动物细胞融合与单克隆抗体优秀讲稿.ppt
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1、动物细胞融合与单克隆抗体优秀第一页,讲稿共三十八页哦 2002年年12月月30日,日,两场筹备了两场筹备了10年的年的“太空婚太空婚礼礼”首次在神舟四号飞船上举行,首次在神舟四号飞船上举行,植物细胞植物细胞“新人新人”黄花烟草黄花烟草和和革新一号烟草革新一号烟草叶肉细胞叶肉细胞原生质体原生质体,动物细胞动物细胞“新人新人”是小鼠是小鼠B淋巴细胞淋巴细胞和和骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞,两批新人同时在两批新人同时在“产房产房”电融合仪内孕育新生命。电融合仪内孕育新生命。“太空婚礼太空婚礼”这两场这两场“太空婚礼太空婚礼”实质是哪两项细胞工程技术实质是哪两项细胞工程技术植物体细胞杂交技术植物体细胞杂交技术
2、动物细胞融合技术动物细胞融合技术第二页,讲稿共三十八页哦(1)(1)(2)(3)(4)(5)植物体细胞杂交过程示意图第三页,讲稿共三十八页哦A细胞细胞B细胞细胞人工诱导人工诱导1.1动物动物细胞融合的概念细胞融合的概念杂交细胞杂交细胞 动物细胞融合(也称细胞杂交)动物细胞融合(也称细胞杂交):是指:是指两个或多个细胞两个或多个细胞融合形成融合形成一个一个单核细胞单核细胞的过程。的过程。一、动物细胞融合一、动物细胞融合第四页,讲稿共三十八页哦阅读课本阅读课本P52P52及识图及识图2-232-23,第五页,讲稿共三十八页哦细胞膜的流动性细胞膜的流动性灭活病毒、灭活病毒、PEG、电激等、电激等融合
3、后的细胞进行有丝分裂,融合后的细胞进行有丝分裂,形成完整的杂交细胞形成完整的杂交细胞诱导的手段?诱导的手段?融合后细胞的类型?融合后细胞的类型?ABAB杂种细胞遗传物质杂种细胞遗传物质有什么特点?有什么特点?三种三种AA、ABAB、BB(A、B)含两种生物的遗传物质含两种生物的遗传物质1.21.2动物细胞融合过程动物细胞融合过程原理?原理?第六页,讲稿共三十八页哦1.21.2动物细胞融合过程动物细胞融合过程 为什么灭活的病为什么灭活的病毒能作诱导剂毒能作诱导剂?灭活灭活使病毒的感染活性、增使病毒的感染活性、增殖能力丧失但不破坏病毒的殖能力丧失但不破坏病毒的抗原结构。抗原结构。第七页,讲稿共三十
4、八页哦想一想想一想1动动物物细细胞融合完成的胞融合完成的标标志是什么?志是什么?【提示提示】细细胞核融合。胞核融合。第八页,讲稿共三十八页哦1.3动物动物细胞融合技术的意义和应用细胞融合技术的意义和应用第九页,讲稿共三十八页哦比较项目细胞融合的原理细胞融合的方法诱导手段用途植物体细胞杂交细胞膜的流动性纤维素酶、果胶酶去除细胞壁后诱导原生质体融合离心、电刺激、振动、聚乙二醇克服远源杂交不亲和,获得杂种植株动物细胞融合细胞膜的流动性用胰蛋白酶使细胞分散后诱导细胞融合除应用植物细胞杂交手段外,还有灭活病毒获得杂种细胞、制备单克隆抗体1.4 比较动、植物细胞杂交技术比较动、植物细胞杂交技术第十页,讲稿
5、共三十八页哦【例例1】能使动物细胞融合的特有的诱导因子是能使动物细胞融合的特有的诱导因子是()A.离心离心 B.灭活的病毒灭活的病毒 C.电刺激电刺激 D.振动振动【例例2】融合后的杂交细胞的遗传物质有何特点(融合后的杂交细胞的遗传物质有何特点()A.具有原来两个或多个细胞的遗传信息具有原来两个或多个细胞的遗传信息 B.能无限增殖能无限增殖 C.可形成新个体可形成新个体 D.培养过程会贴壁培养过程会贴壁【例例3】动物细胞融合的作用中最重要的是(动物细胞融合的作用中最重要的是()A.克服远源杂交不亲和克服远源杂交不亲和 B.制备单克隆抗体制备单克隆抗体 C.培育新物种培育新物种 D.生产杂种细胞
6、生产杂种细胞 BBA第十一页,讲稿共三十八页哦互互动动探究探究(1)本本题题中中细细胞融合手段不同于植物体胞融合手段不同于植物体细细胞胞杂杂交的是什么?交的是什么?(2)本本题题中培养液中融合中培养液中融合处处理后的理后的细细胞胞类类型最多有几种?分型最多有几种?分别别是什么是什么细细胞?胞?提示提示】(1)动物细胞融合的手段与植物体细胞杂交的区别是前者动物细胞融合的手段与植物体细胞杂交的区别是前者通常采用灭活的病毒作为诱导剂。通常采用灭活的病毒作为诱导剂。(2)细胞类型通常有细胞类型通常有5种,即鼠种,即鼠鼠、人鼠、人人、人人、人鼠、人、鼠鼠、人、鼠单独的细胞。单独的细胞。第十二页,讲稿共三
7、十八页哦【易易误误警警示示】(1)常常用用的的病病毒毒诱诱导导剂剂有有仙仙台台病病毒毒、新城新城鸡鸡瘟病毒、疱疹病毒等,其中仙台病毒最常用。瘟病毒、疱疹病毒等,其中仙台病毒最常用。(2)用做用做诱导剂诱导剂的病毒必的病毒必须须事先事先灭灭活,使病毒的感活,使病毒的感染活性、增殖能力染活性、增殖能力丧丧失但不破坏病毒的抗原失但不破坏病毒的抗原结结构。构。第十三页,讲稿共三十八页哦强调:强调:效应效应B淋巴细胞是能淋巴细胞是能够产生抗体的够产生抗体的B淋巴细胞,淋巴细胞,下文将其简称为下文将其简称为B淋巴细胞淋巴细胞抗体:能够与抗原发生特抗体:能够与抗原发生特异性结合的异性结合的免疫球蛋白免疫球蛋
8、白。能产生抗体的细胞是能产生抗体的细胞是浆细浆细胞(即效应胞(即效应B细胞)。细胞)。二、单克隆抗体二、单克隆抗体B淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞效应效应效应效应B B淋巴淋巴淋巴淋巴细胞细胞细胞细胞记忆记忆记忆记忆B B淋巴淋巴细胞细胞分化分化分化分化第十四页,讲稿共三十八页哦抗体的传统生产方法抗体的传统生产方法抗原抗原 反复注射动物反复注射动物从动物的从动物的血清血清中分离抗体中分离抗体该法制备抗体的缺点:该法制备抗体的缺点:产量低、纯度低,且抗体的产量低、纯度低,且抗体的特异性差、灵敏度低。特异性差、灵敏度低。单克隆抗体!单克隆抗体!第十五页,讲稿共三十八页哦提示提示1 1:对:对B
9、B细胞进行细胞培养可行吗?细胞进行细胞培养可行吗?提示提示2 2:我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的?:我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的?问题:问题:如何大量生产单克隆抗体?请尝试设计一如何大量生产单克隆抗体?请尝试设计一个方案。个方案。2.2单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备第十六页,讲稿共三十八页哦一个一个B B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖骨髓瘤细胞能无限增殖杂交瘤细胞杂交瘤细胞动物细胞培养技术动物细胞培养技术设计方案:设计方案:动物细胞融合技术动物细胞融合技术单克隆抗单克隆抗体体 既能产生特异性抗体,既能产生特异性抗体,又能大量增殖的细胞
10、又能大量增殖的细胞19751975年英国科学家年英国科学家米尔斯坦米尔斯坦和和柯勒柯勒的实验的实验第十七页,讲稿共三十八页哦为什么给小鼠注射特定的抗为什么给小鼠注射特定的抗原蛋白?原蛋白?会有几种融合方式?会有几种融合方式?杂交瘤细胞是如何筛选出来杂交瘤细胞是如何筛选出来的?有何特点?的?有何特点?是否所有的杂交瘤细胞都能是否所有的杂交瘤细胞都能产生专一性抗体?产生专一性抗体?如何大规模进行培养得到如何大规模进行培养得到大量的单克隆抗体?大量的单克隆抗体?第十八页,讲稿共三十八页哦BB、B瘤瘤、瘤瘤瘤瘤(B、瘤)、瘤)(一选)(一选)选选择性培养基择性培养基:只有只有杂交瘤杂交瘤细胞细胞才能存
11、活才能存活获得产生相应获得产生相应抗体的抗体的B细胞细胞(二选):选能(二选):选能产生所需产生所需专一抗专一抗体的杂交瘤细胞体的杂交瘤细胞体外培养体外培养体外培养体外培养小鼠腹腔内培养小鼠腹腔内培养杂交瘤细胞特点:杂交瘤细胞特点:既能产生特异性既能产生特异性抗体,又能大量抗体,又能大量增殖。增殖。第十九页,讲稿共三十八页哦想一想想一想2什什么么是是单单克克隆隆抗抗体体?鼠鼠的的单单克克隆隆抗抗体体能能否否用用于人体疾病的治于人体疾病的治疗疗?为为什么?什么?【提示提示】单单克隆抗体是由克隆抗体是由单单一一杂杂交瘤交瘤细细胞增殖胞增殖产产生的生的化学性质单一、特异性强化学性质单一、特异性强的抗
12、体。不能。因的抗体。不能。因为为鼠的鼠的B淋巴淋巴细细胞所胞所产产生的抗体与人体生的抗体与人体B淋巴淋巴细细胞胞产产生的抗体是不同的。生的抗体是不同的。第二十页,讲稿共三十八页哦单抗制备过程分哪几步?单抗制备过程分哪几步?请用箭头把以下代表单克隆抗体请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是?第二十一页,讲稿共三十八页哦(2012北京四中高二质检北京四中高二质检)1975年科学家首次利用年科学家首次利用B淋巴细胞杂淋巴细胞杂交瘤技术制备出单克隆抗体。请根据下图回答问题:交瘤技术制备出单克隆抗体。请根据下图回答
13、问题:(1)病原体注入小鼠体内后,要经过病原体注入小鼠体内后,要经过_细胞处理后形成抗原细胞处理后形成抗原MHC复复合体,才能被免疫细胞识别。合体,才能被免疫细胞识别。(2)制备单克隆抗体所用的制备单克隆抗体所用的B淋巴细胞一淋巴细胞一般从脾中采集,然后以般从脾中采集,然后以_作诱导作诱导剂,使剂,使B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合。通过筛选和克隆培养,淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合。通过筛选和克隆培养,获得的杂交瘤细胞具获得的杂交瘤细胞具_的特点。的特点。(3)单克隆抗体的特点是单克隆抗体的特点是_根据上图写出应用杂交瘤技术获得单克隆抗体的两种主要方法根据上图写出应用杂交瘤技术获得单克隆抗体的两种主要方
14、法_吞噬吞噬(或巨噬或巨噬)灭活的仙台病毒或聚乙二醇灭活的仙台病毒或聚乙二醇既能产生特异性抗体,又能无限增殖既能产生特异性抗体,又能无限增殖特异性强,纯度高特异性强,纯度高(或:专一性强、灵敏度高或:专一性强、灵敏度高)体外培养法和动物体内培养法体外培养法和动物体内培养法第二十二页,讲稿共三十八页哦变式训练变式训练(2012西宁五中高二检测西宁五中高二检测)根据单克隆抗体制备流程示意图判根据单克隆抗体制备流程示意图判断以下选项中正确的是断以下选项中正确的是()A单克隆抗体技术的原理包括细胞增殖、细胞膜的流动性、细胞的全单克隆抗体技术的原理包括细胞增殖、细胞膜的流动性、细胞的全能性等能性等B根据
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