页，讲稿共九十六页哦4 4 与三氯化锑发生呈色反应与三氯化锑发生呈色反应CHCl33 3紫外吸收特性紫外吸收特性4 4 325-328325-328的范围有最大吸收的范围有最大吸收第十二页，讲稿共九十六页哦（一）三氯化锑反应（一）三氯化锑反应（C

4、arr-price 反应）反应）条件：无水，无醇。条件：无水，无醇。CHCl3鉴别鉴别二、二、第十三页，讲稿共九十六页哦蓝色蓝色逐渐变紫红逐渐变紫红第十四页，讲稿共九十六页哦方法方法 取维生素取维生素A A油溶液油溶液1d1d，加氯仿加氯仿10 ml10 ml，振摇溶解，取，振摇溶解，取出两滴，加氯仿出两滴，加氯仿2 ml2 ml，与，与25%25%三氯化梯氯仿液三氯化梯氯仿液0.5 ml0.5 ml反应，反应，成兰色，渐成紫红。成兰色，渐成紫红。第十五页，讲稿共九十六页哦（BPBP（20002000）max为为326nm一个吸收峰一个吸收峰UVUV法法（二）（二）max为为350390nm三

5、个吸收峰三个吸收峰第十六页，讲稿共九十六页哦去水去水VitA（VitA3）VitA第十七页，讲稿共九十六页哦第十八页，讲稿共九十六页哦讨论讨论 维生素维生素 A A有五个共扼双有五个共扼双键，无水乙醇溶液在键，无水乙醇溶液在 326 nm326 nm处处有最大吸收，盐酸催化加热脱有最大吸收，盐酸催化加热脱水，成水，成5 5个双键，故，波长红移，个双键，故，波长红移，同时在同时在350-390350-390之间出现之间出现3 3个吸个吸收峰。收峰。第十九页，讲稿共九十六页哦USP USP 显色剂显色剂 磷钼酸磷钼酸 规定斑点颜色和规定斑点颜色和RfRf值值BP BP 杂质对照品法杂质对照品法 显

6、色剂显色剂 三氯化锑三氯化锑TLCTLC法法（三）（三）第二十页，讲稿共九十六页哦立体异构体立体异构体氧化产物及光照产物氧化产物及光照产物合成中间体合成中间体去氢维生素去氢维生素A A（VitAVitA2 2）去水维生素去水维生素A A（VitAVitA3 3）UVUV法法（一）（一）三三 含量测定含量测定第二十一页，讲稿共九十六页哦三、点校正法（三、点校正法（P208P208）1.1.条件：条件：（1 1）杂质的吸收在）杂质的吸收在310340nm310340nm波长波长范围内呈一条直线，且随波长的范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；增大吸收度减小；（2 2）物质对光的吸收具有加和性

7、。）物质对光的吸收具有加和性。第二十二页，讲稿共九十六页哦2.波长的选择：波长的选择：（1）1 VitA的的 max（328nm）（2）2 3 分别在分别在 1 1的两侧各选一点的两侧各选一点第二十三页，讲稿共九十六页哦对吸收有影响的杂质见书对吸收有影响的杂质见书209液液第二十四页，讲稿共九十六页哦测定对象：测定对象：VitAVitA醋酸酯醋酸酯第一法第一法 等波长差法等波长差法第二十五页，讲稿共九十六页哦第二十六页，讲稿共九十六页哦第二法第二法 等吸收度法等吸收度法(皂化法皂化法)测定对象：测定对象：VitAVitA醇醇第二十七页，讲稿共九十六页哦第二十八页，讲稿共九十六页哦3.3.测定法

8、测定法4.4.（1 1）基本步骤）基本步骤:v第一步第一步 A A选择选择选择依据：选择依据：所选所选A A值中杂质的干扰已基本消除值中杂质的干扰已基本消除第二十九页，讲稿共九十六页哦注意：注意：C 为混合样品的浓度为混合样品的浓度 第二步第二步 求求第三十页，讲稿共九十六页哦第三步第三步 求效价求效价换算因数由纯品计算而得：换算因数由纯品计算而得：第三十一页，讲稿共九十六页哦第三十二页，讲稿共九十六页哦第三十三页，讲稿共九十六页哦第四步：求标示量第四步：求标示量第三十四页，讲稿共九十六页哦（二）（二）(二二)三氯化锑比色法三氯化锑比色法 标准曲线法标准曲线法优点优点 简便简便 快速快速max

9、 max 618nm618nm620nm620nm缺点缺点呈色不稳定呈色不稳定 （5 10s5 10s内）内）水分干扰水分干扰与标准曲线温差与标准曲线温差11专属性差专属性差三氯化锑有腐蚀性三氯化锑有腐蚀性第三十五页，讲稿共九十六页哦注意事项注意事项1 1 颜色不稳，动作要快。颜色不稳，动作要快。2 2 用无水氯仿作溶剂测定用无水氯仿作溶剂测定,要求无水。要求无水。3 3 温度恒定。温度恒定。4 4 非专属性，结果偏高。非专属性，结果偏高。5 5 有腐蚀性。有腐蚀性。第三十六页，讲稿共九十六页哦三三 HPLC HPLC第三十七页，讲稿共九十六页哦氨基嘧啶环氨基嘧啶环CHCH2 2噻唑环噻唑环(

10、季铵碱季铵碱)第二节第二节 维生素维生素B B1 1HClCl-第三十八页，讲稿共九十六页哦（二）（二）性质性质1 1 溶解性：易溶于水，水溶液呈酸性溶解性：易溶于水，水溶液呈酸性2 2 硫色素反应：硫色素反应：噻唑环在碱性介质中噻唑环在碱性介质中开环，在与嘧啶环环合，经铁氰化钾开环，在与嘧啶环环合，经铁氰化钾等氧化剂氧化成具有荧光的硫色素。等氧化剂氧化成具有荧光的硫色素。第三十九页，讲稿共九十六页哦3 3 盐酸液的盐酸液的246nm246nm波长处测定吸收度，吸波长处测定吸收度，吸收系数为收系数为421421。UV UV 共轭双键共轭双键 max=246nmmax=246nm4 4 碱性碱性

11、 嘧啶环嘧啶环 伯氨伯氨 噻唑环噻唑环 季铵季铵1 1、可与酸成盐、可与酸成盐2 2、与生物碱沉淀剂沉淀。、与生物碱沉淀剂沉淀。3 3、含量测定、含量测定 非水碱量法非水碱量法第四十页，讲稿共九十六页哦二、鉴别试验二、鉴别试验（一）（一）硫色素反应，硫色素反应，ChPChP第四十一页，讲稿共九十六页哦第四十二页，讲稿共九十六页哦硫色素硫色素2H第四十三页，讲稿共九十六页哦方法方法 取本品约取本品约5 mg5 mg，加氢氧化钠，加氢氧化钠与正丁醇与正丁醇2.5ml2.5ml，强烈振摇。放置，强烈振摇。放置分层，上面醇层显强烈兰色荧光。分层，上面醇层显强烈兰色荧光。加酸消失，再加碱又重现。加酸消失

12、，再加碱又重现。专属性反应。专属性反应。第四十四页，讲稿共九十六页哦VitB1H+H+H+H+（二）沉淀反应（二）沉淀反应第四十五页，讲稿共九十六页哦S元素反应元素反应Cl-反应反应（三）其他反应（三）其他反应第四十六页，讲稿共九十六页哦三三含量测定含量测定四四（一）（一）非水滴定法非水滴定法五五 1 1 原理原理 两个碱性的，已成盐两个碱性的，已成盐的伯胺与季胺的基团，在非水的伯胺与季胺的基团，在非水溶液中，醋酸汞存在下，均可溶液中，醋酸汞存在下，均可与高氯酸作用，根据消耗高氯与高氯酸作用，根据消耗高氯酸的量进行计算。酸的量进行计算。第四十七页，讲稿共九十六页哦喹那啶红亚甲蓝喹那啶红亚甲蓝

13、（紫红（紫红天蓝）天蓝）第四十八页，讲稿共九十六页哦2 2 方法方法 取本品取本品0.15g0.15g，精密称定，精密称定，置置100ml100ml具塞锥形瓶中加冰醋酸，具塞锥形瓶中加冰醋酸，醋酸汞，喹那啶红亚甲蓝醋酸汞，喹那啶红亚甲蓝2d2d，高，高氯酸滴定。由紫红氯酸滴定。由紫红天蓝，天蓝，1ml1ml相相当于当于16.86mg16.86mg。第四十九页，讲稿共九十六页哦第五十页，讲稿共九十六页哦 二二 紫外光谱法紫外光谱法 维生素维生素B1B1片的测定，取片的测定，取2020片称定。严细。称取细粉适量，片称定。严细。称取细粉适量，相当于相当于25 mg25 mg，置，置100ml100m

14、l量瓶中，量瓶中，取取5ml5ml，在定溶于，在定溶于100ml100ml，246nm246nm测。标准吸光系数测。标准吸光系数421421。注意所。注意所使用的溶剂。使用的溶剂。第五十一页，讲稿共九十六页哦第五十二页，讲稿共九十六页哦=421（每片）相当于标示量的（每片）相当于标示量的%=%=A=ECL规格规格g/g/片片g/100mlgChPChP片剂片剂第五十三页，讲稿共九十六页哦维生素维生素B1注射液的测定注射液的测定取本品相当于取本品相当于B1 50mg，置，置200ml量量瓶中，加水置刻度，取瓶中，加水置刻度，取5ml，用，用盐酸定溶于盐酸定溶于100ml，246nm测。测。标准吸

15、光系数标准吸光系数421。第五十四页，讲稿共九十六页哦注射剂注射剂（每（每mlml）相当于标示量的）相当于标示量的%=%=规格规格g/mlml第五十五页，讲稿共九十六页哦NaOH（三）（三）硫色素荧光法硫色素荧光法原理原理1、第五十六页，讲稿共九十六页哦激发波长激发波长365nm365nm发射波长发射波长435nm435nm方法与计算方法与计算2、第五十七页，讲稿共九十六页哦+NaOH+铁氰化钾铁氰化钾+异丁醇异丁醇+NaOH+异丁醇异丁醇+NaOH+铁氰化钾铁氰化钾+异丁醇异丁醇+NaOH+异丁醇异丁醇S SdAb对照液对照液供试液供试液第五十八页，讲稿共九十六页哦特点特点3、（1 1）灵敏

16、度高，线性范围宽）灵敏度高，线性范围宽（2 2）代谢产物不干扰，适用于）代谢产物不干扰，适用于 体液分析体液分析第五十九页，讲稿共九十六页哦第三节第三节 维生素维生素C CL L抗坏血酸抗坏血酸第六十页，讲稿共九十六页哦（一）结构（一）结构 为为L-L-抗坏血酸，在化学结构抗坏血酸，在化学结构上和醣类似。有上和醣类似。有4 4种光学异构体，种光学异构体，L L右旋活性最强。具有二稀醇的结右旋活性最强。具有二稀醇的结构，具有内酯环，具有两个手性构，具有内酯环，具有两个手性碳（碳（C4C4，C5C5），性质活泼。），性质活泼。第六十一页，讲稿共九十六页哦（二）性质（二）性质1 1溶解性溶解性2 2

17、易溶于水易溶于水3 3水溶液呈酸性水溶液呈酸性第六十二页，讲稿共九十六页哦2 2 酸性酸性C C3 3OHOH的酸性较的酸性较强。强。pKa=4.17pKa=4.17，C C2 2OHOH的酸性的酸性较弱较弱pKa=11.57pKa=11.57。故表现为一元酸故表现为一元酸的性质。能与碳的性质。能与碳酸氢钠成钠盐。酸氢钠成钠盐。第六十三页，讲稿共九十六页哦二烯醇结构二烯醇结构二酮基结构二酮基结构3强还原性强还原性二烯醇结构的还原性极强。二烯醇结构的还原性极强。第六十四页，讲稿共九十六页哦有活性有活性有活性有活性无活性无活性第六十五页，讲稿共九十六页哦4 4光学活性光学活性L(+)L(+)抗坏血

18、酸抗坏血酸活性最强手性活性最强手性C C（C C4 4、C C5 5）*第六十六页，讲稿共九十六页哦5 5 水解反应与碱反应水解反应与碱反应第六十七页，讲稿共九十六页哦第六十八页，讲稿共九十六页哦506 6 具糖的性质具糖的性质 结构与糖类相似结构与糖类相似 有糖类的显色反应有糖类的显色反应第六十九页，讲稿共九十六页哦7 7 紫外特征紫外特征第七十页，讲稿共九十六页哦二、鉴别反应二、鉴别反应（一）与（一）与AgNOAgNO3 3反应反应 (ChP2000)具有强还原性具有强还原性：取本品取本品0.2 g,加水加水10 ml溶解，取溶解，取5 ml，加硝酸银，加硝酸银0.5ml，成，成-第七十一

19、页，讲稿共九十六页哦（二）、与（二）、与2 2，6-6-二氯靛酚反应二氯靛酚反应氧化型氧化型玫瑰红色玫瑰红色还原型还原型蓝色蓝色OHOH(ChP2000)第七十二页，讲稿共九十六页哦（玫瑰色）（玫瑰色）（无色）（无色）第七十三页，讲稿共九十六页哦取本品取本品0.2 g,加水加水10 ml溶解，溶解，取取5 ml，加，加2 2，6-6-二氯靛二氯靛酚酚2d，成，成-第七十四页，讲稿共九十六页哦（三）与其他氧化剂的反应（三）与其他氧化剂的反应第七十五页，讲稿共九十六页哦与碱性酒石酸铜反应与碱性酒石酸铜反应USPUSP与与KMnOKMnO4 4反应反应第七十六页，讲稿共九十六页哦（四）糖类的反应（四

20、）糖类的反应 USPUSP或盐酸或盐酸50吡咯吡咯第七十七页，讲稿共九十六页哦第七十八页，讲稿共九十六页哦（蓝色）（蓝色）(糠醛糠醛)戊糖戊糖50(吡咯吡咯)第七十九页，讲稿共九十六页哦（四）（四）UVUV0.01mol/L HCl0.01mol/L HCl第八十页，讲稿共九十六页哦三三杂质检查杂质检查四四（一）（一）溶液的澄清度与颜色检溶液的澄清度与颜色检查查五五注射液注射液 取本品适量，加水成取本品适量，加水成50mg/ml50mg/ml的溶液，的溶液，420nm 420nm 测，吸测，吸收度不得超过收度不得超过0.060.06。第八十一页，讲稿共九十六页哦片剂片剂 取片粉适量（相当于取片

21、粉适量（相当于1.0g1.0g），），加水加水20ml20ml溶解，滤过。成溶解，滤过。成50mg/ml50mg/ml的溶液，的溶液，440nm 440nm 测，吸测，吸收度不得超过收度不得超过0.070.07。在加工过程中有色杂质略有不同，在加工过程中有色杂质略有不同，故波长不同。故波长不同。第八十二页，讲稿共九十六页哦（二）（二）铁，铜离子的检查铁，铜离子的检查第八十三页，讲稿共九十六页哦指示剂指示剂 淀粉指示液淀粉指示液四、含量测定四、含量测定（一）碘量法（一）碘量法1 原理原理第八十四页，讲稿共九十六页哦H+第八十五页，讲稿共九十六页哦 取本品约取本品约0.2g0.2g，精密称定，加新

22、，精密称定，加新沸过的冷水沸过的冷水100ml100ml与稀醋酸与稀醋酸10ml10ml使溶使溶解，加淀粉指示液解，加淀粉指示液1ml1ml，立即用碘滴，立即用碘滴定液（定液（0.1mol/L0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝）滴定，至溶液显蓝色，在色，在3030秒内不褪。每秒内不褪。每1ml1ml碘滴定液碘滴定液(0.1mol/L)(0.1mol/L)相当于相当于8.806mg8.806mg的的C C6 6H H8 8O O6 62 2、方法、方法第八十六页，讲稿共九十六页哦第八十七页，讲稿共九十六页哦（1 1）酸性环境）酸性环境 d.HCl d.HCl （2 2）新沸冷新沸冷H H2 2O

23、 O减慢减慢VitCVitC被被O O2 2氧化速度氧化速度4 4、讨论、讨论（3 3）立即滴定）立即滴定 赶走水中赶走水中O O2 2减少减少O O2 2的干扰的干扰第八十八页，讲稿共九十六页哦（4 4）附加剂干扰的排除）附加剂干扰的排除片剂片剂 滑石粉滑石粉 过滤过滤注射剂注射剂 抗氧剂抗氧剂 丙酮丙酮甲醛甲醛Na2SO3 NaHSO3 Na2S2O3 Na2S2O5 一缩二亚硫酸第八十九页，讲稿共九十六页哦CH HOOa S3a S O+H2N H ON2 2 52HO NHCOS3a第九十页，讲稿共九十六页哦（二）（二）2 2，6-6-二氯靛酚钠滴定法法二氯靛酚钠滴定法法1 1、原理、

24、原理第九十一页，讲稿共九十六页哦自身指示终点法自身指示终点法2 2、方法、方法第九十二页，讲稿共九十六页哦（4 4）缺点）缺点 需经常标定需经常标定贮存贮存一周一周不稳定不稳定干扰多干扰多 氧化力较强氧化力较强第九十三页，讲稿共九十六页哦（三）（三）HPLCHPLC法法第九十四页，讲稿共九十六页哦例例多种维生素片中多种维生素片中VitAVitA、VitBVitB1 1、VitBVitB2 2 、VitBVitB6 6 、烟酰胺、烟酰胺、VitCVitC、VitEVitE的含量测定的含量测定色谱柱色谱柱 ODS流动相流动相 A、水、水-甲醇（甲醇（4 ：1）B、甲醇、甲醇 （梯度洗脱）（梯度洗脱）抗氧剂抗氧剂 二巯基丙烷磺酸钠二巯基丙烷磺酸钠第九十五页，讲稿共九十六页哦感感谢谢大大家家观观看看第九十六页，讲稿共九十六页哦