干生化试剂原理及应用课件.ppt

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1、关于干生化试剂原理及应用第1页，此课件共54页哦什么是干化学？所谓“干化学”是与传统的“湿化学”（即溶液化学）相对比较而言的。它是以被检测样品中的液体作为反应媒介，待测物直接与固化于载体上的干粉试剂反应的一种方式。它与传统湿化学的最大区别就在于参与化学反应的媒介不同。随着生物化学中酶的分离、提纯、存储等技术的发展，传感器、光度计和电极技术的进步，以及计算机应用的普及，干化学技术在近20年里得到了长足的进步。第2页，此课件共54页哦相对于“湿化学”，“干化学”具有如优点：操作简单单个标本检测速度快适用于急诊试剂稳定、有效期长结果准确、稳定无需供水系统第3页，此课件共54页哦Variable Dr

2、y Chemistry 干化学之种类干化学之种类 Tablet药片剂Strip试纸条Multi-Film多层薄膜第4页，此课件共54页哦最简单的二层结构最简单的二层结构尿试纸条尿试纸条用于生化分析的试剂载体最简单的是二层结构，在支持层塑料基片上有一试剂层纤维素片，在纤维素片中预固化了全部试剂。常见的是尿生化分析试剂条尿生化分析试剂条：第5页，此课件共54页哦尿液中的待测成分与预固相在纤维素片上的试剂直接反应，通过反射光度计测定其颜色的改变，从而计算待测成份的浓度。这种方法只能对待测成分进行定性或半定量测定，这样就限制了它在其它须准确定量的标本的应用。第6页，此课件共54页哦稍加改进的三层结构稍

3、加改进的三层结构在试剂层上加一多孔胶膜过滤层，其作用是将样品中的杂质过滤掉，并起保护试剂层作用。常见的是微量法测定葡萄糖的试剂条。第7页，此课件共54页哦三层试剂载体的测定光路是通过透明的塑料基片，而不经过最上面的过滤层，这样消除了样品中干扰成分的影响，保证了待测成分测定的稳定性和准确性。第8页，此课件共54页哦TrueDryChemistry真正之干化学Multi-CoatingSlideMulti-CoatingSlide多涂层薄膜干试剂片它集现代化学、光学、酶工程学、化学计量学和计算机技术于它集现代化学、光学、酶工程学、化学计量学和计算机技术于一体。一体。第9页，此课件共54页哦Type

4、s of Slides干片类型干片类型CM/RTCM/RTPMPMIRIRColorimetric/RatePotentiometricColorimetric/RatePotentiometric Immuno-RateImmuno-RateSlideSlideSlidesSlidesSlidesSlides比色比色/速率干片速率干片电势法干片电势法干片免疫速率法干片免疫速率法干片第10页，此课件共54页哦第11页，此课件共54页哦Dry Slide 干片干片Methodology方法学方法学第12页，此课件共54页哦CM/RTSlideMeasure chemistry concentra

5、tion by color development通过颜色的变化来测定化学物浓度通过颜色的变化来测定化学物浓度Colorimetric/Rate Slide比色比色/速率法干片速率法干片第13页，此课件共54页哦比色比色/速率法干片速率法干片比色/速率法干片主要用于常规生化项目的测定，干片模式图显示了一个临床化学比色/速率法干片模式简图。在这个试剂片中，多种反应试剂被固化在一张透明聚酯膜上，上面覆以多孔的扩散层，然后被夹在一个塑料结构中。如图所示，共有4个功能层：扩散层（分布层）、试剂层、指示剂层和支持层。每个试剂片的层数视所采用的分析方法而定，干片的大小大致与一枚邮票相同，显色剂层呈现的颜色

6、深浅与待测物浓度成正比。第14页，此课件共54页哦Components of One Slide干片之基本组成干片之基本组成SpreadinglayerSpreadinglayer分布扩散层分布扩散层ReagentlayerReagentlayer试剂层试剂层IndicatorlayerIndicatorlayer指示剂层指示剂层SupportlayerSupportlayer支持层支持层SampleSample标本标本第15页，此课件共54页哦Spreading Layer分布扩散层分布扩散层SpreadinglayerSpreadinglayer分布层分布层ReagentlayerReag

7、entlayer试剂层试剂层IndicatorlayerIndicatorlayer指示层指示层SupportlayerSupportlayer支持层支持层uuUniformly distributes the Uniformly distributes the samplesample 均匀分布标本均匀分布标本第16页，此课件共54页哦它由TiO2,BaSO4和醋酸纤维素构成的100-300微米的多空聚合物，聚合物的孔径在1.530微米之间。分布层的孔径和厚度将取决于特定分析的需要。分布层的中空体积占40%90%，这种毛细网状结构能使样品溶液快速、均匀地分布到下层。当一滴样品约10微升加在试

8、剂片上后，毛细作用将样品迅速吸入多空扩散层，但样品在一瞬间被下面的凝胶层所排斥，因为凝胶层在接受血清组份之前，必须先生成水合物。第17页，此课件共54页哦SpreadinglayerSpreadinglayer分布层分布层ReagentlayerReagentlayer试剂层试剂层IndicatorlayerIndicatorlayer指示层指示层SupportlayerSupportlayer支持层支持层Spreading Layer 分布层分布层Uniformlydistributesthesample均匀分布标本Filtersoutlargemolecules过滤大分子Maycontai

9、nreagentstobreakupmolecules:byphysicalorbychemical可包含打断大分子的试剂：物理性和化学性Abackgroundforreflectivepurpose提供反射测定的背景第18页，此课件共54页哦Uniformly distribute the sample均匀分布标本均匀分布标本第19页，此课件共54页哦Uniformly distribute the sample均匀分布标本均匀分布标本第20页，此课件共54页哦Uniformly distribute the sample均匀分布标本均匀分布标本第21页，此课件共54页哦Uniformly

10、distribute the sample均匀分布标本均匀分布标本第22页，此课件共54页哦Uniformly distribute the sample均匀分布标本均匀分布标本第23页，此课件共54页哦Uniformly distribute the sample均匀分布标本均匀分布标本第24页，此课件共54页哦扩散层不仅可阻留细胞，结晶和其他小颗粒，它也可以根据需要让大分子，如蛋白质等滞留。当待检样品通过扩散层后，可以消除溶液中影响检测反应干扰物质。扩散层中的TiO2和BaSO4.一方面可用来掩盖待检样品中的有色物质，使反射光度计的测定结果不受影响，同时这些反光化合物也给干片底层的显色层提

11、供反射背景。在一些特定试剂片中，扩散层中还含有选择性阻留某种成份或启动某种反应的物质，以提高分析的特异性。第25页，此课件共54页哦A Background for Light Reflection光反射的背景光反射的背景第26页，此课件共54页哦Reagent Layer 试剂层试剂层uuContainsreagentindryContainsreagentindryformform包含干性试剂包含干性试剂uuControleachreactionControleachreactionsequencesequence控制反应顺序控制反应顺序SpreadinglayerSpreadinglay

12、er分布层分布层ReagentlayerReagentlayer试剂层试剂层IndicatorlayerIndicatorlayer指示层指示层SupportlayerSupportlayer支持层支持层第27页，此课件共54页哦试剂层：在化学试剂层中，根据实际测定的需要，可由数层至数十个功能试剂层组成。反应区的功能是将待测物通过物理、化学或生物酶学等反应转化为可与显色剂结合的化合物。试剂层中按照反应的顺序涂布了不同的化学试剂，使反应按照预先的设定依次进行。针对不同检测项目的个性化设计为化学反应提供了最理想的物理和化学反应环境这就是为什么干化学技术能够确保更准确的试验结果。尿酸干片是使用清除剂

13、层的一个示例。清除剂层含有抗坏血酸氧化酶，用于将抗坏血酸（维生素C）（一种内源性干扰物）转化，对试剂层中所发生反应不产生干扰。第28页，此课件共54页哦Indicator Layer 指示剂层指示剂层uuDrivereactiontowardDrivereactiontowardcompletioncompletion将反应驱于完成将反应驱于完成uuContainsadyetoproduceContainsadyetoproduceacoloredcomplexacoloredcomplex包含染料以产生显色复合包含染料以产生显色复合物物SpreadinglayerSpreadinglayer

14、分布层分布层ReagentlayerReagentlayer试剂层试剂层IndicatorlayerIndicatorlayer指示层指示层SupportlayerSupportlayer支持层支持层第29页，此课件共54页哦指示剂层：反应底物进入指示剂层，在这里发生显色反应。此层包含染料或相似的指示剂，使反应产物到达指示剂层后生成了有色化合物，其颜色变化与分析物浓度成比例，被反射光检测。第30页，此课件共54页哦Support Layer 支持层支持层uuProvideforasupportingProvideforasupportingbasebase提供反应支持基提供反应支持基uuAll

15、owslightstopassAllowslightstopassthroughthrough允许光路通过允许光路通过SpreadinglayerSpreadinglayer分布层分布层ReagentlayerReagentlayer试剂层试剂层IndicatorlayerIndicatorlayer指示层指示层SupportlayerSupportlayer支持层支持层第31页，此课件共54页哦支持层：此层是透明塑料制成，起到支持其它层的作用，且允许光线百分之百透射，以便对有色复合物进行测量。第32页，此课件共54页哦DetectorDetectorTransmission&Reflecti

16、on透射透射 与与 反射反射第33页，此课件共54页哦BUNReactionResultLowConc.低浓度HighConc.高浓度Transmission&Reflection透射透射 与与 反射反射第34页，此课件共54页哦Potentiometric Slides电势电位法干片电势电位法干片uuISE,Ion Selective Electrode TechnologyISE,Ion Selective Electrode Technology离子选择法电极技术离子选择法电极技术离子选择法电极技术离子选择法电极技术uu3 tests are performed on Vitros Sy

17、stem3 tests are performed on Vitros System Sodium(Na+)Sodium(Na+)钠离子钠离子 Potassium(K+)Potassium(K+)钾离子钾离子 Chloride(Cl-)Chloride(Cl-)氯离子氯离子uuMeasures the potential difference between the two Measures the potential difference between the two electrodeselectrodes测定两电极间电势的不同测定两电极间电势的不同测定两电极间电势的不同测定两电极间电势

18、的不同PMPMSlideSlide第35页，此课件共54页哦电势法干片第36页，此课件共54页哦第37页，此课件共54页哦第38页，此课件共54页哦SaltBridgeS2S1S3S4aIarVMembraneM+ClAgClAgMembraneM+ClAgClAgaIarSample=S1reference=S3S2S4Paperinplastic=saltbridgeVOne Dry ISE SlideISE Cell第39页，此课件共54页哦离子（钠，钾，氯）检测是干化学检测项目中的传统优势项目，采用离子法干片。其设计采用直接电势法，样本无需稀释。离子干片是由纸桥将两个离子选择性电极相连

19、，通过电压表来测量患者样本和已知参比液之间的电势差，从而计算出钠，钾，氯的离子浓度。第40页，此课件共54页哦Immuno-Rate Slides免疫速率法干片免疫速率法干片uExamplesofIRtests:免疫速率法干片举例：免疫速率法干片举例：Digoxin,Phenytoin,Phenobarbital,CRPDigoxin,Phenytoin,Phenobarbital,CRP 地高辛，苯妥英，苯巴比妥，地高辛，苯妥英，苯巴比妥，C C反应蛋白反应蛋白uuCompetitive&Non-competitiveIRformatCompetitive&Non-competitiveIR

20、format竞争与非竞争性免疫速率反应模式竞争与非竞争性免疫速率反应模式uLiquidsubstrateisrequired 需要液体反应底物需要液体反应底物IRIR第41页，此课件共54页哦竞争法（例如地高辛）竞争法（例如地高辛）读数时采用了多点速率法来检测分析物浓度。分析物与酶标抗原竞争有限数量的抗体结合位点。加入含底物的免疫洗液，一方面洗去未结合物质，另一方面抗原抗体复合物与无色底物反应显色以670nm波长加入免疫洗液并孵育2.5min后读数；通过速率的变化采计算分析物浓度，发射光密度与分析物浓度成反比。第42页，此课件共54页哦非竞争法（非竞争法（CRP）读数时采用定点速率法。待测物与

21、固相抗体、酶标抗体形成夹心“三明治”。加入含底物的免疫洗液后洗去读数视窗区域未结合物质，抗原抗体结合物与底物反应显色，孵育2.5分钟时读数670nm发射光密度与待测物浓度成正比。第43页，此课件共54页哦Immuno-Rate Slide免疫速率法干片免疫速率法干片SpreadingLayer分布层ReceptorLayer受体层GelatinLayer胶乳层Estarsupportlayer聚酯支持层EnzymeAntibodyEnzyme-labeledAntigenGelatinReagent第44页，此课件共54页哦Application of Sample应用举例应用举例Patien

22、tSample病人标本第45页，此课件共54页哦EnzymeLabeledHapten酶标半抗原ImmobilizedAbGelatinReagent胶乳试剂PatientSample病人标本第46页，此课件共54页哦EnzymeLabledHaptenImmobilizedAbPatientSampleGelatinReagent第47页，此课件共54页哦EnzymeLabledHapten+AntigeninSampleImmobilizedAbGelatinReagent第48页，此课件共54页哦GelatinReagentCompetitiveBinding竞争性结合BindingAg

23、&FreeAg结合抗原与游离抗原第49页，此课件共54页哦GelatinReagentSubstrateAddition底物加入第50页，此课件共54页哦GelatinReagentDetermineAnalyteConc.分析物测定第51页，此课件共54页哦LowConc.HighConc.DetermineAnalyteConc.分析物测定(CompetitiveMethod竞争性方法)第52页，此课件共54页哦经过20多年的发展，目前干化学试剂已可进行近70余项化学分析，已囊括常规生化项目、内分泌激素、毒素药物和特种蛋白等各个领域，干化学分析已能够满足常规临床实验室的需要了。第53页，此课件共54页哦感感谢谢大大家家观观看看第54页，此课件共54页哦